專利名稱：一種截短側(cè)耳素的提取純化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種獸藥的提取純化方法，具體涉及一種截短側(cè)耳素的提取純化方 法，屬于藥物制備技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
截短側(cè)耳素(Pleuromutilin)是由側(cè)耳菌(Pleurotus mutilus)產(chǎn)生的一類廣譜 的二萜烯類抗生素，它通過作用于細菌核糖體50S亞基，抑制蛋白質(zhì)合成，導(dǎo)致菌體死亡。 截短側(cè)耳素類是一大類具有較好抗菌活性的抗生素家族，主要用作家禽和家畜的飼料添加 劑，在飼料中添加該類物質(zhì)，可有效預(yù)防許多傳染病，例如能夠有效抑制革蘭氏陽性菌，尤 其以葡萄球菌、鏈球菌最為明顯，同時對于支原體感染也有治療作用。截短側(cè)耳素還用作截 短側(cè)耳素類半合成衍生物的前體，目前已有衍生物泰妙菌素和沃尼妙林，它的許多衍生物 的抑菌活性和范圍比截短側(cè)耳素強，同時抗菌譜更廣泛。專利200510122954. 0公開了一種泰妙菌素合成過程中用的截短側(cè)耳素原 料的制備方法，專利201010180181. 2公開了 一種截短側(cè)耳素的溶劑提取工藝，專利 200910073722. 9公開了一種截短側(cè)耳素提取工藝，專利200810046089. X公開了一種高純度截短側(cè)耳素原料的發(fā)酵提取制備方法。在這些工藝中一般采用乙酸丁酯或甲醇、乙醇浸 提截短側(cè)耳素，也有采用甲基異丁基甲酮作為浸提劑，這些方法雖然提取率高，但是所得產(chǎn) 品帶有雜質(zhì)，其純度不高，且不易純化。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對上述不足，提供了一種截短側(cè)耳素的提取純化方法，該方法能夠提高 截短側(cè)耳素的提取率，且所得產(chǎn)品純度高，在98%以上。本發(fā)明是通過以下措施實現(xiàn)的一種截短側(cè)耳素的提取純化方法，其特征是包括以下步驟(1)截短側(cè)耳素粗品提取將截短側(cè)耳素干菌絲用甲基異丁基甲酮浸取多次，浸取后壓濾得浸取液，浸取液濃縮、 結(jié)晶、過濾、干燥得截短側(cè)耳素粗品；(2)純化2. 1將截短側(cè)耳素粗品加入甲醇水溶液中，攪拌至全溶； 2. 2將上述溶液減壓濃縮，濃縮至溶液沸點明顯升高，餾出物基本無甲醇為止； 2. 3向濃縮液中加入石油醚進行攪拌萃取，靜置分層后進行分離，取水相，水相再次加 入石油醚進行攪拌萃取，靜置分層后分離得水相；2. 4將水相加入乙酸丁酯進行攪拌萃取，靜置分層進行分離，取水相再次用乙酸丁酯萃 取，兩次萃取的乙酸乙酯相合并進入下一步；2. 5將上述乙酸乙酯相在濃縮結(jié)晶罐中進行真空蒸發(fā)，濃縮至溶液粘稠、基本無溶劑蒸 出為止，然后向濃縮液中加入乙醚，逐漸降溫至0-4°C，在此溫度下結(jié)晶；2.6晶體完全析出后，將結(jié)晶分離，用冷乙醚洗滌，洗滌后過濾、干燥； 2. 7將干燥后的晶體用乙酸乙酯溶解，用活性炭脫色，然后溶液濾去活性炭，采用步驟 2. 5,2. 6的方法進行濃縮、結(jié)晶、過濾、干燥得截短側(cè)耳素。上述提取純化方法中，截短側(cè)耳素粗品提取的具體步驟為1. 1向截短側(cè)耳素干菌絲中加入甲基異丁基甲酮浸取三次，浸取后壓濾，將三次所得的 浸取液合并，第一次浸取所用截短側(cè)耳素(g)與甲基異丁基甲酮(ml)的比值為1 :3-5，后 兩次浸取所用截短側(cè)耳素(g)與甲基異丁基甲酮(ml)的比值為1 :2-4，每次浸取時間均為 lh；1. 