專利名稱：用于蛋白質(zhì)、肽和其它分子的改進的f-18標記的方法和組合物的制作方法
用于蛋白質(zhì)、肽和其它分子的改進的F-18標記的方法和組合物相關(guān)申請本申請要求2009年12月4提交的美國臨時專利申請No. 61/266，773 ;2010年2月8日提交的61/302，280 ;2010年3月22日提交的61/316，125 ;2010年5月24日提交的61/347，486 ；2010 年 9 月 10 日提交的 61/381，720 和 2010 年 9 月 30 日提交的 61/388，268的優(yōu)先權(quán)。將每個優(yōu)先權(quán)申請通過弓I用整體并入本文。序列表本申請包括已通過EFS-Web以ASCII格式提交的并且通過引用整體并入本文的序列表。2010年12月2日創(chuàng)建的所述ASCII拷貝命名為MM31W07. txt并且大小為16,889個字節(jié)。 領(lǐng)域本發(fā)明涉及利用在例如PET或NMR體內(nèi)成像中使用的18F或19F標記肽或其它分子的方法。優(yōu)選地，18F或19F與鋁或另一種金屬通過螯合部分連接為綴合物[復(fù)合物]，所述螯合部分可共價連接至蛋白質(zhì)、肽或其它分子。通過使用本文中描述的技術(shù)，高特異活性的18F或19F標記的分子可在30分鐘或更短內(nèi)制備并且適合用于成像技術(shù)而無需標記分子的HPLC純化。標記可在適合于體內(nèi)直接使用的鹽水介質(zhì)中存在。在替代實施方案中，可加入有機溶劑來提高標記的效率。標記分子在體內(nèi)條件下是穩(wěn)定的，盡管為了某些目的，例如試劑盒配制，可加入穩(wěn)定劑例如抗壞血酸、海藻糖、山梨醇或甘露醇。在其它替代實施方案中，可用鋁預(yù)先加載螯合部分，將其凍干以用于貯存，然后用18F或19F進行標記。背景正電子發(fā)射斷層攝影(PET)已經(jīng)成為診斷醫(yī)學(xué)中最重要的功能成像模式之一，具有極高的靈敏度(fmol)、高分辨率(4-10mm)和可被適當定量的組織堆積(tissueaccretion) (Volkow 等，1988,1988, Am. J. Physiol. Imaging 3:142)。盡管[18F]2_ 脫氧-2-氟-D-葡萄糖([18F]FDG)是腫瘤學(xué)中最廣泛使用的功能成像劑(Fletcher等，2008，J. Nucl. Med. 49:480),但在開發(fā)功能成像的其它標記化合物以補充或增進解剖成像方法中存在濃厚興趣(Torigian等，2007，CA Cancer J. Clin. 57:206)，特別是目前使用的組合型PET/計算機斷層攝影系統(tǒng)。因此，需要具有使放射正電子的放射性核素與各種生物學(xué)和醫(yī)學(xué)目標分子綴合的簡易方法。肽或其它小分子可以用正電子發(fā)射體18F、64CU、nC、66Ga、68Ga、76Br、94mTc、86Y和124I來標記。PET同位素的較低發(fā)射能量是期望的，以使正電子在產(chǎn)生被PET相機成像的兩個511keV Y射線之前從靶位點移行的距離最短。許多發(fā)射正電子的同位素在其衰變鏈中還具有其它發(fā)射，例如Y射線、α粒子或β粒子。還期望具有是純正電子發(fā)射體的PET同位素，以使任何劑量測定問題最小化。同位素的半衰期也是重要的，因為半衰期必須足夠長以使同位素連接至靶向分子，分析產(chǎn)物，將其注入患者，并使得產(chǎn)物定位、從非靶組織清除并然后成像。如果半衰期太長，則比活度可能不能高至足以獲得清晰圖像所需的足夠光子，而如果半衰期太短，則生產(chǎn)、商業(yè)分銷和生物分布所需的時間可能不足。由于其較低的正電子發(fā)射能量，不存在側(cè)向發(fā)射以及適當?shù)陌胨テ冢?8F(i3+635keV 97%，t1/2110分鐘)是最廣泛使用的PET發(fā)射同位素之一。