專利名稱：通過(guò)對(duì)隨機(jī)序列聚合物的組合物基于血清蛋白的檢測(cè)，改進(jìn)含隨機(jī)序列聚合物的組合物 ...的制作方法
通過(guò)對(duì)隨機(jī)序列聚合物的組合物基于血清蛋白的檢測(cè)，改進(jìn)含隨機(jī)序列聚合物的組合物的設(shè)計(jì)、生物利用度和效能
的方法
相關(guān)申請(qǐng)本申請(qǐng)要求2009年11月17日遞交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)No. 61/281，470和2010年9月27日遞交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)No. 61/386,909的優(yōu)先權(quán)益。
背景技術(shù)：
現(xiàn)有技術(shù)中已有檢測(cè)簡(jiǎn)單多肽的方法。然而，由于受檢多肽的異質(zhì)性，檢測(cè)一組多肽混合物而非具有明確氨基酸序列的一種多肽的有效血漿濃度方法很復(fù)雜。例如，含隨機(jī)序列聚合物(RSP)的組合物包括隨機(jī)摻入多肽鏈的氨基酸的復(fù)雜混合物。RSP組合物由氨 基酸的特性和比例而不是特定序列決定。鑒于多肽的多樣性，需要對(duì)多種制造方法制備的這些RSP組合物的均一性和組成進(jìn)行評(píng)估的改進(jìn)方法。確定RSP組合物在體內(nèi)的狀態(tài)具有重要的免疫學(xué)意義，因?yàn)槿Q于給藥途徑和/或給藥頻率及血清蛋白與RSP組合物的結(jié)合，這種肽混合物可能激發(fā)初級(jí)炎癥反應(yīng)(THl型)或初級(jí)調(diào)控反應(yīng)(TH2型)，導(dǎo)致其在受試對(duì)象中的藥代動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)改變。更加嚴(yán)謹(jǐn)?shù)脑O(shè)計(jì)和堅(jiān)持給予RSP組合物可能提高治療效果或者減少潛在的不良炎癥應(yīng)答反應(yīng)。因此，為了治療目的，需要定量分析RSP組合物的方法，例如有助于評(píng)估這種肽混合物在體內(nèi)的狀況和確定合適的劑量及給藥方式。
發(fā)明概述本申請(qǐng)?zhí)峁z測(cè)和評(píng)價(jià)RSP組合物的改進(jìn)的方法。本發(fā)明提供檢測(cè)和定量分析RSP組合物的方法。本發(fā)明提供基于肽亞組與特定捕獲多肽相互作用的測(cè)定，和富集RSP組合物中多肽亞組亞組的方法。本發(fā)明進(jìn)一步提供對(duì)需要接受治療的患者給予RSP組合物的方法，其中可根據(jù)上述檢測(cè)和定量方法來(lái)確定或評(píng)估給藥方案和劑量。本申請(qǐng)還提供檢測(cè)RSP組合物的方法，包括以下步驟(a)將所述RSP組合物附著于固相支持物上；(b)使(a)所述固相支持物與含蛋白質(zhì)生物液體接觸；(c)鑒定特異性結(jié)合于(a)所述固相支持物的(b)所述的蛋白質(zhì)；(d)獲得基本純的(C)所述結(jié)合蛋白產(chǎn)物；(e)將(c)所述蛋白質(zhì)附著于定量檢測(cè)所述RSP組合物用的工具上；和(f)測(cè)定所述RSP組合物與(e)所述蛋白每一種的結(jié)合。本說(shuō)明書(shū)也提供一種改進(jìn)RSP組合物設(shè)計(jì)的方法，包括以下步驟(a)將所述RSP組合物附著于固相支持物上；(b)使(a)所述固相支持物與含蛋白的生物液體接觸；(c)鑒定特異性結(jié)合于(a)所述固相支持物的(b)所述的蛋白質(zhì)；(d)獲得基本純的(C)所述的結(jié)合蛋白產(chǎn)物；(e)使(C)所述蛋白質(zhì)附著于定量檢測(cè)RSP組合物用的工具上；(f)測(cè)定所述RSP組合物與(e)所述蛋白質(zhì)結(jié)合的每一種肽；(g)調(diào)整所述RSP組合物的設(shè)計(jì)以增加或減少與(e)所述一種或多種蛋白質(zhì)的結(jié)合；(h)重復(fù)步驟(f) ；(i)任選地重復(fù)步驟(f_h)，其中調(diào)整所述RSP組合物的設(shè)計(jì)可導(dǎo)致一種或多種效果提高生物利用度、減少毒性和提高效能。
此外，本申請(qǐng)?zhí)峁┮环N檢測(cè)RSP組合物中肽種類的方法，包括以下步驟(a)將所述RSP組合物附著于固相支持物上；(b)使(a)所述固相支持物與含蛋白的生物液體接觸；