2浸取液用降膜濃縮器濃縮至晶體含量為15 20wt%，然后轉(zhuǎn)入結(jié)晶罐，在緩慢攪拌 條件下，以5 10°C /h的降溫速度降至0-4°C，保溫至晶體完全析出；1.3將晶體分離，用預(yù)冷的甲基異丁基甲酮洗滌，然后過濾，用真空干燥器干燥至晶體 含濕量< 洲得截短側(cè)耳素粗品；1.4將結(jié)晶母液和甲基異丁基甲酮洗滌液合并，濃縮至截短側(cè)耳素含量> 20%，然后降 溫結(jié)晶、甲基異丁基甲酮洗滌得截短側(cè)耳素粗品，與步驟1. 3中粗品混合，濃縮所得的甲基 異丁基甲酮循環(huán)利用。上述提取純化方法中，步驟2. 1中，截短側(cè)耳素粗品(g)與甲醇水溶液(ml)的比 值為1:8-15，甲醇水溶液的濃度為50-70體積％。上述提取純化方法中，步驟2. 3中，第一次萃取時，石油醚的加入量為濃縮液的 30-50體積％，第二次萃取時，石油醚的加入量為水相的30-50體積％，萃取時間均為15min。上述提取純化方法中，步驟2. 4中，兩次萃取乙酸乙酯的加入量(ml)為截短側(cè)耳 素粗品(g)的8-15倍，萃取時間為30min。上述提取純化方法中，步驟2. 5中，乙醚的加入量(ml)為濃縮液(g)的8-15倍，降 溫速度為5 10°C /h。上述提取純化方法中，步驟2. 6中，晶體干燥至干燥失重低于1%，干燥所用設(shè)備為 真空烘箱或雙錐干燥機。上述提取純化方法中，步驟2. 5的結(jié)晶母液和步驟2. 6的乙醚洗滌液合并，蒸餾回 收乙醚。上述提取純化方法中，步驟2. 7中，乙酸乙酯的加入量(ml)為晶體(g)的8-15倍， 脫色時活性炭的用量為溶液的3-5wt%，脫色溫度為50-60°C，脫色時間為30min。上述提取純化方法中，步驟2. 1中，截短側(cè)耳素粗品(g)與甲醇水溶液(ml)的比值 為1:10，甲醇水溶液的濃度為60體積％ ；步驟2. 4中，兩次萃取乙酸乙酯的加入量(ml)為 截短側(cè)耳素粗品(g)的10倍；步驟2. 5中，乙醚的加入量(ml)為濃縮液(g)的10倍；步驟 2. 7中，乙酸乙酯的加入量(ml)為晶體(g)的10倍。本發(fā)明的提取純化方法是以發(fā)酵所得的截短側(cè)耳素干菌絲為原料的，截短側(cè)耳素 干菌絲的制備為現(xiàn)有技術(shù)，并不是本發(fā)明的創(chuàng)新點，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)的 記載制備截短側(cè)耳素干菌絲。有益效果本發(fā)明在浸提截短側(cè)耳素粗品時采用甲基異丁基甲酮代替乙酸丁酯， 提取率增高，高于90%，在純化過程中，通過選擇合適的工藝步驟及萃取、洗滌劑，除去截短 側(cè)耳素中所含的雜質(zhì)，純化度高，所含截短側(cè)耳素純度在98%以上。
具體實施例方式下面通過具體實施例對本發(fā)明進行進一步的闡述，應(yīng)該明白的是，下述說明僅是 為了解釋本發(fā)明，并不對其內(nèi)容進行限定。實施例1一、截短側(cè)耳素粗品提取1、向截短側(cè)耳素干菌絲中加入3倍(g:ml)的甲基異丁基甲酮(MIBK)，攪拌浸取1小 時，浸取結(jié)束后過濾，浸取液經(jīng)精過濾后進入濃縮器，菌絲再用4倍MIBK浸取兩次，每次1 小時，浸取結(jié)束后壓濾，所得浸取液合并進入濃縮器。壓濾所用設(shè)備為板框壓濾機。2、浸取液用降膜濃縮器濃縮至接近析出晶體(晶體含量約為15 20wt%)，濃縮 液迅速轉(zhuǎn)入結(jié)晶罐，在緩慢攪拌條件下，濃縮液以5-10°C /h的降溫速度緩慢降溫，降至 0-4°C，在此溫度保溫，晶體逐漸析出，直至結(jié)晶完全。