常規(guī)地,18F通過將其結(jié)合至碳原子而連接至化合物(Miller等,2008, Angew ChemInt Ed 47:8998-9033),但是也已經(jīng)報道了連接至娃(Shirrmacher 等，2007, Bioconj Chem18:2085-89 ;Hohne 等，2008，Bioconj Chem 19:1871-79)和硼(Ting 等，2008，F(xiàn)luorineCheml29:349-58) ο結(jié)合至碳通常涉及多步合成，包括多個純化步驟，這對具有110分鐘半衰期的同位素而言是有問題的。目前用于肽的18F標記方法通常包括標記低比活度試劑，HPLC純化試劑，然后綴合至目標肽。綴合物通常在綴合后再次純化以獲得期望的標記肽比活度。一個實例是 Poethko 等(J. Nucl. Med. 2004 ;45:892-902)的標記方法，其中4_[18F]氟苯甲醒被首先合成并純化(Wilson等，J. Labeled Compounds andRadiopharm. 1990 ;XXVIII: 1189-1199)，然后綴合至肽。然后通過HPLC純化肽綴合物以去
除用來促進綴合完全的過量肽。其它實例包括用以下物質(zhì)標記琥珀酰[18F]氟代苯甲酸酯(SFB)(例如，Vaidyanathan 等，1992, Int. J. Rad. AppI. Instrum. B 19:275),其它酸基化合物(Tada 等，1989, Labeled Compd. Radiopharm. XXVII: 1317 ;Wester 等，1996, Nucl. Med.Biol. 23:365 ;Guhlke 等，1994，Nucl. MEd. Biol 21:819)或點擊化學(xué)加合物(Li 等，2007，Bioconjugate Chem. 18:1987)。這些方法的總合成和配制時間范圍為1-3小時,大部分時間用于標記肽的HPLC純化以獲得體內(nèi)靶向所需的比活度。對于2小時的半衰期，使18F與肽連接所需的所有操作是很大的負擔。這些方法也操作冗長并且需要使用專門設(shè)計來產(chǎn)生標記產(chǎn)物的設(shè)備和/或需要專門專業(yè)化學(xué)人員的努力。它們也不利于可常規(guī)用于臨床環(huán)境的試劑盒配制。需要快速簡單的18F標記靶向部分(例如蛋白質(zhì)或肽)的方法，所述方法產(chǎn)生用于適合檢測和/或成像的比活度和體內(nèi)穩(wěn)定性的靶向構(gòu)建體，同時最大限度減少對專門設(shè)備或高度培訓(xùn)人員的需求并減少操作人員暴露于高水平放射。更優(yōu)選地，需要制備用于預(yù)靶向技術(shù)的18F標記的靶向肽。還需要可提供進行這種新方法所需的組合物的預(yù)包裝試劑盒。概述在各種實施方案中，本發(fā)明涉及關(guān)于用于PET或NMR成像的18F-或19F標記分子的組合物和方法。如本文中所論述，當本申請?zhí)峒?8F時，本領(lǐng)域技術(shù)人員將了解可利用18F、19F或另一種金屬(例如68Ga)結(jié)合放射性核素。在示例性方法中，將18F與金屬結(jié)合，并且將18F-金屬復(fù)合物連接至肽或其它分子上的配體。如下文中所描述的，IIIA族的金屬(鋁、鎵、銦和鉈)適合于18F結(jié)合，盡管鋁是優(yōu)選的。也可以使用镥。金屬結(jié)合配體優(yōu)選為螯合劑例如N0TA、NETA，D0TA、DTPA和在下文更詳細討論的其它螯合基團?；蛘?，可以首先使金屬或分子連接，然后添加18F來結(jié)合所述金屬。本領(lǐng)域技術(shù)人員將了解，實際上任何遞送分子可連接至18F以用于成像目的，只要其含有可以被修飾而不影響遞送分子與細胞或組織靶受體之間的配體-受體結(jié)合相互作用的可衍生化基團。盡管下文實施例主要關(guān)注18F-標記的肽部分，但是許多其它類型的遞送分子，例如寡核苷酸、激素、生長因子、細胞因子、趨化因子、血管生成因子、抗血管生成因子、免疫調(diào)節(jié)劑、蛋白質(zhì)、核酸、抗體、抗體片段、藥物、白介素、干擾素、寡糖、多糖、脂質(zhì)等可以被18F-標記并用于成像目的。