專利名稱：酸模素的分離制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用高速逆流色譜法(HSCCC)分離制備高純度酸模素的方法。
背景技術(shù)：
羊蹄(Rumex japonicus Houtt.)為蓼科酸模屬植物，又名土大黃、金不換等，為多年生草本，資源極為豐富，廣泛分布于我國華東、華中、華南等地區(qū)，生于田邊、路旁、河灘、 溝邊濕地。其根入藥，為較常用藥，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為下品，味苦，性寒。有殺蟲、活血止血、清熱解毒等功效，用于皮膚病、疥癬、各種出血及各種炎癥。原源等采用高效液相色譜法對5種酸模屬植物根及3個不同產(chǎn)地羊蹄根中酸模素的含量進(jìn)行了測定，不同基原的 “羊蹄類藥材”中酸模素含量存在較大差異，5種藥材中羊蹄的酸模素含量最高，可達(dá)0. 13% 以上，金不換和齒果酸模次之，具有作為抗真菌藥的開發(fā)利用價值。酸模素(Musizin)，又名羊蹄根素；分子式=C13H12O3 ；分子量216. 23 ；為黃色針狀結(jié)晶，mp. 1640C -165°C。藥理研究表明酸模素具有抗菌、抗真菌作用。對深紅色發(fā)癬菌、枯草桿菌、白色念珠菌和八迭球菌的最低抑菌濃度分別為50，25，100，100yg/ml ；可以作為抗氧化劑用于食品和化妝品；對睪丸激素還原酶有抑制作用；含有酸模素的牙粉制品可以預(yù)防和治療牙齦炎和牙床的膿溢。中國專利申請?zhí)?00610046584. 1利用羊蹄根根部所含的大黃素、酸模素等成份，抑制、殺滅紅色毛癬菌、及其它致病菌，達(dá)到治愈腳氣病的目的。文獻(xiàn)報道了用硅膠柱層析方法得到酸模素的方法(鄭水慶，等.中藥羊蹄化學(xué)成分的研究(I).第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報.2000，21 (10) :910-913)，采用80%乙醇室溫冷浸提取多次，減壓濃縮，依次用二氯甲烷等多種溶劑萃取，在二氯甲烷的提取物經(jīng)硅膠柱層析分離得到酸模素，該方法操作步驟繁瑣，過程中損失大，回收率低。高速逆流色譜(HSCCC)是國際上世紀(jì)80年代以來在液-液分配色譜基礎(chǔ)上發(fā)展起來的新型分離技術(shù)，其分離原理是利用螺旋柱在高速行星運(yùn)動時產(chǎn)生的巨大離心力，使螺旋柱中互不相溶的兩相不斷混合，達(dá)到穩(wěn)定的流體動力學(xué)平衡態(tài)。該技術(shù)不采用固態(tài)吸附劑，是全液態(tài)的色譜方法。與其他的色譜技術(shù)相比，HSCCC是能夠消除固體吸附劑所導(dǎo)致的樣品不可逆吸附和對樣品的沾染、失活、變性等影響，實現(xiàn)復(fù)雜混合物中各組分的高純度分離。HSCCC的流動相、固定相為互不相溶的液體。利用螺旋管柱方向性及特定的高速流星式旋轉(zhuǎn)所產(chǎn)生的離心場作用，使無載體支持的固定相穩(wěn)定地保留在聚四氟乙烯管中，利用恒流泵連續(xù)輸入流動相，隨流動相進(jìn)入螺旋柱的溶質(zhì)再兩相間持續(xù)分配，按分配系數(shù)大小依次洗脫。高速逆流色譜作為一種新型的分離技術(shù)，有許多優(yōu)點(diǎn)是傳統(tǒng)液-固色譜無法比擬的，因而具有廣闊的應(yīng)用前景。首先，它的流動相和固定相均為液體，不需固體載體，避免了不可逆吸附；其次，它的分離率高，可達(dá)幾千個理論塔板數(shù)；此外，它的進(jìn)樣量大，可從毫克到克量級。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是客服現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，采用高速逆流色譜法分離制備酸模素的方法。該方法得到的酸模素含量高達(dá)98%。本發(fā)明的技術(shù)方案如下酸模素的分離制備方法，其特征在于包括以下步驟1)將羊蹄用二氯甲烷滲漉提取，回收溶劑，得粗提取干燥物；2)選擇兩相溶劑體系，采用高速逆流色譜儀，將步驟1)中的粗提取物溶解于上相和下相的混合溶液中，再將固定相泵滿色譜分離柱，連接柱首端與進(jìn)樣閥，收集分離物，濃縮、干燥得到酸模素。所述步驟2)中的兩相溶劑體系是石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水，體積比為 (5-8) (7-10) (4-6) 0-4)，優(yōu)選體積比為 6 8 4 2、8 10 6 4、 5·8·5·2ο所述高速逆流色譜法所用分離柱轉(zhuǎn)速為600-900rpm，優(yōu)選650-800rpm。