專利名稱：一種生產(chǎn)制備奧利司他的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種生產(chǎn)制備奧利司他的方法，具體涉及一種提 取純化奧利司他的新方法。
背景技術(shù)：
奧利司他是長(zhǎng)效和強(qiáng)效的特異性胃腸道脂肪酶抑制劑，通過與胃和小腸腔內(nèi)胃脂 肪酶和胰脂肪酶的活性絲氨酸部位形成共價(jià)鍵使酶失活而發(fā)揮治療作用，主要用于治療和 預(yù)防與肥胖相關(guān)的病癥。其化學(xué)名為(S)-2-甲酰氨基-4-甲基-戊酸酯(S)-1-[[(2S， 3S) -3-己基-4-氧-2-氧雜環(huán)丁烷基]甲基]_十二烷基酯，結(jié)構(gòu)式如下奧利司他可以通過全合成方法以及發(fā)酵法生產(chǎn)。本專利涉及的奧利司他的生產(chǎn)方 法為發(fā)酵法生產(chǎn)，是鏈霉菌屬毒三素鏈霉菌經(jīng)過發(fā)酵后產(chǎn)生的尼泊司他汀經(jīng)氫化后的衍生 物。隨著時(shí)代的發(fā)展，公眾對(duì)藥品質(zhì)量的要求也越來越高。發(fā)酵法生產(chǎn)的奧利司他中 間體尼泊司他汀屬于胞外胞內(nèi)均有的脂溶性次級(jí)代謝產(chǎn)物，而且代謝副產(chǎn)物又多，本身給 產(chǎn)品的分離純化帶來了不小的困難。中國(guó)專利《一制胰菌素的提純方法》(公開號(hào)CN1266058A)公開的提純方法為發(fā) 酵產(chǎn)生的尼泊司他汀用庚烷以及含水乙酸等強(qiáng)極性溶劑進(jìn)行雙流萃取，對(duì)尼泊司他汀的純 度要求高，工藝路線比較復(fù)雜。中國(guó)專利《一種奧利司他的提純方法》(公開號(hào)CN1763021A)公開的提純方法為先 用中極性溶劑溶解過濾、除雜、結(jié)晶奧利司他，后用非極性溶劑奧利司他結(jié)晶，不能有效地 去除與奧利司他結(jié)構(gòu)類似的雜質(zhì)，得到高純度的奧利司他產(chǎn)品。美國(guó)專利US4598089提到通過發(fā)酵液預(yù)處理，離心得到菌絲體，甲醇/乙醇浸泡菌 絲體，硅膠柱層析(己烷甲醇水；己烷乙酸乙酯體系)其工藝繁瑣，柱層析條件不能 有效地去除雜質(zhì)，得到高品質(zhì)的產(chǎn)品。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明克服了現(xiàn)有技術(shù)工藝步驟復(fù)雜、較難獲得高純度的奧利司他的缺陷，通過 大孔吸附樹脂去除極性大的雜質(zhì)，通過硅膠柱層析去除奧利司他結(jié)構(gòu)類似的雜質(zhì)，提供了 可以將奧利司他制備成高純度的醫(yī)藥產(chǎn)品并適用于工業(yè)化生產(chǎn)的方法。
本發(fā)明公開了一種純化奧利司他的方法，具體步驟包括1)吸附樹脂純化奧利司他中間體尼泊司他汀發(fā)酵液，用丙酮浸提，浸提后過濾 菌體，丙酮浸提液用0. Ium鈦棒過濾器過濾后，用草酸調(diào)節(jié)PH至3. 0 4. 5，上大孔吸附樹 脂吸附，吸附量為30 50克/升樹脂。吸附速率為0. 5 0. 8柱體積/小時(shí)，吸附完后用 80%的丙酮溶液解析洗脫。洗脫速度0. 8 1柱體積/小時(shí)，洗脫體積3 4個(gè)柱體積， 直到TLC檢測(cè)無尼泊司他汀析出為止。2)洗脫液的萃取、氫化含有尼泊司他汀的洗脫液加水調(diào)節(jié)丙酮濃度至50 65%，后用庚烷萃取，得到含有尼泊司他汀的庚烷萃取相。尼泊司他汀庚烷萃取相濃縮后氫 化合成奧利司他；3)氫化后奧利司他的硅膠柱層析尼泊司他汀氫化得到奧利司他后，過濾去除 鈀碳催化劑，后濃縮氫化液至奧利司他濃度到10%左右，上硅膠柱。硅膠柱高徑比8 10 1，硅膠目數(shù)為80 100目，上樣量為80 100克/升，流動(dòng)相為庚烷乙酸乙酯= 4 1。洗脫速度為0.5 0.8柱體積/小時(shí)。TLC檢測(cè)收集，直到無奧利司他出現(xiàn)為止。4)濃縮、結(jié)晶奧利司他收集硅膠柱層析液濃縮后庚烷溶解，結(jié)晶，30°C真空干燥 后，得到單一雜質(zhì)小于0. 