下文實施例中描述的用于18F或其它試劑的預(yù)靶向遞送的可靶向構(gòu)建體肽包括但不限于 IMP 449, IMP 460, IMP 461, IMP 467, IMP469, IMP 470, IMP 471, IMP 479, IMP 485和MP 487，其包含螯合部分，所述螯合部分包括但不限于DTPA、ΝΟΤΑ、芐基-ΝΟΤΑ、NOTA的烷基或芳基衍生物、NODA-GA, C-NETA、琥珀酰-C-NETA和雙-叔丁基-N0DA。在某些實施方案中，示例性18F-標記的肽可在使用雙特異性或多特異性抗體或抗體片段的預(yù)靶向方法中用作可靶向構(gòu)建體。在 這種情況下，抗體或片段將包括疾病或病癥相關(guān)靶的一個或多個結(jié)合位點，所述靶例如腫瘤相關(guān)抗原或自身免疫疾病相關(guān)抗原或病原生物產(chǎn)生或展示的抗原，所述病原生物例如病毒、細菌、真菌或其它微生物。第二結(jié)合位點將特異性結(jié)合至可靶向構(gòu)建體。使用雙特異性或多特異性抗體進行預(yù)靶向的方法是本領(lǐng)域公知的(參見例如，美國專利No. 6，962，702，將其實施例部分通過引用并入本文)。類似地，結(jié)合可靶向構(gòu)建體的抗體或其片段也是本領(lǐng)域公知的，例如與HSG(組胺琥珀酰甘氨酸)結(jié)合的679單克隆抗體或與In-DTPA結(jié)合的734抗體(參見，美國專利No. 7，429，381、7，563，439,7, 666，415和7，534，431，將所述每個專利的實施例部分通過引用并入本文)。一般在預(yù)靶向方法中，首先施用雙特異性或多特異性抗體并允許結(jié)合至細胞或組織靶抗原。在未結(jié)合抗體從循環(huán)中清除適量時間之后，例如18F-標記的可靶向構(gòu)建體施用給患者并結(jié)合至集中于靶細胞或組織的抗體，然后例如通過PET掃描進行成像。在替代實施方案中，直接結(jié)合受體的分子例如生長抑素、奧曲肽、鈴蟾肽、葉酸或葉酸類似物、R⑶肽或其它已知的受體配體可被標記并且用于成像。受體靶向性試劑可包括例如ΤΑ138,—種整聯(lián)蛋白α ν β 3受體的非肽拮抗劑(Liu等,2003, Bioconj. Chem. 14 1052-56)。使用金屬螯合劑的受體靶向成像的其它方法在本領(lǐng)域是己知的并且可用于實施所要求保護的方法(參見例如，Andre等,2002, J. Inorg. Biochem. 88:1-6 ;Pearson等，1996，J. Med.，Chem. 39:1361-71)?？梢员怀上竦募膊』虿“Y的類型僅受用于靶向與疾病或病癥相關(guān)的細胞或組織的適合遞送分子的可用性限制。許多此類遞送分子是己知的。例如，與患病組織或靶(例如癌癥)結(jié)合的任何蛋白質(zhì)或肽可以通過所公開的方法用18F標記并用于檢測和/或成像。在某些實施方案中，此類蛋白或肽可以包括但不限于結(jié)合腫瘤相關(guān)抗原(TAA)的抗體或抗體片段。任何己知的TAA結(jié)合抗體或片段可以通過所描述的方法用18F標記并用于腫瘤的成像和/或檢測，例如通過PET掃描或其它己知技術(shù)。某些替代實施方案包括使用點擊化學(xué)反應(yīng)將金屬-18F-螯合部分連接至分子。優(yōu)選地，所述點擊化學(xué)包括靶向分子例如抗體或抗原結(jié)合抗體片段(包含激活部分例如炔、硝酮或疊氮基)與連接至一個或多個螯合基團并且包含對應(yīng)的反應(yīng)性部分例如疊氮化物、炔或硝酮的螯合部分或載體分子的反應(yīng)。當靶向分子包含炔時，螯合部分或載體將包含疊氮化物、硝酮或類似的反應(yīng)性部分。點擊化學(xué)反應(yīng)可在體外發(fā)生以形成高度穩(wěn)定的標記的靶向分子，隨后將所述分子給受試者施用。附圖簡述下列附圖被包括以示例性說明本發(fā)明的特定實施方案并且不意味著限制所要求保護的主題的范圍。圖I. 18F標記試劑在攜帶腫瘤的裸小鼠中的生物分布，通過顯微PET成像。