專利名稱：氯丙嗪半抗原、人工抗原和抗體及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于食品安全技術(shù)領(lǐng)域。具體涉及氯丙嗪半抗原、人工抗原和抗體的制備 方法及應(yīng)用。
背景技術(shù)：
氯丙嗪(Chlorpromazine，CPZ)又稱冬眠靈，分子式為=C17H19C1N2S,藥用一般為鹽 酸鹽形式，化學名稱為N，N-二甲基-2-氯-IOH-吩噻嗪-10-丙胺鹽酸鹽。屬于吩噻嗪類 藥物之一，為中樞多巴胺受體的阻斷劑，具有鎮(zhèn)靜、抗精神病、鎮(zhèn)吐、降低體溫及基礎(chǔ)代謝、 D “腎上腺素能受體及m-膽堿能受體阻斷、抗組織胺、影響內(nèi)分泌等作用。臨床上用于控制 精神分裂癥或其它精神病的躁動、緊張不安、幻覺、妄想等癥狀；治療各種原因引起的嘔吐； 亦用于低溫麻醉及人工冬眠；與鎮(zhèn)痛藥合用，治療癌癥晚期病人的劇痛。目前，由于氯丙嗪的鎮(zhèn)靜、催眠特殊生物學作用，常被用作飼料添加劑。但氯丙嗪 對人體具有白細胞減少、體位性低血壓、肝功能障礙、皮疹、接觸性皮炎等過敏性反應(yīng)。震 顫、靜坐不能、流涎等遲發(fā)性運動障礙，對人體有毒性副作用。歐盟早在1997年就頒布了氯丙嗪禁止在飼料中添加的禁令(EC)NO. 17/97。我國 農(nóng)業(yè)部、衛(wèi)生部、國家藥品監(jiān)督管理局聯(lián)合發(fā)布《禁止在飼料和動物飲用水中使用的藥物品 種目錄》農(nóng)業(yè)部第176、235號公告(2002年)也明確指出嚴禁氯丙嗪在動物飼料和飲水 中添加，允許治療劑量，但在動物性食品中不得檢出。免疫學分析技術(shù)以其靈敏、特異、快 速、簡便的優(yōu)點在藥物殘留檢測領(lǐng)域已被廣泛應(yīng)用，比起理化檢驗方法有很多優(yōu)勢。目前，對畜禽水產(chǎn)品中氯丙嗪殘留的檢測主要采用理化檢驗方法。然而理化檢驗 方法存在復(fù)雜、繁瑣、檢測通量小、需要專業(yè)人員和專業(yè)技能、檢測成本昂貴等缺陷，不能實 現(xiàn)大批量樣品的快速檢測分析。因此，有必要研制更加簡單快捷方便的檢測方法。免疫學分析技術(shù)以其靈敏、特異、快速、簡便的優(yōu)點在藥物殘留檢測領(lǐng)域已被廣泛 應(yīng)用，人工抗原的合成是半抗原物質(zhì)免疫分析方法建立的的關(guān)鍵，對于氯丙嗪，因為半抗原 設(shè)計和合成的原因，現(xiàn)有技術(shù)獲得的氯丙嗪抗體的特異性和識別力不夠，缺乏氯丙嗪的免 疫學分析方法的相關(guān)技術(shù)報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個目的是填補氯丙嗪現(xiàn)有檢測技術(shù)的不足，提供一種氯丙嗪人工半抗 原、人工抗原和特異性抗體。本發(fā)明的另一個目的是提供所述氯丙嗪人工半抗原、人工抗原和特異性抗體的制 備方法。本發(fā)明還有一個目的是提供所述氯丙嗪人工半抗原、人工抗原和特異性抗體的應(yīng)用。本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案予以實現(xiàn)提供一種氯丙嗪人工半抗原、人工抗原和特異性抗體，所述氯丙嗪人工半抗原具有式(I)所示分子結(jié)構(gòu)
權(quán)利要求
一種氯丙嗪半抗原，其特征在于具有式(I)所示分子結(jié)構(gòu)。FSA00000251892000011.tif
