專利名稱：一種可直接標(biāo)記的蘇丹紅i號(hào)及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種可直接標(biāo)記的蘇丹紅I號(hào)的制備 方法及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
蘇丹紅I號(hào)是一種人工合成的偶氮類染料，不溶于水，具有很好的親脂性。作為一 種常用的工業(yè)染料，它被廣泛用于溶劑的增色以及紡織品的增光等方面。自21世紀(jì)初有關(guān)蘇丹紅I號(hào)污染食品的相關(guān)事件被曝光以來(lái)，人們?cè)絹?lái)越關(guān)注蘇 丹紅I號(hào)所引起的危害。研究表明蘇丹紅I號(hào)的致毒性與其代謝所生成的胺類及萘酚類 物質(zhì)密切相關(guān)。當(dāng)人食用或接觸含有蘇丹紅I號(hào)的食品后，它可以通過(guò)人體皮膚或消化系 統(tǒng)進(jìn)入體內(nèi)。肝臟作為蘇丹紅I號(hào)產(chǎn)生致癌性的主要靶器官，一方面，其代謝產(chǎn)物苯胺可直 接作用于肝細(xì)胞，引起肝臟疾病，并且有可能誘發(fā)基因突變，增加癌變的幾率；另一方面，苯 胺進(jìn)入人體后的代謝產(chǎn)物可以將狗2+氧化為狗3+，使得血紅蛋白無(wú)法結(jié)合氧從而導(dǎo)致患上 高鐵血紅蛋白癥。蘇丹紅I號(hào)的另一種代謝產(chǎn)物1-氨基-2-萘酚具有致癌、致畸、致敏、致 突變的潛在毒性。國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)(International Agency for Research on Cancer, IARC)將 蘇丹紅I號(hào)歸為三類致癌物，即動(dòng)物致癌物。1995年歐盟等國(guó)家禁止蘇丹紅作為食品添加 劑，中國(guó)也在1996年的《食品添加劑衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》中明令禁止使用蘇丹紅。但是由于其價(jià)廉易 得、色澤鮮亮持久等特點(diǎn)，仍然有一些不法食品生產(chǎn)商違規(guī)加工、違法使用蘇丹紅染料。這 不但給國(guó)家的食品安全帶來(lái)了很大的隱患，而且也給消費(fèi)者的身心健康帶來(lái)嚴(yán)重威脅。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)食品中蘇丹紅I號(hào)的常用檢測(cè)方法是高效液相色譜法(HPLC)、高 效液相-質(zhì)譜聯(lián)用法(HPLC-MS)、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(GC-MS)、化學(xué)發(fā)光法等。這些方 法的樣品前處理比較復(fù)雜繁瑣，需要精密昂貴的儀器設(shè)備，同時(shí)還要有專門的儀器操作人 員等，很難達(dá)到快速、簡(jiǎn)便的現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)要求，因此限制了其在基層檢測(cè)部門的大規(guī)模推廣使 用。酶聯(lián)免疫檢測(cè)分析(Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)由于具有特異 性強(qiáng)、靈敏度高、簡(jiǎn)便、快速等優(yōu)點(diǎn)，近年來(lái)備受人們的關(guān)注。蘇丹紅I號(hào)作為小分子物質(zhì)， 對(duì)于它的檢測(cè)，傳統(tǒng)的ELISA分析方法主要采用非競(jìng)爭(zhēng)性間接ELISA，其操作步驟相對(duì)較 多，引入人為誤差的幾率較大。目前，國(guó)際上著名的檢測(cè)公司如拜耳等商業(yè)化的檢測(cè)小分子 物質(zhì)試劑盒很多均采用競(jìng)爭(zhēng)性一步法ELISA，其工作原理是將小分子物質(zhì)直接標(biāo)記上酶 或者其他的一些直接可以檢測(cè)的熒光基團(tuán)，與待測(cè)樣品同時(shí)加入到檢測(cè)體系中，兩者與酶 標(biāo)板上的抗體競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合，待測(cè)物的含量與輸出信號(hào)呈負(fù)相關(guān)。這種方法大大縮短了檢測(cè) 步驟，從而達(dá)到快速、簡(jiǎn)捷、減少人為誤差的目的。但是，蘇丹紅I號(hào)本身沒(méi)有可以直接和載 體蛋白偶聯(lián)的氨基或羧基，因此需要引入。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是
