專利名稱：一種用于抗菌的新化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于抗菌作用的新化合物，該化合物對MRSA、MSSA具有很好的抗 菌活性。
背景技術(shù)：
近年來，隨著抗生素的廣泛應(yīng)用(包括人和動(dòng)物)、糖皮質(zhì)激素及免疫抑制劑應(yīng)用 的增加以及老年患者的增多，肺部耐藥菌感染問題日益突出。這些耐藥菌常見的有耐青霉 素肺炎鏈球菌、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)、耐萬古霉素腸球菌(VRE)、產(chǎn)超廣譜β 內(nèi)酰胺酶(ESBL)革蘭陰性菌等。有關(guān)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌也是比較棘手的問題， 自首株MRSA檢出以來的40余年，MRSA感染在世界各地一直呈上升趨勢，美國國家院內(nèi)感 染監(jiān)測(NNIS)報(bào)道，1975年182所醫(yī)院MRSA占金葡菌感染總數(shù)的2.4%，1997年上升至 24. 8%。國內(nèi)90年代后京、滬等地大型醫(yī)院MRSA分離率均超過金葡菌感染總數(shù)的50%以 上。MRSA具有多重耐藥性，對所有β內(nèi)酰胺類抗生素(包括含酶抑制劑)耐藥，并常對喹 諾酮類、氨基糖苷類、大環(huán)內(nèi)酯類抗生素及克林霉素等耐藥。臨床證實(shí)，糖肽類抗生素(萬 古霉素、去甲萬古霉素、替考拉寧)對MRSA敏感，目前已成為臨床上首選藥物。1997年日 本發(fā)現(xiàn)對萬古霉素中度敏感的金黃色葡萄球菌(VISA)，2002年美國發(fā)現(xiàn)耐萬古霉素的金 黃色葡萄球菌(VRSA)，迄今為止，全世界已報(bào)道多例VISA及2例VRSA感染的病例。VISA 感染可選用糖肽類與其他抗生素聯(lián)合治療，如利福平、阿米卡星/阿貝卡星等，亦可選用新 型抗生素，如奎奴普丁 /達(dá)福普丁(quinupristin/dol fopristin)、利奈唑胺(Iinezolid) 等，VRSA感染可選用新型抗生素。然而這些藥物在臨床應(yīng)用一段時(shí)間后均產(chǎn)生了不同程度 的耐藥性，因此探究針對耐藥菌的新抗生素成為了必要。

發(fā)明內(nèi)容
我們提供了一種新的四環(huán)素類化合物，這種化合物以土霉素為原料，經(jīng)過硝化、還 原、純化、精制等反應(yīng)而得。這種化合物對耐甲氧西林金葡菌(MRSA)、甲氧西林敏感金葡菌 (MSSA)的抑菌效果顯著，優(yōu)于土霉素等抗生素。
具體實(shí)施例實(shí)施例1 式1化合物的制備(1)硫酸9-硝基土霉素素的制備將一定量的鹽酸土霉素(Ikg)加入到96% -98% 的濃硫酸(4kg)中，溫度保持在10°C以下。然后冷卻溶液至低于7°C后，逐滴加入濃硝酸 (濃度大于90%，0. 2kg)，攪拌反應(yīng)混合物，期間溫度小于10°C。將反應(yīng)混合物傾入溫度在 0_5°C的異丙醇(25L)和庚烷(4L)的混合液中，保持溫度小于40°C下攪拌混懸液，待冷卻混 懸液至25°C以下是，離心硫酸9-硝基美他環(huán)素并用異丙醇和甲醇的混合液洗滌。在45°C 下干燥得產(chǎn)物1。(2)將得到的產(chǎn)物1溶解在甲醇(7L)和純凈水(0. 1L)的混合液中。將10%鈀-碳(0. 03kg)催化劑加入甲醇中，通入氫氣進(jìn)行氫化反應(yīng)至反應(yīng)完全，壓力小于5巴，溫度小于 25°C。濾除催化劑，將反應(yīng)混合物傾入到異丙醇(20L)和庚烷(IOL)的混合液中，冷卻至 0_5°C，攪拌混懸液離心產(chǎn)物，在40-45°C溫度下真空干燥得產(chǎn)物2，稱重0. 92kg。(3)將產(chǎn)物2 (0. 