3、將結(jié)晶分離，用溫度在0_4°C之間的甲基異丁基甲酮洗滌晶體，然后再次過濾， 洗滌液并入結(jié)晶母液，晶體用真空干燥器干燥至含濕量< 2%，得截短側(cè)耳素粗品。4、將結(jié)晶母液和甲基異丁基甲酮洗滌液混合，再次用濃縮器濃縮至截短側(cè)耳素含 量>20%，然后用結(jié)晶罐進行降溫結(jié)晶，晶體經(jīng)洗滌，干燥得得截短側(cè)耳素粗品，與上面得到 的粗品混合，濃縮蒸餾所得的溶劑MIBK可循環(huán)使用。二、截短側(cè)耳素粗品純化1、將截短側(cè)耳素粗品用60體積％的甲醇水溶液溶解，甲醇水溶液的量為粗品的12 倍(質(zhì)量體積)，將溶液用濃縮器減壓濃縮，蒸發(fā)至溶液沸點明顯升高，餾出物基本沒有甲 醇為止(密度計檢測)。此時開始有固體析出，需注意避免堵塞管路，將濃縮液轉(zhuǎn)移入萃取 罐。2、向萃取罐加入濃縮液40體積％量的石油醚，攪拌15分鐘，靜置分層，分離將上 層醚相轉(zhuǎn)入暫存罐，下層水相轉(zhuǎn)入另一萃取罐，向水相再次加入水相40體積％量的石油醚， 攪拌15分鐘，靜置分層，分離將兩次醚相合并，蒸餾回收石油醚，剩余的殘渣為雜質(zhì)。3、將石油醚兩次萃取后所得的水相用乙酸丁酯萃取，攪拌萃取30min，靜置分層， 分離將水相再用乙酸丁酯萃取一次，攪拌萃取30min，靜置分層，分離將兩次萃取所得的乙 酸丁酯相混合，進入濃縮結(jié)晶罐，兩次所加乙酸丁酯的體積用量(ml)為截短側(cè)耳素粗品的 質(zhì)量(g)的10倍。4、乙酸丁酯相在濃縮結(jié)晶罐中真空加熱蒸發(fā)，濃縮至粘稠、基本無溶劑蒸出為止， 然后在攪拌下向濃縮液中加入乙醚，在5-10°C /h的降溫速度緩慢降溫至0-4°C，保溫至晶 體析出完全，乙醚的用量(ml)為濃縮液(g)的10倍。使用過濾器或離心機進行晶體分離， 用溫度0-4°C的冷乙醚洗滌晶體，晶體用真空烘箱或雙錐干燥機干燥至干燥失重低于1%。 將結(jié)晶母液和乙醚洗滌液混合，蒸餾回收乙醚，所得殘渣為雜質(zhì)。5、將上述干燥的晶體加入乙酸乙酯，在脫色罐中攪拌升溫至完全溶解，乙酸乙酯 加入量(ml)為晶體質(zhì)量的10倍。在溶液中加入3 5wt%的活性炭，在50-60°C攪拌脫色 30分鐘，溶液在保溫條件下經(jīng)活性碳過濾器過濾后，進入濃縮結(jié)晶罐。經(jīng)降溫濃縮結(jié)晶、過 濾干燥得截短側(cè)耳素，純度為99. 5%，收率高于90%。實施例2方法步驟同實施例1，不同的是 一、截短側(cè)耳素粗品提取1、開始，向截短側(cè)耳素干菌絲(g)中加入5倍的甲基異丁基甲酮(ml)進行浸取，然后菌 絲再用2倍的MIBK浸取兩次。二、截短側(cè)耳素粗品純化1、將截短側(cè)耳素粗品用65體積％的甲醇水溶液溶解，甲醇水溶液的量為粗品的10倍 (質(zhì)量體積)。2、第一次萃取石油醚的加入量為濃縮液的50體積％，第二次萃取石油醚的加入量 為水相的30體積％。3、乙酸丁酯萃取時，兩次所加乙酸丁酯的體積用量(ml)為截短側(cè)耳素粗品的質(zhì)量 (g)的8倍。
