專利名稱：：通過調(diào)節(jié)ap2轉(zhuǎn)錄因子增加植物中的產(chǎn)量的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及遺傳學(xué)和分子生物學(xué)領(lǐng)域。更具體而言，本發(fā)明組合物和方法涉及在植物中調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄和改善產(chǎn)量。
背景技術(shù)：
：通過常規(guī)育種改進谷粒產(chǎn)量，在作物方面已幾乎達到停滯不前的狀態(tài)了。因此自然要探索一些能用來獲得進一步的產(chǎn)量提升的備選非常規(guī)方法。技術(shù)發(fā)展繼續(xù)進步以努力解決增加植物產(chǎn)量的需要，以便養(yǎng)活正在增長的世界人口。生物技術(shù)通過(例如)提供對干旱和昆蟲侵擾具有增加的抗性的植物，在這方面努力中起著日益重要的作用。對于許多植物如玉米、水稻和大豆，種子提供了植物產(chǎn)品來源，包括谷粒并且可直接食用或加工成面粉、乳制品等等。對于其他植物，可食用的種子、根、莖、葉、鱗莖和塊莖提供了蔬菜來源。果實(其為植物的成熟繁殖體)也是重要的食物來源。因為許多食物直接或間接作為植物開花的結(jié)果而來，增加植物的開花效率和所產(chǎn)生的花的數(shù)目的方法可導(dǎo)致增加的產(chǎn)量。另外，在提供增加作物產(chǎn)量的手段的同時，這種工具還可用于觀賞植物產(chǎn)業(yè)，從而提供例如增加植物產(chǎn)生的花的數(shù)目和/或大小的手段。幾乎所有作物都可獲益于對生長和發(fā)育特性的操縱。就這一點而論，導(dǎo)致矮桿植物的赤霉素的接收和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中的突變已被描述為在許多作物中有利(第6，307，126號美國專利；第6，762，348號美國專利；第6，830，930號美國專利；第6，794，560號美國專利)。在高產(chǎn)量、半矮稈小麥品種中尤其是這樣，其中植株高度降低在增加每株植物的谷粒產(chǎn)量和較好秸稈強度方面是最有利的。較短、較強的秸稈大大減少了因為降雨和大風(fēng)引起的倒伏或壓平所造成的損失。此外伴隨的收獲指數(shù)增加明顯，使更多的光合物質(zhì)從營養(yǎng)生長組分轉(zhuǎn)移至谷粒。本領(lǐng)域需要能采用這種序列來調(diào)節(jié)植物的收獲指數(shù)和產(chǎn)量的方法和組合物。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的組合物和方法包含和采用涉及調(diào)節(jié)植物發(fā)育、形態(tài)和生理的AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽和多核苷酸。所述組合物包含來自擬南芥屬(Arabidopsis)和大豆(Glycinemax)的AP2轉(zhuǎn)錄因子序列。本發(fā)明的組合物包含選自SEQIDNO:1-5的氨基酸序列和核苷酸序列以及它們的變體和片段。在DNA構(gòu)建體中提供了編碼AP2轉(zhuǎn)錄因子的核苷酸序列用于在所關(guān)注植物中表達。還提供了包含本發(fā)明的序列的表達盒、植物、植物細胞、植物部分和種子。在具體的實施方案中，該多核苷酸有效連接至組成型啟動子。提供了用于調(diào)節(jié)植物或植物部分中的AP2轉(zhuǎn)錄因子序列的水平的方法。該方法包括向植物或植物部分引入包含本發(fā)明的AP2轉(zhuǎn)錄因子序列、AP2DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域或AP2轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域的異源多核苷酸?？稍黾踊蚪档虯P2轉(zhuǎn)錄因子多肽的水平。這種方法可用來提高植物中的產(chǎn)量；在一個實施方案中，該方法用來提高作物中的谷粒產(chǎn)量。圖1提供了來自玉米(Zeamays)、擬南芥(Arabidopsisthaliana)、水稻(Oryzasativum)和金魚草(Antirrhinummajus)的幾種AP2轉(zhuǎn)錄因子序列的比對。AP2轉(zhuǎn)錄因子共有結(jié)構(gòu)域用單下劃線標(biāo)出，多聚絲氨酸和多聚甘氨酸共有結(jié)構(gòu)域用雙下劃線標(biāo)出。圖2.擬南芥屬AP2和大豆AP2序列的比對。圖3.表達處于組成型SCPl啟動子的控制下的擬南芥屬AP2基因(AT-AP2TF1)的植物轉(zhuǎn)化載體。圖4.表達處于組成型AT-UBQlO啟動子的控制下的擬南芥屬AP2基因(AT-AP2TFl)的植物轉(zhuǎn)化載體。圖5.表達處于組成型SCPl啟動子的控制下的大豆AP2基因(GM-AP2-2)的植物轉(zhuǎn)化載體。圖6.表達處于組成型AT-UBQlO啟動子的控制下的大豆AP2基因(GM-AP2-2)的植物轉(zhuǎn)化載體。圖7.過表達AT-AP2的植物具有增加的花莖(bolt)數(shù)目和長角果數(shù)目。相對于非轉(zhuǎn)基因野生型對照植物(C)示出了三種過表達AT-AP2基因的轉(zhuǎn)基因植物(植物1-3)。圖8.過表達AT-AP2的轉(zhuǎn)基因擬南芥屬中的花莖數(shù)目㈧和長角果數(shù)目⑶的增加。來自十二個Tl代轉(zhuǎn)基因擬南芥品系和六個非轉(zhuǎn)基因野生型對照植物的平均花莖數(shù)目示于分圖A中。來自過表達AT-AP2的轉(zhuǎn)基因系(四株植物)和非轉(zhuǎn)基因系的長角果數(shù)目示于分圖B中。具體實施例方式下文將結(jié)合附圖更詳細地描述本發(fā)明，附圖中只顯示了本發(fā)明的一些實施方案，而非全部實施方案。確實，這些發(fā)明方案可以以許多不同的形式來體現(xiàn)，不應(yīng)被認為局限于本文給出的實施方案；提供這些實施方案是為了使本公開內(nèi)容能滿足適用的法律要求。借助前面的描述和隨附的附圖中給出的教導(dǎo)，本發(fā)明所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員將會想到本發(fā)明的許多修改形式和其他實施方案。因此，應(yīng)當(dāng)了解，本發(fā)明不限于所公開的特定實施方案，并旨在將修改形式和其他實施方案包括在所附權(quán)利要求的范圍內(nèi)。雖然本文采用了特定術(shù)語，但它們僅以一般性和描述性含義使用而不出于限制目的。I.概論本發(fā)明提供了方法和組合物以促進花器官發(fā)育、根起始和產(chǎn)量，并用來調(diào)節(jié)植物中的葉形成、趨光性、頂端優(yōu)勢、果實發(fā)育等。本發(fā)明的組合物和方法通過調(diào)節(jié)植物中至少一種AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽或具有本發(fā)明的AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽的生物活性變體或片段的多肽的水平，來導(dǎo)致植物或作物產(chǎn)量的提高。II.組合物本發(fā)明的組合物包含涉及調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄的AP2轉(zhuǎn)錄因子多核苷酸和多肽以及它們的變體和片段。AP2轉(zhuǎn)錄因子編碼具有AP2結(jié)構(gòu)域的植物蛋白。另外，用于向細胞核運輸?shù)暮硕ㄎ恍盘栆约岸嗑劢z氨酸和多聚甘氨酸結(jié)構(gòu)域也存在于AP2蛋白中。所謂“對應(yīng)于”意指對每個結(jié)構(gòu)域所述及的氨基酸位置與所述及的序列標(biāo)識號的氨基酸位置相關(guān)聯(lián)，且包含這些結(jié)構(gòu)域的多肽可通過用標(biāo)準(zhǔn)的比對方法將多肽與所述及的序列標(biāo)識號進行比對來找到。本發(fā)明的AP2轉(zhuǎn)錄因子序列可充當(dāng)效應(yīng)子基因或調(diào)控子的轉(zhuǎn)錄的激活子或抑制子。盡管不受任何機理的理論束縛，但還是認為AP2轉(zhuǎn)錄因子可控制對產(chǎn)量形成結(jié)構(gòu)(yieldformingstructure)如花或花枝的確立重要的植物發(fā)育的方面。AP2轉(zhuǎn)錄因子以十分低的水平表達并且可通過MPPSS分析(MPSSprofiling)檢測。低的AP2表達水平表明，其編碼受到嚴格調(diào)控的控制因子并且AP2的異位表達導(dǎo)致具有改變的植物形態(tài)的植物，該改變的植物形態(tài)可積極影響植物產(chǎn)量。如本文所用，“AP2轉(zhuǎn)錄因子”或“AP2轉(zhuǎn)錄因子”序列包含編碼具有AP2轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)域或AP2轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)域的生物活性變體或片段的多肽的多核苷酸。參見(例如)Jurata禾口Gill,(1997)Mol.Cell.Biol.17:5688_98禾口Franks等人(2002)Development129:253-63。在一個實施方案中，本發(fā)明提供包含SEQIDNO2和4所示氨基酸序列以及它們的片段和變體的分離的AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽。還提供的是包含SEQIDN0:1所示核苷酸序列的多核苷酸和包含編碼AP2結(jié)構(gòu)域(SEQIDNO5)的多核苷酸的序列。本發(fā)明涵蓋分離的或?qū)嵸|(zhì)上純化的多核苷酸或蛋白質(zhì)組合物?！胺蛛x的”或“純化的”多核苷酸或蛋白質(zhì)或其生物活性部分，實質(zhì)上或基本上不含通常在該多核苷酸或蛋白質(zhì)的天然環(huán)境中存在的、與該多核苷酸或蛋白質(zhì)相伴隨或相互作用的成分。因此，分離的或純化的多核苷酸或蛋白質(zhì)，當(dāng)通過重組技術(shù)產(chǎn)生時實質(zhì)上不含其他細胞物質(zhì)或培養(yǎng)基，或者當(dāng)通過化學(xué)法合成時實質(zhì)上不含化學(xué)前體或其他化學(xué)品。最佳的是，“分離的”多核苷酸不含在得到該多核苷酸的生物體的基因組DNA中天然位于該多核苷酸的旁側(cè)的序列(即位于該多核苷酸的5'和3'末端的序列)(最佳的是蛋白質(zhì)編碼序列)。例如，在多個實施方案中，分離的多核苷酸可含有少于約5kb、4kb、3kb、2kb、lkb、0.5kb或0.Ikb的在得到該多核苷酸的細胞的基因組DNA中天然位于該多核苷酸的旁側(cè)的核苷酸序列。實質(zhì)上不含細胞物質(zhì)的蛋白質(zhì)包括具有小于約30%、20%、10%、5%或(以干重計)的污染性蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)的制品。當(dāng)本發(fā)明的蛋白質(zhì)或其生物活性部分用重組法生產(chǎn)時，最佳的是，培養(yǎng)基具有少于約30%、20%、10%、5%或(以干重計)的化學(xué)前體或非所關(guān)注蛋白的化學(xué)品。AP2轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)域或AP2轉(zhuǎn)錄因子多核苷酸和由此編碼的蛋白質(zhì)的片段和變體也為本發(fā)明的方法和組合物所涵蓋。所謂“片段”意指多核苷酸的部分或者氨基酸序列的部分。多核苷酸的片段可編碼保留該天然蛋白的生物活性從而能調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄的蛋白質(zhì)片段。例如，多肽片段將包含AP2轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)域(SEQIDNO5)或多聚絲氨酸(SEQIDNO7-11)或多聚甘氨酸結(jié)構(gòu)域(SEQIDNO:6)。在一些實施方案中，多肽片段將包含AP2轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)域和多聚絲氨酸或多聚谷氨酸二者?；蛘?，用來抑制或沉默AP2轉(zhuǎn)錄因子序列(即降低其表達水平)的片段不必編碼蛋白質(zhì)片段，但要保留抑制目標(biāo)序列的表達的能力。另外，可用作雜交探針的片段通常不編碼保留生物活性的片段蛋白。因此，核苷酸序列的片段可在至少約18個核苷酸、約20個核苷酸、約50個核苷酸、約100個核苷酸直至編碼本發(fā)明蛋白質(zhì)的全長多核苷酸的范圍內(nèi)。編碼AP2轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)域或AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽的多核苷酸的片段將編碼15、25、30、50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、675、700、725、750、775、6800,825個連續(xù)氨基酸，或最多至全長AP2轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)域或AP2轉(zhuǎn)錄因子蛋白(即SEQIDNO2)中存在的總氨基酸數(shù)目?？捎米麟s交探針、PCR引物或用作抑制構(gòu)建體的AP2轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)域或AP2轉(zhuǎn)錄因子多核苷酸的片段通常不必編碼AP2轉(zhuǎn)錄因子蛋白或AP2轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)域的生物活性部分。包含AP2轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)域的多肽或AP2轉(zhuǎn)錄因子蛋白的生物活性片段可通過如下方式制備分離AP2轉(zhuǎn)錄因子多核苷酸的部分，使所編碼的AP2轉(zhuǎn)錄因子蛋白的部分表達(例如，通過體外重組表達)并評估所編碼的AP2轉(zhuǎn)錄因子蛋白的部分的活性。為AP2轉(zhuǎn)錄因子核苷酸序列或包含AP2轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)域的多核苷酸序列的片段的多核苷酸包含至少16、20、50、75、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、800、900,1,000,1,100,1,200,1,300,1,400,1,500,1,600,1,700,1,800,1,900,2,000,2,050、2，100,2,150,2,200,2,250,2,300,2,350,2,400,2,450,2,500個連續(xù)核苷酸或最多至全長AP2轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)域中或AP2轉(zhuǎn)錄因子多核苷酸中存在的核苷酸數(shù)目(即NO1和3，分別為919個和1217個)?！白凅w”旨在意指實質(zhì)上相似的序列。對于多核苷酸，變體包含在天然多核苷酸當(dāng)中的一個或多個內(nèi)部位點處的一個或多個核苷酸的缺失和/或添加，和/或在天然多核苷酸中的一個或多個位點處的一個或多個核苷酸的置換。本文所用的“天然”多核苷酸或多肽分別包含天然的核苷酸序列或氨基酸序列。對于多核苷酸，保守變體包括因為遺傳密碼的簡并性而編碼AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽之一或AP2轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列的那些序列。天然等位基因變體(如這些)可用公知的分子生物學(xué)技術(shù)進行鑒定，例如用下文所述的聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)和雜交技術(shù)來鑒定。