1 %，含量在99%以上的奧利司他產(chǎn)品。步驟1)中用草酸調(diào)節(jié)發(fā)酵浸提液的PH至3.0 4. 5，目的是更容易去除極性大的 部分雜質(zhì)，PH太大太小均達(dá)不到去雜的目的。步驟1)中所用丙酮量為1 2倍發(fā)酵液體積，太少給過濾帶來困難，同時(shí)收率變 低，太大則容易帶來更多的雜質(zhì)，優(yōu)選丙酮量為1. 5倍發(fā)酵液體積。步驟1)中所用大孔吸附樹脂型號(hào)為HZ818或HZ820型，吸附樹脂的尼泊司他汀的 吸附量為30 50克/升樹脂。吸附尼泊司他汀的速率為0. 5 0. 8柱體積/小時(shí)，太快 導(dǎo)致容易穿柱，太慢則影響吸附量。吸附完以后洗脫用的洗脫劑為80%丙酮，洗脫劑的流速 為0. 8 1柱體積/小時(shí)，洗脫相的用量為約3 4個(gè)柱體積。步驟2)中樹脂吸附洗脫液加水調(diào)節(jié)丙酮濃度優(yōu)選60%，奧利司他硅膠柱層析所 用的硅膠目數(shù)為80 100目，太細(xì)容易導(dǎo)致產(chǎn)品脫尾，分離效果變差。上樣量為80 100 克奧利司他/升硅膠，上樣量太小溶劑使用量太大，上樣量太大則影響分離效果。步驟2)中硅膠柱層析的流動(dòng)相為庚烷乙酸乙酯=4 1，洗脫速度為0.5 0.8 柱體積/小時(shí)。洗脫速度控制太快導(dǎo)致分離困難，太慢導(dǎo)致產(chǎn)品拖尾嚴(yán)重，影響分離效率。步驟1)、步驟3)中所述的TLC展開劑為庚烷乙酸乙酯=6:1。本發(fā)明的有益效果在于通過大孔吸附樹脂去除了奧利司他中間體中部分極性較 大的雜質(zhì)，通過硅膠柱層析，去除與奧利司他結(jié)構(gòu)類似的雜質(zhì)，本方法公開的奧利司他的純 化方法比較容易得到高品質(zhì)的奧利司他，獲得的產(chǎn)品含量高于99%，單一雜質(zhì)低于0. 1%, 適合于工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實(shí)施例方式下面通過一些實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作一些說明。應(yīng)理解這些實(shí)施例僅用于例證的目 的，并不限制本發(fā)明的范圍，同時(shí)，本領(lǐng)域技術(shù)人員對(duì)本發(fā)明作出的顯而易見的改變和修飾 也包含在本發(fā)明范圍之內(nèi)。實(shí)施例1
奧利司他中間體尼泊司他汀發(fā)酵液100升(發(fā)酵單位7克/升)加入100升丙酮， 攪拌浸提1小時(shí)后，板框壓濾，得到190升丙酮浸提液，用0. Ium鈦棒過濾器過濾，過濾后用 草酸調(diào)節(jié)PH至3. 0，20升HZ820型大孔吸附樹脂裝柱經(jīng)過預(yù)處理后吸附丙酮浸提液，吸附 速度為10升/小時(shí)。吸附完畢后用60升80%的丙酮溶液洗脫，洗脫速度為16升/小時(shí)， TLC檢測(cè)收集含尼泊司他汀的丙酮洗脫液。洗脫完畢后得到60升含尼泊司他汀的丙酮洗脫 液。60升丙酮洗脫液加入20升水，調(diào)節(jié)丙酮濃度約60%，加入20升庚烷萃取，萃取1 小時(shí)后，靜止分層，含有尼泊司他汀的庚烷萃取相濃縮，得到1公斤尼泊司他汀粗品，其中 尼泊司他汀濃度為60%。1公斤尼泊司他汀粗品加入15升庚烷和40克5%鈀碳，25°C、0. 3MPa氫化10小時(shí) 以后，得到奧利司他。奧利司他氫化液過濾去除鈀碳，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮氫化液至6升，準(zhǔn) 備上硅膠柱。7升80 100目硅膠經(jīng)活化后濕法裝柱，柱高徑比為10 1。裝柱用庚烷平衡好 以后開始上柱?？刂粕现俣葹?.5升/小時(shí)。上柱結(jié)束以后用庚烷乙酸乙酯=4 1 流動(dòng)相洗脫。控制洗脫速度為4升/小時(shí)，TLC檢測(cè)，收集含有奧利司他的組分，直至檢測(cè) 不到奧利司他為止。結(jié)束后得到洗脫相22升。