92kg)溶解在純凈水(5L)中，冷卻溶液至5°C下，加入Ikg的叔丁 基甘氨酰氯，攪拌反應(yīng)混合物并保證在溫度8°C以下，至產(chǎn)物2反應(yīng)完，將反應(yīng)混合液加入 到二氯甲烷(9L)和甲醇(2. 3L)的混合液中，保持溫度在小于10°C，用28%的氨水調(diào)節(jié)PH 至7. 0-7. 4，分離有機(jī)相。真空蒸發(fā)有機(jī)相，加入甲醇(6L)，在20-25°C下攪拌混懸物，過濾 固體并用甲醇洗滌，得濕粗品。(4)純化將粗品懸浮于丙酮(3L)和甲醇(3L)的混合液中，在小于25°C下攪拌混 懸物。過濾固體并用甲醇洗滌。(5)結(jié)晶將以上粗品溶解到甲醇(IL)和二氯甲烷(6L)的混合液中，攪拌混懸 物至溶解完全，以1 μ m的濾筒過濾溶液，在小于20°C下真空蒸餾，得到濃稠剩余物，在小 于 60°C下真空干燥得到 0. 93kg 該化合物，1H NMR(400MHz，DMS0-d6) δ 15. 02 (br s，2H)， 8. 01(br s, 1H)，7· 68 (d, J = 8. 7Hz, 1H)，6· 92 (d, J = 8. 7Hz, 1H)，6· 02 (br s，2H)，3· 49 (s, 2H)，3. 42-3. 38 (m, 1H)，3. 29 (d, J = 2. 7Hz, 1H)，2. 51 (d，J = 2. 7Hz, 1H)，2. 32-2. 28 (m, 1H)， 2. 27(s，6H)，1. 59(s，3H)，1. 10(s，9H) ； ESI-MS m/z 589. 24 (M+H)+。實(shí)施例2 式1化合物的抗菌活性研究2.1材料與方法抗菌藥物式1化合物對照藥鹽酸土霉素購自武漢遠(yuǎn)城化工有限公司被測菌株101株MRSA和105株MSSA均獲贈(zèng)于中山大學(xué)藥學(xué)院，經(jīng)鑒定后按NCCLS 標(biāo)準(zhǔn)確定。培養(yǎng)基購自法國生物梅里埃公司，批號811813401。方法采用二倍瓊脂稀釋法測定式1化合物和鹽酸土霉素對所有菌株的最低抑菌 濃度(MIC)。即先將兩種抗生素分別以不同濃度PH的無菌磷酸鹽緩沖液倍比稀釋成12個(gè)濃 度，將各濃度的藥液各IOml，分別加入到已溶化并冷至50°C左右的M-H瓊脂中，立即傾注平 皿，使培養(yǎng)基的抗生素最終濃度依次為0. 0625,0. 125,0. 25_128mg/L。用微量多點(diǎn)接種儀將 108-109CFU/ml菌懸液接種到含不同濃度抗生素的上述瓊脂平板表面，置35°C培養(yǎng)24h觀察 結(jié)果，以抑制細(xì)菌聲場的最低抗生素濃度確定為MIC。分別統(tǒng)計(jì)MIC范圍、MIC50、MIC90，并 根據(jù)抗菌藥物敏感的臨界濃度，計(jì)算對細(xì)菌的敏感率，同時(shí)描繪濃度積累抑菌百分率曲線。2. 2 結(jié)果式1化合物和鹽酸土霉素抗菌效果比較如表1 (MIC，mg/L)
權(quán)利要求
式I所示的化合物及其在藥學(xué)上可以接受的酸的鹽及水合物式IFSA00000267648300011.tif
2.含有權(quán)利要求1所述的式I化合物及其在藥學(xué)上可以接受的酸的鹽及水合物和其它 藥用輔料組成的藥物組合物。
3.如權(quán)利要求1和2所述的物質(zhì)或組合物用于抗菌作用。
全文摘要
一種具有顯著抗菌活性的新化合物，結(jié)構(gòu)如下(式I)，對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)及甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌(MSSA)具有很好的抗菌作用。(式I)
文檔編號C07C231/02GK101948403SQ20101028032
公開日2011年1月19日 申請日期2010年9月10日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月10日
發(fā)明者王偉, 蘇春華 申請人:蘇春華