專利名稱：硅膠柱層析分離中藥生物堿的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從中藥中提取生物堿的方法，尤其是涉及一種利用硅膠柱層析從 中藥中提取生物堿的方法。
背景技術(shù)：
生物堿是廣泛存在于自然界的一類含氮的有機化合物，大多數(shù)具有較復(fù)雜的氮雜 環(huán)結(jié)構(gòu)，呈堿性。生物堿的發(fā)現(xiàn)始于19世紀初，是人們研究的最多而且最早的一類天然 的有機化合物。目前已發(fā)現(xiàn)的生物堿大約6000余種，并且仍以每年約100多種的速度遞 增。因為大多數(shù)生物堿都具有抗癌、抗腫瘤、抗炎、抗病毒以及抗血小板凝集、抗心律失常以 及抗高血壓等心血管疾病的作用，因此，它在衛(wèi)生、醫(yī)藥等方面有著巨大的應(yīng)用潛力。由于 大多數(shù)生物堿的藥理作用尚有待進一步研究，這就需要從大量含有生物堿的藥用植物中提 取、分離、純化生物堿。如何運用現(xiàn)代高效的分離手段，簡便而高效的分離，是當(dāng)前生物堿研 究的一個重要方面。按照生物堿的基本結(jié)構(gòu)，已可分為幾十種類型。大多數(shù)生物堿幾乎不溶或難溶于 水，能溶于氯仿、乙醚、酒精、丙酮、苯等有機溶劑，但生物堿與稀酸作用生成鹽類后，可溶于 水溶液中。絕大多數(shù)生物堿在常壓時均無揮發(fā)性，一般性質(zhì)較穩(wěn)定，分離純化過程不需要特 殊環(huán)境，在貯存上除避光外，不需其他特殊條件。許多藥用植物中富含生物堿，是中藥有效 成份的組成部分。生物堿有效成分的分離與純化是中藥開發(fā)的難點與關(guān)鍵，新技術(shù)的研究 與開發(fā)能大大提高中藥化學(xué)成分的收率與質(zhì)量，節(jié)約大量的時間與能源。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明為了解決現(xiàn)有技術(shù)對中藥中生物堿提取成本較高、操作復(fù)雜、提純率低、不 利于工業(yè)化生產(chǎn)的問題而提供了一種硅膠柱層析分離中藥生物堿的方法。為了解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)方案是一種硅膠柱層析分離中藥生物堿 的方法，具體工藝步驟如下(1).原料預(yù)處理將中藥材洗凈，60°C下烘他至恒重，用粉碎機粉碎后過60目篩，得中藥粉末備 用；(2).溶解按照HCl和水1 10的比例加入濃度為0. 04%的HCl，充分攪拌，微波爐處理2 分鐘，用離心機6000r/min離心20min，取上清液；取上清液后把沉淀按照上述的1和2步 驟再重復(fù)一次；合并兩次上清液，用10%氨水調(diào)pH值為10 ；(3).氯仿萃取加入上清液1/5體積的氯仿萃取，同樣氯仿萃取3次，合并氯仿層，利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā) 儀減壓蒸干；(4).層析
根據(jù)層析柱的體積，用300-400目硅膠干法填充至層析柱3/4處，用3倍層析柱體 積的氯仿過柱；將待純化的液體加到層析柱的頂端，加入量不超過柱體積的1/10，打開柱 下端，使液體浸入硅膠中；以甲醇和氯仿配比為1 1的洗脫劑洗脫，從第二個柱體流出的 液體開始收集，一直收集到第六個柱體流出液為止；(5).干燥將收集液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓蒸干。本發(fā)明避免了使用索氏提取裝置等復(fù)雜耗時的儀器設(shè)備，具有效率高，較為簡便 等特征，硅膠層析具有成本低廉，重復(fù)性高，操作方便等優(yōu)點。
