專利名稱：含有2-O-α-D-葡萄糖基-L-抗壞血酸無水結晶的粉末及其制造方法和用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及含有2-0- α -D-葡萄糖基_L_抗壞血酸無水結晶的粉末及其制造方法 和用途，更具體地，涉及與已有物相比顯著更難以固結的含有2-0- α -D-葡萄糖基-L-抗壞 血酸無水結晶的粉末及其制造方法，以及以其作為食品原料、化妝品原料、準藥品原料、藥 品原料的用途。
背景技術：
由于L-抗壞血酸具有優(yōu)異的生理活性及抗氧化作用，一直以來用于包括食品、化 妝品等的多種用途中。但是，L-抗壞血酸則由于具有直接還原性的原因而不穩(wěn)定，存在易 于氧化分解、易于喪失生理活性的較大的缺點。為了消除L-抗壞血酸的缺點，本申請人作 為共同申請人中的一人在專利文件1中公開了在L-抗壞血酸的2位羥基上結合了 1分子 的D-葡萄糖得到2-0- α -D-葡萄糖基-L-抗壞血酸(以下在本說明書中簡稱為“抗壞血酸 2-葡萄糖苷”)。這種抗壞血酸2-葡萄糖苷不具有直接還原性，很穩(wěn)定，并且，具有在生物 體內原本存在的酶的作用下分解為L-抗壞血酸和D-葡萄糖，發(fā)揮L-抗壞血酸原本的生理 活性的劃時代的特性。根據(jù)專利文獻1公開的制造方法，含有L-抗壞血酸和α-葡萄糖基 糖化合物的溶液在環(huán)麥芽糖糊精葡聚糖轉移酶(以下簡稱為“CGT酶”)或α-葡萄糖苷酶 等的糖轉移酶作用下生成抗壞血酸2-葡萄糖苷。此外，本申請人在專利文獻2中公開了從抗壞血酸2-葡萄糖苷的過飽和溶液中成 功析出抗壞血酸2-葡萄糖苷的晶體，得到抗壞血酸2-葡萄糖苷以及包含抗壞血酸2-葡萄 糖苷的含有抗壞血酸2-葡萄糖苷結晶的粉末。并且，現(xiàn)階段認為抗壞血酸2-葡萄糖苷結 晶僅存在無水結晶物。因此，在非專利文獻1及2中，報道了用X射線解析抗壞血酸2-葡 萄糖苷結晶的結構的結果。此外，本申請人在專利文獻3及4中公開了一種高含抗壞血酸2-葡萄糖苷的物 質的制造方法，其將含有酶反應生成的抗壞血酸2-葡萄糖苷的溶液進行使用強酸性陽離 子交換樹脂的柱層析獲得高喊抗壞血酸2-葡萄糖苷的級分。此外，本申請人在專利文獻5 中公開了一種高含抗壞血酸2-葡萄糖苷的物質的制造方法，將含有酶反應生成的抗壞血 酸2-葡萄糖苷的溶液中用陰離子交換膜的電透析法除去L-抗壞血酸或糖類等夾雜物；在 專利文獻6中公開了一種高含抗壞血酸2-葡萄糖苷的物質的制造方法，將含有抗壞血酸 2-葡萄糖苷的溶液接觸陰離子交換樹脂，可選擇性除去陰離子交換樹脂吸附的成分，得到 高含抗壞血酸2-葡萄糖苷的級分。此外，本申請人在專利文獻7中公開了一種抗壞血酸2-葡萄糖苷的制造方法，含 有L-抗壞血酸與α-葡萄糖基糖化合物的溶液在α-異麥芽糖基葡萄糖(異麥芽糖基葡 萄糖)生成酶、或α-異麥芽糖基葡萄糖生成酶與CGT酶的作用下生成抗壞血酸2-葡萄 糖苷。此外，本申請人在專利文獻8及9中還分別公開了 α-異麥芽糖基葡萄糖生成酶及 α -異麥芽糖基轉移酶催化向L-抗壞血酸的糖轉移，生成抗壞血酸2-葡萄糖苷。
同時，關于抗壞血酸2-葡萄糖苷的用途，例如專利文獻10 四中示出了多種建 議。由于抗壞血酸2-葡萄糖苷具有的這些優(yōu)異的特性，可用作食品原料、化妝品原料、準藥 品原料或藥品原料，與之前的L-抗壞血酸的用途相比，廣泛使用在以往由于L-抗壞血酸不 穩(wěn)定而不能將L-抗壞血酸進行使用的其它用途。由上述內容可知，目前已知以L-抗壞血酸和淀粉為原料利用多種糖轉移酶可制 得抗壞血酸2-葡萄糖苷。然而，如果本申請人根據(jù)目前已知的知識，將認為用作為糖轉移 酶的CGT酶來作用含有L-抗壞血酸和淀粉的溶液的方法是抗壞血酸2-葡萄糖苷的生成率 最高、可以成為工業(yè)上優(yōu)選的方法。基于這種認識，本申請人根據(jù)用CGT酶作用于含有L-抗 壞血酸和淀粉的溶液的方法制造含有抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶的粉末，將其作為化 妝品·準藥品原料以及食品原料，分別以商品名“AA2G” (株式會社林原生物化學研究所出 售)以及商品名“7 7 二 7 > 7(株式會社林原商社出售)進行出售(下文中，這些 作為化妝品·準藥品原料以及食品原料出出售的現(xiàn)有的含有抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結 晶的粉末簡稱為“準藥品級的粉末”)。然而，準藥品級的粉末是在制品規(guī)格上，抗壞血酸2-葡萄糖苷的純度在98. 