2.—種權(quán)利要求1所述氯丙嗪人工半抗原的制備方法，其特征在于是將氯丙嗪溶于乙 酸酐，冰浴下滴入新鮮制備的硝酸乙酰酯，反應(yīng)得到氯丙嗪半抗原中間體2-氯-10- (3- ( 二 甲胺基丙基))-7-硝基-5-氧-IOH-酚噻嗪，進而采用鈀碳催化氫化法還原得到所述氯丙 嗪半抗原(I)。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于包括以下步驟(1)將氯丙嗪、硝酸乙酰酯分別溶于乙酸酐；(2)將硝酸乙酰酯溶液緩慢滴入氯丙嗪溶液中，冰浴反應(yīng)，反應(yīng)完畢后將產(chǎn)物用冰的 飽和氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值至8，析晶得氯丙嗪半抗原中間體2-氯-10-(3-( 二甲胺基丙 基))-7-硝基-5-氧-IOH-酚噻嗪；(3)取步驟(2)制備得到的2-氯-10-(3-(二甲胺基丙基))-7_硝基-5-氧-1OH-酚 噻嗪溶于無水乙醇中，加入鈀碳催化劑，連續(xù)通入氫氣還原，通過色譜柱層析分離得到目標 半抗原。
4.一種氯丙嗪人工抗原，其特征在于具有式(II)或(III)所示分子結(jié)構(gòu)
5.一種權(quán)利要求4所述氯丙嗪人工抗原的制備方法，其特征在于是采用戊二醛法或重 氮化法將權(quán)利要求1所述的氯丙嗪半抗原與蛋白質(zhì)偶聯(lián)制備得到。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于包括以下步驟(1)稱取所述氯丙嗪半抗原和載體蛋白一起溶于PBS溶液中，攪拌均勻；(2)將戊二醛逐滴滴入步驟(1)所述混合溶液中，滴加完畢后室溫攪拌反應(yīng)；(3)將經(jīng)步驟(2)反應(yīng)后的溶液透析得到目的產(chǎn)物，分裝后于_20°C保存； 或者包括以下步驟(1)稱取所述氯丙嗪半抗原溶于鹽酸中，調(diào)節(jié)溶液PH值；(2)取亞硝酸鈉溶液逐滴加入到步驟(1)氯丙嗪半抗原溶液中，重氮化反應(yīng)；(3)將載體蛋白溶于PBS溶液中，將步驟(2)重氮化反應(yīng)后的溶液逐滴加入到載體蛋白 溶液中，調(diào)節(jié)溶液PH值，過夜；(4)將經(jīng)步驟(3)反應(yīng)后的溶液透析得到目的產(chǎn)物，分裝后_20°C保存。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的制備方法，其特征在于所述載體蛋白為牛血清白蛋白質(zhì)、 人血清蛋白質(zhì)、血藍蛋白或卵清蛋白，優(yōu)選牛血清白蛋白。
8.—種權(quán)利要求4所述人工抗原在制備氯丙嗪抗體或在檢測氯丙嗪中方面的應(yīng)用。
9.一種采用權(quán)利要求4所述人工抗原制備得到的氯丙嗪單克隆抗體、多克隆抗體或基 因工程抗體。
10.一種權(quán)利要求9所述抗體在檢測氯丙嗪中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種氯丙嗪半抗原、人工抗原、抗體及其制備方法和應(yīng)用。所述氯丙嗪人工半抗原具有式(I)所示分子結(jié)構(gòu)所述氯丙嗪人工抗原具有式(II)或(III)所示分子結(jié)構(gòu)采用本發(fā)明抗原得到的抗血清的效價可達1∶3×105，最低檢測限為3ng/mL，半抑制濃度為29ng/mL，產(chǎn)生的抗體的特異性高、靈敏度高、準確度高，本發(fā)明的抗原及抗體在食品中氯丙嗪的殘留檢測上具有廣泛的應(yīng)用前景。
文檔編號C07K14/795GK101987836SQ20101026899
公開日2011年3月23日 申請日期2010年8月31日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月31日
發(fā)明者孫遠明, 徐振林, 楊金易, 沈玉棟, 王弘, 肖犇, 雷紅濤 申請人:華南農(nóng)業(yè)大學