變體多核苷酸還包括合成法得到的多核苷酸，如例如通過使用定點誘變產(chǎn)生但仍編碼包含能夠調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄或者能夠降低AP2轉(zhuǎn)錄因子多核苷酸表達水平(即抑制或沉默)的一AP2轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)域(或二者)或AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽的那些多核苷酸。通常，通過本文別處所述的序列比對程序和參數(shù)測定，本發(fā)明的特定多核苷酸的變體將與該特定多核苷酸具有至少約40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高的序列同一性。本發(fā)明的特定多核苷酸(即參比多核苷酸)的變體，還可通過比較變體多核苷酸所編碼的多肽與該參比多核苷酸所編碼的多肽之間的序列同一性百分數(shù)來進行評估。因此，例如，公開了分離多核苷酸，該分離的多核苷酸編碼與SEQIDNO.2或SEQIDN0:4的多肽具有給定序列同一性百分數(shù)的多肽。任何兩個多肽之間的序列同一性百分數(shù)，可用本文別處描述的序列比對程序和參數(shù)來計算。在任何給定的本發(fā)明多核苷酸對是通過比較它們編碼的兩個多肽所共享序列同一性百分數(shù)進行評估的情況中，兩個被編碼的多肽之間的序列同一性百分數(shù)為至少約40%,45%,50%,55%,60%,65%,70%,75%,80%,85%,90%,91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高的序列同一性。“變體”蛋白旨在意指通過在天然蛋白質(zhì)中的一個或多個內(nèi)部位點處缺失或添加一個或多個氨基酸和/或在天然蛋白質(zhì)的一個或多個位點處置換一個或多個氨基酸而從該天然蛋白質(zhì)衍生的蛋白質(zhì)。本發(fā)明所涵蓋的變體蛋白質(zhì)是生物活性的，也就是說它們繼續(xù)擁有該天然蛋白質(zhì)的所需生物活性，即如本文所述調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄。這種變體可例如由遺傳多態(tài)性或由人類操縱而得到。通過本文別處所述的序列比對程序和參數(shù)測定，本發(fā)明的AP2轉(zhuǎn)錄因子蛋白或AP2轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)域的生物活性變體將與AP2轉(zhuǎn)錄因子蛋白或共有AP2轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列具有至少約40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高的序列同一性。本發(fā)明的AP2轉(zhuǎn)錄因子蛋白的生物活性變體或AP2轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)域的生物活性變體與該蛋白可相差少至1-15個氨基酸殘基，少至1-10個(如6-10個)、少至5個、少至4、3、2或甚至1個氨基酸殘基。本發(fā)明的多核苷酸可通過多種方式進行變更，包括氨基酸置換、缺失、截短和插入。這類操縱的方法是本領(lǐng)域公知的。例如，AP2轉(zhuǎn)錄因子蛋白或AP2轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列變體和片段可通過在DNA進行突變來制備。誘變和多核苷酸變更的方法是本領(lǐng)域公知的。參見(例如)Kunkel(1985)Proc.Natl.Acad.Sci.USA82:488-492;Kunkel等人，(1987)MethodsinEnzymo1.154:367_382；第4，873，192號美國專利；Walker禾口Gaastra(編輯)(1983)TechniquesinMolecularBiology(MacMillanPublishingCompany,NewYork)以及其中所引用的參考文獻。有關(guān)不影響所關(guān)注蛋白質(zhì)的生物活性的適當(dāng)氨基酸置換的指導(dǎo)，可在Dayhoff等人(1978)AtlasofProteinSequenceandStructure(Natl.Biomed.Res.Found.，Washington,D.C.)中找到，將該文獻以引用的方式并入本文。保守置換，如將一個氨基酸用另一具有相似性質(zhì)的氨基酸進行交換，可能是優(yōu)選的。因此，本發(fā)明的基因和多核苷酸既包括天然序列也包括突變形式。同樣，本發(fā)明的蛋白質(zhì)既涵蓋天然蛋白質(zhì)也涵蓋其變種和修飾形式。這種變體將繼續(xù)擁有所需的活性(即調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄或降低目標(biāo)AP2轉(zhuǎn)錄因子序列的表達水平的能力)。在具體的實施方案中，將在編碼該變體的DNA中作出的突變不會使序列位于閱讀框之外，且不會產(chǎn)生可能會導(dǎo)致二級mRNA結(jié)構(gòu)的互補區(qū)域。參見第75，444號歐洲專利申請公開。預(yù)期本文所涵蓋的蛋白質(zhì)序列的缺失、插入和置換不會造成該蛋白質(zhì)特性的根本變化。但是，當(dāng)在進行缺失、插入和置換之前難以預(yù)測缺失、插入和置換的準(zhǔn)確效應(yīng)時，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)認識到該效應(yīng)將通過常規(guī)的篩選測定進行評估。例如，AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽的活性可通過測定該多肽調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄的能力來進行評價。有多種方法可用來測定此活性，包括在核苷酸或多肽水平上直接監(jiān)測目標(biāo)基因的表達水平。用于這種分析的方法是已知的，包括例如RNA印跡、Sl保護測定、蛋白質(zhì)印跡、酶測定或比色測定。在具體的實施方案中，確定序列是否具有AP2轉(zhuǎn)錄因子活性可通過監(jiān)測目標(biāo)基因(包括AG)的水平或活性的增加或降低來測定。例如，在具體實施方案中，AP2轉(zhuǎn)錄因子序列可調(diào)節(jié)目標(biāo)基因如花同源異型基因AG、涉及生長素調(diào)控的生長和發(fā)育的基因等等的轉(zhuǎn)錄。參見Sridhar等人(2004)Proc.Natl.Acad.Sci.USA101:11494_11499，將該文獻以引用方式并入本文?；蛘?，測定轉(zhuǎn)錄活性的調(diào)節(jié)的方法可包括監(jiān)測植物的表型的改變。例如，如本文別處進一步詳細論述的，調(diào)節(jié)AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽的水平可導(dǎo)致異常的花形成、根起始和產(chǎn)量改變。測定這些變化的方法在本文別處進一步詳細地討論。變體多核苷酸和蛋白質(zhì)還涵蓋由誘變和重組工程程序(如DNA改組)得到的序列和蛋白質(zhì)。使用這些程序，可操縱一種或多種不同的AP2轉(zhuǎn)錄因子編碼序列以產(chǎn)生擁有所需性質(zhì)的新AP2轉(zhuǎn)錄因子序列或AP2轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)域。按這種方式，從包含具有實質(zhì)序列同一性的序列區(qū)域的相關(guān)序列多核苷酸的群體產(chǎn)生重組多核苷酸的文庫，并可將文庫在體外或體內(nèi)進行同源重組。例如，使用該方法，可將編碼所關(guān)注結(jié)構(gòu)域的序列基序在本發(fā)明的AP2轉(zhuǎn)錄因子基因和其他已知的AP2轉(zhuǎn)錄因子基因之間進行改組，以獲得編碼具有改善的所關(guān)注性質(zhì)(如在酶的情況中為提高的Km)的蛋白質(zhì)的新基因。這種DNA改組的策略是本領(lǐng)域已知的。參見(例如)Stemmer，(1994)Proc.Natl.Acad.Sci.USA9110747-10751；Stemmer,(1994)Nature370389-391；Crameri等人，(1997)NatureBiotech.15:436_438；Moore等人，(1997)J.Mol.Biol.272:336_347；Zhang等人，(1997)Proc.Natl.Acad.Sci.USA94:4504_4509；Crameri等人，(1998)Nature391:288_291以及第5，605，793號和第5，837，458號美國專利。本發(fā)明的多核苷酸可用來從其他生物，特別是其他植物，更具體而言其他單子葉植物分離相應(yīng)的序列。按此方式，可使用諸如PCR、雜交等之類的方法，對這類序列基于其與本文給出的序列的序列同一性來進行鑒定?；谄渑c本文給出的本發(fā)明的整個AP2轉(zhuǎn)錄因子序列或AP2轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)域或者與它們的變體和片段的序列同一性而分離的序列，為本發(fā)明所涵蓋。這類序列包括作為所公開的序列的直系同源物的序列?！爸毕低次铩敝荚谝庵秆茏怨餐淖嫦然虿⒂捎谖锓N形成而存在于不同物種中的基因。存在于不同物種中的基因，當(dāng)它們的核苷酸序列和/或它們的編碼蛋白質(zhì)序列共享至少60%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更大的序列同一性時，被認為是直系同源物。直系同源物的功能在各種物種中常常是高度保守的。因此，可沉默或抑制AP2轉(zhuǎn)錄因子序列或編碼AP2轉(zhuǎn)錄因子蛋白的多核苷酸的表達且在嚴格條件下與本文所公開的AP2轉(zhuǎn)錄因子序列或者與其變體或片段雜交的分離的多核苷酸，為本發(fā)明所涵蓋。在PCR方法中，可設(shè)計寡核苷酸引物用于PCR反應(yīng)來從提取自任何所關(guān)注的植物的cDNA或基因組DNA擴增相應(yīng)的DNA序列。用于設(shè)計PCR引物或PCR克隆的方法是本領(lǐng)域公知的，在Sambrook等人，(1989)MolecularCloning:ALaboratoryManual(第2版，ColdSpringHarborLaboratoryPress,Plainview,NewYork)中有公開。還可參見Innis等人(編輯)(1990)PCRProtocols:AGuidetoMethodsandApplications(AcademicPress,NewYork)；Innis禾口Gelfand(編輯)(1995)PCRStrategies(AcademicPress,NewYork)；以及Innis和Gelfand(編輯)(1999)PCRMethodsManual(AcademicPress,NewYork)。已知的PCR方法包括但不限于利用成對引物、巢式引物、單一特異引物、簡并引物、基因特異性引物、載體特異性引物、部分錯配引物等的方法。在雜交技術(shù)中，將已知的多核苷酸的全部或部分用作探針，該探針選擇性地雜交至來自選定生物體的克隆的基因組DNA片段或cDNA片段的群體(即基因組文庫或cDNA文庫)中存在的其他相應(yīng)多核苷酸。雜交探針可以是基因組DNA片段、cDNA片段、RNA片段或其他寡核苷酸，且可用可檢測基團(如32P)或任何其他可檢測標(biāo)志物進行標(biāo)記。因此，例如，雜交用探針可通過基于本發(fā)明的AP2轉(zhuǎn)錄因子多核苷酸對合成的寡核苷酸進行標(biāo)記來制備。制備雜交探針和構(gòu)造cDNA文庫和基因組文庫的方法是本領(lǐng)域已知的，在Sambrook等人，(1989)MolecularCloning:ALaboratoryManual(第2版，ColdSpringHarborLaboratoryPress,Plainview,NewYork)中有公開。例如，本文公開的整個AP2轉(zhuǎn)錄因子多核苷酸或編碼AP2轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)域的多核苷酸，或者它們的一個或多個部分，可用作能夠與相應(yīng)的AP2轉(zhuǎn)錄因子多核苷酸和信使RNA特異性雜交的探針。為實現(xiàn)在多種條件下的特異性雜交，這類探針包括在各個AP2轉(zhuǎn)錄因子多核苷酸序列當(dāng)中獨特的序列，且優(yōu)選長度為至少約10個核苷酸，最優(yōu)選長度為至少約20個核苷酸。這類探針可用來通過PCR從選定的植物擴增相應(yīng)的AP2轉(zhuǎn)錄因子多核苷酸。該技術(shù)可用于從所需植物分離出另外的編碼序列或用作診斷測定法以確定編碼序列在植物中的存在。雜交技術(shù)包括接種的DNA文庫(噬菌斑或菌落)的雜交篩選；參見例如Sambrook等人，(1989)MolecularCloning:ALaboratoryManual(第2片反，ColdSpringHarborLaboratoryPress，Plainview,NewYork)0這類序列的雜交可在嚴格條件下進行。所謂“嚴格條件”或“嚴格雜交條件”意指探針與其靶標(biāo)序列雜交的程度將可檢測地大于與其他序列雜交的程度(例如比背景大至少2倍)的條件。嚴格條件是序列依賴性的，在不同的環(huán)境中將會不同。通過控制雜交和/或洗滌條件的嚴格性，可鑒定與探針100%互補的靶標(biāo)序列(同源探測)?；蛘撸烧{(diào)節(jié)嚴格性條件以允許序列中有一些錯配，以使得檢測到較低程度的相似性(異源探測)。通常，探針長度小于約1000個核苷酸，優(yōu)選長度小于500個核苷酸。通常，嚴格條件將為其中鹽濃度低于約1.5M鈉離子，通常為約0.01至1.OM鈉離子濃度(或其他鹽)，PH為7.0至8.3，對短探針(例如，10至50個核苷酸)而言溫度為至少30°C，對長探針(例如超過50個核苷酸)而言溫度為至少約60°C的那些條件。嚴格條件還可通過添加去穩(wěn)定劑如甲酰胺來實現(xiàn)。示例性的低嚴格性條件包括在37°C下用30至35%甲酰胺、IMNaClU%SDS(十二烷基硫酸鈉)的緩沖溶液雜交，并在50至55°C下在IX至2XSSC(20XSSC=3.OMNaCl/0.3M檸檬酸三鈉)中洗滌。示例性的中嚴格條件包括在40-45%甲酰胺、1.OMNaCl、l%SDS中于37°C下雜交，并在0.5X-1XSSC中于55-60°C下洗滌。示例性的高嚴格條件包括在50%甲酰胺、IMNaCl、l%SDS中于37°C下雜交，并在0.IXSSC中于60-65°C下洗滌。任選地，洗滌緩沖液可包含約0.至約SDS0雜交的持續(xù)時間通常少于約24小時，往往約4至約12小時。洗滌的持續(xù)時間將為至少足以達到平衡的時間長度。特異性通常決定于雜交后的洗滌，關(guān)鍵因素為最終洗滌溶液的離子強度和溫度。對于DNA-DNA雜交體，Tm可從Meinkoth和Wahl，(1984)Anal.Biochem.138:267_284的公式來估計:Tm=81.5°C+16.6(logΜ)+0.41(%GC)-0.61(%form)-500/L；其中M為單價陽離子的摩爾濃度，％GC為DNA中的鳥嘌呤核苷酸和胞嘧啶核苷酸的百分數(shù)，％form為雜交溶液中的甲酰胺的百分數(shù)，L為雜交體的長度(單位為堿基對)。Tm為50%的互補靶標(biāo)序列與完美匹配的探針雜交時的溫度(在確定的離子強度和PH下)。每錯配，1減少約1°C，因而，可調(diào)節(jié)Tm、雜交和/或洗滌條件以雜交至所需同一性的序列。例如，如果尋求具有>90%同一性的序列，則可將Tm降低10°C。通常，將嚴格條件選擇為比特定序列及其互補序列在確定的離子強度和PH下的熱解鏈溫度(Tm)低約5°C。然而，極嚴格條件可采用在低于熱解鏈溫度001、2、3或41下雜交和/或洗滌；中等嚴格條件可采用在低于熱解鏈溫度(Tm)6、7、8、9或10°C下雜交和/或洗滌；低嚴格條件可采用在低于熱解鏈溫度(Tffl)11、12、13或14、15或20°C下雜交和/或洗滌。利用該公式，雜交和洗滌組成以及所需的Tm，普通技術(shù)人員將認識到，雜交和/或洗滌溶液的嚴格性的變化固有地得到了描述。如果所需程度的錯配導(dǎo)致Tm低于45°C(水溶液)或32°C(甲酰胺溶液)，則優(yōu)選的是增加SSC濃度以便可使用較高的溫度。