0質 量％以上的較高純度的產品，盡管剛制得的粉末具有良好的流動性，但長期擱置于高溫、高 濕度的環(huán)境下時將由于自重以及吸濕出現(xiàn)固結的缺點。鑒于這種缺點，將準藥品級的粉末 各IOkg裝入聚乙烯制的袋子中，與干燥劑一起裝入附有蓋子的鋼制罐中作為商品形態(tài)進 行銷售。但根據(jù)本發(fā)明人隨后得到的認識，即使是這種商品形態(tài)的準藥品級粉末在長期的 保存期間也通常出現(xiàn)固結，出現(xiàn)損壞粉末有效性的問題。一旦用作化妝品原料及準藥品原 料或食品原料的含有抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶的粉末出現(xiàn)固結，對原來以原材料是 具有流動性的粉末為前提設計的制造設備來說將在原材料輸送、篩分、混合等步驟上出現(xiàn)
障礙。
現(xiàn)有技術文獻
專利文獻
專利文獻1特開平3-139288號公報
專利文獻2特開平3-135992號公報
專利文獻3特開平3-18；3492號公報
專利文獻4特開平5-117290號公報
專利文獻5特開平5-208991號公報
專利文獻6特開2002-088095號公報
專利文獻7特開2004-065098號公報
專利文獻8國際公開W002010361號單行本
專利文獻9國際公開W001090338號單行本
專利文獻10國際公開W005087182號單行本
專利文獻11特開平4-046112號公報
專利文獻12特開平4-182412號公報
專利文獻13特開平4-182413號公報
專利文獻14特開平4-18M19號公報
專利文獻15特開平4-182415號公報
專利文獻16特開平4-18M14號公報專利文獻17特開平8-333260號公報專利文獻18特開2005-239653號公報專利文獻19國際公開W006033412號單行本專利文獻20特開2002_3洸擬4號公報專利文獻21特開2003-17U90號公報專利文獻22特開2004-217597號公報專利文獻23國際公開W005034938號單行本專利文獻24特開2006-225327號公報專利文獻25國際公開W006137U9號單行本專利文獻沈國際公開W006022174號單行本專利文獻27特開2007-063177號公報專利文獻觀國際公開W006132310號單行本專利文獻四國際公開W007086327號單行本非專利文獻非專利文獻17 >夕· 4 夕力t 二等，「力一# /、J卜、l· 一卜·丨J寸一手」(碳 水化合物研究)，第232卷，197-205頁(1992年)非專利文獻24 乂々工 工夕力等，「4 >夕一于〉3于卟·夕弋一于卟 才 7·· · 7 7 — * 二一歹^夕7」(國際制藥學期刊)，第331卷，38-45頁(2007年)

發(fā)明內容
發(fā)明解決的課題為了解決上述缺點，本發(fā)明的要解決的技術問題是提供一種含有抗壞血酸2-葡 萄糖苷無水結晶的粉末及其制造方法和用途，該粉末要比常用的準藥品級的含有抗壞血酸 2-葡萄糖苷無水結晶的粉末顯著更難以固結。解決課題的技術手段為了解決上述課題，本發(fā)明人反復研究含有抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶的粉 末的固結性，本申請人發(fā)現(xiàn)作為分析用標準試劑銷售的含有抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結 晶的粉末(商品名“抗壞血酸2-葡萄糖苷999”，代碼編號AG124，株式會社林原生物化學 研究所銷售)(以下簡稱“試劑級的粉末”)即使在準藥品級的粉末固結的條件下仍不固 結，得以保持粉末的形狀。這種試劑級的粉末與準藥品級的粉末相同，均是經過CGT酶作用 于含有L-抗壞血酸和淀粉的溶液的步驟、純化得到的含有抗壞血酸2-葡萄糖苷的溶液、 濃縮、析出抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶、收集結晶制得的粉末，但與準藥品級的粉末所 不同的，在通常的步驟中還加入了將一次得到的結晶溶解后再次析出晶體的再結晶步驟、 以及將再結晶步驟得到的結晶用經純化水等反復洗凈的洗凈步驟，由此可以得到抗壞血酸 2-葡萄糖苷純度在99. 9質量％以上的純度極高級水平的粉末。因此，推測如果準藥品級的 粉末中抗壞血酸2-葡萄糖苷純度提高至99. 9質量％以上，是否也可以得到難以固結的含 有抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶的粉末。然而，為了使抗壞血酸2-葡萄糖苷的純度達到為99. 