專利名稱：一種分離純化煙草中兩種致香前體物的方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明屬于分離純化技術(shù)領域，涉及煙草中有效成分的分離純化技術(shù)，具體涉及一種從新鮮煙葉中提取、分離和純化α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β _4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇的方法。α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β _4，8，13-西柏三烯-I，3_ 二醇是煙草中重要的致香前體物，主要來源于新鮮煙葉和煙花的表面分泌物，在調(diào)制后大部分會發(fā)生降解， 生成重要的致香成分茄酮及其衍生物，對煙葉的香氣風格和品質(zhì)具有決定性影響，是開展煙葉品質(zhì)研究的關(guān)鍵化學物質(zhì)之一。另一方面，α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β-4， 8，13-西柏三烯-1，3- 二醇具有較強的抗腫瘤活性、抑菌和調(diào)節(jié)植物生長等生物活性，對于尼古丁上癮也有一定的抑制作用，因此也日益受到越來越多生物化學家和藥物化學家的關(guān)注。然而，0-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和0-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇的分離純化較為困難，涉及浸取、萃取、多步柱色譜分離和重結(jié)晶等多種技術(shù)的聯(lián)用，工藝操作復雜， 制備成本較高，目前國內(nèi)外尚沒有標準品出售，相關(guān)科學研究所用純品多為國外大型煙草公司贊助，技術(shù)專屬性強，極大地限制了我國相關(guān)研究的發(fā)展。因此，開展煙草中α-4，8， 13-西柏三烯-1，3- 二醇和β -4，8，13-西柏三烯-1，3- 二醇的分離研究，制備高純度標準品，對于提高我國相關(guān)科學研究水平具有十分重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種從新鮮煙葉中提取、分離和純化α-4，8，13_西柏三烯-1,3- 二醇和β -4,8,13-西柏三烯-1,3- 二醇的方法。本發(fā)明的兩種致香前體物為α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β_4，8，13_西柏三烯-1，3-二醇，化學結(jié)構(gòu)式分別如下
權(quán)利要求
1.一種分離純化煙草中α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β _4，8，13-西柏三烯_1， 3-二醇的方法，包括如下步驟(1)浸取采用浸洗法萃取新鮮煙葉的表面分泌物，萃取液濃縮至干，得到深褐色浸膏Sl ；(2)液-液萃取采用液-液萃取法得到含西柏烷類化合物的提取液S2；(3)正相硅膠柱色譜分離采用正相硅膠柱對獲得的提取液S2進行梯度洗脫，得到主要物質(zhì)為α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β _4，8，13-西柏三烯-1，3_ 二醇的洗脫液 S3，所述流動相選用逐漸增加極性的梯度洗脫劑；(4)正相氰基柱色譜分離采用正相氰基制備柱對獲得的洗脫液S3進行梯度洗脫，得到主要物質(zhì)為α-4,8,13-西柏三烯-1,3- 二醇和β-4,8,13-西柏三烯-1,3- 二醇的洗脫液S4，所述流動相選用逐漸增加極性的梯度洗脫劑；(5)反相C18柱色譜分離采用反相C18制備柱對獲得的洗脫液S4進行梯度洗脫，洗脫時在210nm處先后出現(xiàn)兩個強吸收峰，分別收集兩個強吸收峰對應的洗脫液S5和洗脫液 S6，將洗脫液S5和洗脫液S6分別減壓濃縮干燥后得到α _4，8，13-西柏三烯_1，3- 二醇和 β -4,8,13-西柏三烯-1,3- 二醇。
2.如權(quán)利要求1所述的分離純化方法，其特征在于，步驟(1)中，所述萃取液為二氯甲烷或三氯甲烷。