所述高速逆流色譜法中流動相流速為0. 5-3ml/min,優(yōu)選為1. 0-2. 5ml/min。本發(fā)明的有益效果由于采用了合理的溶劑體系，控制溫度、轉(zhuǎn)速、流動相流速等條件，本發(fā)明可得到高純度的酸模素。且該方法簡單，適于各種型號的逆流色譜儀分離純化酸模素，條件溫和、回收率高，用時短。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述，但本發(fā)明的實施方式并不僅限于此。實施例1 取羊蹄根150g (南京產(chǎn))，用IOOml 二氯甲烷浸潤后滲漉提取，至滲漉液顏色變淺， 回收溶劑，得棕褐色粗提干燥物16. 3g。采用高速逆流色譜儀，色譜儀分離溶劑體系由石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水組成， 體積比為6 :8:4: 2，將溶劑體系配置于分液漏斗中，充分振搖后靜置分層，取上相為固定相，下相為流動相，取粗提干燥物1. 5g溶于30ml上層和下層的混合溶劑中，使高速逆流色譜儀柱子中充滿固定相，然后將柱的首端與進(jìn)樣閥相連接，開啟速度控制器，使主機(jī)轉(zhuǎn)動，轉(zhuǎn)速達(dá)到700rpm，開始以2. Oml/min流速泵入流動相，再由進(jìn)樣閥泵入溶有1. 5g樣品的溶劑，待流動相開始流出色譜柱時開始收集分離物，設(shè)定波長為2Mnm，根據(jù)檢測器圖譜接受目標(biāo)成分，濃縮后得到酸模素92mg，其中純度98. 5%。實施例2:取羊蹄根150g (南京產(chǎn))，用IOOml 二氯甲烷浸潤后滲漉提取，至滲漉液顏色變淺， 回收溶劑，得棕褐色粗提干燥物16. 3g。采用高速逆流色譜儀，色譜儀分離溶劑體系由石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水組成， 體積比為8 10 6 4，將溶劑體系配置于分液漏斗中，充分振搖后靜置分層，取上相為固定相，下相為流動相，取粗提干燥物2. Ig溶于40ml上層和下層的混合溶劑中，使高速逆流色譜儀柱子中充滿固定相，然后將柱的首端與進(jìn)樣閥相連接，開啟速度控制器，使主機(jī)轉(zhuǎn)動，轉(zhuǎn)速達(dá)到650rpm，開始以1. 5ml/min流速泵入流動相，再由進(jìn)樣閥泵入溶有2. Ig樣品的溶劑，待流動相開始流出色譜柱時開始收集分離物，設(shè)定波長為2Mnm，根據(jù)檢測器圖譜接受目標(biāo)成分，濃縮后得到酸模素91mg，其中純度98. 8%。實施例3 取羊蹄根150g (南京產(chǎn))，用IOOml 二氯甲烷浸潤后滲漉提取，至滲漉液顏色變淺， 回收溶劑，得棕褐色粗提干燥物16. 3g。采用高速逆流色譜儀，色譜儀分離溶劑體系由石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水組成， 體積比為5 :7:5: 3，將溶劑體系配置于分液漏斗中，充分振搖后靜置分層，取上相為固定相，下相為流動相，取粗提干燥物2. 5g溶于50ml上層和下層的混合溶劑中，使高速逆流色譜儀柱子中充滿固定相，然后將柱的首端與進(jìn)樣閥相連接，開啟速度控制器，使主機(jī)轉(zhuǎn)動，轉(zhuǎn)速達(dá)到900rpm，開始以1. Oml/min流速泵入流動相，再由進(jìn)樣閥泵入溶有2. 5g樣品的溶劑，待流動相開始流出色譜柱時開始收集分離物，設(shè)定波長為2Mnm，根據(jù)檢測器圖譜接受目標(biāo)成分，濃縮后得到酸模素90mg，其中純度98. 4%。實施例4 取羊蹄根150g (南京產(chǎn))，用IOOml 二氯甲烷浸潤后滲漉提取，至滲漉液顏色變淺， 回收溶劑，得棕褐色粗提干燥物16. 3g。采用高速逆流色譜儀，色譜儀分離溶劑體系由石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水組成， 體積比為6 10 6 4，將溶劑體系配置于分液漏斗中，充分振搖后靜置分層，取上相為固定相，下相為流動相，取粗提干燥物2. Sg溶于55ml上層和下層的混合溶劑中，使高速逆流色譜儀柱子中充滿固定相，然后將柱的首端與進(jìn)樣閥相連接，開啟速度控制器，使主機(jī)轉(zhuǎn)動，轉(zhuǎn)速達(dá)到850rpm，開始以0. 