每個左肋攜帶小的皮下LS174T腫瘤的3只裸小鼠在注射以下任一個之后的冠狀切片(A) [18F]FDG、(B)用抗-CEA X 抗-HSGbsMAb 預(yù)靶向的 Al [18F] IMP449, (C)單獨的 Al [18F] IMP449 (未用bsMAb預(yù)靶向)。在成像期結(jié)束時給出從動物取出的組織的生物分布數(shù)據(jù)，表示為每克百分比注射劑量(%ID/g)?？s寫:B，骨髓;H，心臟；K,腎；Τ，腫瘤。圖2.給至在上肋攜帶35-mg LS174T人結(jié)腸直腸癌異種移植物的裸小鼠的預(yù)靶向Alt18F] IMP 449的動態(tài)成像研究。上方三個圖分別顯示冠狀、徑向和橫向截面，經(jīng)120分鐘的成像期在6個不同的5分鐘間隔取自集中于腫瘤外周位置的身體區(qū)域。每個剖視圖中左側(cè)第一個圖像顯示十字線交叉處腫瘤的定位，由箭頭突出顯示。動物在成像期間向其右側(cè)部分傾斜。下方2個圖顯示其它冠狀和徑向截面，其集中于冠狀截面更前方的平面以突出顯示在肝和腸中的分布，而徑向視圖在身體中更中心地交叉?？s寫Cor，冠狀；FA，前臂；H，心臟；K，腎；Lv，肝；Sag，徑向；Tr，橫向；UB，膀胱。圖3. 18F-標記的MP 468鈴蟾肽類似物的體內(nèi)組織分布。
圖4.在注射后2h，AR42J腫瘤攜帶小鼠(n=5)中18F-IMP 466和68Ga-IMP 466的生物分布對比。作為對照，單獨組的小鼠(n=5)接受過量未標記的奧曲肽以證明受體特異性。圖5.在注射后2h，頸部具有s. c. AR42J腫瘤的小鼠中18F_MP466和68Ga-MP 466的PET/CT掃描的冠狀切片。清晰可見在腫瘤和腎中的累積。圖6.在靜脈內(nèi)注射68Ga-MP 288后I小時，具有皮下LS174T和SK-RC52腫瘤的BALB/c 裸小鼠中 6. Onmol 125I_TF2 (O. 37MBq)和 O. 25nmol 68Ga-IMP 288(5MBq)的生物分布。值以平均值土標準偏差給出(n=5)。圖7.在用6. Onmol TF2預(yù)靶向之后靜脈內(nèi)注射后I小時，5MBqFDG和5MBq68Ga-IMP288 (O. 25nmol)的生物分布。值以平均值土標準偏差給出(n=5)。圖8.在右后腿具有皮下LS174T腫瘤(O. Ig)(亮箭頭)并且在左大腿肌肉具有炎癥(暗箭頭)的BALB/c裸小鼠的PET/CT圖像，所述小鼠接受了 5MBq 18F-FDG并且在一天后以 16 小時的間隔接受 6. OnmoITF2 和 5MBq 68Ga-IMP 288 (O. 25nmol)。動物在 18F-FDG 和68Ga-IMP288注射后一小時被成像。圖顯示FDG-PET掃描的3D體積透視(A)、腫瘤區(qū)域的橫截面⑶，以及預(yù)靶向免疫PET掃描的3D體積透視(C)、腫瘤區(qū)域的橫截面⑶。圖9.在之前16小時6. Onmol TF2，靜脈內(nèi)注射后I小時，O. 25nmol Al18F-IMP449 (5MBq)的生物分布，沒有預(yù)靶向的A118F_MP449的生物分布，或Al [18F]的生物分布。值以平均值土標準偏差給出。

圖10.以16小時的間隔靜脈內(nèi)接受6. Onmol TF2和O. 25nmoIAl 18F-IMP449 (5MBq)的、在右側(cè)具有皮下LS174T腫瘤(O. Ig)(箭頭)的BALB/c裸小鼠的靜態(tài)PET/CT成像研究。動物在注射Al18F-MP449之后I小時被成像。圖顯示3D體積透視(A)后視圖，以及在腫瘤區(qū)域的橫截面(B)冠狀、(C)徑向。
11. IMP 479 (SEQ ID NO: 35)的結(jié)構(gòu)。圖 12. IMP 485 (SEQ ID NO: 36)的結(jié)構(gòu)。圖13. IMP 487 (SEQ ID NO: 37)的結(jié)構(gòu)。圖14. 二-叔丁基-N0DA-MPAA 的合成。圖15. NOTA的馬來酰亞胺綴合物的合成。