9質量％以上的高純度，如上所述，在常規(guī)的制造步驟中必須加入再結晶步驟以及反復用經純化水等洗凈的步驟，這樣 不僅將增加制造所花費的時間和勞力，并且在再結晶步驟及洗凈步驟中還無法避免抗壞血 酸2-葡萄糖苷的損失，導致出現(xiàn)制品成品率低下、制造成本大幅上升的缺點。因此，為了得 到比準藥品級的粉末更難以固結的含有抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶的粉末的目的，單 純地將抗壞血酸2-葡萄糖苷的純度提高到99. 9質量％以上的選擇項是不現(xiàn)實的。因而，本發(fā)明人著重研究了含有抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶的粉末的固結性， 重復了多種嘗試錯誤的結果，發(fā)現(xiàn)盡管含有抗壞血酸2-葡萄糖苷的無水結晶的粉末中抗 壞血酸2-葡萄糖苷的純度與之前的準藥品級的粉末水平相同；或者，即使沒有達到試劑級 的純度水平，只要使含有抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶的粉末中抗壞血酸2-葡萄糖苷無 水結晶的結晶度也達到90%以上；或者，粉末的動態(tài)水分吸附量為0.01質量％以下，則該 粉末就比準藥品級的粉末濕著更難以固結。此外，本發(fā)明人進一步研究了結晶度及動態(tài)水分吸附量達到上述水平的含有抗壞 血酸2-葡萄糖苷無水結晶的粉末的工業(yè)規(guī)模的制造方法，結果發(fā)現(xiàn)，含有L-抗壞血酸與淀 粉的溶液在CGT酶和葡萄糖淀粉酶的依次作用下，溶液中能按35質量％以上的高生成率生 成抗壞血酸2-葡萄糖苷，純化該溶液，直至溶液中抗壞血酸2-葡萄糖苷的含量按無水物換 算時超過86質量％時，從該溶液中析出含抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶的粉末，可以較 為容易地獲得結晶度在90%以上、粉末的動態(tài)水分吸附量為0. 01質量％以下的抗壞血酸 2-葡萄糖苷無水結晶。此外，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，含有抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶的結晶度90%以上或動 態(tài)水分吸附量0.01質量％以下的抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶的粉末與之前的準藥品級 粉末相比顯著更難以固結，易于用作食品原料、化妝品原料、準藥品原料以及藥品原料，具 有重大意義和價值，由此完成本發(fā)明。即，本發(fā)明提供了一種含有抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶的粉末，其特征是按 無水物換算含有超過98. 0質量％不足99. 9質量％的抗壞血酸2-葡萄糖苷，且基于粉末X 射線衍射曲線算出的抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶的結晶度為90%以上，由此解決了上 述課題。此外，本發(fā)明提供了一種含有抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶的粉末，其特征是 按無水物換算含有超過98. 0質量％不足99. 9質量％的抗壞血酸2-葡萄糖苷，且氮氣流下 除去粉末中的水分后，在溫度25°C、相對濕度35質量％的條件下保持12小時時其動態(tài)水分 吸附量為0. 01質量％以下，由此解決了上述課題。在優(yōu)選的一種情況中，本發(fā)明的含有抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶的粉末含有 占粉末全體70質量％以上的粒徑不足150 μ m的粒子以及占粉末全體40 60質量％的 粒徑53 μ m以上不足150 μ m的粒子。此外，在優(yōu)選的一種情況中，本發(fā)明的含有抗壞血酸 2-葡萄糖苷無水結晶的粉末含有L-抗壞血酸和/或D-葡萄糖，且粉末全體的還原能力不 足1質量％。此外，在更優(yōu)選的一種情況中，本發(fā)明的含有抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶 的粉末中L-抗壞血酸量按無水物換算為0. 1質量％以下。如上所述的本發(fā)明的含有抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶的粉末，典型的是從經 過CGT酶作用于含有L-抗壞血酸和淀粉的溶液的步驟得到的含有抗壞血酸2-葡萄糖苷的 溶液制得的粉末。