濃縮后得到560克奧利司他濃縮物，奧利司 他含量為89%，最大雜質(zhì)為0. 25%。560克奧利司他濃縮物加入庚烷11升，結(jié)晶后抽濾，得到類白色結(jié)晶，最大雜質(zhì)為 0.15%。再加入11升庚烷溶解后結(jié)晶，抽濾后得到類白色結(jié)晶，最大雜質(zhì)為0.09%。結(jié)晶 30°C真空干燥30小時(shí)后，得到420克類白色產(chǎn)品。最大雜質(zhì)為0. 09%，產(chǎn)品含量為99%。實(shí)施例2尼泊司他汀發(fā)酵液500升(發(fā)酵單位7. 2克/升)用750升丙酮攪拌浸提1小時(shí) 后，板框壓濾，得到1200升丙酮浸提液，之后用0. Ium鈦棒過濾器過濾，過濾后用草酸調(diào)節(jié) PH至4. 0,90升HZ820型大孔吸附樹脂裝柱經(jīng)過預(yù)處理后吸附丙酮浸提液，吸附速度為50 升/小時(shí)。吸附完后用350升80%的丙酮溶液洗脫，洗脫速度為90升/小時(shí)，TLC檢測(cè)收 集含尼泊司他汀的丙酮洗脫液。洗脫后得到350升含尼泊司他汀的丙酮洗脫液。340升丙酮洗脫液加入118升水，調(diào)節(jié)丙酮濃度約65%左右，加入120升庚烷萃 取1小時(shí)，靜止分層，庚烷萃取相濃縮得到4. 25公斤尼泊司他汀粗品，尼泊司他汀濃度為 65%。4. 25公斤尼泊司他汀粗品加入200克5%鈀碳和60升庚烷，25°C、0. 3MPa氫化10 小時(shí)以后，過濾去除鈀碳。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮氫化液至30升，準(zhǔn)備上硅膠柱。30升80 100目硅膠經(jīng)活化后濕法裝柱，柱高徑比為9 1。用庚烷平衡好以后 開始上柱，上柱速度為15升/小時(shí)。上柱結(jié)束以后用庚烷乙酸乙酯4 1流動(dòng)相洗脫。 控制洗脫速度為20升/小時(shí)，TLC檢測(cè)，收集含有奧利司他的組分，直至檢測(cè)不到奧利司 他為止。結(jié)束后得到洗脫相95升，濃縮得到2. 5公斤奧利司他粗品，其中奧利司他含量為 88%，最大雜質(zhì)為0. 22%。2. 5公斤奧利司他粗品加入庚烷50升，結(jié)晶后抽濾，得到類白色結(jié)晶，最大雜質(zhì)為 0.13%。再加入50升庚烷結(jié)晶，抽濾后得白色結(jié)晶，最大雜質(zhì)為0.07%。結(jié)晶30°C真空干 燥30小時(shí)，得到1.76公斤白色產(chǎn)品。最大雜質(zhì)為0.07%，產(chǎn)品含量為99. 1%。
實(shí)施例3尼泊司他汀發(fā)酵液1000升(發(fā)酵單位6. 6克/升)加入1400升丙酮攪拌浸提1 小時(shí)后，壓濾得到2200升丙酮浸提液，用0. Ium鈦棒過濾器過濾，過濾后用草酸調(diào)節(jié)PH至 4. 5，160升HZ818型大孔吸附樹脂裝柱經(jīng)過預(yù)處理后吸附丙酮浸提液，速度為80升/小時(shí)， 吸附后用640升80%的丙酮溶液洗脫，洗脫速度為160升/小時(shí)，TLC檢測(cè)收集含尼泊司他 汀的丙酮洗脫液。洗脫完畢后得到640升含尼泊司他汀的丙酮洗脫液。640升丙酮洗脫液加入210升水，調(diào)節(jié)丙酮濃度約60%，加入220升庚烷萃取1小 時(shí)后，靜止分層，庚烷萃取相濃縮，得到8. 95公斤尼泊司他汀粗品，其中尼泊司他汀濃度為 58%。8. 95公斤尼泊司他汀粗品加入130升庚烷和350克5%鈀碳，25°C、0. 3MPa氫化 10小時(shí)以后，過濾去除鈀碳。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮氫化液至50升，準(zhǔn)備上硅膠柱。70升80 100目硅膠經(jīng)活化后濕法裝柱，柱高徑比為8 1。用庚烷平衡好以后 開始上柱，控制速度為35升/小時(shí)，上柱結(jié)束以后用庚烷乙酸乙酯=4 1流動(dòng)相洗脫， 控制洗脫速度為56升/小時(shí)，TLC檢測(cè)，收集含有奧利司他的組分，直至檢測(cè)不到奧利司他 為止。結(jié)束后得到洗脫相220升，濃縮后得到4. 97公斤奧利司他濃縮物，奧利司他含量為 85%，最大雜質(zhì)為0. 28%。4. 97公斤奧利司他濃縮物加入庚烷90升，結(jié)晶后抽濾，得到類白色結(jié)晶，最大雜 質(zhì)為0. 16%。再加入90升庚烷結(jié)晶，抽濾后得到類白色結(jié)晶，最大雜質(zhì)為0. 06%，結(jié)晶30°C 真空干燥30小時(shí)，得到3. 48公斤類白色產(chǎn)品。最大雜質(zhì)為0. 06%，產(chǎn)品含量為99. 2%。