具體實施例方式本發(fā)明的具體工藝步驟如下1.原料預(yù)處理將中藥材(如荷葉、黃連、延胡索、杜仲等，根據(jù)不同需要分別提取)洗凈，60°C下 烘8h至恒重(恒重延長干燥時間藥材的重量并不發(fā)生變化)。用粉碎機粉碎后過60目 篩，得中藥粉末備用。2.溶解按照HCl和水1 10(HC1 水=1 10)的比例加入濃度為0. 04%的HC1，充分 攪拌；WD900B型微波爐處理2分鐘，用離心機6000r/min離心20min，取上清液；取上清液后 把沉淀按照上述的1和2步驟再重復(fù)一次。合并兩次上清液(將2次離心的上清液合并)， 用10%氨水調(diào)pH值為10。3、氯仿萃取加入1/5體積(步驟2中合并后的上清液的1/ 的氯仿萃取(氯仿萃取就是一 種萃取方法)，同樣氯仿萃取3次，合并氯仿層，利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓蒸干。無水乙醇溶解沉 淀，待柱層析純化。4、層析根據(jù)層析柱(層析柱是層析技術(shù)中的主體，一般是玻璃管或有機玻璃管)的體積， 用300-400目硅膠干法填充至層析柱3/4處(干法填充先用300-400目硅膠填充至層析 柱3/8處，然后將下面的活塞與泵相通，通過減壓使硅膠裝實，再加入3/8體積的步驟3中 的沉淀溶解液，浸潤硅膠，小心使之不產(chǎn)生氣泡)，用3倍層析柱體積的氯仿過柱。將待純化 的液體加到層析柱的頂端，加入量不超過柱體積的1/10，打開柱下端，使液體浸入硅膠中； 以甲醇和氯仿配比為1 1的洗脫劑洗脫，從第二個柱體流出的液體開始收集，一直收集到 第六個柱體流出液為止(以甲醇和氯仿配比為1 1為洗脫劑，70ml/min的流速進行梯度 洗脫，柱的使用壓力為2-3kg/c，從第二個柱體積流出液開始收集，一直收集到第六個柱體 積液為止。)。5、干燥將收集液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓蒸干。微波有助于生物堿的析出，析出的生物堿粗品能打到22% -23%左右。酸性溶液有利于將生物堿與其他物質(zhì)分離，分離后得到的提純產(chǎn)品生物堿含量達 到94% -95%左右。用高效液相色譜法鑒定，以杜仲為例杜仲中總生物總堿和高速逆流色譜分離各組分用HPLC分析。WatersC18色譜柱Q60mmx4. 6mm, 6um)；檢測波長為^Onm ；流動 相為乙醇一乙酸/乙酸鈉緩沖溶液(60 40，V/V，pH 5.0)，流速l.Oml/min，進樣量10uL。 HSCCC各峰組分的結(jié)構(gòu)根據(jù)ESI-MS-MS、IH-NMR和13C-NMR的數(shù)據(jù)進行分析，得出總生物堿 含量在94-95%。
權(quán)利要求
1. 一種硅膠柱層析分離中藥生物堿的方法，其特征在于具體工藝步驟如下(1).原料預(yù)處理將中藥材洗凈，60°c下烘至恒重，用粉碎機粉碎后過60目篩，得中藥粉末備用；(2).溶解按照HCl和水1 10的比例加入濃度為0. 04%的HCl，充分攪拌，微波爐處理2分鐘， 用離心機6000r/min離心20min，取上清液；取上清液后把沉淀按照上述的1和2步驟再重 復(fù)一次；合并兩次上清液，用10%氨水調(diào)pH值為10 ；(3).氯仿萃取加入上清液1/5體積的氯仿萃取，同樣氯仿萃取3次，合并氯仿層，利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減 壓蒸干；(4).層析根據(jù)層析柱的體積，用300-400目硅膠干法填充至層析柱3/4處，用3倍層析柱體積的 氯仿過柱；將待純化的液體加到層析柱的頂端，加入量不超過柱體積的1/10，打開柱下端， 使液體浸入硅膠中；以甲醇和氯仿配比為1 1的洗脫劑洗脫，從第二個柱體流出的液體開 始收集，一直收集到第六個柱體流出液為止；(5).干燥將收集液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓蒸干。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種硅膠柱層析分離中藥生物堿的方法，具體工藝步驟為原料預(yù)處理、溶解、氯仿萃取、層析、干燥幾個步驟。本發(fā)明避免了使用索氏提取裝置等復(fù)雜耗時的儀器設(shè)備，具有效率高，較為簡便等特征，硅膠層析具有成本低廉，重復(fù)性高，操作方便等優(yōu)點。
文檔編號C07G5/00GK102093433SQ201010588418
公開日2011年6月15日 申請日期2010年12月15日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月15日
發(fā)明者羌利民, 譚湘陵 申請人:南通遠大生物科技發(fā)展有限公司, 譚湘陵