此外，本發(fā)明還提供了一種含有抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶的粉末的制造方 法，其特征是包括含有L-抗壞血酸和淀粉的溶液經CGT酶和葡萄糖淀粉酶的依次作用，得 到抗壞血酸2-葡萄糖苷生成率35質量％以上的含有抗壞血酸2-葡萄糖苷的溶液的步驟； 純化得到的含有抗壞血酸2-葡萄糖苷的溶液，使抗壞血酸2-葡萄糖苷的含量按無水物換 算超過86質量％的步驟；從按無水物換算含有超過86質量％的抗壞血酸2-葡萄糖苷的溶 液中析出抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶的步驟；收集析出的抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結 晶的步驟；對收集的抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶老化、干燥、根據(jù)需要而粉碎的步驟。在本發(fā)明的制造方法中使用的CGT酶只要能使含有L-抗壞血酸和淀粉的溶液在 CGT酶和葡萄糖淀粉酶的依次作用下能按照生成率35質量％以上的高生產率生成抗壞血 酸2-葡萄糖苷的酶，其起源和來源沒有特別限制，可以是天然的酶，也可以是基因重組得 到的酶。但是，從抗壞血酸2-葡萄糖苷的生成率觀點出發(fā)，優(yōu)選下述的經基因重組技術變 異的來自嗜熱脂肪土芽孢桿菌(GecAacillus stearother mophilus) Tc_62株的CGT酶、來 自嗜熱脂肪土芽孢桿菌Tc-27株的CGT酶、或來自嗜熱脂肪土芽孢桿菌Tc-91株的CGT酶 得到的變異CGT酶，其中，嗜熱脂肪土芽孢桿菌Tc-62株產生的CGT酶由于能獲得較高的 抗壞血酸2-葡萄糖苷的生成率，因此最為優(yōu)選。使用的葡萄糖淀粉酶沒有特別限制，只要能使含有L-抗壞血酸和淀粉的溶液在 CGT酶和葡萄糖淀粉酶的依次作用下能按照生成率35質量％以上的高生產率生成抗壞血 酸2-葡萄糖苷的酶即可，其起源和來源沒有特別限制，可以是天然的酶，也可以是基因重 組得到的酶。也依賴于作為原料使用的淀粉的種類，也可以在含有L-抗壞血酸和淀粉的溶液 經CGT酶作用時，使異淀粉酶或支鏈淀粉酶等淀粉脫支酶與CGT酶一同作用來提高抗壞血 酸2-葡萄糖苷生成率。且，在本發(fā)明的制造方法的優(yōu)選的一種情況中，上述純化含有抗壞血酸2-葡萄糖 苷的溶液至抗壞血酸2-葡萄糖苷含量按無水物換算超過86質量％的步驟中，將經過濾、脫 鹽的酶反應液接觸陰離子交換樹脂，使其吸附抗壞血酸2-葡萄糖苷和L-抗壞血酸，用經純 化水洗脫除去D-葡萄糖等糖類后，向層析柱中加入不足0. 5N的鹽酸或鹽類的水溶液作為 洗脫液，洗脫抗壞血酸2-葡萄糖苷和L-抗壞血酸，濃縮洗脫液，進行使用陽離子交換樹脂 或多孔性合成樹脂的柱層析，用洗脫液洗脫的方法。特別地，在用強酸性陽離子交換樹脂為 填充劑的模擬移動床式作為使用陽離子交換樹脂的柱層析時，能高效地、較好收率地獲得 目的抗壞血酸2-葡萄糖苷的含量超過86質量％的級分，因此優(yōu)選這種情況。在此之上，本發(fā)明還提供了包含本發(fā)明的含有抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶的 粉末的粉末狀的食品原料、化妝品原料、準藥品原料或藥品原料，由此解決了上述課題。本發(fā)明的含有抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶的粉末可有利地用于食品原料，所 述食品原料例如可分別舉出維生素C強化劑、膠原產生強化劑、美白劑、味道改善劑、品質 改善劑、防止黑變劑、酸味劑、賦形劑、增量劑、抗氧化劑等；可有利地用于化妝品原料，所述 例如化妝品原料可分別舉出美白劑、細胞賦活劑、膠原產生強化劑、維生素C強化劑、味道 改善劑、品質改善劑、防止黑變劑、酸味劑、賦形劑、增量劑、穩(wěn)定劑、抗氧化劑等；可有利地 用于準藥品原料，所述準藥品原料例如可分別舉出美白劑、細胞賦活劑、膠原產生強化劑、 維生素C強化劑、味道改善劑、品質改善劑、防止黑變劑、酸味劑、賦形劑、增量劑、穩(wěn)定劑、抗氧化劑等；以及，可有利地用于藥品原料，所述藥品原料例如可分別舉出美白劑、細胞 賦活劑、膠原產生強化劑、臟器保護劑、自由基障礙抑制劑、維生素C強化劑、防止黑變劑、 賦形劑、增量劑、穩(wěn)定劑、抗氧化劑等。