(C)鑒定特異性結(jié)合于(a)所述固相支持物的(b)所述的蛋白質(zhì)；(d)獲得基本純的(C)所述結(jié)合蛋白制品；(e)使(C)所述蛋白質(zhì)附著于固相支持物上；(f)使(e)所述固相支持物與所述RSP組合物接觸；(g)測(cè)定所述RSP組合物中每種肽與(f)所述固相支持物的結(jié)合。另外，本申請(qǐng)?zhí)峁┮环N改進(jìn)RSP組合物中肽種類設(shè)計(jì)的方法，包括以下步驟(a)使所述RSP組合物附著于固相支持物上；(b)使(a)所述固相支持物與含蛋白的生物液體接觸；(C)鑒定特異性結(jié)合于(a)所述固相支持物的(b)所述蛋白質(zhì)；(d)獲得基本純的(C)所述結(jié)合蛋白制品；(e)使(C)所述蛋白質(zhì)附著于固相支持物上；(f)使(e)所述固相支持物與所述RSP組合物接觸；(g)測(cè)定所述RSP組合物中與(f)所述固相支持物結(jié)合的每一種肽；(h)調(diào)整所述RSP組合物的設(shè)計(jì)以增加或減少與(f)所述一種或多種蛋白質(zhì)的結(jié)合；(i)重復(fù)步驟(g) ；(j)任選地重復(fù)步驟(g_j)，其中調(diào)整所述RSP組合物肽種類的設(shè)計(jì)可導(dǎo)致一種或多種效果提高生物利用度、減少毒性，和提高效能。 通過(guò)應(yīng)用本申請(qǐng)所述方法，研究者不僅可以更可靠地檢測(cè)RSP組合物中的低含量組分，而且可以特異性地檢測(cè)RSP組合物中與生物活性如毒性或效力有關(guān)或?qū)ζ溆胸暙I(xiàn)的肽種類。本發(fā)明的基礎(chǔ)是，發(fā)現(xiàn)RSP組合物中的一種肽或多種肽可與某些具有蛋白質(zhì)性質(zhì)的物質(zhì)特異性結(jié)合。相反，一旦鑒定到本說(shuō)明書(shū)稱為“捕獲多肽”的蛋白質(zhì)，即可利用一種或多種這類捕獲多肽定量分析RSP組合物中所含的肽，并分離RSP組合物中功能更優(yōu)良的肽亞組，或者根據(jù)結(jié)合特異性給RSP組合物中的各組分分類。為了實(shí)施本發(fā)明，鑒定到能與(RSP組合物所含)肽結(jié)合的捕獲多肽后，即可將其制備成可用于實(shí)施本發(fā)明的形式，SP對(duì)其進(jìn)行分離和純化，純度達(dá)到足以結(jié)合(RSP組合物所含)肽而不受到存在的其他組分干擾。本發(fā)明的一個(gè)方面提供了一種評(píng)價(jià)或測(cè)定RSP組合物不同制造的制劑、用不同方法制造的、或不同的制造后加工的產(chǎn)品的差異的方法。本發(fā)明的具體方法是，比較不同的RSP組合物制品與捕獲多肽的結(jié)合來(lái)確定各制品之間的相似性和/或差異。本發(fā)明的另一方面提供一種定量分析RSP組合物或含RSP組合物的樣品中所含肽的方法。本發(fā)明的一些實(shí)施方式是檢測(cè)給予RSP組合物后其在體內(nèi)的生物可利用含量或濃度(如血漿濃度)的方法。本發(fā)明的方法是檢測(cè)受試對(duì)象組織中存在的RSP組合物，所述受試對(duì)象先前曾接觸過(guò)RSP組合物或用其治療過(guò)，在這種接觸后立即、或在接觸后至少大約10、20、30、或45分鐘，或者 1、2、4、6、12、24、36 或 48 小時(shí)，或 3、4、5、6、7 或 10 天，或 2、3、4、6、8 或 12 周進(jìn)行一次或多次所述方法的檢測(cè)。本發(fā)明的一種具體方法是檢測(cè)哺乳動(dòng)物血清或血漿中存在的RSP組合物的各組分，所述哺乳動(dòng)物在進(jìn)行所述方法前曾在上述期間內(nèi)用所述DSP組合物治療過(guò)。在某些具體實(shí)施方案中，所述哺乳動(dòng)物是人。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明方法包括通過(guò)使RSP與一種或多種預(yù)先確定的捕獲多肽結(jié)合然后用例如免疫檢測(cè)方法檢測(cè)RSP組合物的存在，和任選地檢測(cè)其含量。因此。本發(fā)明的一個(gè)方面包括選擇或鑒定能與RSP組合物優(yōu)先結(jié)合的血清蛋白。在某些實(shí)施方案中，鑒定一種或多種血清蛋白的方法包括使RSP組合物與包括血清的生物樣品接觸；如果樣品中存在RSP組合物中的肽，則檢測(cè)其與血清中一種或多種組分的結(jié)合；分離得到結(jié)合組分，鑒定一種或多種結(jié)合組分。在一些實(shí)施方式中，分離這種結(jié)合組分的方法是，使樣品接觸設(shè)計(jì)的能與RSP組合物所含肽結(jié)合的親和柱、隨后洗脫結(jié)合組分，然后鑒定結(jié)合組分。任何能與RSP組合物所含肽結(jié)合的血清結(jié)合蛋白可用于上述方法。