5ml/min流速泵入流動相，再由進(jìn)樣閥泵入溶有2. 8g樣品的溶劑，待流動相開始流出色譜柱時開始收集分離物，設(shè)定波長為254nm，根據(jù)檢測器圖譜接受目標(biāo)成分，濃縮后得到酸模素Mmg，其中純度98. 1%。實施例5 取羊蹄根150g (南京產(chǎn))，用IOOml 二氯甲烷浸潤后滲漉提取，至滲漉液顏色變淺， 回收溶劑，得棕褐色粗提干燥物16. 3g。采用高速逆流色譜儀，色譜儀分離溶劑體系由石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水組成， 體積比為7 :9:4: 3，將溶劑體系配置于分液漏斗中，充分振搖后靜置分層，取上相為固定相，下相為流動相，取粗提干燥物3. Og溶于60ml上層和下層的混合溶劑中，使高速逆流色譜儀柱子中充滿固定相，然后將柱的首端與進(jìn)樣閥相連接，開啟速度控制器，使主機(jī)轉(zhuǎn)動，轉(zhuǎn)速達(dá)到750rpm，開始以2. 2ml/min流速泵入流動相，再由進(jìn)樣閥泵入溶有3. Og樣品的溶劑，待流動相開始流出色譜柱時開始收集分離物，設(shè)定波長為254nm，根據(jù)檢測器圖譜接受目標(biāo)成分，濃縮后得到酸模素93mg，其中純度98. 3%。實施例6 取羊蹄根150g (南京產(chǎn))，用IOOml 二氯甲烷浸潤后滲漉提取，至滲漉液顏色變淺， 回收溶劑，得棕褐色粗提干燥物16. 3g。采用高速逆流色譜儀，色譜儀分離溶劑體系由石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水組成， 體積比為5 :8:5: 2，將溶劑體系配置于分液漏斗中，充分振搖后靜置分層，取上相為固定相，下相為流動相，取粗提干燥物3. 5g溶于70ml上層和下層的混合溶劑中，使高速逆流色譜儀柱子中充滿固定相，然后將柱的首端與進(jìn)樣閥相連接，開啟速度控制器，使主機(jī)轉(zhuǎn)動，轉(zhuǎn)速達(dá)到800rpm，開始以1. 5ml/min流速泵入流動相，再由進(jìn)樣閥泵入溶有3. 5g樣品的溶劑，待流動相開始流出色譜柱時開始收集分離物，設(shè)定波長為2Mnm，根據(jù)檢測器圖譜接受目標(biāo)成分，濃縮后得到酸模素88mg，其中純度98. 9%。
權(quán)利要求
1.酸模素的分離制備方法，其特征在于包括以下步驟1)將羊蹄用二氯甲烷滲漉提取，回收溶劑，得粗提取干燥物；2)選擇兩相溶劑體系，采用高速逆流色譜儀，將步驟1)中的粗提取物溶解于上相和下相的混合溶液中，再將固定相泵滿色譜分離柱，連接柱首端與進(jìn)樣閥，收集分離物，濃縮、干燥得到酸模素。
2.按照權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述步驟2)中的兩相溶劑體系是石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水，體積比為(5-8) (7-10) (4-6) 0-4)，優(yōu)選體積比為 6 8 4 2、8 10 6 4、5 8 5 2。
3.按照權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于所述高速逆流色譜法所用分離柱轉(zhuǎn)速為 600-900rpm，優(yōu)選 650_800rpm。
4.按照權(quán)利要求1-3所述的制備方法，其特征在于所述高速逆流色譜法中流動相流速為 0. 5-3ml/min，優(yōu)選為 1. 0-2. 5ml/min。
全文摘要
本發(fā)明公開了酸模素的分離制備方法。所述方法包括以下步驟1)將羊蹄用二氯甲烷滲漉提取，回收溶劑，得粗提取干燥物；2)選擇兩相溶劑體系，采用高速逆流色譜儀，將步驟1)中的粗提取物溶解于上相和下相的混合溶液中，再將固定相泵滿色譜分離柱，連接柱首端與進(jìn)樣閥，收集分離物，濃縮、干燥得到酸模素。步驟2)中的兩相溶劑體系是石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水，兩相中的上相為固定相，下相為流動相。按本方法得到的酸模素含量達(dá)到98％。
文檔編號C07C45/79GK102476986SQ201010557828
公開日2012年5月30日 申請日期2010年11月25日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月25日
發(fā)明者劉東鋒, 李法慶 申請人:蘇州寶澤堂醫(yī)藥科技有限公司