有關(guān)核酸的雜交的詳盡指導(dǎo)可見于Tijssen，(1993)LaboratoryTechniquesinBiochemistryandMolecularBiology-HybridizationwithNucleicAcidProbes，第I部分，第2章(Elsevier，NewYork)；和Ausubel等人(編輯)(1995)CurrentProtocolsinMolecularBiology,第2章(GreenePublishingandffiley-Interscience,NewYork)。參見Sambrook等人，(1989)MolecularCloningALaboratoryManual(第2版，ColdSpringHarborLaboratoryPress,Plainview,NewYork)。以下術(shù)語用來描述兩個或更多個核苷酸或多肽之間的序列關(guān)系(a)“參比序列”，(b)“比較窗口”，(c)“序列同一性”和(d)“序列同一性百分比”。(a)本文所用的“參比序列”是用作序列比較的基礎(chǔ)的確定的序列。參比序列可為指定的序列的子集或全部；例如作為全長cDNA或基因序列的區(qū)段或者該完全cDNA或基因序列。(b)本文所用的“比較窗口”是指多核苷酸序列的連續(xù)和指定的區(qū)段，其中該比較窗口中的該多核苷酸序列相比于參比序列(不包含添加或缺失)可包含添加或缺失(即空位)，以便兩個多核苷酸的最佳比對。通常，比較窗口長度為至少20個連續(xù)的核苷酸，任選地可為30、40、50、100個或更長。本領(lǐng)域技術(shù)人員認識到，為避免由于在多核苷酸序列中加入空位所致的與參比序列的高度相似性，通常引入空位罰分并從匹配數(shù)扣除空位罰分。將序列進行比對以作比較的方法是本領(lǐng)域公知的。因此，對任何兩個序列之間的序列同一性百分數(shù)的確定，可使用數(shù)學(xué)算法來完成。這類數(shù)學(xué)算法的非限制性實例有Myers和Miller,(1988)CABIOS4:11_17的算法；Smith等人，(1981)Adv.Appl.Math.2482的局部比對算法；Needleman和Wunsch，(1970)J.Mol.Biol.48443-453的全局比對算法；Pearson和Lipman，(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.852444-2448的搜索局部(search-for-local)比對方法；Karlin和Altschul，(1990)Proc.Natl.Acad.Sci.USA872264的算法，其在Karlin和Altschul，(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:5873_5877中作了修正。可利用這些數(shù)學(xué)算法的計算機實施進行序列的比較，從而確定序列同一性。這類實施包括但不限于PC/Gene程序(可獲自Intelligenetics，MountainView,California)中的CLUSTAL;GCGWisconsinGeneticsSoftwarePackage版本10(可獲自AccelrysInc.，9685ScrantonRoad,SanDiego,California,USA)中的ALIGN程序(版本2.0)和GAP、BESTFIT、BLAST、FASTA和TFASTA。使用這些程序的比對可用默認參數(shù)來進行。CLUSTAL程序在以下文獻中得到很好的描述=Higgins等人，(1988)Gene73:237-244(1988);Higgins等人，(1989)CABIOS5:151_153;Corpet等人，(1988)NucleicAcidsRes.1610881-90;Huang等人(1992)CABI0S8:155-65;和Pearson等人(1994)Meth.Mol.Biol.24:307-331。ALIGN程序是基于Myers和Miller，(1988)(出處同上)的算法。當(dāng)比較氨基酸序列時，ALIGN程序可使用PAM120加權(quán)殘基表(weightresiduetable)、空位長度罰分12和空位罰分4。Altschul等人，(1990)J.Mol.Biol.215403的BLAST程序是基于Karlin和Altschul,(1990)(出處同上)的算法。BLAST核苷酸搜索可用BLASTN程序、score(得分)=100、wordlength(字長)=12來進行，以獲得與編碼本發(fā)明蛋白質(zhì)的核苷酸序列同源的核苷酸序列。BLAST蛋白質(zhì)搜索可用BLASTX程序、得分=50、字長=3來進行，以獲得與本發(fā)明蛋白質(zhì)或多肽同源的氨基酸序列。為出于比較目的獲得帶空位的比對，可如Altschul等人，(1997)NucleicAcidsRes.25:3389中所述利用GappedBLAST(在BLAST2.O中)?；蛘?，可使用PSI-BLAST(在BLAST2.O中)來進行迭代搜索，該搜索可檢11測分子之間的遠源關(guān)系。參見Altschul等人，(1997)(出處同上)。當(dāng)采用BLAST、GappedBLAST、PSI-BLAST時，可使用各個程序的默認參數(shù)(例如BLASTN用于核苷酸序列，BLASTX用于蛋白質(zhì))。參見www.ncbi.nlm.nih.gov。還可以以手動方式通過檢查來進行比對。除非另有規(guī)定，否則本文提供的序列同一性/相似性值是指使用GAP版本10用以下參數(shù)獲得的值使用GAP權(quán)重50和長度權(quán)重3及nwsgapdna.cmp打分矩陣，獲得核苷酸序列的同一性百分數(shù)和相似性百分數(shù)；使用GAP權(quán)重8和長度權(quán)重2及BL0SUM62打分矩陣或其任何等同程序，獲得氨基酸序列的同一性百分數(shù)和相似性百分數(shù)。所謂“等同程序”意指任何這樣的序列比較程序，其對于任何兩個所考慮的序列，相比于GAP版本10所產(chǎn)生的相應(yīng)比對，能產(chǎn)生出具有相同的核苷酸或氨基酸殘基匹配和相同的序列同一性百分數(shù)的比對。GAP使用Needleman和Wunsch，(1970)J.Mol.Biol.48443-453的算法，以找到兩個完全序列的比對，該比對能使匹配數(shù)最大和使空位數(shù)最小。GAP會考慮所有可能的比對和空位位置，并產(chǎn)生具有最大數(shù)目的匹配堿基和最少的空位的比對。其允許提供以匹配堿基數(shù)為單位的空位產(chǎn)生罰分和空位延伸罰分。GAP對于其插入的每個空位，都必須利用匹配的空位產(chǎn)生罰分數(shù)。如果選擇大于零的空位延伸罰分，GAP對于每個插入的空位必須另外利用空位長度乘以空位延伸罰分。對于蛋白質(zhì)序列，GCGWisconsinGeneticsSoftwarePackage的版本10中的默認空位產(chǎn)生罰分值和空位延伸罰分值分別為8和2。對于核苷酸序列，默認空位產(chǎn)生罰分為50，而默認空位延伸罰分為3?？瘴划a(chǎn)生罰分和空位延伸罰分可以以選自0-200的整數(shù)來表示。因此，例如，空位產(chǎn)生罰分和空位延伸罰分可為0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65或更大。GAP給出最好的比對的群體中的一個成員。這個群體可能存在許多成員，但其他成員沒有更好的質(zhì)量。GAP顯示關(guān)于比對的四個品質(zhì)因素品質(zhì)(quanlity)、比率(ratio)、同一性(identity)和相似性(similarity).質(zhì)量是為了比對序列而被最大化的指標(biāo)(metric)。比率是品質(zhì)除以較短區(qū)段中的堿基數(shù)。同一性百分數(shù)是實際匹配的符號的百分數(shù)。相似性百分數(shù)是相似的符號的百分數(shù)。將對應(yīng)于空位的符號忽略。當(dāng)一對符號的打分矩陣值大于或等于0.50(相似性閾值)時，對相似性打分。GCGWisconsinGeneticsSoftwarePackage的版本10中使用的打分矩陣為BL0SUM62(參見Henikoff和Henikoff，(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.USA8910915)。(c)在兩個多核苷酸或多肽序列的情形中，本文所用的“序列同一性”或“同一性”是指當(dāng)在指定的比較窗口上進行比對以獲得最大對應(yīng)時兩個序列中相同的殘基。當(dāng)序列同一性百分數(shù)針對蛋白質(zhì)使用時，應(yīng)認識到，不相同的殘基位置往往差別在于保守氨基酸置換，其中氨基酸殘基被其他具有相似的化學(xué)性質(zhì)(例如電荷或疏水性)的氨基酸殘基置換，因此不會改變分子的功能性質(zhì)。當(dāng)序列差別在于保守置換，則可上調(diào)百分比序列同一性以校正置換的保守性質(zhì)。差異在于這種保守置換的序列被稱為具有“序列相似性”或“相似性”。作出這個調(diào)整的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。通常，這涉及將保守置換打分為部分錯配而不是完全錯配，從而提高序列同一性百分數(shù)。因而，例如，如果相同的氨基酸給予1分，非保守置換給予0分，則保守置換給予0至1之間的分數(shù)。保守置換的打分是例如如在程序PC/GENE(Intelligenetics，MountainView,California)中所執(zhí)行那樣進行計算。(d)本文所用的“序列同一性百分數(shù)”意指通過在比較窗口上比較兩個最佳比對的序列所確定的數(shù)值，其中多核苷酸序列在比較窗口中的部分與參比序列(不包含添加或缺失)相比包含添加或缺失(即空位)，以便兩個序列的最佳比對。該百分數(shù)是這樣計算的確定在兩個序列中出現(xiàn)相同核酸堿基或氨基酸殘基的位置的數(shù)目以得到匹配的位置的數(shù)目，將匹配的位置的數(shù)目除以比較窗口中的位置的總數(shù)目，然后將結(jié)果乘以100以得到序列同一性百分數(shù)。B.棺物在具體的實施方案中，本發(fā)明提供具有改變了的水平(即提高或降低)的AP2轉(zhuǎn)錄因子序列。在一些實施方案中，所述植物和植物部分已在其基因組中穩(wěn)定摻入了至少一種異源多核苷酸，該異源多核苷酸編碼包含SEQIDN0:5所示AP2轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)域的AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽或其生物活性變體或片段。在一個實施方案中，編碼AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽的多核苷酸在SEQIDNO:1中示出或為其生物活性變體或片段。在另外其他的實施方案中，提供這樣的植物和植物部分，其中穩(wěn)定摻入到該植物或植物部分的基因組中的異源多核苷酸包含這樣的多核苷酸，該多核苷酸當(dāng)在植物中表達時能增加包含AP2轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)域的AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽、AP2轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)域或其活性變體或片段的水平?？捎脕碓黾覣P2轉(zhuǎn)錄因子多肽的表達的序列包括但不限于SEQIDNO1所示的序列或其變體或片段。如本文別處更詳細討論的，這種植物、植物細胞、植物部分和種子可具有改變了的表型，包括例如改變了的花器官發(fā)育、葉形成、趨光性、頂端優(yōu)勢、果實發(fā)育、根起始和提高了的產(chǎn)量。本文所用的術(shù)語植物包括植物細胞、植物原生質(zhì)體、從中可再生出植物的植物細胞組織培養(yǎng)物、植物愈傷組織、在植物或植物部分中完好的植物塊和植物細胞如胚、花粉、胚珠、種子、葉、花、枝、果實、仁、穗、穗軸、殼、莖、根、根尖、花粉囊等。谷粒旨在表示商業(yè)種植者出于栽培或繁殖物種之外的目的生產(chǎn)的成熟種子。再生的植物的子代、變體和突變體也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)，前提是這些部分包含本文所公開的引入的或異源的多核苷酸。本發(fā)明可用于任何植物物種(包括但不限于單子葉植物和雙子葉植物)的轉(zhuǎn)化。所關(guān)注的植物物種的實例包括但不限于玉米；蕓苔屬物種(Brassicasp.)(例如甘藍型油菜(B.napus)、蕪菁(B.rapa)、芥菜(B.jimcea))，特別是可用作種子油來源的那些蕓苔屬i^ft；WH(Medicagosativa)(Secalecereale)>^^(Sorghumbicolor,Sorghumvulgare)、小米(例如珍珠粟(Pennisetumglaucum)、黃米(Panicummiliaceum)、^■-f-(Setariaitalica)>^fciTlfS(Eleusinecoracana))；(π|H^(Helianthusannuus)；紅花(Carthamustinctorius)；小麥(Triticumaestivum)、大豆(Glycinemax)、煙草(Nicotianatabacum)、馬鈴薯(Solanumtuberosum)、落花生(Arachishypogaea)、棉花(海島棉(Gossypiumbarbadense)、陸地棉(Gossypiumhirsutum))；甘薯(Ipomoeabatatus)；L(Manihotesculenta)；BjlPB^(Coffeaspp.)(Cocosnucifera)；菠蘿(Ananascomosus)；柑橘(Citrusspp.)；可可(Theobromacacao)；茶(Camelliasinensis)；香蕉(Musaspp.)；魚萼梨(Perseaamericana)；無花果(Ficuscasica)；番石■(Psidiumguajava)；τ^(Mangiferaindica)；^iH(Oleaeuropaea)；H(Caricapapaya)；腰果(Anacardiumoccidentale)；澳洲堅果(Macadamiaintegrifolia)；杏樹(Prunusamygdalus)；糖用舌甘菜(Betavulgaris)；甘鹿(Saccharumspp.)；燕麥；大麥；蔬13菜；觀賞植物和針葉樹。蔬菜包括番爺(Lycopersiconesculentum)、萵苣(例如Lactucasativa)、青豆(Phaseolusvulgaris)、利馬豆(Phaseoluslimensis)、豌豆(Lathyrusspp.)禾口黃瓜屬(Cucumis)的成員如黃瓜(C.sativus)、香瓜(C.cantalupensis)和甜瓜(C.melo)。觀賞植物包括才土胃$^￡(Rhododendronspp.)^AyIlljiE(MacrophyIlahydrangea)、朱·(Hibiscusrosasanensis)、攻瑰(Rosaspp·)、郁金香(Tulipaspp.)、7jC仙花(Narcissusspp·)、ΜΦΨ^(Petuniahybrida)>β(Dianthuscaryophyllus)>一nniL(Euphorbiapulcherrima)禾口菊花?？捎糜趯嵤┍景l(fā)明的針葉樹包括例如松樹如火炬松(Pinustaeda)、濕地松(Pinuselliotii)、美國黃松(Pinusponderosa)、美國黑松(Pinuscontorta)和輻射松(Pinusradiata)；花方萁松(Pseudotsugamenziesii)；力口拿大鐵杉(Tsugacanadensis)；北美云杉(Piceaglauca)；紅杉(Sequoiasempervirens)；真冷杉如銀揪(Abiesamabilis)和香脂冷杉(Abiesbalsamea)；和雪松如西岸紅雪松(Thujaplicata)和黃扁柏(Chamaecyparisnootkatensis)。在具體的實施方案中，本發(fā)明的植物是作物植物(例如玉米、苜蓿、向日葵、蕓苔屬植物、大豆、棉花、紅花、花生、高粱、小麥、小米、煙草等等)。在其他實施方案中，玉米和大豆植物是優(yōu)選的，在另外其他實施方案中，玉米植物是優(yōu)選的。所關(guān)注的其他植物包括提供所關(guān)注的種子的谷物植物、油料種子植物和豆科植物。所關(guān)注的種子包括谷物種子，如玉米、小麥、大麥、水稻、高粱、黑麥等等。油料植物包括棉花、大豆、紅花、向日葵、蕓苔屬植物、玉蜀黍、苜蓿、棕櫚、椰子等等。