合適的檢測(cè)方法包括直接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、Western印跡法、免疫流式細(xì)胞檢測(cè)法、放射免疫檢測(cè)法(RIA)，或者任何其他能定量檢測(cè)特異性抗原的免疫學(xué)檢測(cè)方法。本發(fā)明的一個(gè)方面是一種檢測(cè)生物樣品中RSP組合物存在與否的方法，包括使生物樣品與至少一種捕獲多肽接觸；檢測(cè)捕獲多肽與RSP組合物有無(wú)結(jié)合，其中存在這種結(jié)合表明在生物樣品中存在RSP組合物中的肽組分。可進(jìn)一步延伸用這種方法檢測(cè)樣品中RSP組合物的含量或濃度。本發(fā)明的另一個(gè)方面是測(cè)量RSP組合物在哺乳動(dòng)物中的生物利用度方法，包括給予哺乳動(dòng)物一定劑量的RSP組合物；取得對(duì)象的生物樣品；使該生物樣品與至少一種捕獲多肽接觸；進(jìn)而檢測(cè)該生物樣品中RSP組合物的生物利用度或者生物可利用的程度。
·
本發(fā)明的另一個(gè)方面是提供給予哺乳動(dòng)物對(duì)象RSP組合物的方法，給藥量取決于用上述檢測(cè)方法或者本說(shuō)明書(shū)描述的其他方法檢測(cè)的該劑量的生物可利用部分。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明方法還包括對(duì)照樣品，和進(jìn)行藥效學(xué)試驗(yàn)，通過(guò)比較樣品與對(duì)照兩者的檢測(cè)結(jié)果，測(cè)定生理標(biāo)志(例如激素、酶、血清蛋白、細(xì)胞因子、免疫調(diào)節(jié)劑，或者這些功能蛋白的效應(yīng)物或調(diào)節(jié)劑)的變化，并確定能引起所需藥效學(xué)參數(shù)變化的有效劑量。在某些實(shí)施方案中，觀察對(duì)象報(bào)告的行為改變、自覺(jué)癥狀改變，例如疼痛或疾病癥狀的減輕或其他間接效應(yīng)。在一些具體實(shí)施例中，所述哺乳動(dòng)物是小鼠或大鼠等嚙齒動(dòng)物，其他的實(shí)施例中，所述對(duì)象是人。本發(fā)明這個(gè)方面的某些實(shí)施方案，提供確定給予需要的受試對(duì)象RSP組合物合適劑量的方法包括(a)給予受試對(duì)象一個(gè)劑量RSP組合物；(b)取得受試對(duì)象的生物樣品；(c)使此生物樣品與至少一種捕獲多肽接觸；(d)檢測(cè)該生物樣品中RSP組合物各組分的水平；(e)任選地用不同劑量重復(fù)步驟(a)至(d) ；(g)將所測(cè)得的水平與預(yù)先確定的生物樣品中的RSP組合物合適水平作比較；其中所述合適劑量是導(dǎo)致生物樣品中RSP組合物達(dá)到預(yù)定合適水平的劑量。本發(fā)明的某些實(shí)施方案提供預(yù)測(cè)RSP組合物所含的有生物利用價(jià)值組分的方法。這種方法包括使含RSP組合物的樣品與RSP組合物給予和遞送后預(yù)期可到達(dá)部位原位的預(yù)定捕獲多肽接觸，測(cè)定RSP組合物與該捕獲多肽的結(jié)合。被大量RSP組合物結(jié)合，可表明較大比例的肽是與治療和/或生理相關(guān)的肽，結(jié)合較緊密(對(duì)每種肽測(cè)定其解離常數(shù))可能表示延長(zhǎng)那些肽體內(nèi)半衰期的保護(hù)作用。本發(fā)明的又一個(gè)方面提供根據(jù)從實(shí)驗(yàn)對(duì)象獲得的數(shù)據(jù)預(yù)測(cè)擬給予治療對(duì)象(如人)的RSP組合物的治療有效量的方法。在某些實(shí)施方案中，該方法包括給予非人哺乳動(dòng)物實(shí)驗(yàn)對(duì)象RSP組合物，測(cè)定該劑量的生物可利用部分(例如用本說(shuō)明書(shū)所述的定量測(cè)定方法)，測(cè)定功能讀出，根據(jù)從哺乳動(dòng)物實(shí)驗(yàn)對(duì)象獲得的數(shù)據(jù)和治療對(duì)象與實(shí)驗(yàn)對(duì)象之間的相關(guān)比率，預(yù)測(cè)擬給予治療對(duì)象的RSP組合物的治療有效量。為了本發(fā)明的目的，“功能讀出”可以是受試對(duì)象的表型或功能、受試對(duì)象細(xì)胞的表型或功能、或受試對(duì)象產(chǎn)生的一種或幾種液體的組成。功能讀出還可包括或者包括測(cè)量一種或幾種生物合成或代謝產(chǎn)生的組分，如激素、酶、血清蛋白、細(xì)胞因子、趨化因子、生長(zhǎng)因子、免疫調(diào)節(jié)劑，或所述功能讀出的效應(yīng)器或調(diào)節(jié)劑。