權(quán)利要求
一種生產(chǎn)制備奧利司他的方法，包括以下步驟1)吸附樹脂純化奧利司他中間體尼泊司他汀發(fā)酵液用丙酮浸提，浸提后過濾菌體，丙酮浸提液經(jīng)過濾后用草酸調(diào)節(jié)PH至3.0～4.5，上大孔吸附樹脂吸附，吸附完后丙酮水溶液洗脫直到TLC檢測(cè)無尼泊司他汀析出為止；2)洗脫液的萃取、氫化樹脂吸附后洗脫液加水調(diào)節(jié)丙酮濃度，然后用庚烷萃取。含有尼泊司他汀的庚烷萃取液濃縮后氫化合成奧利司他；3)奧利司他的硅膠柱層析將步驟2)氫化得到的奧利司他液，濃縮，上硅膠柱，流動(dòng)相為庚烷 乙酸乙酯，檢測(cè)收集，直到TLC無產(chǎn)品出現(xiàn)為止；4)濃縮、結(jié)晶收集硅膠柱層析液濃縮后1～2次庚烷結(jié)晶，30℃真空干燥后，得到純度為99％以上的奧利司他產(chǎn)品。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟1)中用丙酮浸提發(fā)酵液，丙酮與發(fā)酵液 的體積比為1 2 1。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟1)中丙酮發(fā)酵浸提液用大孔吸附樹脂層 析，大孔吸附樹脂的型號(hào)為HZ818或HZ820型。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟1)中大孔吸附樹脂層析的吸附量為 30 50克/升樹脂。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟1)中大孔吸附樹脂洗脫液丙酮水溶液的 濃度為80%。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟2)中樹脂吸附洗脫液加水調(diào)節(jié)丙酮濃度 至50 65%。
7.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于樹脂吸附洗脫液加水調(diào)節(jié)丙酮濃度至60%。
8.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟1)、步驟3)中用到的TLC展開劑為庚 烷乙酸乙酯=6 1。
9.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟3)中奧利司他柱層析的流動(dòng)相為庚烷 乙酸乙酯=4 1。
10.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟3)中奧利司他柱層析的上樣量為80 100克/升。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種發(fā)酵法生產(chǎn)減肥藥物奧利司他的制備新方法。本發(fā)明制備方法包括發(fā)酵液浸提過濾、大孔吸附樹脂層析除雜、氫化后奧利司他的硅膠柱層析等步驟。通過發(fā)酵浸提液的大孔吸附樹脂層析以及奧利司他的硅膠柱層析等方法，達(dá)到良好的除雜、純化產(chǎn)品的效果。
文檔編號(hào)C07D305/12GK101948450SQ20101050517
公開日2011年1月19日 申請(qǐng)日期2010年10月13日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月13日
發(fā)明者劉茂田, 趙志全 申請(qǐng)人:魯南制藥集團(tuán)股份有限公司