豆科植物包括莢果類和豆類。莢果類包括瓜爾豆、槐豆、胡蘆巴、大豆、四季豆、豇豆、綠豆、利馬豆、蠶豆、小扁豆、鷹嘴豆等等?！笆茉囍参锘蛑参锛毎笔瞧渲谐霈F(xiàn)了變更(如多肽的轉(zhuǎn)化或引入)的植物或植物細胞，或者是遺傳自經(jīng)如此變更的植物或細胞而包含該變更的植物或植物細胞?！皩φ铡被颉皩φ罩参铩被颉皩φ罩参锛毎碧峁y量受試植物或植物細胞的表型變化的參考點。對照植物或植物細胞可包含例如(a)野生型植物或細胞，即與用于進行變更得到受試植物或細胞的原始材料有相同的基因型；(b)與原始材料有相同的基因型、但已轉(zhuǎn)化了無效(null)構(gòu)建體(即轉(zhuǎn)化了對目的性狀已知沒有作用的構(gòu)建體，如包含標(biāo)志物基因的構(gòu)建體)的植物或植物細胞；(c)屬受試植物或植物細胞的后代中非轉(zhuǎn)化分離子的植物或植物細胞；(d)在遺傳上與受試植物或植物細胞相同、但不被暴露于會誘導(dǎo)目的基因的表達的條件或刺激的植物或植物細胞或者(e)處于目的基因不被表達的條件下的受試植物或植物細胞本身。C.多核苷酸構(gòu)建體術(shù)語“多核苷酸”的使用并不旨在將本發(fā)明局限于包含DNA的多核苷酸。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員會認識到，多核苷酸可包含核糖核苷酸以及包含核糖核苷酸和脫氧核糖核苷酸的組合。這種脫氧核糖核苷酸和核糖核苷酸既包括天然的分子也包括合成的類似物。本發(fā)明的多核苷酸還涵蓋所有形式的序列，包括但不限于單鏈形式、雙鏈形式、發(fā)夾結(jié)構(gòu)、莖-環(huán)結(jié)構(gòu)等。應(yīng)用于本發(fā)明方法和組合物中的各種多核苷酸可在表達盒中提供以便在目的植物中表達。表達盒將包括有效連接至本發(fā)明的多核苷酸的5'和3'調(diào)控序列?！坝行нB接”旨在意指兩個或更多個元件之間的功能連接。例如，所關(guān)注的多核苷酸和調(diào)控序列(即啟動子)之間的有效連接是可使該所關(guān)注多核苷酸得以表達的功能連接。有效連接的元件可以是連續(xù)的或非連續(xù)的。當(dāng)用來指兩個蛋白質(zhì)編碼區(qū)域的連接時，所謂有效連接意指所述編碼區(qū)域處于相同的閱讀框中。表達盒可另外含有至少一個待共轉(zhuǎn)化到該生物體中的額外基因。作為另外一種選擇，可在多個表達盒上提供額外的基因。這種表達盒設(shè)有多個限制性位點和/或重組位點，以使AP2轉(zhuǎn)錄因子多核苷酸的插入處于調(diào)控區(qū)的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)之下。表達盒可另外含有選擇性標(biāo)志物基因。表達盒在5'-3'轉(zhuǎn)錄方向上可包括在植物中起作用的轉(zhuǎn)錄和翻譯起始區(qū)(即啟動子)、AP2轉(zhuǎn)錄因子多核苷酸及轉(zhuǎn)錄和翻譯終止區(qū)(即終止區(qū))。調(diào)控區(qū)(即啟動子、轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)和翻譯終止區(qū))和/或AP2轉(zhuǎn)錄因子多核苷酸對宿主細胞而言或彼此之間而言可以是天然的/同功的。或者，所述調(diào)控區(qū)域和/或AP2轉(zhuǎn)錄因子多核苷酸對于宿主細胞而言或彼此之間可以是異源的。本文所用的針對序列所謂的“異源”為起源于外來物種的序列，或者，如果起源于相同物種的話，則通過有意的人為干預(yù)對其天然形式在組成和/或基因座方面進行實質(zhì)性修飾的序列。例如，有效連接至異源多核苷酸的啟動子來自于與得到該多核苷酸的物種不同的物種，或者如果來自于相同/類似的物種的話，一者或兩者實質(zhì)上從它們的原始形式和/或基因座修飾而得，或者該啟動子不是該被有效連接的多核苷酸的天然啟動子。本文所用的嵌合基因包含編碼序列和與其有效連接的轉(zhuǎn)錄起始區(qū)，該轉(zhuǎn)錄起始區(qū)與該編碼序列異源。雖然可優(yōu)選使用異源啟動子來表達序列，但可以使用天然的啟動子序列。這種構(gòu)建體能改變AP2轉(zhuǎn)錄因子轉(zhuǎn)錄物或蛋白質(zhì)在植物或植物細胞中的表達水平。因此，植物或植物細胞的表型可得到改變。終止區(qū)可以對于轉(zhuǎn)錄起始區(qū)而言是天然的，可以對于有效連接的所關(guān)注的AP2轉(zhuǎn)錄因子多核苷酸而言是天然的，可以對于植物宿主而言是天然的，或者可以衍自對于該啟動子、該所關(guān)注AP2轉(zhuǎn)錄因子多核苷酸、該植物宿主或它們的任何組合而言別的來源(即外來的或異源的)。便利的終止區(qū)可獲自根瘤農(nóng)桿菌(A.tumefaciens)的Ti質(zhì)粒，如章魚氨酸合酶和胭脂氨酸合酶終止區(qū)。另參見Guerineau等人，(1991)Mol.Gen.Genet.262141-144；Proudfoot,(1991)Cell64671-674；Sanfacon等人，(1991)GenesDev.5141-149;Mogen等人，(1990)PlantCell21261-1272;Munroe等人，(1990)Gene91:51-158;Ballas等人，(1989)NucletcAcidsRes.17:7891_7903和Joshi等人，(1987)NucleicAcidsRes.15:9627_9639。如適當(dāng)?shù)脑?，可對多核苷酸進行優(yōu)化以使其在轉(zhuǎn)化的植物中的表達提高。也就是說，可使用植物偏好的密碼子來合成多核苷酸，以改進表達。有關(guān)宿主偏好的密碼子用法的討論，參見例如Campbell和Gowri，(1990)PlantPhysiol.92=I-Il0本領(lǐng)域有用來合成植物偏好的基因的方法。參見例如第5，380，831號和第5，436，391號美國專利以及Murray等人，(1989)NucleicAcidsRes.17:477_498(通過引用并入本文)。已知有另外的序列修飾可增強在細胞宿主中的基因表達。這些修飾包括消除編碼假的聚腺苷酸化信號的序列、外顯子_內(nèi)含子剪接位點信號、轉(zhuǎn)座子重復(fù)序列和其他此類得到很好表征的可能對基因表達有害的序列。可將序列的G-C含量調(diào)整到給定的細胞宿主的平均水平，這通過參考在宿主細胞中表達的已知基因計算得到。當(dāng)可能時，對序列進行修飾以避免出現(xiàn)預(yù)測的發(fā)夾二級mRNA結(jié)構(gòu)。表達盒可另外含有5'前導(dǎo)序列。這種前導(dǎo)序列可起到增強翻譯的作用。翻譯前導(dǎo)序列是本領(lǐng)域已知的，包括小核糖核酸病毒前導(dǎo)序列，例如EMCV前導(dǎo)序列(腦心肌炎病毒5‘非編碼區(qū))(Elroy-Stein等人，(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.USA86:6126_6130)；馬鈴薯Y病毒組前導(dǎo)序列，例如TEV前導(dǎo)序列(煙草蝕刻病毒MGallie等人，(1995)Gene165(2):233-238)、MDMV前導(dǎo)序列(玉米矮花葉病毒)(Virology154:9_20)和人免疫球蛋白重鏈結(jié)合蛋白(BiP)(Macejak等人，(1991)Nature353:90-94)；來自苜?；ㄈ~病毒的外殼蛋白mRNA的非翻譯前導(dǎo)序列(AMVRNA4)(Jobling等人，(1987)Nature325622~625)；煙草花葉病毒前導(dǎo)序列(TMV)(Gallie等人，(1989)MolecularBiologyofRNA,Cech(編輯)(Liss，NewYork)，第237-256頁)和玉米枯黃斑點病毒前導(dǎo)序列(MCMV)(Lommel等人，(1991)Virology81:382-385)。還可參見Della-Cioppa等人，(1987)PlantPhysiol.84965-968。在制備表達盒時，可對各種DNA片段進行操縱，以提供處于正確取向的DNA序列，且適當(dāng)時提供處于正確的閱讀框的DNA序列。為此目的，可應(yīng)用銜接子或接頭將DNA片段連接在一起，或者可涉及其他的操縱以提供便利的限制位點、去除多余的DNA、去除限制位點等。出于這個目的，可涉及到體外誘變、引物修復(fù)、限制性酶切、退火、再置換(例如轉(zhuǎn)換和易位)。有許多啟動子可用于實施本發(fā)明，包括所關(guān)注的多核苷酸序列的天然啟動子。啟動子可基于所需的結(jié)果來選擇。可將核酸與組成型啟動子、組織偏好的啟動子或其他啟動子組合以便在植物中表達。這種組成型啟動子包括例如WO99/43838和第6，072，050號美國專利中所公開的Rsyn7啟動子的核心啟動子及其他組成型啟動子；核心CaMV35S啟動子(Odell等人，(1985)Nature313:810-812)；水稻肌動蛋白(McElroy等人，(1990)PlantCell2163-171)；泛素(Christensen等人，(1989)PlantMol.Biol.12:619_632和Christensen等人，(1992)PlantMol.Biol.18675-689)；pEMU(Last等人，(1991)Theor.Appl.Genet.81581-588)；MAS(Velten等人，(1984)EMBOJ.3:2723_2730)；ALS啟動子(第5，659，026號美國專利)，G0S2啟動子(dePater等人，(1992)PlantJ.2:837_44)等等。其他組成型啟動子包括例如第5，608，149號；第5，608，144號；第5，604，121號；第5，569，597號；第5，466，785號；第5，399，680號；第5，268，463號；第5，608，142號和第6，177,611號美國專利。表達盒還可包含用于選擇轉(zhuǎn)化細胞的選擇性標(biāo)志物基因。選擇性標(biāo)志物基因被用于轉(zhuǎn)化細胞或組織的選擇。選擇性標(biāo)志物基因包括編碼抗生素抗性的基因，如那些編碼新霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶II(NEO)和潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶(HPT)的基因，以及賦予對除草化合物的抗性的基因，所述除草化合物為例如草銨膦、溴苯腈、咪唑啉酮和2，4_二氯苯氧基乙酸(2，4-D)。另外的選擇性標(biāo)志物包括表型標(biāo)志物，如半乳糖苷酶和熒光蛋白如綠熒光蛋白(GFP)(Su等人，(2004)BiotechnolBioeng85:610_9和Fetter等人，(2004)PlantCell16:215-28)、青色熒光蛋白(CYP)(Bolte等人，(2004)J.CellScience117:943_54和Kato等人，(2002)PlantPhysiol129:913-42)和黃色熒光蛋白(Evrogen的PhiYFP，參見Bolte等人，(2004)J.CellScience117:943-54)。對于另外的選擇性標(biāo)志物，一般參BYarranton,(1992)Curr.Opin.Biotech.3:506-511；Christopherson等人，(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA89:6314-6318;Yao等人(1992)Cell71:63-72；Reznikoff,(1992)Mol.Microbiol.6:2419-2422；Barkley等人，(1980)TheOperon,第177-220頁；Hu等人，(1987)Cell48:555-566;Brown等人，(1987)Cell49:603-612;Figge等人，(1988)Cell52:713-722；Deuschle等人，(1989)Proc.Natl.Acad.Aci.USA86:5400-5404；Fuerst等人，(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.USA86:2549-2553；Deuschle^人，(1990)Science248:480-483；Gossen,(1993)博士論文，海德爾堡大學(xué)；Reines等人，(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:1917-1921;Labow等人，(1990)Mol.Cell.Biol.10:3343-3356；Zambretti等人，(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA89:3952-3956;Baim等人，(1991)Proc.Natl.Acad.Sci.USA88:5072-5076；Wyborski等人，(1991)NucleicAcidsRes.194647-4653;Hillenand-ffissman,(1989)TopicsMol.Struc.Biol.10:143-162；Degenkolb等人，(1991)Antimicrob.AgentsChemother.35:1591-1595;Kleinschnidt等人，(1988)Biochemistry27:1094-1104；Bonin,(1993)博士論文，海德爾堡大學(xué)；Gossen等人，(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA89:5547-5551；Oliva等人，(1992)Antimicrob.AgentsChemother.36:913-919;Hlavka等人，(1985)HandbookofExperimentalPharmacology,第78卷(Springer-Verlag,Berlin)；Gill等人，(1988)Nature334:721-724。將這些公開內(nèi)容以引用的方式并入本文。上面關(guān)于選擇性標(biāo)志物基因的列表并不意指是限制性的。任何選擇性標(biāo)志物基因均可用于本發(fā)明。在某些實施方案中，本發(fā)明的多核苷酸可與所關(guān)注的多核苷酸序列的任何組合進行堆疊，以產(chǎn)生具有所需性狀的植物。本文所用的性狀是指衍自特定序列或序列群組的表型。生成的組合也可包括所關(guān)注多核苷酸中的任何一者的多個拷貝。本發(fā)明的多核苷酸還可與病害或除草劑抗性所需的性狀進行堆疊(例如伏馬毒素解毒基因(第5，792，931號美國專利)；無毒性和病害抗性基因(Jones等人，(1994)Science266:789;Martin等人，(1993)Science2621432;Mindrinos等人，(1994)Cell78:1089)；導(dǎo)致除草劑抗性的乙酰乳酸合酶(ALQ突變體，如S4和/或Hra突變；谷氨酰胺合酶的抑制劑，如膦絲菌素或kista(例如bar基因)和草甘磷抗性(EPSPS基因))，以及對加工或工藝產(chǎn)品而言理想的性狀如高油脂(例如第6，232，5號美國專利)；經(jīng)修飾的油脂(例如脂肪酸去飽和酶基因(第5，952，544號美國專利；WO94/11516))；經(jīng)修飾的淀粉(例如ADPG焦磷酸化酶(AGP酶)、淀粉合酶(SS)、淀粉分支酶(SBE)和淀粉脫支酶(SDBE))和聚合物或生物塑料(例如第5.602，321號美國專利；促進聚羥基鏈烷酸酯(PHA)表達的β-酮硫解酶、聚羥基丁酯合酶和乙酰乙酰輔酶A還原酶(Schubert等人，(1988)J.Bacteriol.170:5837-5847))，將上述文獻的公開內(nèi)容以引用的方式并入本文。還可將本發(fā)明的多核苷酸與提供農(nóng)藝性狀或轉(zhuǎn)化技術(shù)性狀的多核苷酸進行組合，所述農(nóng)藝性狀如雄性不育(例如參見第5，583，210號美國專利)、莖稈強度、開花時間，所述轉(zhuǎn)化技術(shù)性狀如細胞周期調(diào)控或基因靶向(例如WO99/61619、WO00/17364和WO99/25821)，這些專利的公開內(nèi)容以引用方式并入本文。這些堆疊的組合可通過任何方法來產(chǎn)生，包括但不限于通過任何常規(guī)方法或頂交(TopCross)方法或遺傳轉(zhuǎn)化來對植物進行雜交育種。如果序列通過遺傳轉(zhuǎn)化植物來堆疊，則所關(guān)注的多核苷酸序列可在任何時間以任何順序進行組合。例如，可將包括一種或多種期望性狀的轉(zhuǎn)基因植物用作靶標(biāo)，通過后續(xù)的轉(zhuǎn)化引入更多性狀?？