在某些實(shí)施方式中，檢測(cè)步驟可以各種有規(guī)律或無(wú)規(guī)律的時(shí)間間隔后重復(fù)進(jìn)行，來(lái)測(cè)定給予RSP組合物后其生物利用度、代謝和/或清除的時(shí)間進(jìn)程。在某些實(shí)施方案中，可用此方法測(cè)定一組RSP組合物的血漿半衰期。在又一個(gè)實(shí)施方案中，可用此方法測(cè)定RSP組合物中一種肽類的半 衰期。在具體實(shí)施方案中，實(shí)驗(yàn)對(duì)象是嚙齒動(dòng)物，例如小鼠或大鼠。本發(fā)明另一個(gè)方面提供通過(guò)給予RSP組合物治療患者的有效方法，包括通過(guò)合成肽(例如簡(jiǎn)單地接著合并每輪延伸產(chǎn)生的多個(gè)肽，或同時(shí)利用合并的氨基酸單體)制備RSP組合物，制備所述RSP組合物的藥學(xué)上可接受的制劑，給予治療對(duì)象所述RSP組合物，取得治療對(duì)象的組織樣品，測(cè)定所述組織樣品中RSP組合物的含量和/或濃度，測(cè)定功能讀出，將RSP組合物含量與功能讀出相關(guān)聯(lián)，及調(diào)整給予治療對(duì)象的RSP組合物劑量以改善功能讀出。本發(fā)明的另一個(gè)方面是治療或預(yù)防治療對(duì)象產(chǎn)生不希望有的免疫應(yīng)答反應(yīng)的方法，包括給予治療對(duì)象合適劑量的RSP組合物，確定合適劑量可通過(guò)(i)給予治療對(duì)象一個(gè)劑量的RSP組合物；(ii)取得治療對(duì)象的生物樣品；(iii)使該生物樣品與至少一種捕獲多肽接觸；(iv)檢測(cè)生物樣品中該捕獲多肽的水平；(V)任選地用不同劑量重復(fù)步驟(i)至(iv) ；(vi)將測(cè)得的水平與預(yù)定的生物樣品中RSP組合物的合適水平作比較；其中合適劑量是導(dǎo)致生物樣品中RSP組合物達(dá)到預(yù)定合適水平的劑量。在前述某些方面和實(shí)施方案中，捕獲多肽是標(biāo)記的多肽。在某些實(shí)施方案中，捕獲多肽附著于固相支持物。在某些實(shí)施方案中，檢測(cè)和/或分離包含捕獲多肽的復(fù)合體和RSP組合物的一個(gè)或多個(gè)肽組分。在具體實(shí)施方案中，用對(duì)所述復(fù)合體而不是對(duì)捕獲多肽或RSP組合物的肽組分具有特異性的抗體來(lái)檢測(cè)和/或分離這種復(fù)合體。本發(fā)明另一個(gè)方面提供一種分離所選擇的組成RSP組合物的肽亞組的方法。在特別的例子中，該亞組由氨基酸序列不同的一種或多種肽組成。在其他例子中，可根據(jù)結(jié)合特異性利用捕獲多肽對(duì)RSP組合物所含組分分類。在某些實(shí)施方案中，分離含RSP組合物樣品中肽的方法包括(a)使該樣品與至少一種捕獲多肽接觸；(b)分離混合物中結(jié)合于捕獲多肽的肽。在這樣的實(shí)施方案中，捕獲多肽附著于固相支持物上。在一些實(shí)施方式中，捕獲多肽是表位示蹤或標(biāo)記的多肽。在一些實(shí)施方式中，該方法還包括分離與捕獲多肽結(jié)合的肽，以分離得到這些肽。在具體實(shí)施方式
中，該方法還包括測(cè)定該分離肽的特性，例如合并的分離肽中的氨基酸組成和/或分離肽的氨基酸序列。在某些實(shí)施方案中，鑒定在受試對(duì)象中RSP組合物的生物可利用肽的方法包括(a)給予受試對(duì)象RSP組合物；(b)在執(zhí)行步驟(a)后取得受試對(duì)象的生物樣品；(c)鑒定該樣品中結(jié)合于至少一種捕獲多肽的肽。在某些實(shí)施方案中，鑒定能結(jié)合捕獲多肽的肽亞組的方法包括按擬定方案制備RSP組合物，使所述RSP組合物與預(yù)先確定的捕獲多肽(如適合作為體內(nèi)靶標(biāo)或運(yùn)載體的多肽)接觸，測(cè)定RSP組合物中的結(jié)合肽，鑒定能區(qū)別結(jié)合肽和未結(jié)合肽的特征，制備能反映一種或多種差別特征的改進(jìn)的RSP組合物。本發(fā)明的另一個(gè)方面是改進(jìn)含RSP組分的組合物制備工藝的方法。在某些實(shí)施方案中，根據(jù)鑒定結(jié)合捕獲多肽的肽亞組的上述方法設(shè)計(jì)RSP組合物。在某些實(shí)施方案中，設(shè)計(jì)的RSP組合物其氨基酸組成和/或氨基酸序列接近于結(jié)合捕獲多肽的肽亞組的氨基酸組成和/或氨基酸序列。在某些實(shí)施方案中，RSP組合物與參比RSP組合物相比效力增強(qiáng)，其中參比RSP組合物與接觸捕獲多肽的最初RSP組合物的效力相同或基本相同。在其他實(shí)施方式中，RSP組合物的毒性比參比RSP組合物低。