4、乙醚的用量(ml)為濃縮液(g)的8倍。5、乙酸乙酯加入量(ml)為晶體質(zhì)量的8倍。最終所得截短側(cè)耳素純度為98. 9%， 收率高于90%。實施例3方法步驟同實施例1，不同的是 一、截短側(cè)耳素粗品提取1、開始，向截短側(cè)耳素干菌絲(g)中加入5倍的甲基異丁基甲酮(ml)進行浸取，然后菌 絲再用2倍的MIBK浸取兩次。二、截短側(cè)耳素粗品純化1、將截短側(cè)耳素粗品用70體積％的甲醇水溶液溶解，甲醇水溶液的量為粗品的8倍 (質(zhì)量體積)。2、第一次萃取石油醚的加入量為濃縮液的30體積％，第二次萃取石油醚的加入量 為水相的50體積％。3、乙酸丁酯萃取時，兩次所加乙酸丁酯的體積用量(ml)為截短側(cè)耳素粗品的質(zhì)量 (g)的15倍。4、乙醚的用量(ml)為濃縮液(g)的9倍。5、乙酸乙酯加入量(ml)為晶體質(zhì)量的9倍。最終所得截短側(cè)耳素純度為98. 3%， 收率高于90%。實施例4方法步驟同實施例1，不同的是 一、截短側(cè)耳素粗品提取1、開始，向截短側(cè)耳素干菌絲(g)中加入4倍的甲基異丁基甲酮(ml)進行浸取，然后菌 絲再用3倍的MIBK浸取兩次。二、截短側(cè)耳素粗品純化1、將截短側(cè)耳素粗品用60體積％的甲醇水溶液溶解，甲醇水溶液的量為粗品的12倍 (質(zhì)量體積)。2、第一次萃取石油醚的加入量為濃縮液的40體積％，第二次萃取石油醚的加入量 為水相的50體積％。
3、乙酸丁酯萃取時，兩次所加乙酸丁酯的體積用量(ml)為截短側(cè)耳素粗品的質(zhì)量 (g)的9倍。4、乙醚的用量(ml)為濃縮液(g)的15倍。5、乙酸乙酯加入量(ml)為晶體質(zhì)量的15倍。最終所得截短側(cè)耳素純度為98. 5%， 收率高于90%。
權(quán)利要求
1.一種截短側(cè)耳素的提取純化方法，其特征是包括以下步驟(1)截短側(cè)耳素粗品提取將截短側(cè)耳素干菌絲用甲基異丁基甲酮浸取多次，浸取后壓濾得浸取液，浸取液濃縮、 結(jié)晶、過濾、干燥得截短側(cè)耳素粗品；(2)純化2.1將截短側(cè)耳素粗品加入甲醇水溶液中，攪拌至全溶；2. 2將上述溶液減壓濃縮，濃縮至溶液沸點明顯升高，餾出物基本無甲醇為止； 2. 3向濃縮液中加入石油醚進行攪拌萃取，靜置分層后進行分離，取水相，水相再次加 入石油醚進行攪拌萃取，靜置分層后分離得水相；2. 4將水相加入乙酸丁酯進行攪拌萃取，靜置分層進行分離，取水相再次用乙酸丁酯萃 取，兩次萃取的乙酸乙酯相合并進入下一步；2. 5將上述乙酸乙酯相在濃縮結(jié)晶罐中進行真空蒸發(fā)，濃縮至溶液粘稠、基本無溶劑蒸 出為止，然后向濃縮液中加入乙醚，逐漸降溫至0-4°C，在此溫度下結(jié)晶； 2.6晶體完全析出后，將結(jié)晶分離，用冷乙醚洗滌，洗滌后過濾、干燥； 2. 7將干燥后的晶體用乙酸乙酯溶解，用活性炭脫色，然后溶液濾去活性炭，采用步驟 2. 5,2. 6的方法進行濃縮、結(jié)晶、過濾、干燥得截短側(cè)耳素。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取純化方法，其特征是截短側(cè)耳素粗品提取的具體步驟為1. 1向截短側(cè)耳素干菌絲中加入甲基異丁基甲酮浸取三次，浸取后壓濾，將三次所得的 浸取液合并，第一次浸取所用截短側(cè)耳素(g)與甲基異丁基甲酮(ml)的比值為1 :3-5，后 兩次浸取所用截短側(cè)耳素(g)與甲基異丁基甲酮(ml)的比值為1 :2-4，每次浸取時間均為 lh；1. 2浸取液用降膜濃縮器濃縮至晶體含量為15 20wt%，然后轉(zhuǎn)入結(jié)晶罐，在緩慢攪拌 條件下，以5 10°C /h的降溫速度降至0-4°C，保溫至晶體完全析出；1.3將晶體分離，用預(yù)冷的甲基異丁基甲酮洗滌，然后過濾，用真空干燥器干燥至晶體 含濕量< 洲得截短側(cè)耳素粗品；1.4將結(jié)晶母液和甲基異丁基甲酮洗滌液合并，濃縮至截短側(cè)耳素含量> 20%，然后降 溫結(jié)晶、甲基異丁基甲酮洗滌得截短側(cè)耳素粗品，與步驟1.3中粗品混合，濃縮所得的甲基 異丁基甲酮循環(huán)利用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的提取純化方法，其特征是步驟2.1中，截短側(cè)耳素粗品 (g)與甲醇水溶液(ml)的比值為1:8-15，甲醇水溶液的濃度為50-70體積％。