梢杂霉厕D(zhuǎn)化規(guī)程將性狀與目的多核苷酸同時引入，所述多核苷酸由轉(zhuǎn)化盒的任何組合提供。例如，如果將引入兩條序列，則可將該兩條序列包含在單獨的轉(zhuǎn)化盒中(反式)或包含在同一轉(zhuǎn)化盒中(順式)?？赏ㄟ^相同啟動子或不同啟動子驅(qū)動序列表達。在某些情況中，可能期望引入將會抑制所關(guān)注多核苷酸表達的轉(zhuǎn)化盒。這可以與其它抑制盒或超表達盒的任何組合組合使用以在植物中生成期望特性組合。進一步認識到可使用位點特異性重組體系在期望基因組位點堆疊多核苷酸序列。參見例如W099/25821、W099/25854、W099/25840、W099/25855和1099/^25853,它們都以引用方式并入本文。P.引入方法本發(fā)明的方法涉及將多肽或多核苷酸引入植物中?！耙搿敝荚谝庵敢允沟眯蛄心軌蜻M入植物細胞的內(nèi)部的方式將多核苷酸或多肽給予植物。本發(fā)明的方法不取決于將序列引入植物中的具體方法，只要多核苷酸或多肽可進入植物的至少一個細胞的內(nèi)部即可。將多核苷酸或多肽引入植物中的方法是本領(lǐng)域已知的，包括但不限于穩(wěn)定轉(zhuǎn)化方法、瞬時轉(zhuǎn)化方法和病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化方法。“穩(wěn)定轉(zhuǎn)化”旨在意指被引入到植物中的核苷酸構(gòu)建體整合到了植物的基因組中，并能夠被其后代遺傳?！八矔r轉(zhuǎn)化”旨在意指多核苷酸被引入到植物中但沒有整合到植物的基因組中，或者多肽被引入到植物中。轉(zhuǎn)化規(guī)程以及將多肽或多核苷酸序列引入到植物中的規(guī)程，可根據(jù)要進行轉(zhuǎn)化的植物或植物細胞的類型(即單子葉植物或雙子葉植物)而異。將多肽和多核苷酸引入到植物細胞中的合適方法包括微注射(Crossway等人，(1986)Biotechniques4:320-334)、電穿孑L(Riggs等人，(1986)Proc.Natl.Acad.Sci.USA83:5602-5606)、農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化(第5，563，055號美國專利和第5，981，840號美國專利)、直接基因轉(zhuǎn)移(Paszkowski等人，(1984)EMBOJ.3:2717-2722)和彈道粒子加速(ballisticparticleacceleration)(參見例如第4，945，050號美國專利；第5，879，918號美國專利；第5，886，244號美國專利和第5，932，782號美國專利；Tomes等人，(1995)PlantCell,Tissue,andOrganCultureFundamentalMethods,Gamborg禾口Phillips(編輯)(Springer-Verlag,Berlin)；McCabe等人，(1988)Biotechnology6:923-926)和Lecl轉(zhuǎn)化(WO00/28058)。另參見Weissinger等人，(1988)Ann.Rev.Genet.22:421-477；Sanfordφ人，(1987)ParticulateScienceandTechnology5:27-37(洋蔥)；Christou等人，(1988)PlantPhysiol.87:671-674(大豆)；McCabe等人，(1988)Bio/Technology6:923-926(大豆)；Finer和McMullen,(1991)InVitroCellDev.Biol.27P175-182(大豆)；Singh等人，(1998)Theor.Appl.Genet.96:319-324(大豆)；Datta等人，(1990)Biotechnology8:736-740(水稻)；Klein等人，(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:4305-4309(玉蜀黍)；Klein等人，(1988)Biotechnology6:559-563(玉蜀黍)；第5，240，855號；第5，322，783號和第5，324，646號美國專利；Klein等人，(1988)PlantPhysiol.91:440-444(玉蜀黍)；Fromm等人，(1990)Biotechnology8:833-839(玉蜀黍)；Hooykaas-VanSlogteren等人，(1984)Nature(倫敦)311:763-764；第5，736，369號美國專利(谷類植物)；Bytebier等人，(1987)Proc.Natl.Acad.Sci.USA84:5345-5349(百合科)；DeWet等人，(1985)TheExperimentalManipulationofOvuleTissues,Chapman等人(編輯)，(Longman,NewYork),第197-209頁(花粉)；Ka印pier等人，(1990)PlantCellImports9:415-418和Ka印pier等人，(1992)Theor.Appl.Genet.84:560-566(晶須介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化)；D‘Halluin等人，(1992)PlantCell41495-1505(電穿孔)；Li等人，(1993)PlantCellReports12:250-255以及Christou和Ford，(1995)AnnalsofBotany75:407-413(水稻)；Osjoda等人，(1996)NatureBiotechnology14:745-750(玉蜀黍通過根瘤農(nóng)桿菌)，所有這些文獻都以引用方式并入本文。在具體的實施方案中，AP2轉(zhuǎn)錄因子序列或其變體和片段可用多種瞬時轉(zhuǎn)化方法來提供給植物。這種瞬時轉(zhuǎn)化方法包括但不限于將AP2轉(zhuǎn)錄因子蛋白或其變體和片段直接引入到植物中，或者將AP2轉(zhuǎn)錄因子轉(zhuǎn)錄物引入到植物中。這類方法包括例如微注射或粒子轟擊。參見例如Crossway等人，(1986)MolGen.Genet.202:179-185;Nomura等人，(1986)PlantSci.44:53-58；Hepler等人，(1994)Proc.Natl.Acad.Sci.91:2176-2180和Hush等人，(1994)TheJournalofCellScience107:775_784，所有這些文獻都以引用方式并入本文。或者，可使用本領(lǐng)域已知的技術(shù)將AP2轉(zhuǎn)錄因子多核苷酸瞬時轉(zhuǎn)化到植物中。這類技術(shù)包括病毒載體系統(tǒng)以及將多核苷酸以避免該DNA隨后釋放的方式進行的沉淀。因此，從粒子結(jié)合的DNA可發(fā)生轉(zhuǎn)錄，但它釋放出來而整合到基因組中的頻率則大大降低。這類方法包括使用包被有聚乙胺的粒子(PEI；Sigma#P3143)0在其他實施方案中，可通過使植物與病毒或病毒核酸接觸而將本發(fā)明的多核苷酸引入到植物中。通常，這類方法涉及將本發(fā)明的核苷酸構(gòu)建體摻入在病毒DNA或RNA分子內(nèi)。應(yīng)認識到，AP2轉(zhuǎn)錄因子序列或其變體或片段可最初作為病毒多聚蛋白的一部分來合成，其以后可通過體內(nèi)或體外蛋白水解加工而產(chǎn)生所需的重組蛋白質(zhì)。此外，應(yīng)認識到，本發(fā)明的啟動子還涵蓋用于通過病毒RNA聚合酶進行的轉(zhuǎn)錄的啟動子。涉及病毒DNA或RNA分子的將多核苷酸引入到植物中并表達其中所編碼的蛋白質(zhì)的方法，是本領(lǐng)域已知的。參見例如第5，889，191號、第5，889，190號、第5，866，785號、第5，589，367號、第5，316，931號美國專利和Porta等人，(1996)MolecularBiotechnology5:209_221，它們以引用方式并入本文。用于將多核苷酸定向插入在植物基因組中的特定位置的方法是本領(lǐng)域已知的。在一個實施方案中，將多核苷酸插入所需的基因組位置是用位點特異性重組系統(tǒng)來實現(xiàn)的。參見(例如)W099/25821、W099/25邪4、W099/25840、W099/25855和W099/25853，將這些文獻都以引用方式并入本文。簡單而言，可將本發(fā)明的多核苷酸包含在轉(zhuǎn)移盒中，該轉(zhuǎn)移盒旁側(cè)帶有兩個非重組產(chǎn)生的(non-recombinogenic)重組位點。將轉(zhuǎn)移盒引入到在其基因組中穩(wěn)定摻入了這樣的靶標(biāo)位點的植物中，該靶標(biāo)位點兩側(cè)帶有兩個對應(yīng)于該轉(zhuǎn)移盒的所述位點的非重組工程的重組位點。提供適當(dāng)?shù)闹亟M酶，將該轉(zhuǎn)移盒整合在該靶標(biāo)位點處。所關(guān)注的多核苷酸因此整合在植物基因組中的特定染色體位置?？筛鶕?jù)常規(guī)方式將已轉(zhuǎn)化的細胞培育成植株。參見例如McCormick等人，(1986)PlantCellReports5:81-84。這些可栽培這些植株，并用同一轉(zhuǎn)化株或不同的株系進行授粉，并鑒定出具有所需表型特征的組成型表達的所得子代。可培養(yǎng)兩代或更多代以確保所需表型特性的表達得到穩(wěn)定保持和遺傳，然后收獲種子以確保所需表型特征的表達已得到實現(xiàn)。以此方式，本發(fā)明提供在其基因組中穩(wěn)定摻入了本發(fā)明的多核苷酸(例如本發(fā)明的表達盒)的轉(zhuǎn)化種子(也稱為“轉(zhuǎn)基因種子”)。III.使用方法19A.i謂種帥一#AP2■附麻丨雕雜船方法在本發(fā)明方法的語境中，“經(jīng)調(diào)節(jié)的多肽水平”或“調(diào)節(jié)多肽的水平”是指基因產(chǎn)物的表達、濃度或活性的任何提高或降低，包括表達、濃度或活性的任何相對增加。任何在轉(zhuǎn)錄或翻譯水平上調(diào)節(jié)靶標(biāo)基因產(chǎn)物的表達的方法或組合物，或者任何調(diào)節(jié)靶標(biāo)基因產(chǎn)物的活性的方法或組合物，都可用來實現(xiàn)靶基因產(chǎn)物的經(jīng)調(diào)節(jié)的表達、濃度、活性。一般而言，相對于適當(dāng)?shù)膶φ罩参铩⒅参锊糠只蚣毎?，該水平提高或降低達至少1%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或更高。本發(fā)明的調(diào)節(jié)可在植物生長過程中發(fā)生，和/或可在植物生長至所需的發(fā)育階段后發(fā)生。在具體的實施方案中，本發(fā)明的多肽在單子葉植物特別是谷物植物(如水稻、小麥、玉蜀黍等)中得到調(diào)節(jié)。具有AP2轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)域的多肽或其生物活性變體或片段的表達水平可直接測量，例如通過測定AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽在植物中的水平來直接測量，或者可間接測量，例如通過測量編碼該蛋白質(zhì)的多核苷酸的水平或者通過測量該AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽在植物中的活性來間接測量。測定AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽的活性的方法在本文別處描述。在具體的實施方案中，將本發(fā)明的多肽或多核苷酸引入到植物細胞中。隨后，用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法選出具有引入的本發(fā)明序列的植物細胞，所述方法如但不限于DNA印跡分析、DNA序列測定、PCR分析或表型分析。將經(jīng)前述實施方案改變或修飾的植物或植物部分在形成植物的條件下培育一段時間，該時間足以調(diào)節(jié)本發(fā)明多肽在該植物中的濃度和/或活性。形成植物的條件是本領(lǐng)域公知的，在本文別處有簡要介紹。還應(yīng)認識到，可通過采用不能夠在轉(zhuǎn)化的植物中引導(dǎo)蛋白質(zhì)或RNA的表達的多核苷酸，來調(diào)節(jié)所述多肽的水平和/或活性。例如，本發(fā)明的多核苷酸可用來設(shè)計可在用于改變或突變生物體中的基因組核苷酸序列的方法中應(yīng)用的多核苷酸構(gòu)建體。這類多核苷酸構(gòu)建體包括但不限于RNADNA載體、RNADNA突變載體、RNADNA修復(fù)載體、混合雙鏈體寡核苷酸、自身互補RNA=DNA寡核苷酸和重組工程寡核苷酸。這類核苷酸構(gòu)建體和使用方法是本領(lǐng)域已知的。參見第5，565，350號美國專利；第5，731，181號美國專利；第5，756，325號美國專利；第5，760，012號美國專利；第5，795，972號美國專利和第5，871，984號美國專利，所有這些專利都以引用方式并入本文。另參見WO98/49350、WO99/07865、WO99/25821和Beetham等人，(1999)Proc.Natl.Acad.Sci.USA96:8774_8778，它們以引用方式并入本文。因此應(yīng)認識到，本發(fā)明的方法并不依賴于將整個多核苷酸摻入到基因組中，只要將多核苷酸引入到細胞中而使植物或其細胞被改變即可。在本發(fā)明的一個實施方案中，基因組可在將多核苷酸引入到細胞中之后被改變。例如，可將多核苷酸或其任何部分摻入到植物的基因組中。本發(fā)明的基因組的變更包括但不限于基因組中核苷酸的添加、缺失和置換。雖然本發(fā)明的方法并不依賴于任何具體數(shù)目的核苷酸的添加、缺失和置換，但應(yīng)認識到這種添加、缺失或置換包含至少一個核苷酸。在一個實施方案中，AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽的活性和/或水平得到增加?？赏ㄟ^將AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽或其生物活性變體或片段提供給植物，來實現(xiàn)AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽的水平和/或活性的增加。如本文別處所討論，有許多用來將多肽提供給植物的方法是本領(lǐng)域已知的，包括但不限于將AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽直接引入到植物中，或者將編碼具有AP2轉(zhuǎn)錄因子活性的多肽的多核苷酸構(gòu)建體引入到植物中(瞬時引入或穩(wěn)定引入)。還應(yīng)認識到，本發(fā)明的方法可采用不能夠在轉(zhuǎn)化的植物中引導(dǎo)蛋白質(zhì)或RNA的表達的多核苷酸。因而，AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽的水平和/或活性可通過改變編碼AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽的基因或其啟動子來增加。參見例如Kmiec，第5，565，350號美國專利；Zarling等人，PCT/US93/03868。因而，提供了攜帶AP2轉(zhuǎn)錄因子基因突變的經(jīng)誘變處理的植物，其中所述突變可增加AP2轉(zhuǎn)錄因子基因的表達或可增加所編碼的AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽的活性。在其他實施方案中，通過將能抑制多肽的水平或活性的多核苷酸引入到植物中，來降低或消除本發(fā)明的AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽的活性和/或水平。該多核苷酸可通過防止AP2轉(zhuǎn)錄因子信使RNA的翻譯來直接抑制AP2轉(zhuǎn)錄因子的表達，或通過編碼可抑制編碼AP2轉(zhuǎn)錄因子蛋白的AP2轉(zhuǎn)錄因子基因的轉(zhuǎn)錄或翻譯的多肽來間接抑制AP2轉(zhuǎn)錄因子的表達。用于抑制或消除基因在植物中的表達的方法是本領(lǐng)域公知的，任何這種方法都可用于本發(fā)明以抑制至少一種AP2轉(zhuǎn)錄因子序列在植物中的表達。在本發(fā)明的其他實施方案中，通過用編碼能抑制AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽的活性的多肽的序列轉(zhuǎn)化植物細胞，來降低或消除AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽的活性。