在可替代的實(shí)施方案中，一種方法包括按擬定方案制備RSP組合物，配制含RSP的組合物，通過(guò)檢測(cè)功能讀出的水平或程度確定所述組合物中生物可利用的RSP組分的含量，將功能讀出與標(biāo)準(zhǔn)值作比較，和調(diào)整擬定方案或組合物的配方以獲得滿意的生物利用度。本發(fā)明還有一個(gè)方面是通過(guò)將RSP組合物(例如參比RSP組合物或用本說(shuō)明書(shū)所述方法產(chǎn)生的改進(jìn)的RSP組合物)或RSP組合物的一個(gè)組分與受關(guān)注的治療劑締合而使該 藥物靶向特定組織，其中所述RSP組合物或其組分與具有組織特異性靶向性能的捕獲多肽結(jié)合，可將這種締合藥劑給予患者使所述藥物靶向能與相應(yīng)捕獲多肽結(jié)合的組織。本發(fā)明這一方面的一些實(shí)施方式提供了將治療劑轉(zhuǎn)運(yùn)到治療對(duì)象特定組織的方法，該方法包括(a)使RSP組合物與組織特異性肽接觸并分離混合物中結(jié)合于該組織特異性肽的肽，得到標(biāo)記肽；(b)將標(biāo)記肽與治療劑偶聯(lián)，(C)給予治療對(duì)象該偶聯(lián)物。本發(fā)明的其它實(shí)施方式包括通過(guò)上述方法的步驟(a)和(b)制備這種靶向治療劑的方法，及用此方法制備的靶向治療劑。本發(fā)明的又一個(gè)方面是上述方法之一中有用的組合物。本發(fā)明這一方面的一個(gè)實(shí)施方式是一種組合物，可用其檢測(cè)生物樣品中包含YEAK或YEAK肽的RSP組合物，這種組合物包含至少一種捕獲多肽。在一些實(shí)施方式中，所述捕獲多肽選自正常人血清、正常非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物血清、正常家兔血清、正常小鼠血清、正常大鼠血清、正常雪貂血清、正常豬血清、正常狗血清、正常馬血清、正常綿羊血清、正常母牛血清中的一種組分，哺乳動(dòng)物HDL蛋白質(zhì)組的一種組分，哺乳動(dòng)物L(fēng)DL蛋白質(zhì)組的一種組分，補(bǔ)體組分C3，載脂蛋白A-I前原蛋白，載脂蛋白A-II前原蛋白(載脂蛋白D)，補(bǔ)體組分C4A，胰蛋白酶抑制劑，間-α -胰蛋白酶抑制劑家族重鏈相關(guān)蛋白(IHRP)、α-I-B-糖蛋白，α-I-抗胰蛋白酶酶，載脂蛋白A_IV，血漿銅藍(lán)蛋白，未命名的蛋白產(chǎn)物(BLAST檢索表明它是IgM重鏈)，載脂蛋白E，補(bǔ)體因子B，前白蛋白，載脂蛋白C-III，a2-HS糖蛋白，載脂蛋白J前體，IgM的C鏈，免疫球蛋白λ輕鏈，凝血因子ΙΙ(凝血酶)，IgK輕鏈V-III (KAU冷凝集素)，載脂蛋白J前體，Ig Al Bur,富含組氨酸的糖蛋白前體，a -2-HS糖蛋白，凝溶膠蛋白同工型a前體,抑制劑Kunitz型蛋白酶，未命名的蛋白產(chǎn)物(NCBI基因座/登記號(hào)NO.CAA28659)，及IgJ-鏈。在上述任何一個(gè)實(shí)施方式和任何一個(gè)方面中，所述RSP組合物包括YEAK肽或YFAK肽。YEAK肽或YFAK肽是本領(lǐng)域已知的，下面對(duì)其進(jìn)行描述，它們是RSP組合物所包含的肽，可稱為YFAK RSP組合物或YEAK RSP組合物。另外，不依賴于選擇YFAK或選擇YEAK肽，在具體實(shí)施方式
中，捕獲多肽可以是血清結(jié)合蛋白。在更具體的實(shí)施方式中，捕獲多肽選自α -I-抗胰蛋白酶，載脂蛋白A-I、α _1_Β_糖蛋白、載脂蛋白A_IV、載脂蛋白D和前白蛋白，或選自本段落前一段所枚舉的捕獲多肽，或選自本說(shuō)明書(shū)公開(kāi)的血清多肽。在上述任何一個(gè)實(shí)施方式中，RSP組合物所含肽可在生理上相關(guān)的其它組分存在下與捕獲多肽(例如血清蛋白)進(jìn)行結(jié)合。在具體實(shí)施方式
中，其它組分是脂質(zhì)，如膽固醇或甘油三酯。在具體實(shí)施方式
中，其它組分是除捕獲多肽外基本上沒(méi)有蛋白成分的HDL或LDL復(fù)合物。
附圖的簡(jiǎn)單描述圖I是測(cè)定RSP組合物與血清結(jié)合蛋白(已結(jié)合于支持物上)結(jié)合所用的試驗(yàn)的示意圖。在血清蛋白被鑒定后，將其結(jié)合于固相支持物。將RSP組合物(單獨(dú)或包含于血清中)加到支持物上。加入抗RSP組合物(或抗RSP組合物與血清蛋白的偶聯(lián)物)的第一抗體，再用第二抗體和檢測(cè)試劑檢測(cè)第一抗體與其靶標(biāo)的結(jié)合。