發(fā)明的效果由于與之前作為化妝品原料、準藥品原料、食品原料等市售的準藥品級粉末相比， 本發(fā)明的含有抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶的粉末顯著更難以固結，因此在保存、保管時 及流通時粉末的流動性不容易收到影響，具有容易處置的優(yōu)點。此外，盡管本發(fā)明的含有抗 壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶的粉末比之前的準藥品級粉末顯著更難以固結，但由于抗壞 血酸2-葡萄糖苷的純度也沒必要高至試劑級粉末的水平，因此制造時沒必要增加再結晶 步驟和重復洗凈結晶的步驟。因此，不會大幅降低制品的成品率，還具有可廉價地進行制造 的優(yōu)點。同時，本發(fā)明的制造方法具有以下優(yōu)點通過使用本發(fā)明的制造方法，以L-抗壞 血酸和淀粉為原料，根據(jù)與之前的準藥品級粉末的制造方法的步驟不發(fā)生變化的制造方法 也可制得本發(fā)明的含有抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶的粉末，只需要花費與之前準藥品 級粉末的制造所必需的時間、勞動力、制造設備及成本相差不大的時間、勞動力、制造設備 及成本，即可制得比準藥品級粉末顯著更難以固結的含有抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶 的粉末。此外，由本發(fā)明的含有抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶的粉末構成的粉末狀的食 品原料、化妝品原料、準藥品原料以及藥品原料具有以下優(yōu)點由于構成粉末狀原料的含 有抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶的粉末顯著更難以固結，因此在保存、保管方面容易處置 些，可使用以流動性粉末為原料為前提制作的制造設備，在原料的輸送、篩分、混合等步驟 中不會出現(xiàn)障礙。同時，本發(fā)明的含有抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶的粉末具有以下優(yōu)點由于容 易調整為食品原料等所希望的粒度分布，即，粒徑不足150 μ m的粒子占粉末全體的70質 量％以上，且粒徑53 μ m以上不足150 μ m的粒徑占粉末全體的40 60質量％的粒徑分 布，因此將其用作食品原料、化妝品原料、準藥品原料或藥品原料無需改變之前的制造過程 和原料規(guī)格，可直接使用從前的方法。此外，本發(fā)明的含有抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶 的粉末還具有以下優(yōu)點當含有L-抗壞血酸和/或D-葡萄糖且粉末全體的還原能力不足 1質量％時，盡管是以L-抗壞血酸和淀粉為原料制得的粉末，但即使混合氨基酸及蛋白質 等分子內具有氨基的其他成分也不會出現(xiàn)變色等品質降低的現(xiàn)象。更具體地，當本發(fā)明的 含有抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶的粉末中L-抗壞血酸含量按無水物換算為0. 1質量％ 以下時，即使將本發(fā)明的含有抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶的粉末作為單獨粉末長時間 保存，粉末自身也不會出現(xiàn)淡褐色的著色，可作為實質上無著色的白色粉末用作食品原料、 化妝品原料、準藥品原料及藥品原料。


圖1依據(jù)基本上由抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶構成的含有抗壞血酸2-葡萄 糖苷無水結晶的粉末的特性X射線得到的粉末X射線衍射曲線的一個例子。圖2依據(jù)基本上由無定形部分構成的含有抗壞血酸2-葡萄糖苷的粉末的特性X射線得到的粉末X射線衍射曲線的一個例子。圖3依據(jù)基本上由抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶構成的含有抗壞血酸2-葡萄 糖苷無水結晶的粉末的同步加速器輻射得到的粉末X射線衍射曲線的一個例子。圖4依據(jù)基本上由無定形部分構成的含有抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶的粉 末的同步加速器輻射得到的粉末X射線衍射曲線的一個例子。圖5示出了來自屬于土芽孢桿菌屬的微生物的CGT酶的高級結構的模式圖。圖6示出了來自屬于土芽孢桿菌屬的微生物的CGT酶的催化劑殘基及保守區(qū)域 的模式圖。圖7示出了本發(fā)明使用的包含來自屬于土芽孢桿菌屬的微生物的CGT酶基因的 重組DNA “pRSET-iBTC12”的結構及限制性切酶位點的圖。