在其它實施例中，AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽的活性可通過破壞編碼AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽的基因來降低或消除。本發(fā)明涵蓋攜帶AP2轉(zhuǎn)錄因子基因突變的經(jīng)誘變處理的植物，其中所述突變可降低AP2轉(zhuǎn)錄因子基因的表達或抑制所編碼的AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽的AP2轉(zhuǎn)錄因子活性。對于植物中遺傳工程的幾個方面而言，降低特定基因的活性(也稱為基因沉默或基因抑制)是合乎需要的。許多用于基因沉默的技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，包括但不限于反義技術(shù)(參見例如Sheehy等人，(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:8805-8809和第5，107，065號；第5，453，566號和第5，759，8號美國專利)；共抑制(例如Taylor,(1997)PlantCell9:1245；Jorgensen,(1990)TrendsBiotech.8(12):340-344;Flavell,(1994)Proc.Natl.Acad.Sci.USA91:3490-3496；Finnegan等人，(1994)Bio/Technology12:883-888；和Neuhuber等人，(1994)Mol.Gen.Genet.244:230-241)；RNA干擾(Napoli等人，(1990)PlantCell2:279-289；第5，034，323號美國專利；Sharp,(1999)GenesDev.13:139-141；Zamore等人，(2000)Cell101:25-33和Montgomery等人，(1998)Proc.Natl.Acad.Sci.USA95:15502-15507)；病毒誘導(dǎo)的基因沉默(Burton等人，(2000)PlantCell12:691-705；和Baulcombe，(1999)Curr.Op.PlantBio.2:109-113)；靴標(biāo)RNA特異性核酶(Haseloff等人，(1988)Nature334:585-591)；發(fā)夾結(jié)構(gòu)(Smith等人，Q000)Nature407:319-320；WO99/53050；WO02/00904；WO98/53083;Chuang和Meyerowitz,(2000)Proc.Natl.Acad.Sci.USA97:4985-4990;Stoutjesdijk等人，(2002)PlantPhysiol.129:1723-1731；Waterhouse禾口Helliwell，(2003)Nat.Rev.Genet.429-38；Pandolfini等人，BMCBiotechnology3:7；第2003/0175965號美國專利申請公開；Panstruga等人(2003)Mol.Biol.Rep.30:135-140；Wesley等人，(2001)PlantJ.27581-590；Wang和Waterhouse，(2001)Curr.Opin.PlantBiol.5:146-150；第2003/0180945號美國專利申請公開；和WO02/00904，將所有這些文獻和專利都以引用方式并入本文)；核酶(Steinecke等人(1992)EMBOJ.11:1525；和Perriman等人，(1993)AntisenseRes.Dev.3253)；寡核苷酸介導(dǎo)的定向修飾(例如WO03/076574和WO99/25853)；鋅指靶向分子(例如WO01/52620；WO03/048345和WO00/42219)；轉(zhuǎn)座子標(biāo)簽法(Maes等人，(1999)TrendsPlantSci.4:90-96；Dharmapuri禾口Sonti，(1999)FEMSMicrobiol.Lett.17953-59；Meissner等人，(2000)PlantJ.22:265-274；Phogat等人，(2000)J.Biosci.2557-63；Walbot,(2000)Curr.Opin.PlantBiol.2:103-107；Gai等人，(2000)NucleicAcidsRes.28:94-96；Fitzmaurice等人，(1999)Genetics153:1919-1928；Bensen等人，(1995)PlantCell7:75-84;Mena等人，(1996)Science274:1537-1540以及第5，962，764號美國專利)(這些文獻和專利的每一個都以引用方式并入本文)，以及本領(lǐng)域技術(shù)人員知道的其他方法或者上述方法的組合。應(yīng)認識到，用本發(fā)明的多核苷酸，可構(gòu)建出與AP2轉(zhuǎn)錄因子序列的信使RNA(mRNA)的至少一部分互補的反義構(gòu)建體。構(gòu)建反義核苷酸以與相應(yīng)的mRNA雜交?？蓪Ψ戳x序列作出修飾，只要序列能雜交相應(yīng)的mRNA并干擾其表達。以此方式，可使用與相應(yīng)的被反義處理的(antisensed)序列具有70%、優(yōu)選80%、更優(yōu)選85%序列同一性的反義構(gòu)建體。此外，反義核苷酸的部分可用來破壞靶基因的表達。一般來講，可使用至少50個核苷酸、100個核苷酸、200個核苷酸、300、400、450、500、550或更多個核苷酸的序列。本發(fā)明的多核苷酸還以以有義取向使用以抑制植物中內(nèi)源基因的表達。用多核苷酸以有義取向抑制植物中的基因表達的方法是本領(lǐng)域已知的。所述方法通常涉及用包含這樣的啟動子的DNA構(gòu)建體轉(zhuǎn)化植物，該啟動子有效連接至對應(yīng)于該內(nèi)源基因的轉(zhuǎn)錄物的多核苷酸的至少一部分，能驅(qū)動植物中的表達。通常，這種核苷酸序列與內(nèi)源基因的轉(zhuǎn)錄物的序列具有相當(dāng)大的序列同一性，優(yōu)選的是高于約65%的序列同一性，更優(yōu)選的是高于約85%的序列同一性，最優(yōu)選的是高于約95%的序列同一性。參見第5，283,184號和第5，034，323號美國專利，將它們以引用的方式并入本文。因此，有許多方法可用來降低或消除AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽或其生物活性變體或片段的活性。另外，可采用各種方法的組合來降低或消除至少一種AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽的活性。還應(yīng)認識到，可調(diào)節(jié)單種AP2轉(zhuǎn)錄因子序列的水平以產(chǎn)生所需的表型?；蛘?，可能理想的是調(diào)節(jié)(提高和/或降低)多種具有AP2轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)域或其生物活性變體或片段的序列的表達水平。如上所討論，有多種啟動子可用來調(diào)節(jié)AP2轉(zhuǎn)錄因子序列的水平。在一個實施方案中，可通過組織偏好的啟動子，特別是葉子偏好的啟動子(即葉肉偏好的啟動子或維管束鞘偏好的啟動子)和/或種子偏好的啟動子(即胚乳偏好的啟動子或胚偏好的啟動子)，來調(diào)控可調(diào)節(jié)至少一種AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽的水平的異源多核苷酸的表達。B.i周節(jié)勿Φ的花器官發(fā)育禾Π產(chǎn)量的方法通過遺傳和生理學(xué)分析，生長素流量牽涉于花器官的模式、起始和生長。ETTIN/ARF3轉(zhuǎn)錄因子響應(yīng)生長素而影響擬南芥屬花中的花被器官數(shù)目和生殖器官分化(Pfluger和Zambryski，(2004)Development131:4697-4707)。本發(fā)明的AP2轉(zhuǎn)錄因子核酸分子編碼可轉(zhuǎn)錄共阻遏AGAM0US花器官決定基因(floralorganidentitygene)的蛋白質(zhì)。另外，AP2轉(zhuǎn)錄因子可在生長素調(diào)控的生長和發(fā)育中起作用。AP2轉(zhuǎn)錄因子具有多效表型(pleiotropicphenotype)，其包括諸如頂端優(yōu)勢、側(cè)根起始、對外來生長素的敏感性和DR5生長素響應(yīng)報告基因的激活之類的幾種經(jīng)典生長素響應(yīng)的減少。因此，提供了方法和組合物來調(diào)節(jié)AP2轉(zhuǎn)錄因子和AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽并從而調(diào)節(jié)了植物中的花器官發(fā)育、根起始和產(chǎn)量。在一個實施方案中，本發(fā)明的組合物可用來提高谷類植物中的谷粒產(chǎn)量。在這個實施方案中，將AP2轉(zhuǎn)錄因子編碼序列在所關(guān)注的谷類植物中表達以增加AP2轉(zhuǎn)錄因子轉(zhuǎn)錄因子的表達。以此方式，所述方法和組合物可用于提高植物中的產(chǎn)量。本文所用的術(shù)語“改進的產(chǎn)量”是指任何所測量的植物產(chǎn)物的產(chǎn)量的任何改進。產(chǎn)量的改進可包含所測量的植物產(chǎn)物的0.1%,0.5%U%>3%,5%,10%,15%,20%,30%,40%,50%,60%,70%,80%,90%或更大的提高?；蛘?，提高的植物產(chǎn)量可包含所測量的植物產(chǎn)物的約0.5倍、1倍、2倍、4倍、8倍、16倍或32倍的提高。例如，相比于在相同條件下栽培的未經(jīng)處理的大豆或玉米的蒲式耳/英畝產(chǎn)量，衍自具有本發(fā)明的處理的作物的大豆或玉米的蒲式耳/英畝產(chǎn)量的提高，將被認為是改進的產(chǎn)量。所謂提高的產(chǎn)量還意指種子總數(shù)的提高、種子總重量的提高、根生物量的提高和收獲指數(shù)的提高中的至少一者。收獲指數(shù)定義為收獲時產(chǎn)出生物量與總累積生物量之比。因此，提供了各種提高植物的產(chǎn)量的方法。在一個實施方案中，提高植物或植物部分的產(chǎn)量包括將異源多核苷酸引入到植物或植物部分中，并在該植物或植物部分中表達該異源多核苷酸。在該方法中，該異源多核苷酸的表達可調(diào)節(jié)至少一種AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽在植物或植物部分中的水平，其中AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽包含具有SEQIDNO:5(AP2轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)域)或SEQIDN0:6(多聚甘氨酸)或SEQIDNO:7-11(多聚絲氨酸結(jié)構(gòu)域)所示的氨基酸序列或所述結(jié)構(gòu)域的變體或片段的AP2轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)域(或二者)。在具體的實施方案中，對AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽的水平的調(diào)節(jié)包括至少一種AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽的水平的提高。在這類方法中，引入到植物中的異源多核苷酸編碼具有AP2轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)域或其生物活性變體或片段的多肽。在具體的實施方案中，異源多核苷酸包含至少一個SEQIDNO:1所示的序列和/或其生物活性變體或片段。在其它實施例中，調(diào)節(jié)至少一種AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽的水平包括至少一種AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽的水平的降低。在這類方法中，引入植物中的異源多核苷酸不必編碼功能性AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽，而是該多核苷酸的表達導(dǎo)致包含AP2轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)域或AP2轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)域的生物活性變體或片段的AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽的表達降低。在具體的實施例中，具有降低的水平的AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽在SEQIDNO:2或SEQIDNO:4或其生物活性變體或片段中的至少一者中示出。以下實施例以說明性方式而不是以限制性方式提供。麵實施例1:AP2轉(zhuǎn)錄因子基因的克隆通過篩選一組激活標(biāo)簽擬南芥屬植物的具有改變的產(chǎn)量組分的表型變體，鑒別了編碼來自擬南芥屬的AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽的cDNA。使用針對激活標(biāo)簽設(shè)計的引物通過反向PCR(iPCR)克隆AP2基因。通過用RT-PCR定量AP2mRNA來驗證AP2的激活。通過如下方式確認AP2異位/過表達的表型將AP2基因的基因組形式(含內(nèi)含子)和cDNA形式克隆進具有組成型啟動子(SCPPRO)和擬南芥屬泛素10啟動子(AT-UBQlO)的轉(zhuǎn)基因盒中并轉(zhuǎn)化野生型擬南芥屬(哥倫比亞生態(tài)型)。過表達處于組成型SCPl啟動子或組成型AT-UBQ10啟動子的控制下的AT-AP2基因的轉(zhuǎn)基因擬南芥屬具有較大數(shù)目的長角果(莢果)和分枝(圖7和8)。實施例2載體構(gòu)建使用設(shè)計用于引入RcaI和SfuI位點來方便克隆的引物從cDNA或基因組DNA擴增全長擬南芥屬AP2基因。對PCR擴增產(chǎn)物進行測序并引入含有SCP啟動子和PINII終止子的植物表達載體中。隨后利用Gateway多位點克隆(Invitrogen)將該入門載體克隆進植物轉(zhuǎn)化載體中，通過電穿孔引入根瘤農(nóng)桿菌(Agrobacteriumtumafaciens)中并通過Clough和Bent的花序浸漬法(floraldipmethod)(Clough和Bent，(1998)Floraldipasimplifiedmethodforagrobacterium-mediatedtransformationofarabidopsisthaiiana，PlantJournal16(6):735-743)轉(zhuǎn)化進擬南芥屬中。通過用使用BlastX算法以及擬南芥屬AP2序列作為模板篩選DuPontEST文庫來分離全長大豆AP2基因。使用引入NcoI和SfuI限制性內(nèi)切酶位點以方便克隆的引物，從該EST擴增全長大豆AP2。將全長大豆AP2克隆進處于SCPl和AT-UBQlO啟動子的控制下的載體用于在大豆中組成型表達。實施例3水稻轉(zhuǎn)化方法將使用包被有核酸構(gòu)建體的金屬粒子的高速彈道轟擊用于轉(zhuǎn)化野生型水稻(Klein等人(1987)Nature327:70-73；第4，945，050號美國專利，將這些文獻以引用的方式并入本文)。將BiolisticPDS-1000/He(BioRADLaboratories,Hercules,CA)用于這些互補實驗。將粒子轟擊技術(shù)用于用pG0S2::ZM-AP2轉(zhuǎn)錄因子轉(zhuǎn)化野生型水稻。將來自吸水鏈霉菌(Sti^ptomyceshygroscopicus)的細菌潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶(HptII)基因(其能賦予對抗生素的抗性)用作水稻轉(zhuǎn)化的選擇性標(biāo)志物。