圖2顯示當(dāng)抗體結(jié)合于它們的靶標(biāo)后，結(jié)合了抗YFAK和抗YEAK抗體的HRP組合物的A450比色吸光度。靶標(biāo)包括含有與正常人血清中所含(或所加)血清蛋白結(jié)合的YFAK和YEAK肽的RSP組合物。在RSP組合物濃度較高時(shí)，用抗YFAK和抗YEAK抗體檢測(cè)的偶合物高于較低濃度RSP組合物。在病人中，12. 5ng/mL對(duì)應(yīng)于大約2mg劑量。圖3顯示能結(jié)合PI-2301或考帕松(Copaxone)的血清蛋白列表。血清蛋白的來(lái)源是正常小鼠血清或正常人血清(已標(biāo)明)。PI-2301可以是乙?；蚍且阴；?。用抗YFAK和抗YEAK抗體識(shí)別PI-2301或考帕松的結(jié)合復(fù)合體，并用第二抗體和檢測(cè)試劑加以檢測(cè)。洗脫該復(fù)合體中的血清蛋白并鑒定。根據(jù)檢測(cè)試劑的A450吸光度給蛋白評(píng)分。與背景吸光度相比，70分對(duì)應(yīng)的P值< O. 001，認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著意義。圖4顯示小鼠靜脈內(nèi)給予4mg/kg或皮下給予21mg/kg劑量的YEAK后血清中的YEAK,用比色法和偶聯(lián)有HRP的抗-YEAK抗體檢測(cè)YEAK與其結(jié)合于正常人血清所含血清蛋白的靶標(biāo)YEAK肽結(jié)合后的A450吸光度。該圖顯示，給予GA(乙酸格拉默)片段后約15分鐘,GA達(dá)到了血清最高濃度1800ng/mL。皮下給予Copaxone 的估計(jì)生物利用度為靜脈給予Copaxone⑧的12%。給藥后2小時(shí)仍可測(cè)到GA組分。圖5顯示給予小鼠YEAK后血清或血漿中對(duì)YEAK應(yīng)答產(chǎn)生的可溶性因子緊急釋放的示范例，此例中為CCL22，也稱為MDC。如該圖所示，皮下給予小鼠的YEAK劑量與觀察到的最大CCL22血漿濃度之間存在線性相關(guān)。圖6顯示用LC-MS觀察從固定于CNBr-S^h柱的YEAK片段洗脫所得血清蛋白的肽圖像。用Mascot搜索引擎鑒定肽序列。簡(jiǎn)言之，將胰蛋白酶消化產(chǎn)生的YEAK片段偶聯(lián)于溴化氰Sepharose (CNBr-Seph) 4b,與人或小鼠血清一起室溫培育2小時(shí)。用0. IM甘氨酸-鹽酸，PH 2. 8液洗脫結(jié)合于YEAK片段的血清蛋白，在50%甲醇/50mM碳酸氫銨中用胰蛋白酶消化，干燥后用液相色譜法(LC)分離，除去溶劑，電離后噴霧到質(zhì)譜儀(MS)中，直視觀察并用Mascot搜索引擎鑒定。圖7顯示用圖I所示的本發(fā)明方法進(jìn)行ELISA試驗(yàn)，其中，將YEAK加入到男性和女性正常人血清后合并男性和女性正常人血清。該試驗(yàn)顯示檢測(cè)血清YEAK濃度的線性范圍在l-100ng/ml之間。用小鼠血清或用無(wú)關(guān)對(duì)照,如抗匙孔戚血蘭蛋白(anti-Keyole LimpetHemocyanin, KLH)多克隆血清,不能重復(fù)該試驗(yàn)。圖8 顯示第 P53218 和 119142 批次 Copaxone (YEAK)分子量的 SE-HPLC 圖形，二批的圖形相似。圖9顯示用圖I所示本發(fā)明方法檢測(cè)圖8中兩批Copaxone⑧的結(jié)果。

圖10顯示，對(duì)圖8和圖9所用的兩批Copaxone 作的生物試驗(yàn)，其中單核細(xì)胞系RAW264. 7細(xì)胞接觸YEAK后以濃度依賴方式釋放CCL22。
圖11顯示，用MALDI-T0F檢測(cè)，長(zhǎng)度明確不同的YEAK共聚體的實(shí)際平均分子量與理論平均分子量之間有嚴(yán)格的線性關(guān)系。將計(jì)算的理論值乘以共聚體的氨基酸長(zhǎng)度，即
20、40、60和80乘以一個(gè)氨基酸加一個(gè)水分子的理論平均分子量。用Y、E、A和K各自的質(zhì)量減去在氨基酸偶聯(lián)過(guò)程中丟失的一個(gè)水分子的質(zhì)量，計(jì)算出一個(gè)氨基酸的理論質(zhì)量，這4個(gè)氨基酸的比例為1.0 : 1.5 : 4.5 : 3.6。圖12顯示固相合成制備的長(zhǎng)度不同YEAK共聚體的氨基酸分析，按100個(gè)氨基酸標(biāo)準(zhǔn)化后的輸出比例，以及對(duì)圖8、9和10所示的兩批Copaxone 進(jìn)行的相同分析。用含20、40、60和80個(gè)氨基酸的YEAK共聚體產(chǎn)生標(biāo)準(zhǔn)曲線。為了比較，也用Copaxone產(chǎn)生標(biāo)準(zhǔn)曲線。圖12顯示YEAK共聚體的大小與基于競(jìng)爭(zhēng)性ELISA的PK試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果之間的關(guān)系。20-聚YEAK共聚體的抑制作用很小，但用80-聚YEAK共聚體產(chǎn)生的標(biāo)準(zhǔn)曲線與用Copaxone獲得的曲線重疊。
