專利名稱：一種富集純化松樹皮中原花青素的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種原花青素的純化方法，特別是涉及一種 利用間歇蒸餾-大孔吸附樹脂耦合法富集純化松樹皮中原花青素的方法。
背景技術(shù)：
松樹皮提取物是從松樹皮中提取的一類物質(zhì)。從樹上剝下的松樹皮被收集，攤平 和提取。其中含有大量稱作OPCs (原花青素低聚體)的化合物。在對其大量的研究中證明， OPCs為有效的抗氧化劑，且無毒，無突變性，無致癌性并無副作用。使用十分安全。松樹皮 已被證實(shí)是OPCs的新來源，從松樹皮提取的OPCs不論在品質(zhì)和功能上都沒有任何不同，只 是外觀上有一些微小的差異。原花青素英文名是Oligomeric Proantho Cyanidins (OPC)，是一種有著特殊分子 結(jié)構(gòu)的生物類黃酮，是目前國際上公認(rèn)的清除人體內(nèi)自由基最有效的天然抗氧化劑。一般 為紅棕色粉末，氣微、味澀，溶于水和大多有機(jī)溶劑。主要功效有改善血液循環(huán)、治療糖尿病 性視網(wǎng)膜病、減輕水腫和抑制靜脈曲張等。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服常規(guī)技術(shù)提取率相對較低、提取純度低等缺點(diǎn)，提供一種 利用間歇蒸餾-大孔吸附樹脂耦合法富集純化松樹皮中原花青素的方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是一種利用間歇蒸餾-大孔吸附樹脂耦合法富集純化松樹皮中原花青素的方法，其 步驟如下(1)將干松樹皮粉碎后用乙醇加熱回流提?。?2)將經(jīng)步驟(1)處理的松樹皮提取液抽濾，得提取液并減壓回收溶劑的初提物；(3)將所獲初提物用乙醇加熱溶解，加入純化水萃取，用酸調(diào)其PH值為2. O 2. 5，靜置、抽濾、并用水洗滌至中性，減壓濃縮得原花青素粗提物；(4)將所得原花青素粗提物用大孔吸附樹脂進(jìn)行吸附；(5)用不同濃度的乙醇對大孔吸附樹脂進(jìn)行洗脫，用薄層色譜法跟蹤檢測，收集原 花青素各階段洗脫液；(6)將原花青素各階段洗脫液濃縮回收乙醇，得原花青素半成品，其含量為50% 以上；(7)將所得原花青素半成品上硅膠層析柱，并以丙酮，甲醇以不同體積比例進(jìn)行洗 脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收集原花青素各階段洗脫液；(8)將所收集的原花青素洗脫液，采用活性炭脫色、重結(jié)晶方法精制得原花青素， 其含量在95%以上。所述的步驟(1)中，松樹皮粉碎后過10 80目篩在進(jìn)行有機(jī)溶劑提取。所述的步驟(1)中，乙醇為10 100%乙醇中的一種或一種以上，提取時(shí)間為4
348小時(shí)。所述的步驟(1)中，提取的方法為浸泡法、回流提取法、滲漉法、煎煮法、連續(xù)提取 法中的一種或一種以上。所述的步驟(1)中，加入有機(jī)溶劑的體積為松樹皮粉碎體積的10 20倍。所述的步驟(3)中，加入純化水的量按體積計(jì)算為提取物醇溶液的10 20倍，調(diào) 節(jié)PH值所用的酸為鹽酸。所述的步驟中所用的大孔吸附樹脂為天津南開大學(xué)所產(chǎn)生的X-5、NKA-9、 S-8、D 3520、D4006、H103、D4020、AB-8H和NKA-II型樹脂中的一種，吸附為靜態(tài)吸附或動 態(tài)吸附。所述的步驟(5)中所述的洗脫為用10 95%的乙醇進(jìn)行洗脫。所述的在步驟( 和(7)中，所采取的檢測方法均為薄層色譜法跟蹤檢測。所述的步驟(7)中所采取的丙酮與甲醇的體積為1 7 1。本發(fā)明應(yīng)用間歇蒸餾-大孔吸附耦合技術(shù)分離純化原花青素，對原花青素的吸附 選擇性良好，吸附快解析也快，吸附容量較大；提取方便快捷，原料來源豐富，生產(chǎn)成本低 廉，分離效果明顯，提取純度高，可以得到含量50%以上的原花青素半成品和含量95%以 上的原花青素終產(chǎn)品，克服了常規(guī)提取率相對較低、提取純度低的缺點(diǎn)。本發(fā)明選用理化性質(zhì)穩(wěn)定、表面積較大、交換速度較快、機(jī)械強(qiáng)度高、抗污染能力 強(qiáng)、熱穩(wěn)定性好的大孔吸附樹脂，不容于酸、堿及有機(jī)媒，對有機(jī)物選擇性較好，不受無機(jī) 鹽類及強(qiáng)離子低分子化合物存在的影響，可以通過物理吸附從溶液中有選擇地吸附原花青 素，吸附快、解析也快，吸附容量較大。