詳細描述提供下述定義以幫助理解本文公開內(nèi)容。未明確定義的術(shù)語根據(jù)其明顯且普通的含義使用。本文使用的術(shù)語“一(a)”或“一個(an)”可以表示一個或超過一個的項目。本文使用的術(shù)語“和”和“或”可以用來表示合取或析取。即，除非另有說明，否則兩個術(shù)語都應(yīng)該被理解為等價于“和/或”。本文使用的“約”表示在數(shù)字的正或負10%之內(nèi)。例如，“約100”指90和110之
間的任何數(shù)字。本文使用的“肽”指長度為2至100個氨基酸殘基、更優(yōu)選長度為2至10個、更優(yōu)
選在2至6個氨基酸的天然存在或非天然存在氨基酸的任何序列?！鞍被帷笨梢允荓-氨基酸、D-氨基酸、氨基酸類似物、氨基酸衍生物或氨基酸模擬物。本文使用的術(shù)語“病原休”包括但不限于真菌、病毒、寄生蟲和細菌，包括但不限于人免疫缺陷病毒(HIV)、皰疹病毒、巨細胞病毒、狂犬病毒、流感病毒、乙型肝炎病毒、仙臺病毒、貓白血病病毒、呼腸孤病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、人血清細小樣病毒、猿猴病毒40、呼吸道合胞病毒、小鼠乳腺瘤病毒、水痘-帶狀皰疹病毒、登革病毒、風疹病毒、麻疫病毒、腺病毒、人T細胞白血病病毒、埃-巴二氏病毒、鼠白血病病毒、腿腺炎病毒、水皰性口炎病毒、辛德畢斯病毒、淋巴細胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒、疣病毒、藍舌病毒、無乳鏈球菌(Streptococcus agalactiae)、嗜肺軍團菌(Legionella pneumophilia)、釀胺鏈球菌(Streptococcus pyogenes)、大腸桿菌(Escherichia coli)、淋病奈瑟菌(Neisseriagonorrhoeae)、腦膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis)、月市炎球菌屬(Pneumococcus)、乙型流感嗜血桿菌(Hemophilis influenzaeB)、蒼白密螺旋體(Treponema pallidum)、萊姆病螺旋體(Lyme disease spirochetes)、綠胺假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、麻風分枝桿菌(Mycobacterium leprae)、流產(chǎn)布魯氏桿菌(Brucella abortus)、結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis)和破傷風梭菌(Chlostridium tetani)。本文使用的“輻射分解保護劑”指可添加至18F-標記的復(fù)合物或分子以減小18F-標記的復(fù)合物或分子被輻射分解的分解速率的任何分子、化合物或組合物?？梢允褂萌魏渭褐妮椛浞纸獗Ｗo劑，包括但不限于抗壞血酸。18F標記技術(shù)用18F標記分子的各種技術(shù)是己知的。表I列出了幾種較普遍報道的氟化程序的性質(zhì)。通過碳標記的肽經(jīng)常包括通過親核取代18F-結(jié)合至輔基，通常以2或3個步驟，其中所述輔基被標記并純化，連接至化合物，然后再次純化。該一般方法已經(jīng)用于經(jīng)酰胺鍵、醛和“點擊化學(xué)”連接輔基(Marik 等，2006，Bioconjug Chem 17:1017-21 ;Poethko 等，2004，J Nucl Med 45 892-902 ;Li 等，2007，Bioconjug Chem 18:989-93)。最常見的酰胺鍵形成試劑是4-18F氟代苯甲酸N-琥珀酰亞胺酯(18F-SFB),但是已經(jīng)測試了許多其它基團(Marik等，2006)。在一些情況下，例如當使用18F-標記的活性酯酰胺形成基團時，可能有必要在偶聯(lián)反應(yīng)期間保護肽上的某些基團，之后將它們裂解。該18F-SFB試劑的合成以及隨后與肽的 綴合需要許多合成步驟并耗費約2-3小時。Poethko等(2004)開發(fā)了一種更簡單、更有效的18F-肽標記方法，其中4_18F_氟代苯甲醒試劑通過月虧鍵合在約75-90min內(nèi)綴合至肽,包括離心干燥(dry-down)步驟。更新的“點擊化學(xué)”方法在銅催化劑存在下用乙炔或疊氮化物將18F-標記分子連接至肽(Li等，2007 ;Glaser 和 Arstad，2007，Bioconjug Chem 18:989-93)。疊氮化物與乙炔基團之間的反應(yīng)形成三唑連接，該連接是非常穩(wěn)定的并且在肽上非常有效地形成而無需保護基。使用離心干燥步驟，點擊化學(xué)在約75-90分鐘內(nèi)以良好收率( 50%)產(chǎn)生18F-標記的肽。表I.選擇的18F-肽標記方法的概述