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的提取純化方法，其特征是步驟2.3中，第一次萃取時， 石油醚的加入量為濃縮液的30-50體積％，第二次萃取時，石油醚的加入量為水相的30-50 體積％，萃取時間均為15min。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的提取純化方法，其特征是步驟2.4中，兩次萃取乙酸乙 酯的加入量(ml)為截短側(cè)耳素粗品(g)的8-15倍，萃取時間為30min。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的提取純化方法，其特征是步驟2.5中，乙醚的加入量 (ml)為濃縮液(g)的8-15倍，降溫速度為5 10°C /h。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的提取純化方法，其特征是步驟2.6中，晶體干燥至干燥失重低于1%，干燥所用設(shè)備為真空烘箱或雙錐干燥機。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的提取純化方法，其特征是步驟2.5的結(jié)晶母液和步驟 2.6的乙醚洗滌液合并，蒸餾回收乙醚。
9.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的提取純化方法，其特征是步驟2.7中，乙酸乙酯的加入 量(ml)為晶體(g)的8-15倍，脫色時活性炭的用量為溶液的3-5wt%，脫色溫度為50_60°C， 脫色時間為30min。
10.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的提取純化方法，其特征是步驟2.1中，截短側(cè)耳素粗 品(g)與甲醇水溶液(ml)的比值為1:10，甲醇水溶液的濃度為60體積％;步驟2.4中，兩 次萃取乙酸乙酯的加入量(ml)為截短側(cè)耳素粗品(g)的10倍；步驟2. 5中，乙醚的加入量 (ml)為濃縮液(g)的10倍；步驟2. 7中，乙酸乙酯的加入量(ml)為晶體(g)的10倍。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種截短側(cè)耳素的提取純化方法，步驟為將截短側(cè)耳素干菌絲用甲基異丁基甲酮浸取，處理得粗品；粗品用甲醇溶解，先后用石油醚和乙酸丁酯萃取，經(jīng)濃縮、結(jié)晶、乙醚洗滌、活性炭脫色得截短側(cè)耳素成品。本發(fā)明在浸提截短側(cè)耳素粗品時采用甲基異丁基甲酮代替乙酸丁酯，提取率增高，高于90%，在純化過程中，通過選擇合適的工藝步驟及萃取、洗滌劑，除去截短側(cè)耳素中所含的雜質(zhì)，純化度高，所含截短側(cè)耳素純度在98%以上。
文檔編號C07C67/58GK102050737SQ201010582400
公開日2011年5月11日 申請日期2010年12月10日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月10日
發(fā)明者王斌, 王永恒, 胡江林, 趙碩珍 申請人:山東勝利股份有限公司