在載體pML18中，HptII基因經(jīng)工程改造而具有來自花椰菜花葉病毒的35S啟動子和來自根瘤農(nóng)桿菌的章魚氨酸合酶基因的終止信號和聚腺苷酸化信號。PML18在WO97/47731中有描述，將該專利的公開內(nèi)容以引用方式并入本文。源自萌發(fā)的水稻種子的盾片的胚性愈傷組織培養(yǎng)物用作轉(zhuǎn)化實驗的原始材料。該材料是通過使無菌水稻種子在愈傷組織引發(fā)培養(yǎng)基(MS鹽、Nitsch和Nitsch維生素、1.0mg/l2，4-D和10μMAgNO3)中于暗處27_28°C下萌發(fā)來產(chǎn)生的。然后將從胚的盾片增殖的胚性愈傷組織轉(zhuǎn)移至CM培養(yǎng)基(N6鹽、Nitsch和Nitsch維生素、lmg/12，4_D；Chu等人，(1985)Sci.Sinica18:659-668)。將愈傷組織培養(yǎng)物通過以兩周時間間隔進行常規(guī)分培維持在CM上，并在引發(fā)的10周內(nèi)用于轉(zhuǎn)化。愈傷組織是通過分培0.5-1.Omm的塊來進行制備以供轉(zhuǎn)化的，這些塊相隔大約1mm，布置在Whatman#541紙圓圈中央中的約4cm直徑的圓形區(qū)域中，該紙放置在CM培養(yǎng)基上。將具有愈傷組織的板在暗處于27-28°C下溫育3-5天。在轟擊之前，將具有愈傷組織的過濾器轉(zhuǎn)移到補加有0.25M甘露醇和0.25M山梨醇的CM，置于暗處3小時。然后在無菌罩中將平皿蓋保持微開20-45分鐘，以讓組織上的水分散發(fā)。將每個DNA片段與含有用于水稻轉(zhuǎn)化的選擇性標(biāo)志物的pML18—起共沉淀到金粒子的表面上。為實現(xiàn)這一點，將總共10μg的DNA以性狀DNA選擇性標(biāo)志物DNA為21的比例加至已經(jīng)以60mgπιΓ1的濃度重懸的50μ1金粒子等分試樣。然后將氯化鈣(50μ12.5Μ溶液)和亞精胺QOμ10.IM溶液)加至該金-DNA懸浮液，同時將管漩渦混合3分鐘。將金粒子在微量離心機中離心1秒鐘，除去上清液。然后將金粒子用Iml無水乙醇洗滌兩次，重懸于50μ1無水乙醇中并超聲處理(浴超聲器)1秒鐘以使金粒子分散。將金懸浮液在_70°C下溫育五分鐘，進行超聲處理(浴超聲器)以使粒子分散。然后將6μ1的包24被DNA的金粒子裝載到聚酯薄膜巨載體碟(mylarmacrocarrierdisk)上，讓乙醇蒸發(fā)。在干燥時間結(jié)束時，將裝有組織的平皿置于PDS-1000/He的腔室中。然后將腔室中的空氣抽真空成觀-四英寸Hg。使用可破裂膜(rupturemembrane)以氦沖擊波將該巨載體進行加速，該膜在沖擊管中的氦壓力達到1080-1100psi時破裂。將組織放置在離停止網(wǎng)(stoppingscreen)大約8cm處，將愈傷組織轟擊兩次。用包被DNA的金粒子以此方式轟擊兩個至四個板的組織。在轟擊之后，將愈傷組織轉(zhuǎn)移到?jīng)]有補加山梨醇或甘露醇的CM培養(yǎng)基。在轟擊后3至5天，將愈傷組織轉(zhuǎn)移到SM培養(yǎng)基(含有50mg/l潮霉素的CM培養(yǎng)基)。為實現(xiàn)這一點，將愈傷組織從各板轉(zhuǎn)移到無菌的50ml錐形管并稱重。加入40°C熔化的頂層瓊脂，采用2.5ml頂層瓊脂/IOOmg愈傷組織。將愈傷組織團塊通過反復(fù)分配通過IOml移液管來破碎成小于2mM直徑的碎塊。將3ml的愈傷組織懸浮液等分試樣接種到新鮮SM培養(yǎng)基上，將各板在暗處于2748°C下溫育4周。4周后，鑒定轉(zhuǎn)基因愈傷組織事件，轉(zhuǎn)移到新鮮的SM板，在暗處于27-28°C下再生長2周。將生長的愈傷組織轉(zhuǎn)移到RMl培養(yǎng)基(MS鹽、Nitsch和Nitsch維生素、2%蔗糖、3%山梨醇、0.4%gelrite+50ppm潮霉素B)在暗處于25°C下放2周。2周后，將愈傷組織轉(zhuǎn)移到冊2培養(yǎng)基(MS鹽、Nitsch和Nitsch維生素、3%蔗糖、0.4%gelrite+50ppm潮霉素B)，并放置于冷白色燈(約40μEnT2s-1)下，12小時光周期，溫度25°C，濕度30-40%。在光中2-4周后，愈傷組織開始器官化并形成芽。將芽從周圍的愈傷組織/培養(yǎng)基中取出，輕輕轉(zhuǎn)移到phytatrays(SigmaChemicalCo.，St.Louis,MO)中的RM3培養(yǎng)基(1/2XMS鹽、Nitsch和Nitsch維生素、蔗糖+50ppm潮霉素B)，用前一步驟中所述的相同條件繼續(xù)進行溫育。在2-3周后當(dāng)出現(xiàn)充分的根和芽生長時，將所得的TO轉(zhuǎn)化體從RM3轉(zhuǎn)移至裝有Metromix350的4英寸盆。實施例4:AP2轉(zhuǎn)錄因子在大豆中的表達使用基因槍法將處于組成型植物啟動子(AT-UBQ10和SCPPRO)的控制下的植物轉(zhuǎn)化載體中的擬南芥屬AP2基因和大豆AP2基因轉(zhuǎn)化進大豆中。擬南芥屬AP2基因或大豆AP2基因在大豆中的過表達預(yù)計會增加花或莢果數(shù)目、分枝數(shù)目或增加大豆花或莢果的保持率。這些組分中的一種或多種的增加預(yù)計會增加大豆的產(chǎn)量。實施例5:AP2轉(zhuǎn)錄因子序列在玉蜀黍中的過表達將來自溫室供體植物的未成熟玉蜀黍胚用含有在UBI啟動子控制下的AP2轉(zhuǎn)錄因子序列(如Zm-AP2轉(zhuǎn)錄因子/SEQIDNO1)和選擇性標(biāo)志物基因PAT(Wohlleben等人(1988)Gene70:25-37)的質(zhì)粒轟擊，該選擇性標(biāo)志物基因能賦予對除草劑雙丙氨膦的抗性。或者，該選擇性標(biāo)志物基因在單獨的質(zhì)粒上提供。如下進行轉(zhuǎn)化。培養(yǎng)基配方見下文。靶標(biāo)組織的制備將穗去殼并在30%Clorox漂白劑加0.5%Micro去污劑中表面滅菌20分鐘，然后用無菌水清洗兩次。將未成熟胚切下，并以胚軸一側(cè)朝下(盾片一側(cè)朝上)放置，每板25個胚，在560Y培養(yǎng)基上放置4小時，然后在2.5cm靶區(qū)內(nèi)排成一行準(zhǔn)備進行轟擊。制備出包含有效連接至泛素啟動子的AP2轉(zhuǎn)錄因子序列的質(zhì)粒載體。用如下的CaCl2沉淀程序，將該質(zhì)粒DNA加上含有PAT選擇性標(biāo)志物的質(zhì)粒DNA沉淀到1.1μm(平均直徑)鎢沉淀小球上100μ1制備的鎢粒子于水中；10μI(Pg)DNA于1TrisEDTA緩沖液(Iyg總DNA)中；100μ12.5ΜCaCl2禾口10μ10.IM亞精胺。將每種試劑依序加到鎢粒子懸浮液，同時保持在復(fù)式管渦旋機上。將最終的混合物進行短暫超聲處理，讓其在恒定漩渦混合下溫育10分鐘。在沉淀期后，將各管進行短暫離心，除去液體，用500ml100%乙醇洗滌，離心30秒。再次除去液體，將105μ1100%乙醇添加至最終的鎢粒子沉淀小球。對于粒子槍轟擊，將鎢/DNA粒子進行短暫超聲處理，并取10μ1點滴到每個巨載體的中央上，讓其干燥約2分鐘后進行轟擊。將樣品板在粒子槍中以水平#4進行轟擊(第5，Μ0，855號美國專利)。所有樣品接受650PSI的單次射擊，每管的制備粒子/DNA共取十個等分試樣。在轟擊之后，將胚保持在560Υ培養(yǎng)基上2天，然后轉(zhuǎn)移到含有3mg/L雙丙氨膦的560R選擇培養(yǎng)基，每隔2星期進行分培。在進行大約10周的選擇后，將抗選擇的愈傷組織克隆轉(zhuǎn)移到^SJ培養(yǎng)基以引發(fā)植物再生。在體細胞胚成熟后周)，將發(fā)育良好的體細胞胚轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)基中進行發(fā)芽并轉(zhuǎn)移到有光照的培養(yǎng)室。大約7-10天后，將發(fā)育的小植株轉(zhuǎn)移到管中的272V無激素培養(yǎng)基7-10天，直到小植株完全長好。然后將植株轉(zhuǎn)移到含有盆栽土的insertsinflats(相當(dāng)于2.5英寸盆)，在生長室中生長1星期，隨后在溫室中再生長1-2周，然后轉(zhuǎn)移到典型的600個盆(1.6加侖)并生長至成熟。監(jiān)測植株，對氮利用效率的提高、產(chǎn)量的提高或脅迫耐受性的提高進行評分。轟擊培養(yǎng)基(560Y)包含4.Og/1N6基礎(chǔ)鹽(SIGMAC-1416)、1.Oml/1Eriksson維生素混合物(1000XSIGMA-1511)、0.5mg/l鹽酸硫胺、120.Og/1蔗糖、1.0mg/l2，4_D和2.88g/lL-脯氨酸(用KOH調(diào)至pH5.8后用去離子水定容)；2.Og/1Gelrite(在用去離子水定容后加入)和8.5mg/l硝酸銀(在將培養(yǎng)基滅菌并冷卻到室溫后加入)。選擇培養(yǎng)基(560R)包含4.Og/1N6基礎(chǔ)鹽(SIGMAC-1416)U.Oml/1Eriksson維生素混合物(1000XSIGMA-1511)、0·5mg/l鹽酸硫胺、30.0g/l蔗糖和2.0mg/l2，4_D(用KOH調(diào)至pH5.8后用去離子水定容)；3.0g/lGelrite(在用去離子水定容后加入)以及0.85mg/l硝酸銀和3.0mg/l雙丙氨膦(兩者均在將培養(yǎng)基滅菌并冷卻到室溫后加入)。植物再生培養(yǎng)基(288J)包含4.3g/lMS鹽(GIBC011117-074)、5.0ml/lMS維生素母液(O.IOOg煙酸、0.02g/l鹽酸硫胺、0.10g/l鹽酸吡哆辛和0.40g/l甘氨酸，用精煉去離子水定容)(Murashige和Skoog，(1962)Physiol.Plant.15:473)、100mg/l肌醇、0.5mg/l玉米素、60g/l蔗糖和1.0ml/l的0.ImM脫落酸(在調(diào)至pH5.6后用精煉去離子水定容)；3.0g/lGelrite(在用去離子水定容后加入)以及1.0mg/l吲哚乙酸和3.0mg/l雙丙氨膦(在將培養(yǎng)基滅菌并冷卻到60°C后加入)。無激素培養(yǎng)基072V)包含4.3g/lMS鹽(GIBC011117-074)、5.0ml/lMS維生素母液(0.100g/l煙酸、0.02g/l鹽酸硫胺、0.10g/l鹽酸吡哆辛和0.40g/l甘氨酸，用精煉去離子水定容)、0.lg/Ι肌醇和40.Og/Ι蔗糖(在調(diào)至PH5.6后用精煉去離子水定容)和6g/lbacto瓊脂(在用精煉去離子水定容后加入)，滅菌并冷卻至60°C。實施例6農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化對于用AP2轉(zhuǎn)錄因子多核苷酸對玉蜀黍進行農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化，采用了^ia0的方法(第5，981，840號美國專利和PCT專利公布W098/323^；將它們的內(nèi)容以引用方式并入本文)。簡單而言，從玉蜀黍分離出未成熟胚并使胚接觸農(nóng)桿菌的懸浮液，其中該細菌能夠?qū)P2轉(zhuǎn)錄因子多核苷酸轉(zhuǎn)移至該未成熟胚中的至少一者的至少一個細胞(步驟1感染26步驟)。在這個步驟中，將未成熟胚浸入農(nóng)桿菌懸浮液中以引發(fā)接種。將胚與農(nóng)桿菌共培養(yǎng)一段時間(步驟2:共培養(yǎng)步驟)。在感染步驟之后，將未成熟胚在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)。在這個共培養(yǎng)期之后，設(shè)想到任選的“靜息”步驟。在這個靜息步驟中，將胚在至少一種已知能抑制農(nóng)桿菌生長的抗生素的存在下進行溫育，不添加植物轉(zhuǎn)化子的選擇劑(步驟3靜息步驟)。將未成熟胚在固體培養(yǎng)基上與抗生素一起培養(yǎng)，但不加選擇劑，這為了消除農(nóng)桿菌并為了受感染細胞的靜息期。接著，將經(jīng)接種的胚在含有選擇劑的培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，回收生長出的轉(zhuǎn)化愈傷組織(步驟4:選擇步驟)。將未成熟胚在固體培養(yǎng)基上與選擇劑一起進行培養(yǎng)，從而導(dǎo)致轉(zhuǎn)化細胞的選擇性生長。然后將愈傷組織再生成植株(步驟5:再生步驟)，并將在選擇性培養(yǎng)基上生長的愈傷組織在固體培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)以再生出植物。實施例7大豆胚轉(zhuǎn)化培養(yǎng)條件將大豆胚發(fā)生懸浮培養(yǎng)物(栽培變種Jack)在150rpmJ6°C旋轉(zhuǎn)搖蕩器上維持在35ml液體培養(yǎng)基SB196(參見下文配方)中，該旋轉(zhuǎn)搖蕩器具有冷白色熒光燈，光周期為168小時白天/黑夜，光強度為60-85μΕ/πι2Λ。每7天至兩周，通過將大約35mg的組織接種到35ml的新鮮液體SB196中，對培養(yǎng)物進行分培(優(yōu)選的分培間隔為每7天)。通過粒子槍轟擊方法(Klein等人(1987)Nature327:70)，用以下實施例中所述的質(zhì)粒和DNA片段轉(zhuǎn)化大豆胚發(fā)生懸浮培養(yǎng)物。大豆胚發(fā)牛懸浮培養(yǎng)物的引發(fā)每月兩次對大豆培養(yǎng)物進行引發(fā)，每次引發(fā)之間間隔5-7天。在種植45-55天后從可用的大豆植株挑取帶有不成熟種子的豆莢，剝殼并放入無菌絳紅色盒子中。將大豆種子在含有1滴象牙皂的5%Clorox溶液(95ml的高壓滅菌蒸餾水加5mlClorox和1滴皂)中振搖15分鐘，對它們進行滅菌。充分混合。用2個1升瓶子的無菌蒸餾水清洗種子，將小于4mm的種子各自放在單獨的顯微鏡載玻片上。切開種子的小的一端，將子葉擠出種皮。將子葉轉(zhuǎn)移到含有SBl培養(yǎng)基的板(每板25-30個子葉)。將各板用纖維帶包住，存放8周。這個時間后，切取次生胚并放入SB196液體培養(yǎng)基中7天。用于轟擊的DNA的制備將含有所關(guān)注基因和選擇性標(biāo)志物基因的完整質(zhì)?；駾NA質(zhì)粒片段用于轟擊。用于轟擊的質(zhì)粒DNA用PromegaProtocolsandApplicationsGuide(第二版第106頁)中所述的方法按常規(guī)進行制備和純化。通過凝膠分離經(jīng)雙酶切的質(zhì)粒，獲得質(zhì)粒的攜帶AP2轉(zhuǎn)錄因子多核苷酸的片段。在每種情況中，將100μg的質(zhì)粒DNA在0.5ml的適于所關(guān)注的質(zhì)粒的特異性酶混合物中進行消化。通過在1%kaPlaqueGTG瓊脂糖(BioWhitakerMolecularApplications)上進行凝膠電泳來分離所得的DNA片段，并將含有AP2轉(zhuǎn)錄因子多核苷酸的DNA片段從瓊脂糖凝膠上切下來。用GELase消化酶按生產(chǎn)商的方案從瓊脂糖純化DNA。將含有3mg金粒子(3mg金)的50μ1無菌蒸餾水等分試樣加到5μ11μg/μ1DNA溶液(如上所述制備的完整質(zhì)?；駾NA片段)、50μ12.5ΜCaCl2和20μ10.IM亞精胺。將混合物在渦旋搖蕩器的水平3上振搖3分鐘，然后在臺式微量離心機中離心10秒鐘。用400μ1100%乙醇洗滌后，通過在40μ1100%乙醇中進行超聲處理使沉淀懸浮。向BiolisticPDS1000/HE儀碟的每個飛碟(flyingdisk)分配5μ1的DNA懸浮液。每個275μ1等分試樣含有大約0.375mg金/次轟擊(即每碟)。組織制備和用DNA轟擊將大約150-200mg的7天齡胚懸浮培養(yǎng)物放在空的無菌60X15mm平皿中，用塑料網(wǎng)蓋住平皿。每板的組織轟擊1或2次，膜破裂壓力設(shè)定為1100PSI，腔室抽真空至27-28英寸汞柱。將組織放在離阻滯網(wǎng)/停止網(wǎng)大約3.5英寸處。轉(zhuǎn)化胚的詵擇用潮霉素(當(dāng)使用磷酸轉(zhuǎn)移酶HPT基因作為選擇性標(biāo)志物時)或氯磺隆(當(dāng)使用乙酰乳酸合酶ALS基因作為選擇性標(biāo)志物時)選擇轉(zhuǎn)化胚。潮霉素(HPT)詵擇在轟擊后，將組織放入新鮮的SB196培養(yǎng)基中，如上所述進行培養(yǎng)。轟擊后6天，將該SB196用含有30mg/L潮霉素選擇劑的新鮮SB196更換。每周更新選擇培養(yǎng)基。在選擇后四至六周，可觀察到綠色的轉(zhuǎn)化組織從未轉(zhuǎn)化的壞死胚發(fā)生簇中生長出來。移取分離的綠色組織，接種到多孔板中，以產(chǎn)生新的克隆繁殖的轉(zhuǎn)化胚發(fā)生懸浮培養(yǎng)物。