圖13顯示ELISA試驗(yàn)結(jié)果,其中家兔多克隆血清的Ig組分與Copaxone 相互作用強(qiáng)烈，表明隨著固相合成的YEAK共聚體長(zhǎng)度增加，其識(shí)別能力也提高。圖14顯示用先前PCT公開(kāi)文本W(wǎng)02009/075854(其內(nèi)容納入本說(shuō)明書(shū)作參考的)所描述的PK方法與固相合成的YEAK共聚體所作的ELISA試驗(yàn)結(jié)果，證明YEAK共聚體的大小與用上述試驗(yàn)方法測(cè)得的結(jié)果之間相關(guān)。圖15顯示，單核細(xì)胞系RAW264. 7細(xì)胞與圖12、13和14所示固相合成的大小不同的共聚體一起培育后，隨著共聚體長(zhǎng)度的增加，CCL22的產(chǎn)量也增加。圖16顯示，圖8、9、10和12所用的兩批Copaxone 與圖12、13、14和15所用的固相合成的長(zhǎng)度不同的YEAK共聚體,能在體內(nèi)誘導(dǎo)用2. 5mg/kg Copaxone⑧每周一次X 3周免疫的小鼠的脾細(xì)胞增殖。最后一次皮下給予后，收集脾臟，制備細(xì)胞懸液，將脾細(xì)胞與不同濃度的不同共聚體一起培養(yǎng)4天。用本領(lǐng)域熟知的方法通過(guò)測(cè)定氘化胸腺嘧啶的摻入檢測(cè)脾細(xì)胞增殖。
發(fā)明詳述
含隨機(jī)序列聚合物的組合物為描述本發(fā)明目的的含隨機(jī)序列聚合物(RSP)的組合物，可以是一種以不同比例包含兩個(gè)或多個(gè)隨機(jī)順序氨基酸殘基的氨基酸聚合物(典型地為通過(guò)肽鍵相連)的任意混合物，當(dāng)給予哺乳動(dòng)物時(shí)可用于激發(fā)或減弱某些免疫反應(yīng)或其他反應(yīng)。因?yàn)樾蛄谢旌偷碾S機(jī)多樣性,該混合物中存在大量肽序列。肽序列的這種多樣性可賦予比多樣性差的組合物更聞的效能。RSP組合物的定義包括一組聚合物的氨基酸序列和這些氨基酸的摩爾比。例如，以YFAK命名的RSP組合物含有酪氨酸(Y)、苯丙氨酸(F)、丙氨酸(A)和賴氨酸(K)，但不表示該聚合物的氨基酸順序就是Y-F-A-K，這些氨基酸殘基是隨機(jī)摻入序列中的，因此，該RSP組合物包含具有各種順序Y、F、A、K的肽，并且沒(méi)有或基本上沒(méi)有其它氨基酸。相對(duì)摩爾比的表示有兩種方式輸入摩爾比和輸出摩爾比?！拜斎肽柋取敝负铣蒖SP所用氨基酸的摩爾比。例如，如果所述RSP的Y F A K輸入摩爾比為I : I : 10 : 6，那么用固體相合成法合成時(shí)，對(duì)于每輪循環(huán)延伸，將受保護(hù)的Y、F、A和K氨基酸以摩爾比I : I : 10 : 6混和的混合物通過(guò)反應(yīng)延伸肽鏈。另一方面，“輸出摩爾比”指產(chǎn)物RSP肽中所見(jiàn)氨基酸的摩爾比。通過(guò)分析RSP組合物的氨基酸含量測(cè)定輸出摩爾比。輸入與輸出摩爾比不同是由于氨基酸摻入效率的差異所致。合適的RSP 包括在 PCT 國(guó)際公開(kāi)出版物 W 00/05250、TO00/0524、WO 02/59143、WO 0027417、WO 96/32119，美國(guó)專利申請(qǐng) US2008/0021192,2004/003888,2002/005546,2003/0004099、2003/0064915 和 2002/0037848，美國(guó)專利 6，514，938、5，800，808 和5，858，964中描述的和PCT申請(qǐng)PCT/US05/06822中描述的那些。這些文獻(xiàn)描述了合成RSP的方法，含RSP的組合物，RSP的治療制劑，給予受試對(duì)象RSP組合物的方法，可用RSP治療的疾病，及可與RSP同時(shí)給予受試對(duì)象的治療有效藥物。本發(fā)明所用的另外的RSP和合成它們的方法可參見(jiàn)文獻(xiàn)，如 Shukaliak Quandt, J.等· (2004)Mol. Immunol. 40(14-15)1075-87 ；Montaudo, MS (2004)J. Am. Soc. Mass Spectrom. 15 (3) :374-84 ；Takeda,N.等· (2004) J. Control Release 95(2) :343-55 ;Pollino，JM 等· (2004) J. Am. Chem.Soc.126(2) :563-7 ；Fridkis-Hareli, M 等· (2002)J.Clin Invest.109(12) :1635-43 ；Williams，DM 等· (2000) J. Biol. Chem. 275(49) :38127-30 ；Tselios,T.