具體實施例方式1.措辭的定義本說明書中下述措辭具有以下含義。<結晶度>本說明書中的“關于抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶的結晶度”指的是下式1定 義的數(shù)值。式1數(shù)1
結晶度(%)= Hs"H° x 100 Hoo “ H0Hltltl 根據(jù)基本上由抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶構成的含有抗壞血酸2-葡萄糖 苷無水結晶的粉末標準樣品的粉末X射線衍射曲線計算的結晶度的解析值Htl 根據(jù)基本上由無定形部分構成的含有抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶的粉末標 準樣品的粉末X射線衍射曲線計算的結晶度的解析值Hs:根據(jù)作為被檢樣品的含有抗壞血酸2-葡萄糖苷的粉末的粉末X射線衍射曲線 計算的結晶度的解析值。在式1中，作為計算H1(I(I、HQ、HS的基礎的粉末X射線衍射曲線(profile)通常 可用配備了反射式或透射式的光學系統(tǒng)的粉末X射線衍射裝置測得。粉末X射線衍射曲 線中涵蓋了被檢樣品或標準樣品中包含的抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶的衍射角和衍射 強度，從粉末X射線衍射曲線確定結晶度的解析值的方法例如可舉出Harmans法、7才> ” 法等。這些解析方法中，用Harmans法更為簡便和精確。目前，這些解析方法都已經計算機 軟件化，因此配備搭載了任一種計算機軟件的解析裝置的粉末X射線衍射裝置都是很適宜 的。此外，計算解析值Hltltl的“基本上由抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶構成的含有抗 壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶的粉末的標準樣品”使用的是抗壞血酸2-葡萄糖苷純度在 99.9質量％以上(以下，如果沒有特別限制，本說明書中質量％將略寫為“％”。然而，本說 明書中結晶度所使用的％不限于此。)的粉末或單結晶，在粉末X射線衍射曲線中示出了抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶特有的衍射峰，基本上為由抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶構 成的物質。這種粉末或單結晶可舉出上述試劑級的粉末或將其再結晶化得到的含有抗壞血 酸2-葡萄糖苷無水結晶的粉末，或抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶的單結晶。因此，基本上 由抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶構成的上述含有抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶的粉末的 標準樣品的粉末X射線衍射曲線根據(jù)Harmans法用計算機軟件解析時的解析值Hltltl通常為 70. 2 70. 5%。另一方面，計算解析值Htl的“基本上由無定形部分構成的含有抗壞血酸2-葡萄糖 苷的粉末的標準樣品”使用的是抗壞血酸2-葡萄糖苷純度在99. 以上的粉末，該粉末 X射線衍射曲線中僅由來自無定形部分的〃 口一構成，而且基本上不示出抗壞血酸2-葡萄 糖苷無水結晶特有的衍射峰。這種粉末例如可舉出將上述計算解析值Hito的標準樣品溶解 在適量經純化水中、濃縮后、凍干，經卡爾費休法確定水分含量至2.0%以下再經真空干燥 得到的粉末。實施這種處理時，經驗上可知能夠得到基本上由無定形部分構成的粉末。因 此，基本上由無定形部分構成的上述含有抗壞血酸2-葡萄糖苷的粉末的標準樣品的粉末X 射線衍射曲線根據(jù)Harmans法用計算機軟件解析時的解析值Htl通常為7. 3 7. 6%。