權(quán)利要求
1.ー種用18F或19F標記分子的方法，所述方法包括將18F或19F與IIIA族金屬的復(fù)合物連接至螯合部分，其中將所述螯合部分綴合至所述分子或?qū)⑺鲵喜糠蛛S后連接至所述分子。
2.權(quán)利要求I所述的方法，其中將所述螯合部分綴合至所述分子。
3.權(quán)利要求I所述的方法，其中將所述螯合部分隨后連接至所述分子并且所述方法還包括將所述螯合部分連接至所述分子。
4.權(quán)利要求I所述的方法，其中所述分子為蛋白質(zhì)或肽。
5.權(quán)利要求I所述的方法，其中所述分子為選自抗體、單克隆抗體、雙特異性抗體、多特異性抗體、抗體融合蛋白和抗原結(jié)合抗體片段的靶向分子。
6.權(quán)利要求5所述的方法，其中將所述螯合部分綴合至可靶向構(gòu)建體。
7.權(quán)利要求6所述的方法，其還包括； c)給受試者施用所述靶向分子； d)允許充足的時間以便所述靶向分子結(jié)合靶抗原；和 e)隨后給所述受試者施用所述可靶向構(gòu)建體，其中所述可靶向構(gòu)建體結(jié)合所述靶向分子。
8.權(quán)利要求I所述的方法，其中所述IIIA族金屬選自鋁、鎵、銦、镥和鉈。
9.權(quán)利要求I所述的方法，其中所述IIIA族金屬為鋁。
10.權(quán)利要求I所述的方法，其中所述螯合部分選自DOTA、TETA、NOTA、NODA、NODA衍生物、(叔丁基)2NODA、NODA-MPAA, ΝΕΤΑ、C-NETA, L-NETA, S-NETA 和 ΝΟΤΑ 衍生物。
11.權(quán)利要求6所述的方法，其中所述可靶向構(gòu)建體選自ΜΡ448、IMP449、IMP 460、IMP 461、頂P 462、頂P 465、頂P 466、頂P 467、頂P 468、頂P 469、頂P 470, IMP 471、頂P473、IMP 479、IMP 485、IMP 486 和 MP 487。
12.權(quán)利要求I所述的方法，其中所述18F或19F標記分子在所述方法開始后不到30分鐘內(nèi)產(chǎn)生。
13.權(quán)利要求7所述的方法，其還包括使用PET掃描以成像所述受試者中所述18F標記分子的分布。
14.權(quán)利要求I所述的方法，其中將所述18F或19F復(fù)合物在含水介質(zhì)中連接至所述螯合部分。
15.權(quán)利要求I所述的方法，其中向所述介質(zhì)中添加有機溶劑以將18F或19F復(fù)合物連接至螯合部分。
16.權(quán)利要求I所述的方法，其中通過微波輻射將所述18F或19F復(fù)合物連接至所述螯合部分。
17.權(quán)利要求I所述的方法，其中通過加熱將所述18F或19F復(fù)合物連接至所述螯合部分。
18.權(quán)利要求5所述的方法，其中通過?？亢玩i定技術(shù)制備所述靶向分子。
19.權(quán)利要求18所述的方法，其中所述靶向分子為TF2或TF10。
20.權(quán)利要求3所述的方法，其中通過點擊化學(xué)反應(yīng)將螯合部分連接至所述分子。
21.權(quán)利要求3所述的方法，其中通過馬來酰亞胺-巰基反應(yīng)將所述螯合部分連接至所述分子。
22.權(quán)利要求6所述的方法，其中放射性標記的可靶向構(gòu)建體的收率為至少85%。
23.權(quán)利要求6所述的方法，其中所述可靶向構(gòu)建體的比放射性活度為至少115GBq/μ mol ο