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 一種利用間歇蒸餾-大孔吸附樹脂耦合法富集純化松樹皮中原花青素 的方法，其步驟如下(1)將干松樹皮碎后過60目篩，用松樹皮粉體積10倍的丙酮加熱回流提取3次， 每次2小時(shí)；(2)將經(jīng)步驟(1)處理的松樹皮提取液抽濾，得提取液并減壓回收溶劑的初提物；(3)將所獲初提物用乙醇加熱溶解，加入體積為提取物醇溶液體積20倍的純化水 進(jìn)行萃取，然后用酸調(diào)其PH值為2. 0，靜置、抽濾、減壓回收溶劑得原花青素粗提物；(4)將所得原花青素提物用大孔吸附樹脂層析柱上進(jìn)行吸附，所用的大孔樹脂為 天津南開大學(xué)所生產(chǎn)的NKA-II型樹脂；(5)用 10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95% 的乙醇在大孔吸
附樹脂層柱中依次進(jìn)行梯度洗脫，用薄層色譜法跟蹤檢測，收集原花青素各階段洗脫液；(6)將原花青素各階段洗脫液濃縮回收乙醇，得到含量為52%原花青素半成品；(7)將所得原花青素半成品上硅膠層析柱，并用丙酮，甲醇依次以1 1、2 1、 3 1、4 1、5 1、6 1、7 1的體積比進(jìn)行梯度洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收集原花 青素各階段洗脫液；(8)將所收集的原花青素洗脫液，采用活性炭脫色、重結(jié)晶方法精制得到含量 95%原花青素。
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實(shí)施案例2 —種利用間歇蒸餾-大孔吸附樹脂耦合法富集純化松樹皮中原花青 素的方法，其步驟如下(1)將干松樹皮粉碎后過10目篩，用松樹皮粉體積20倍的丙酮加熱回流提取4小 時(shí)；(2)將經(jīng)步驟(1)處理的松樹皮提取液抽濾，得提取液并減壓回收溶劑的初提物；(3)將所獲初提物用乙醇加熱溶解，加入體積為提取物醇溶液體積10倍的純化水 進(jìn)行萃取，然后用酸調(diào)其PH值為2. 3，靜置、抽濾、減壓回收溶劑得原花青素粗提物；(4)將所得原花青素粗提物用大孔吸附樹脂進(jìn)行吸附，所用的大孔樹脂為天津南 開大學(xué)所生產(chǎn)的D4006型樹脂；(5)用10%、30%、50%、70%、90%的乙醇在大孔吸附樹脂進(jìn)行洗脫，用薄層色譜
法跟蹤檢測，收集原花青素各階段洗脫液；(6)將原花青素各階段洗脫液濃縮回收乙醇，得到含量原花青素半成品；(7)將所得原花青素半成品上硅膠層析柱，并用丙酮，甲醇依次以1 1、2 1、 3 1、4 1、5 1、6 1、7 1的體積比進(jìn)行梯度洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收集原花 青素各階段洗脫液；(8)將所收集的原花青素洗脫液，采用活性炭脫色、重結(jié)晶方法精制得到含量 97%原花青素。實(shí)施案例3 —種利用間歇蒸餾-大孔吸附樹脂耦合法富集純化松樹皮中原花青 素的方法，其步驟如下(1)將干松樹皮粉碎后過80目篩，用松樹皮粉體積15倍的75%乙醇加熱回流提 取6小時(shí)；(2)將經(jīng)步驟(1)處理的松樹皮提取液抽濾，得提取液并減壓回收溶劑的初提物；(3)將所獲初提物用乙醇加熱溶解，加入體積為提取物醇溶液體積15倍的純化水 進(jìn)行萃取，然后用酸調(diào)其PH值為2. 5，靜置、抽濾、減壓回收溶劑得原花青素粗提物；(4)將所得原花青素粗提物用大孔吸附樹脂層析柱子、上進(jìn)行吸附，所用的大孔樹 脂為天津南開大學(xué)所生產(chǎn)的NKA-9型樹脂；(5)用20^30^^60^^80%的乙醇在大孔吸附樹脂層析柱子中依次進(jìn)行梯度洗 脫，用薄層色譜法跟蹤檢測，收集原花青素各階段洗脫液；(6)將原花青素各階段洗脫液濃縮回收乙醇，得到含量56%以上原花青素半成
P
m ；(7)將所得原花青素半成品上硅膠層析柱，并用丙酮，甲醇依次以1 1、2 1、 3 1、4 1、5 1、6 1、7 1的體積比進(jìn)行梯度洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收集原花 青素各階段洗脫液；(8)將所收集的原花青素洗脫液，采用活性炭脫色、重結(jié)晶方法精制得到含量 98%原花青素。
權(quán)利要求