且，對計算解析值Htl的標準樣品來說，雖然優(yōu)選抗壞血酸2-葡萄糖苷純度高，但 在自計算解析值Hito的標準樣品按如上所述制備計算解析值Htl的標準樣品中，如后述實驗 1-1所示，計算解析值Hito的標準樣品中抗壞血酸2-葡萄糖苷純度可以高至99. 9 %的極高， 也可低至99. 1%。因此，“基本上由無定形部分構成的含有抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶 的粉末的標準樣品”的抗壞血酸2-葡萄糖苷純度，如上所述，為99. 1 %以上。<動態(tài)水分吸附量>本說明書中的“動態(tài)水分吸附量”指的是用水分吸附解吸測定裝置，在溫度 25°C、相對濕度0%的條件下，在氮氣流中保持12小時，除去樣品中游離的水分，稱量除去 后的樣品后，將樣品在溫度25°C、相對濕度35%的條件下相同的氮氣流下保持12小時，立 刻再度稱量，基于得到的兩個稱量值根據(jù)下式2算出的值。式2數(shù)2
權利要求
1.含有2-0-a-D-葡萄糖基-L-抗壞血酸無水結晶的粉末，其特征在于 按無水物換算含有超過98. O質量％不足99. 9質量％的2-0- α -D-葡萄糖基-L-抗 壞血酸，且 基于粉末X射線衍射曲線算出的2-0- α -D-葡萄糖基-L-抗壞血酸無水結晶的結晶 度為90%以上。
2.含有2-0-a-D-葡萄糖基-L-抗壞血酸無水結晶的粉末，其特征在于 按無水物換算含有超過98. 0質量％不足99. 9質量％的2-0- α -D-葡萄糖基-L-抗 壞血酸，且 氮氣流下除去粉末中的水分后，在溫度25°C、相對濕度35質量％的條件下保持12小 時時其動態(tài)水分吸附量為0. 01質量％以下。
3.含有2-0-a-D-葡萄糖基-L-抗壞血酸無水結晶的粉末，其特征在于 按無水物換算含有超過98. 0質量％不足99. 9質量％的2-0- α -D-葡萄糖基-L-抗 壞血酸， 基于粉末X射線衍射曲線算出的2-0- α -D-葡萄糖基-L-抗壞血酸無水結晶的結晶 度為90%以上，并且 眷含有■占粉末全體70質量％以上的粒徑不足150 μ m的粒子，以及 ■占粉末全體40 60質量％的粒徑53 μ m以上不足150 μ m的粒子。
4.含有2-0-a-D-葡萄糖基-L-抗壞血酸無水結晶的粉末，其特征在于 按無水物換算含有超過98. 0質量％不足99. 9質量％的2-0- α -D-葡萄糖基-L-抗 壞血酸， 氮氣流下除去粉末中的水分后，在溫度25°C、相對濕度35質量％的條件下保特12小 時時其動態(tài)水分吸附量為0. 01質量％以下，并且 眷含有■占粉末全體70質量％以上的粒徑不足150 μ m的粒子，以及 ■占粉末全體40 60質量％的粒徑53 μ m以上不足150 μ m的粒子。
5.含有2-0-a-D-葡萄糖基-L-抗壞血酸無水結晶的粉末，其特征在于 按無水物換算含有超過98. 0質量％不足99. 9質量％的2-0- α -D-葡萄糖基-L-抗 壞血酸， 基于粉末X射線衍射曲線算出的2-0- α -D-葡萄糖基-L-抗壞血酸無水結晶的結晶 度為90%以上， 含有L-抗壞血酸和/或D-葡萄糖，且 粉末全體的還原能力不足1質量％。
6.含有2-0-a-D-葡萄糖基-L-抗壞血酸無水結晶的粉末，其特征在于 按無水物換算含有超過98. 0質量％不足99. 9質量％的2-0- α -D-葡萄糖基-L-抗 壞血酸， 氮氣流下除去粉末中的水分后，在溫度25°C、相對濕度35質量％的條件下保持12小 時時其動態(tài)水分吸附量為0. 01質量％以下， 含有L-抗壞血酸和/或D-葡萄糖，且 粉末全體的還原能力不足1質量％。
7.含有2-0-a-D-葡萄糖基-L-抗壞血酸無水結晶的粉末，其特征在于 按無水物換算含有超過98. O質量％不足99. 9質量％的2-0- α -D-葡萄糖基-L-抗 壞血酸， 基于粉末X射線衍射曲線算出的2-0- α -D-葡萄糖基-L-抗壞血酸無水結晶的結晶 度為90%以上， 眷含有■占粉末全體70質量％以上的粒徑不足150 μ m的粒子，以及 ■占粉末全體40 60質量％的粒徑53 μ m以上不足150 μ m的粒子，同時 還含有L-抗壞血酸和/或D-葡萄糖，且 粉末全體的還原能力不足1質量％。
8.含有2-0-a-D-葡萄糖基-L-抗壞血酸無水結晶的粉末，其特征在于 按無水物換算含有超過98. 0質量％不足99. 9質量％的2-0- α -D-葡萄糖基-L-抗 壞血酸， 氮氣流下除去粉末中的水分后，在溫度25°C、相對濕度35質量％的條件下保持12小 時時其動態(tài)水分吸附量為0. 01質量％以下，并且 眷含有■占粉末全體70質量％以上的粒徑不足150 μ m的粒子，以及 ■占粉末全體40 60質量％的粒徑53 μ m以上不足150 μ m的粒子，同時 還含有L-抗壞血酸和/或D-葡萄糖，且 粉末全體的還原能力不足1質量％。