3.如權(quán)利要求1所述的分離純化方法，其特征在于，步驟O)中，所述液-液萃取法具體包括如下步驟將深褐色浸膏Sl加入混合萃取溶劑中，超聲至浸膏全部溶解后，進行液-液萃取分離，分別收集上層液相和下層液相；然后采用混合萃取溶劑對上層液相和下層液相分別萃取多次，合并所有下層液相的提取液，得到含西柏烷類化合物的提取液S2。
4.如權(quán)利要求3所述的分離純化方法，其特征在于，所述混合萃取溶劑為正己烷、甲醇和水的混合溶劑，所述正己烷、甲醇和水的體積比為100 (50-90) (10-50)。
5.如權(quán)利要求1所述的分離純化方法，其特征在于，步驟(3)中，所述正相硅膠柱色譜分離具體包括如下步驟采用正相硅膠柱，選用正己烷和乙酸乙酯作為梯度洗脫劑，對獲得的提取液S2進行梯度洗脫，收集體積比為60 40-40 60的洗脫流出液，減壓濃縮得到主要物質(zhì)為α-4，8，13-西柏三烯-1，3-二醇和β _4，8，13-西柏三烯-1，3_ 二醇的洗脫液 S3。
6.如權(quán)利要求6所述的分離純化方法，其特征在于，所述正相硅膠柱色譜分離中，對獲得的提取液S2進行梯度洗脫，收集體積比為05-50) (50-5 的洗脫流出液。
7.如權(quán)利要求7所述的分離純化方法，其特征在于，所述正相硅膠柱色譜分離中，收集體積比為50 50的洗脫流出液。
8.如權(quán)利要求1所述的分離純化方法，其特征在于，步驟(4)中，所述正相氰基柱色譜分離具體包括如下步驟采用正相氰基制備柱，選用正己烷和乙酸乙酯的混合體系作為梯度洗脫劑，對獲得的洗脫液S3進行梯度洗脫，收集體積比為85 15-65 35的洗脫流出液，減壓濃縮得到主要物質(zhì)為α-4,8,13-西柏三烯-1，3- 二醇和β-4,8,13-西柏三烯_1， 3-二醇的洗脫液S4。
9.如權(quán)利要求9所述的分離純化方法，其特征在于，所述正相氰基柱色譜分離中，對獲得的洗脫液S3進行梯度洗脫，收集體積比為(80-75) (20-2 的洗脫流出液。
10.如權(quán)利要求10所述的分離純化方法，其特征在于，所述正相氰基柱色譜分離中，收集體積比為75 25的洗脫流出液。
11.如權(quán)利要求1所述的分離純化方法，其特征在于，步驟(5)中，所述反相C18柱色譜分離具體包括如下步驟使用C18制備柱，選用甲醇和水的混合體系作為梯度洗脫劑，對獲得的洗脫液S4進行梯度洗脫；同時采用紫外檢測器監(jiān)測流出液在210nm處的吸光度，并記錄紫外吸收梯度洗脫曲線；體積比為90 10-95 5的甲醇和水洗脫劑洗脫時在210nm 處先后出現(xiàn)兩個強吸收峰，分別收集兩個吸收峰對應的洗脫液S5和洗脫液S6，將洗脫液S5 和洗脫液S6分別減壓濃縮干燥后得到α -4,8,13-西柏三烯-1,3- 二醇和β -4,8,13-西柏三烯-1，3-二醇。
12.如權(quán)利要求10所述的分離純化方法，其特征在于，所述反相C18柱色譜分離中，采用體積比為95 5的甲醇和水洗脫劑洗脫時，分別收集210nm處先后出現(xiàn)的兩個強吸收峰對應的洗脫液S5和洗脫液S6。
13.如權(quán)利要求1所述的分離純化方法，其特征在于，步驟(3)和⑷中，所述減壓濃縮的操作條件均為水浴溫度40-50°C，真空度M0-300mbar ；步驟(5)中，所述減壓濃縮的操作條件為水浴溫度40-50°C，真空度60-72mbar。
全文摘要
本發(fā)明屬于分離純化技術(shù)領域，涉及煙草中有效成分的分離純化技術(shù)，具體涉及一種從新鮮煙葉中提取、分離和純化α-4,8,13-西柏三烯-1,3-二醇和β-4,8,13-西柏三烯-1,3-二醇的方法。本發(fā)明分離純化方法，包括如下步驟(1)浸取；(2)液-液萃取；(3)正相硅膠柱色譜分離；(4)正相氰基柱色譜分離；(5)反相C18柱色譜分離，獲得兩種致香前體物。本發(fā)明分離純化方法獲得的兩種致香前體物的純度均大于99%，可以作為標準品應用于相關(guān)科學研究中；整個分離純化產(chǎn)品回收率高，工藝操作簡便，自動化程度高，易實現(xiàn)大批量制備。
文檔編號C07C35/00GK102206138SQ20101061766
公開日2011年10月5日 申請日期2010年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月30日
發(fā)明者孫文梁, 高偉 申請人:上海煙草集團有限責任公司