1.一種利用間歇蒸餾-大孔吸附樹脂耦合法富集純化松樹皮中原花青素的方法，其特 征在于，其步驟如下(1)將干松樹皮粉碎后用75%乙醇加熱回流提取；(2)將經(jīng)(1)處理的松樹皮提取液過濾，得流浸膏狀初提物，回收乙醇；(3)將所收獲流浸膏狀初提物用水充分洗滌后干燥得到干浸膏，用乙醇溶解后脫色，脫 色液經(jīng)回收乙醇后加水析出大量沉淀，調(diào)PH值至2-2. 5，分離、收集沉淀物，并用水洗滌至 中性，得到原花青素的粗提物。(4)將所得原花青素粗提物用大孔吸附樹脂進(jìn)行吸附；(5)用不同濃度乙醇水溶液對大孔吸附樹脂進(jìn)行洗脫，收集原花青素各階段洗脫液；(6)將原花青素洗脫液濃縮回收洗脫劑，得原花青素半成品；(7)將所得原花青素半成品上硅膠層析柱，并以甲醇，丙酮以不同體積比進(jìn)行洗脫，收 集原花青素各階段洗脫液；(8)將所收集到得原花青素洗脫液進(jìn)行精制的原花青素。
2.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的利用間歇蒸餾-大孔吸附樹脂耦合富集純化松樹皮中原 花青素的方法其特質(zhì)是所述的步驟(1)中，松樹皮粉后過10 80目篩再進(jìn)行乙醇加熱回 流提取。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的利用間歇蒸餾-大孔吸附樹耦合法脂富集純松樹皮中原 花青素的方法，其特征是在所屬的步驟(1)中，乙醇為10 100%中的一種或一種以上， 提取時(shí)間為4 8小時(shí)。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的利用間歇蒸餾-大孔吸附樹脂耦合法富集純化松樹皮中原花 青素的方法，其特征是所述的步驟(1)中，有機(jī)溶劑提取的方法為浸漬法、回流提取法，滲 漉法、煎煮法、連續(xù)提取法中的一種或一種以上。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的利用間歇蒸餾-大孔吸附樹脂耦合法富集純化松樹皮中原 花青素的方法，其特征是；所屬的步驟(1)中，加入有機(jī)溶劑的體積為松樹皮粉體積的10 20倍。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的利用大間歇蒸餾-大孔吸附樹脂耦合法富集純化松樹皮中原 花青素的方法，其特征是在所述的步驟(3)中，加入純化水的量按體積計(jì)為提取物醇溶液 的10 20倍，調(diào)節(jié)PH值所用的酸為鹽酸
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的利用間歇蒸餾-大孔吸附樹脂耦合法富集純化松樹皮中原花 青素的方法，其特征是步驟中所述吸附為靜態(tài)吸附或動態(tài)吸附步驟(5)中所述的洗 脫為用10 95%的乙醇水溶液進(jìn)行洗脫。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的利用間歇蒸餾-大孔吸附樹脂耦合法富集純化松樹皮中原花 青素的方法，其特征是在步驟( 和(7)中，洗脫過程中采用薄層色譜法跟蹤檢測。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的利用間歇蒸餾-大孔吸附樹脂耦合法富集純化松樹皮中原花 青素的方法，其特征是步驟(7)中所采用丙酮與甲醇得體積比為1 7 1。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的利用間歇蒸餾-大孔吸附樹脂耦合法富集純化松樹皮中原 花青素的方法，其特征是在步驟(8)中，采用活性炭脫色、重結(jié)晶方法進(jìn)行精制。
全文摘要
本發(fā)明屬于天然有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種利用間歇蒸餾-大孔吸附樹脂富集純化松樹皮中原花青素的方法。其特點(diǎn)是應(yīng)用間歇蒸餾-大孔吸附耦合技術(shù)分離純化原花青素，對原花青素的吸附選擇性良好，吸附快解析也快，吸附容量較大；提取方便快捷，原料來源豐富，生產(chǎn)成本低廉，分離效果明顯，提取純度高，可以得到含量50％以上的原花青素半成品和含量95％以上的原花青素終產(chǎn)品，克服了常規(guī)提取率相對較低、提取純度低的缺點(diǎn)。本發(fā)明選用理化性質(zhì)穩(wěn)定、表面積較大、交換速度較快、機(jī)械強(qiáng)度高、抗污染能力強(qiáng)、熱穩(wěn)定性好的大孔吸附樹脂，可以通過物理吸附從溶液中有選擇地吸附原花青素，吸附快、解析也快，吸附容量較大。
文檔編號C07D311/62GK102093328SQ20101062312
公開日2011年6月15日 申請日期2010年12月20日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月20日
發(fā)明者姚德利, 姚德坤, 姚航, 鄭君, 閆峰, 黃運(yùn)生 申請人:大興安嶺林格貝有機(jī)食品有限責(zé)任公司