24.權(quán)利要求6所述的方法，其中在放射性標記之前凍干所述可靶向構(gòu)建體以用于貯存。
25.權(quán)利要求24所述的方法，其中將所述可靶向構(gòu)建體在選自山梨醇、甘露醇和海藻糖的填充劑中凍干。
26.權(quán)利要求I所述的方法，其中將所述螯合部分在3.8至4. 5的pH下連接至18F或19F復(fù)合物。
27.權(quán)利要求7所述的方法，其中所述靶向分子結(jié)合患病細胞或病原體并且還包括通過18F標記分子的PET成像或19F標記分子的NMR成像來檢測、診斷或成像所述疾病或病原體的存在。
28.權(quán)利要求27所述的方法，其中所述疾病選自癌癥、心血管疾病、傳染性疾病、炎性疾病、自身免疫疾病、免疫功能障礙疾病、移植物抗宿主病、器官移植排斥和神經(jīng)疾病。
29.權(quán)利要求28所述的方法，其中所述靶向分子結(jié)合抗原，所述抗原選自碳酸酐酶IX、CCCL19、CCCL21、CSAp、CD1、CDla、CD2、CD3、CD4、CD5、CD8、CDl 1A、CD14、CD15、CD16、CD18、CD19、IGF-1R、CD20、CD21、CD22、CD23、CD25、CD29、CD30、CD32b、CD33、CD37、CD38、CD40、CD40L、CD45、CD46、CD52、CD54、CD55、CD59、CD64、CD66a_e、CD67、CD70、CD74、CD79a、CD80、CD83、CD95、CD126、CD133、CD138、CD147、CD154、CXCR4、CXCR7、CXCL12、HIF-1a 、AFP、PSMA、CEACAM5、CEACAM-6、c-met、B7、纖連蛋白的 ED-B、因子 H、FHL-U Flt_3、葉酸受體、GROB,HMGB-1、缺氧誘導(dǎo)因子(HIF)、HMl. 24、胰島素樣生長因子-1 (ILGF-I)、IFNi、IFN-a、IFN-β、IL-2、IL-4R、IL-6R、IL-13R、IL-15R、IL-17R、IL-18R、IL-6、IL-8、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-25、IP-10、MAGE、mCRP、MCP-1、MIP-1A、MIP-1B、MIF、MUCl、MUC2、MUC3、MUC4、MUC5、NCA-95、NCA-90、la、HMl. 24、EGP-1、EGP-2、HLA-DR、生腱蛋白、Le (y)、RANTES,T101、TAC、Tn 抗原、Thomson-Friedenreich 抗原、腫瘤壞死抗原、TNF- a、TRAIL 受體(Rl 和R2)、VEGFR、EGFR、PIGF、補體因子 C3、C3a、C3b、C5a、C5 和癌基因產(chǎn)物。
30.權(quán)利要求28所述的方法，其中所述傳染性疾病與病原體相關(guān)，所述病原體選自真菌、病毒、寄生蟲、細菌、人免疫缺陷病毒(HIV)、皰疹病毒、巨細胞病毒、狂犬病毒、流感病毒、こ型肝炎病毒、仙臺病毒、貓白血病病毒、呼腸孤病毒、脊髄灰質(zhì)炎病毒、人血清細小樣病毒、猿猴病毒40、呼吸道合胞病毒、小鼠乳腺瘤病毒、水痘-帯狀皰疹病毒、登革病毒、風疫病毒、麻疫病毒、腺病毒、人T細胞白血病病毒、埃-巴ニ氏病毒、鼠白血病病毒、腿腺炎病毒、水皰性口炎病毒、辛德畢斯病毒、淋巴細胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒、疣病毒和藍舌病毒、無乳鏈球菌、嗜肺軍團菌、釀膿鏈球菌、大腸桿菌、淋病奈瑟菌、腦膜炎奈瑟菌、肺炎球菌屬、こ型流感嗜血桿菌、蒼白密螺旋體、萊姆病螺旋體、綠膿假單胞菌、麻風分枝桿菌、流產(chǎn)桿菌、結(jié)核分枝桿菌和破傷風梭菌。