9.如權利要求1 8任一項記載的含有2-0-α -D-葡萄糖基_L_抗壞血酸無水結晶的 粉末，其特征在于，按無水物換算L-抗壞血酸的量為0. 1質量％以下。
10.如權利要求1 9任一項記載的含有2-0-α -D-葡萄糖基_L_抗壞血酸無水結晶 的粉末，其特征在于，該粉末是從經過環(huán)麥芽糖糊精葡聚糖轉移酶作用于含有L-抗壞血酸 和淀粉的溶液的步驟得到的含有2-0- α -D-葡萄糖基-L-抗壞血酸的溶液制得的粉末。
11.如權利要求1 10任一項記載的含有2-0-α -D-葡萄糖基_L_抗壞血酸無水結晶 的粉末的制造方法，其特征在于包括眷含有淀粉和L-抗壞血酸的溶液經環(huán)麥芽糖糊精葡聚糖轉移酶和葡萄糖淀粉酶 的依次作用，得到2-0-α-D-葡萄糖基-L-抗壞血酸生成率為35質量％以上的含有 2-0- α -D-葡萄糖基-L-抗壞血酸的溶液的步驟； 純化得到的含有2-0-α -D-葡萄糖基-L-抗壞血酸的溶液，使2-0-α -D-葡萄糖 基-L-抗壞血酸的含量按無水物換算超過86質量％的步驟； 從按無水物換算含有超過86質量％的2-0- α -D-葡萄糖基_L_抗壞血酸的溶液中 析出2-0- α -D-葡萄糖基-L-抗壞血酸無水結晶的步驟； 收集析出的2-0- α -D-葡萄糖基-L-抗壞血酸無水結晶的步驟； 對收集的2-0-α-D-葡萄糖基-L-抗壞血酸無水結晶老化、干燥、根據(jù)需要而粉碎的 步驟。
12.如權利要求11記載的制造方法，其特征在于，在含有淀粉和L-抗壞血酸的溶液經環(huán)麥芽糖糊精葡聚糖轉移酶和葡萄糖淀粉酶的依次作用而得到含有2-0-α -D-葡萄糖 基-L-抗壞血酸的溶液的步驟中，使淀粉脫支酶與環(huán)麥芽糖糊精葡聚糖轉移酶一同作用。
13.如權利要求11或12記載的制造方法，其特征在于，純化上述得到的含 有2-0-α-D-葡萄糖基-L-抗壞血酸的溶液而獲得按無水物換算超過86質量％的 2-0- α -D-葡萄糖基-L-抗壞血酸含量的步驟包括 通過用陰離子交換樹脂的柱層析除去糖類的步驟，和 進行用陽離子交換樹脂作為填充劑的模擬移動床式柱層析的步驟。
14.如權利要求11或12記載的制造方法，其特征在于，純化上述得到的含 有2-0-α-D-葡萄糖基-L-抗壞血酸的溶液而獲得按無水物換算超過86質量％的 2-0- α -D-葡萄糖基-L-抗壞血酸含量的步驟包括 通過用陰離子交換樹脂的柱層析除去糖類的步驟，和 進行用強酸性陽離子交換樹脂或多孔性樹脂的柱層析的步驟。
15.粉末狀的食品原料，其含權利要求1 10任一項記載的含有2-0-α-D-葡萄糖 基-L-抗壞血酸無水結晶的粉末。
16.粉末狀的化妝品原料，其含權利要求1 10任一項記載的含有2-0-α-D-葡萄 糖基-L-抗壞血酸無水結晶的粉末。
17.粉末狀的準藥品原料，其含權利要求1 10任一項記載的含有2-0-α-D-葡萄 糖基-L-抗壞血酸無水結晶的粉末。
18.粉末狀的藥品原料，其含權利要求1 10任-項記載的含有2-0-α -D-葡萄糖 基-L-抗壞血酸無水結晶的粉末。
全文摘要
含有2-O-α-D-葡萄糖基-L-抗壞血酸無水結晶的粉末及其制造方法和用途。本發(fā)明的課題是提供一種比之前常用的準藥品級的含有抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶的粉末更難以固結的含有抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶的粉末及其制造方法，以及用途。提供了一種含有抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶的粉末，該粉末按無水物換算含有超過98.0質量％不足99.9質量％的抗壞血酸2-葡萄糖苷，基于粉末X射線衍射曲線算出抗壞血酸2-葡萄糖苷無水結晶的結晶度為90％以上，或氮氣流下除去粉末中的水分后，在溫度25℃、相對濕度35％的條件下保持12小時時其動態(tài)水分吸附量為0.01質量％以下，還提供了它的制造方法以及用途。
文檔編號C07H17/04GK102093448SQ201010571709
公開日2011年6月15日 申請日期2010年9月3日 優(yōu)先權日2009年9月3日
發(fā)明者三宅俊雄, 伊澤精祐, 澀谷孝, 福田惠溫, 西本友之 申請人:株式會社林原生物化學研究所