專利名稱：一種多肽菌素及其制備與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種新的多肽菌素及其制備與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
在全球范圍內(nèi)，由病原菌及害蟲導(dǎo)致的植物病害是造成農(nóng)業(yè)損失的主要原因之 一。半個(gè)世紀(jì)以來，人們主要采用化學(xué)農(nóng)藥對(duì)這類病害進(jìn)行防治，并取得了顯著的效果。然 而很多化學(xué)農(nóng)藥都具有高毒、高殘留、難降解等特性，隨著這些農(nóng)藥的廣泛使用，環(huán)境污染 日趨嚴(yán)重，生態(tài)平衡遭到破壞；人及牲畜的健康也受到了極大的威脅。此外，隨著耐藥病菌 及害蟲的不斷出現(xiàn)，化學(xué)農(nóng)藥的防治效率逐漸下降，這些問題引起了人們高度的重視，促使 人們尋找一種能夠替代化學(xué)農(nóng)藥的新的防治策略。生物防治是指利用某些有益的活體生物或其次級(jí)代謝產(chǎn)物對(duì)植物病蟲害進(jìn)行防 治的方法。其作用機(jī)制主要包括抗菌作用、競(jìng)爭(zhēng)作用、寄生作用、交叉保護(hù)作用等。生物防 治因其具有對(duì)人畜安全，環(huán)境污染少，易降解，防治對(duì)象針對(duì)性強(qiáng)等特點(diǎn)，逐漸得到了人們 的青睞，不斷尋找并開發(fā)這些具有良好防治效果的生防生物及其代謝產(chǎn)物也成了研究的熱 點(diǎn)。微生物制劑是指來源于微生物的生防試劑，包括微生物活體菌劑和代謝產(chǎn)物制劑兩種。 目前，已有多種細(xì)菌和真菌制劑在美國(guó)環(huán)保署(EPA)中注冊(cè)，并被開發(fā)為商業(yè)生防試劑，如 農(nóng)桿菌屬(Agrobacterium)、假單胞菌屬(Pseudomonas)、鏈霉菌屬(Sti^ptomyces)的一些 細(xì)菌，及念珠菌屬(Candida)、盾殼霉屬(Coniothyrium)、白粉寄生菌屬(Ampelomyces)、木 霉屬(Trichoderma)的一些真菌。另外，多種代謝產(chǎn)物制劑已在我國(guó)廣泛的應(yīng)用于植物病 蟲害的防治，如春雷霉素、多抗霉素、井網(wǎng)霉素A、滅粉霉素等。類芽孢桿菌屬(Paenibacillus)是Ash等于1993年根據(jù)16S rRNA基因序列比對(duì) 結(jié)果，將其從芽孢桿菌屬(Bacillus)中獨(dú)立出來而創(chuàng)建的。類芽孢桿菌廣泛存在于土壤和 植物根系中，是潛在的生防微生物。據(jù)報(bào)道，Paenibacillus polymyxa E681、Paenibacillus elgii SD17,Paenibacilluslentimobus B1146等類芽孢桿菌，對(duì)多種真菌性植物病害具有 良好的防治效果。此外，類芽孢桿菌能產(chǎn)生豐富的次級(jí)代謝產(chǎn)物，僅該屬的模式種多粘類 芽孢桿菌(Paenibacillus polymyxa)，就能產(chǎn)生包括多粘菌素(polymyxins)、喬利肽菌素 (Jolip印tin)、谷纈菌素(Gatavalin)、殺鐮孢菌素 A-D(Fusaricidins)、Saltavalin 以及 LI-F抗生素(含12種不同組分)等在內(nèi)的幾十種次級(jí)代謝產(chǎn)物。其中多粘菌素B和E早 在幾十年前就已在臨床上得到應(yīng)用。隨著研究的深入，必將有越來越多的類芽孢桿菌及其 代謝產(chǎn)物被人們發(fā)現(xiàn)和利用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種新的具有生物防治和醫(yī)療應(yīng)用潛在價(jià)值的多肽菌素 及其制備方法與應(yīng)用。本發(fā)明采用的技術(shù)方案是一種多肽菌素，結(jié)構(gòu)如式(I)所示
權(quán)利要求
一種多肽菌素，結(jié)構(gòu)如式(I)所示其中L Dab為L(zhǎng)型2，4 二氨基丁酸，L Val為L(zhǎng)型纈氨酸，D Val為D型纈氨酸，D Phe為D型苯丙氨酸，L Leu為L(zhǎng)型亮氨酸，L Ser為L(zhǎng)型絲氨酸。FDA0000025465760000011.tif
2.如權(quán)利要求1所述的多肽菌素的制備方法，所述方法包括將類芽孢桿菌 (Paenibacillus elgii)接種至發(fā)酵培養(yǎng)基，于28 32°C下培養(yǎng)24 36h，發(fā)酵液離心取 上清液，上清液經(jīng)分離純化得到所述多肽菌素；所述發(fā)酵培養(yǎng)基終濃度組成如下蛋白胨 5 20g/L,蔗糖1 5g/L，可溶性淀粉1 5g/L，氯化鈉2 8g/L，溶劑為水，pH7. 0 7. 5。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述分離純化方法如下上清液用正丁醇等 體積萃取兩次，合并萃取液、濃縮蒸干得到萃取物；用水懸浮萃取物，過MCI GEL CHP20P樹 脂柱，收集活性成分，濃縮蒸干得到粗品；粗品用甲醇溶解，離心過濾去除沉淀，然后進(jìn)行高 效液相色譜層析，收集活性組分，濃縮蒸干即可得到所述多肽菌素。
4.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述發(fā)酵培養(yǎng)基終濃度組成如下蛋白胨 10g/L，蔗糖3g/L，可溶性淀粉3g/L，氯化鈉5g/L，溶劑為水，pH7. 0 7. 2。
5.如權(quán)利要求1所述的多肽菌素在制備抗菌制劑中的應(yīng)用。
6.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于所述的多肽菌素用于制備抗真菌生物農(nóng)藥。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種新的具有生物防治和醫(yī)療應(yīng)用潛在價(jià)值的多肽菌素及其制備方法與應(yīng)用，所述多肽菌素結(jié)構(gòu)如式(I)所示。本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在提供了一種毒性低于多粘菌素B、具有生物防治和醫(yī)療應(yīng)用價(jià)值的多肽菌素及其制備方法和應(yīng)用，體外實(shí)驗(yàn)表明該化合物對(duì)所有測(cè)試過的革蘭氏陽(yáng)性菌、革蘭氏陰性菌及真菌均具有顯著的抑制作用；盤栽實(shí)驗(yàn)表明該化合物對(duì)多種真菌性植物病害具有一定的防治作用，特別是對(duì)水稻紋枯病的防治效果最為顯著。
文檔編號(hào)C07K1/20GK101962401SQ20101026837
公開日2011年2月2日 申請(qǐng)日期2010年9月1日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月1日
發(fā)明者吳雪昌, 李歐, 杜加秋, 林建秋, 沈小波, 白驊, 錢朝東 申請(qǐng)人:浙江大學(xué);浙江海正藥業(yè)股份有限公司