氯磺降(ALS)詵擇在轟擊后，將組織在2個含有新鮮SB196培養(yǎng)基的燒瓶之間分配，如上所述進行培養(yǎng)。轟擊后六至七天，將該SB196用含有l(wèi)OOng/ml氯磺隆選擇劑的新鮮SB196更換。每周更新選擇培養(yǎng)基。在選擇后四至六周，可觀察到綠色的轉(zhuǎn)化組織從未轉(zhuǎn)化的壞死胚發(fā)生簇中生長出來。移取分離的綠色組織，接種到含有SB196的多孔板中，以產(chǎn)生新的克隆繁殖的轉(zhuǎn)化胚發(fā)生懸浮培養(yǎng)物。大豆體細胞胚再生成植株為了從胚發(fā)生懸浮培養(yǎng)物獲得整株植物，組織必須進行再生。胚成熟將胚在SB196中在冷白色熒光燈泡(PhillipscoolwhiteEconowattF40/CW/RS/EW)和Agro(PhillipsF40Agro)燈泡(40瓦)下于培養(yǎng)4-6周，光周期為168小時，光強度為90-120ιιΕ/πι&。這個時間后，將胚簇移取到固體瓊脂培養(yǎng)基SB166達1_2周。然后將胚簇分培到培養(yǎng)基SB103持續(xù)3周。在這個期間，可從胚簇移取各個單個胚，并篩選ΑΡ2轉(zhuǎn)錄因子表達和/或活性的水平。胚干燥和萌發(fā)將各個成熟的胚放入空的小平皿(35XIOmm)中大約4_7天，對它們進行干燥。將各板用纖維帶密封(產(chǎn)生小的濕度腔室)。將經(jīng)干燥的胚種植到SB71-4培養(yǎng)基中，讓它們在與如上所述相同的培養(yǎng)條件下萌發(fā)。從萌發(fā)培養(yǎng)基移取萌發(fā)的小植株，用水徹底清洗，然后種植在M孔托盤(packtray)中的Redi-Earth中，用透明塑料罩蓋住。2周后，將罩移開，使植物強壯一周。如果小植株看起來強壯，將它們移植到10英寸Redi-Earth盤，每盤最多3株小植株。10至16周后，收獲成熟的種子，破成碎片并分析蛋白質(zhì)。培養(yǎng)基配方SB196-FNLite液體增殖培養(yǎng)基(每升)-MSFeEDTA-1OOx母液11OmlMS硫酸鹽-1OOx母液2IOmlFNLite鹵化物-1OOx母液31OmlFNLiteP,B,Mo-1OOx母液41OmlB5維生素(lml/L)1.0ml2,4-D(1Omg/L終濃度)1.0mlKNO32.83gm(NH4)2SO40.463gm天冬酰胺l.Ogm蔗糖(1%)IOgmpH5.8FNLite母液母液編號MSFeEDTAIOOx母液Na2EDTA*FeSO4-7H20IOOOml3.724g2.784g500ml.86■392g*先加入，溶于深色瓶中，同時攪拌3MS較υ酸鹽IOOx母液MgSO4-7H2037.OgMnSO4-H2O1.69gZnSO4-7H200.86gCuSO4-5H200.0025gFNLite鹵化物IOOx母液CaCl2-2H2030.0g18.5g0.845g0.43g0.00125g15.0gKI0.083g0.0715gCoCl2-6H200.0025g0.00125g4FNLiteP,B,MoIOOx母液KH2PO418.5g9.25gH3BO30.62g0.3IgNa2MoO4-2H200.025g0.0125gSBl固體培養(yǎng)基(每升)包含1包MS鹽(GIBCO/BRL-目錄號為11117-066)；ImlB5維生素IOOOX母液；31.5g蔗糖；2ml2,4-D(20mg/L終濃度)；pH5.7；和8gTC瓊脂。SB166固體培養(yǎng)基(每升)包含1包MS鹽(GIBCO/BRL-目錄號為11117-066)；ImlB5維生素IOOOX母液；60g麥芽糖；750mgMgCl2六水合物；5g活性炭；pH5.7；和2ggelrite。SB103固體培養(yǎng)基(每升)包含1包MS鹽(GIBCO/BRL-目錄號為11117-066)；ImlB5維生素IOOOX母液；60g麥芽糖；750mgMgCl2六水合物；pH5.7；和2ggelrite。SB71-4固體培養(yǎng)基(每升)包含1瓶GamborgB5鹽帶蔗糖(GIBCO/BRL-目錄號為21153-036)；pH5.7；禾口5gTC瓊脂。2，4-D母液為預(yù)制備的，獲自Wiytotech目錄號D四5，濃度為lmg/ml。在-20°C下以等分試樣保藏的B5維生素母液(每IOOml)包含10g肌醇；IOOmg煙酸；IOOmg鹽酸吡哆辛；和Ig硫胺。如果溶液沒有足夠快地溶解，通過熱攪拌板施加低水平的熱量。氯磺隆母液包含lmg/ml于0.OlN氫氧化銨中。實施例8:AP2轉(zhuǎn)錄因子的變體A.TO··馬白媳某_歹_AP2■附白W本浦_歹丨丨將SEQIDNO1和3所示AP2核苷酸序列用于產(chǎn)生變體核苷酸序列，在與相應(yīng)的起始的未改變的開放閱讀框核苷酸序列比較時，該變體核苷酸序列的開放閱讀框的核苷酸序列具有約70%、75%、80%、85%、90%和95%的核苷酸序列同一性。用標(biāo)準(zhǔn)密碼子表產(chǎn)生這些功能變體。雖然變體的核苷酸序列被改變，但開放閱讀框所編碼的氨基酸序列沒有改變。產(chǎn)生了AP2的變體氨基酸序列。在該實施例中，對一個或多個氨基酸進行變更。具體而言，觀察SEQIDNO:2或4所示開放閱讀框以確定適當(dāng)?shù)陌被岣淖?。對要改變的氨基酸的選擇是通過參考與直向同源物和來自不同物種的其他基因家族成員的蛋白質(zhì)比對來進行的。參見圖1和2。選擇出這樣的氨基酸，其被認為不處在高選擇壓力下(不高度保守)，且相當(dāng)容易地被具有相似的化學(xué)特性(即相似的功能側(cè)鏈)的氨基酸置換。可遵循本文別處列出的測定法來確認功能性。使用該方法產(chǎn)生出與SEQIDN0:1或3每一者具有約70%、75%、80%、85%、90%或95%的核酸序列同一性的變體。C.AP2轉(zhuǎn)錄因子的另外的奪體氨某酸序歹Il在該實施例中，產(chǎn)生出相對于參比蛋白質(zhì)序列而言具有80%、85%、90%和95%同一性的人工蛋白質(zhì)序列。這后一嘗試需要從圖1和2所示的比對鑒定保守區(qū)和可變區(qū)域，然后明智地應(yīng)用氨基酸置換表。這些部分將在下文中作更詳細的討論。主要地，根據(jù)AP2轉(zhuǎn)錄因子蛋白之間或其他AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽之間的保守區(qū)作出哪些氨基酸序列要進行改變的決定。參見圖1和2?；谛蛄斜葘Γ纱_定多肽的有可能進行變更的多個區(qū)域。應(yīng)認識到，可在保守區(qū)中作出保守置換而又不改變功能。另外，技術(shù)人員將理解，本發(fā)明的AP2轉(zhuǎn)錄因子序列的功能性變體可在保守結(jié)構(gòu)域中具有微小的非保守氨基酸變更。然后產(chǎn)生出與原始蛋白質(zhì)序列相差在80-8585-90%、90_95%和95-100%同一性范圍內(nèi)的人工蛋白質(zhì)序列。目標(biāo)定在這些范圍的中點，正負偏差近似幅度例如為1%。氨基酸置換將通過定制的Perl腳本來實現(xiàn)。置換表在下表1中提供。首先，鑒定出蛋白質(zhì)中不應(yīng)改變的任何保守氨基酸并“作上記號”以排除不作置換。起始甲硫氨酸當(dāng)然將自動被加到這個名單。接著，作出改變。H、C和P不改變。該改變將首先以異亮氨酸開始，從N端掃描至C端。然后是亮氨酸，如此按列表往下直至達到所需的目標(biāo)?？勺鞒鲋袛?shù)置換(interimnumbersubstitution)，以便不造成改變的逆轉(zhuǎn)。名單的順序是1-17，因此按需以盡可能多的異亮氨酸變化開始，然后是亮氨酸，一直到甲硫氨酸。顯然，按此方式，許多氨基酸將不需要改變。L、I和V將涉及兩個交替的最佳置換的5050置換。將變體氨基酸序列作為輸出寫出。用Perl腳本計算同一性百分數(shù)。使用該程序，產(chǎn)生出與SEQIDNO:1或3的起始的未改變的開放閱讀框核苷酸序列具有約82%、87%、92%和97%氨基酸同一性的AP2轉(zhuǎn)錄因子的變體。30表1置換表權(quán)利要求1.一種分離的多核苷酸，所述多核苷酸具有AP2轉(zhuǎn)錄因子活性并且包含選自如下的核苷酸序列(a)SEQIDNO1或SEQIDNO3所示的核苷酸序列；(b)編碼SEQIDNO:1或SEQIDNO3的氨基酸序列的核苷酸序列；(c)與SEQIDNO:2具有至少90%序列同一性的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列編碼具有AP2轉(zhuǎn)錄因子蛋白活性的多肽；(d)包含SEQIDNO:1或3或其互補序列的至少99個連續(xù)核苷酸的核苷酸序列；以及，(e)編碼與SEQIDNO:2或SEQIDNO:4具有至少80%序列同一性的氨基酸序列的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列編碼具有AP2轉(zhuǎn)錄因子蛋白活性的多肽；(f)編碼與SEQIDNO:5具有至少90%序列同一性的氨基酸序列的核苷酸序列。2.一種表達盒，所述表達盒包含根據(jù)權(quán)利要求1所述的多核苷酸。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的表達盒，其中所述多核苷酸有效連接至驅(qū)動在植物中的表達的啟動子。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的表達盒，其中所述多核苷酸有效連接至組成型啟動子。5.一種轉(zhuǎn)基因植物，所述轉(zhuǎn)基因植物包含根據(jù)權(quán)利要求3或權(quán)利要求4所述的表達盒。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的轉(zhuǎn)基因植物，其中所述植物是玉蜀黍、小麥、水稻、大麥、高粱、黑麥、大豆、蕓苔屬植物或向日葵。7.—種在天然基因座經(jīng)遺傳修飾的植物，所述基因座包含根據(jù)權(quán)利要求1所述的多核苷酸，其中所述植物的所述AP2轉(zhuǎn)錄活性得到調(diào)節(jié)。8.一種包含有效連接至啟動子的多核苷酸的轉(zhuǎn)基因植物，所述啟動子驅(qū)動在所述植物中的表達，其中所述多核苷酸包含根據(jù)權(quán)利要求1所述的核苷酸序列，并且其中相對于對照植物所述植物中的所述AP2轉(zhuǎn)錄因子水平得到調(diào)節(jié)。9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的植物，其中所述植物具有提高水平的選自如下的多肽(a)包含SEQIDNO:2或SEQIDNO4的氨基酸序列的多肽；(b)與SEQIDNO:2具有至少90%序列同一性的多肽，其中所述多肽具有AP2轉(zhuǎn)錄因子蛋白活性；和(c)包含SEQIDNO5所示的AP2轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)域的多肽。10.根據(jù)權(quán)利要求5所述的植物，其中所述植物具有選自如下的表型(a)總種子數(shù)目增加；(b)總種子重量增加；(c)收獲指數(shù)增加；以及(d)生物量增加。11.一種提高植物中多肽的水平的方法，所述方法包括將根據(jù)權(quán)利要求3或權(quán)利要求4所述的表達盒引入到所述植物中。12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中所述植物的產(chǎn)量得到提高。13.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中提高所述多肽的水平在所述植物中產(chǎn)生出選自如下的表型(a)總種子數(shù)目增加；(b)總種子重量增加；(C)收獲指數(shù)增加；以及(d)生物量增加。14.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中所述表達盒穩(wěn)定整合到所述植物的基因組中。15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中所述植物是玉蜀黍、小麥、水稻、大麥、高粱、黑麥、大豆、蕓苔屬植物或向日葵。16.一種增加植物中的產(chǎn)量的方法，所述方法包括增加AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽在所述植物中的表達，其中所述AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽具有AP2轉(zhuǎn)錄因子蛋白活性并且選自(a)包含與SEQIDNO:2或SEQIDNO:4所示的序列具有至少80%序列同一性的氨基酸序列的多肽；(b)包含SEQIDNO5所示的AP2轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)域的多肽；和，(c)包含SEQIDNO5所示的AP2轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)域和SEQIDNO:6_11所示的多聚絲氨酸或多聚甘氨酸結(jié)構(gòu)域的多肽。17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中所述多肽包含與SEQIDNO:5所示的序列具有至少95%序列同一性的氨基酸序列。18.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中所述多肽包含SEQIDNO:5所示的氨基酸序列。19.根據(jù)權(quán)利要求16至18中任一項所述的方法，所述方法包括將表達盒引入所述植物中，所述表達盒包含有效連接至驅(qū)動在植物細胞中的表達的啟動子的編碼所述AP2轉(zhuǎn)錄因子多肽的多核苷酸，其中所述多核苷酸包含選自如下的核苷酸序列(a)SEQIDNO:1或SEQIDNO3所示的核苷酸序列；(b)編碼SEQIDNO:2或4的多肽的核苷酸序列；(c)包含與SEQIDNO:1或3所示的序列具有至少95%序列同一性的核苷酸序列；(d)編碼包含SEQIDNO:2、4或5所示的氨基酸序列的多肽的核苷酸序列；和，(e)編碼與SEQIDNO:2、4或5所示的序列具有至少90%序列同一性的氨基酸序列的核苷酸序列。20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，所述方法包括(a)用所述表達盒轉(zhuǎn)化植物細胞；以及(b)從步驟(a)的轉(zhuǎn)化植物細胞再生出轉(zhuǎn)化植物。21.根據(jù)權(quán)利要求19或權(quán)利要求20所述的方法，其中所述表達盒穩(wěn)定整合到所述植物的序列中。22.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述啟動子是組成型啟動子。23.一種分離的多肽，所述多肽包含選自如下的氨基酸序列(a)包含SEQIDNO:2、4或5的氨基酸序列；(b)包含與SEQIDNO:2、4或5具有至少90%序列同一性的氨基酸序列，其中所述多肽具有調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄的能力；和(c)包含SEQIDNO:2、4或5的至少33個連續(xù)氨基酸的氨基酸序列，其中所述多肽保持調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄的能力。全文摘要本發(fā)明提供用于調(diào)節(jié)花器官發(fā)育、葉形成、趨光性、頂端優(yōu)勢、果實發(fā)育、根起始和用于增加植物中的產(chǎn)量的組合物和方法。所述組合物包含AP2轉(zhuǎn)錄因子序列。本發(fā)明的組合物包含選自SEQIDNO1-11的氨基酸序列和核苷酸序列以及它們的變體和片段。在DNA構(gòu)建體中提供編碼AP2轉(zhuǎn)錄因子的核苷酸序列以便在所關(guān)注的植物中表達，以調(diào)節(jié)植物或植物部分中的AP2轉(zhuǎn)錄因子序列的水平。所述方法包括向植物或植物部分引入包含本發(fā)明的AP2轉(zhuǎn)錄因子序列的異源多核苷酸?？稍黾踊蚪档虯P2轉(zhuǎn)錄因子多肽的水平。這種方法可用來增加植物中的產(chǎn)量；在一個實施方案中，所述方法用來增加谷類中的谷粒產(chǎn)量。文檔編號C07K14/415GK102439032SQ201080019660公開日2012年5月2日申請日期2010年5月4日優(yōu)先權(quán)日2009年5月4日發(fā)明者J·E·黑本,J·Y·聰,N·J·貝特申請人:先鋒國際良種公司