31.權(quán)利要求28所述的方法，其中所述自身免疫疾病選自免疫介導(dǎo)的血小板減少癥、急性特發(fā)性血小板減少性紫癜、慢性特發(fā)性血小板減少性紫癜、皮肌炎、斯耶格倫氏綜合征、多發(fā)性硬化、西登哈姆舞蹈病、重癥肌無力、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、狼瘡腎炎、風濕熱、多腺性綜合征、大皰性類天皰瘡、糖尿病、亨-舍ニ氏紫癜、鏈球菌感染后腎炎、結(jié)節(jié)性紅斑、高安動脈炎、艾迪生病、類風濕性關(guān)節(jié)炎、肉瘤樣病、潰瘍性結(jié)腸炎、多形性紅斑、IgA腎病、結(jié)節(jié)性多動脈炎、強直性脊椎炎、古德帕斯丘綜合征、閉塞性血栓性脈管炎、原發(fā)性膽汁性肝硬變、橋本氏甲狀腺炎、甲狀腺毒癥、硬皮病、慢性活動型肝炎、多肌炎/皮肌炎、多軟骨炎、尋常天皰瘡、韋格納氏肉芽腫、膜性腎病、肌萎縮側(cè)索硬化、脊髓癆、巨細胞動脈炎/多肌痛、惡性貧血、急進性腎小球腎炎和纖維化肺泡炎。
32.權(quán)利要求27所述的方法，其中所述靶向分子為選自hRl(抗-IGF-1R)、hPAM4 (抗-胰腺癌粘蛋白)、hA20 (抗-CD20)、hA19 (抗-CD19)、hIMMU31 (抗-AFP)、hLLl (抗-CD74)、hLL2(抗-CD22)、hMu_9 (抗-C SAp)、hL243 (抗-HLA-DR)、hMN-14 (抗-CEACAM5)、hMN-15 (抗-CEACAM6)、hRS7 (抗-EGP-1)和 hMN_3 (抗-CEACAM6)的抗體。
33.一種可靶向構(gòu)建體，其包含連接至金屬_18F、金屬-19F或68Ga的螯合部分。
34.權(quán)利要求33所述的可靶向構(gòu)建體，其中所述可靶向構(gòu)建體選自IMP448、IMP 449、IMP 460、IMP 461、IMP 462、IMP 465、IMP466, IMP 467、IMP 468、IMP 469、IMP 470、IMP471、頂P 473、頂P 479、頂P 485、頂P 486 和 MP 487。
35.權(quán)利要求33所述的可靶向構(gòu)建體，其中所述螯合部分選自DOTA、TETA、NOTA、NODA、NODA 衍生物、(叔丁基)2N0DA、N0DA-MPAA, ΝΕΤΑ、C-NETA, L-NETA, S-NETA 和 ΝΟΤΑ 衍生物。
36.權(quán)利要求32所述的可靶向構(gòu)建體，其中所述螯合部分為NOTA或NODA的烷基或芳基衍生物。
37.一種組合物，其包含N0DA-MPAA。
38.權(quán)利要求37的組合物，其中將所述N0DA-MPAA綴合至分子。
39.權(quán)利要求37的組合物，其中將所述N0DA-MPAA與金屬18F復(fù)合。
40.權(quán)利要求37的組合物，其中將所述N0DA-MPAA與Al-18F復(fù)合。
41.權(quán)利要求37的組合物，其中將所述N0DA-MPAA與68Ga復(fù)合。
42.ー種利用18F或19F標記分子的方法，其包括； a)在含水介質(zhì)中將IIIA族金屬連接至螯合部分以形成金屬-螯合部分復(fù)合物，其中將所述螯合部分綴合至所述分子或隨后將所述螯合部分連接至所述分子；和 b)將18F或19F添加至金屬-螯合部分復(fù)合物，其中所述18F或19F結(jié)合所述金屬。
43.權(quán)利要求42的方法，其中所述螯合部分為N0DA-MPAA。
全文摘要
本申請公開了合成和使用用于PET或MRI成像的68Ga、18F或19F標記分子的組合物和方法。優(yōu)選地，通過與IIIA族金屬形成復(fù)合物，且將該復(fù)合物結(jié)合至螯合部分來將18F或19F綴合至靶向分子，所述螯合部分可直接或間接連接至靶向分子。在其它實施方案中，68Ga、18F或19F標記的部分可包含與雙特異性抗體組合使用以靶向疾病相關(guān)抗原的可靶向構(gòu)建體。在更優(yōu)選實施方案中，螯合部分或可靶向構(gòu)建體可綴合至靶向分子例如抗體或抗體片段。
文檔編號C07K1/13GK102666567SQ201080052555
公開日2012年9月12日 申請日期2010年12月2日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月4日
發(fā)明者C·A·德索扎, D·M·戈登堡, W·J·麥克布賴德 申請人:免疫醫(yī)療公司