蘇丹紅I號(hào)自身沒(méi)有可以直接和載體蛋白偶聯(lián)的氨基或羧基，因此需要引入。本發(fā)明 利用從頭合成的方法在不改變蘇丹紅I號(hào)主體分子結(jié)構(gòu)中抗原決定簇的前提下，引入了活 性基團(tuán)氨基，然后直接與熒光物質(zhì)和酶連接，為建立蘇丹紅I號(hào)競(jìng)爭(zhēng)性一步法ELISA檢測(cè)體 系解決競(jìng)爭(zhēng)性抗原制備這一重要問(wèn)題。本發(fā)明的技術(shù)方案是
本發(fā)明所述的一種可直接標(biāo)記的蘇丹紅I號(hào)的結(jié)構(gòu)為
權(quán)利要求
1.-種可直接標(biāo)記的蘇丹紅I號(hào)，其結(jié)構(gòu)為
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述可直接標(biāo)記的蘇丹紅I號(hào)的制備方法，其特征在于合成步驟為(1)、將18.5mmol對(duì)苯二胺溶解于無(wú)水四氫呋喃中，在攪拌的條件下，將溶解于無(wú)水四 氫呋喃中的18. 5mmol乙酸酐逐滴加入到對(duì)苯二胺溶液中，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)是否完全；(2)、將反應(yīng)液過(guò)濾，留沉淀，沉淀用甲醇重結(jié)晶，得單氨基保護(hù)產(chǎn)物；(3)、將3.3mmol單氨基保護(hù)的樣品攪拌溶解于50ml含有2. 5ml濃鹽酸的冰水中；將 3. 3mmol亞硝酸鈉溶液緩慢滴加到上述溶液中，持續(xù)攪拌反應(yīng)，得重氮鹽溶液；(4)、將溶解于10%NaOH溶液中的3. 3mmol β -萘酚逐滴加入到上述重氮鹽溶液中，滴 加完畢后，繼續(xù)攪拌反應(yīng)4小時(shí)可見(jiàn)紅色沉淀生成；(5)、過(guò)濾，留沉淀，沉淀用甲醇溶解，按摩爾比1:10加入相應(yīng)量的IM鹽酸，加熱回流 反應(yīng)3-6小時(shí)，過(guò)柱即得產(chǎn)物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述可直接標(biāo)記的蘇丹紅I號(hào)，其特征在于與其偶聯(lián)的分子可以為 帶羧基的熒光分子物質(zhì)或ELISA檢測(cè)中的辣根過(guò)氧化物酶或堿性磷酸酶。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種可直接標(biāo)記的蘇丹紅I號(hào)在競(jìng)爭(zhēng)性一步法ELISA檢測(cè)體系 中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明屬于免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種可直接標(biāo)記的蘇丹紅I號(hào)的制備方法及其應(yīng)用。該方法主要利用從頭合成的技術(shù)路線，在不改變蘇丹紅I號(hào)主體分子結(jié)構(gòu)中抗原決定簇的前提下，成功引入了活性基團(tuán)氨基，為蘇丹紅I號(hào)提供了一種可以直接與熒光物質(zhì)和酶連接的修飾物的制備方法，為建立蘇丹紅I號(hào)競(jìng)爭(zhēng)性一步法ELISA檢測(cè)體系解決了競(jìng)爭(zhēng)性抗原制備這一重要問(wèn)題。整個(gè)方法簡(jiǎn)單易行，操作簡(jiǎn)便，與熒光物質(zhì)和酶連接的效率高。
文檔編號(hào)C07C245/10GK102115451SQ201010599388
公開日2011年7月6日 申請(qǐng)日期2010年12月22日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月22日
發(fā)明者徐加發(fā), 沈萍萍, 范祚舟 申請(qǐng)人:南京大學(xué)