等· (2000)Bioorg.Med. Chem. 8(8) :1903-9 和 Cady, CT 等· (2000) J. Immunol. 165(4) : 1790-8。所有這些專 利、專利申請(qǐng)和出版物的完整內(nèi)容均納入本說(shuō)明書(shū)作為參考，特別是其中所描述的RSP的結(jié)構(gòu)、制備和功能。某些RSP可包含適量帶正電的氨基酸如賴氨酸或精氨酸，和帶負(fù)電的氨基酸(含量宜較少)如谷氨酸或天冬氨酸，任選地與電中性的氨基酸如丙氨酸或甘氨酸(起填充作用)聯(lián)合，任選地還可進(jìn)一步包含適合賦予共聚體免疫原性的氨基酸，例如芳族氨基酸如酪氨酸或色氨酸。這類組合物可包含WO 00/005250中所述的任何一種氨基酸，其全部?jī)?nèi)容納入本說(shuō)明書(shū)作為參考，特別關(guān)注所披露的討論RSP結(jié)構(gòu)、制備和功能的那些部分。在本發(fā)明的某些實(shí)施方式中，RSP組合物是一種聚合物的混合物，這些聚合物包含隨機(jī)或部分隨機(jī)組成的氨基酸序列和含有以下四組氨基酸(a)帶正電氨基酸，即賴氨酸和精氨酸；(b)帶負(fù)電氨基酸，即谷氨酸和天冬氨酸；(C)小的中性氨基酸，即丙氨酸、蘇氮酸、絲氨酸和甘氨酸；(d)大的氨基酸，即亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸。這類RSP的具體實(shí)施方式
有YEAK (包括下文描述的Cop-l)、VEAK和FEAK。在其它實(shí)施方式中，RSP是由三個(gè)氨基酸組成的三聚體，選自上述四組中三組的各個(gè)氨基酸。具體的實(shí)施方式有YAK，YEK, KEA和YEA，下文中有進(jìn)一步描述。在本發(fā)明的其它實(shí)施方式中，RSP組合物是由隨機(jī)或部分隨機(jī)氨基酸序列組成的聚合物的混和物，含有(a)谷氨酸，(b)天冬氨酸和選自以下各組的氨基酸(C)小中性氨基酸，即丙氨酸、蘇氮酸、絲氨酸和甘氨酸；和(d)疏水性氨基酸，即纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸。這類RSP的具體實(shí)施方式
為DALE、DAIE、DAVE、DGLE、DGIE和DGVE。本發(fā)明有用的RSP的其它實(shí)施方式是不含疏水性氨基酸的RSP。
具體實(shí)施方式
是DASE、DATE、DGSE和DGTE。其他合適的RSP是具有隨機(jī)或部分隨機(jī)的氨基酸序列并含有選自以下四組之一氨基酸的聚合物的混和物(a)帶負(fù)電氨基酸，即天冬氨酸和谷氨酸；(b)小脂族氨基酸，即丙氨酸和甘氨酸；(C)疏水性氨基酸，即亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、甲硫氨酸；和(d)含小疏水側(cè)鏈的氨基酸(如絲氨酸、半胱氨酸、蘇氨酸)，此外，所述共聚體可包含脯氨酸殘基。在一種實(shí)施方式中，所述共聚體由氨基酸谷氨酰胺(E)和/或天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)、絲氨酸(S)和丙氨酸(A)產(chǎn)生，本說(shuō)明書(shū)稱之為"ELSA"共聚體。在某些其他實(shí)施方式中，RSP是隨機(jī)或部分隨機(jī)氨基酸序列的混和物，含有以下四組的氨基酸(a)帶負(fù)電氨基酸(如天冬氨酸和谷氨酸)；(b)疏水性脂族氨基酸，即亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、甲硫氨酸；大疏水性氨基酸，即酪氨酸、苯丙氨酸；和(d)有小中性側(cè)鏈的氨基酸，即絲氨酸、蘇氮酸、丙氨酸、甘氨酸；此外，所述共聚體可含脯氨酸殘基。一種示例性共聚體由氨基酸殘基谷氨酰胺(E)和/或天冬天氨酸(D)、亮氨酸(L)、酪氨酸(Y)和纈氨酸(V)形成，本說(shuō)明書(shū)稱之為"DLYV"共聚體。RSP的其他具體實(shí)施方式
是VYAK、VffAK和YFAK，下文有進(jìn)一步描述。在還有的其他實(shí)施方式中，適合用于本發(fā)明的RSP包含氨基酸殘基K、E、A、S、V和任選的P。更優(yōu)選，K E A S V 的比例是 O. 3 : O. 7 : 9 : O. 5 : O. 5 : O. 3。RSP 優(yōu)選長(zhǎng)約 10-100個(gè)氨基酸殘基，更優(yōu)選長(zhǎng)約20-80個(gè)個(gè)氨基酸殘基，甚至更優(yōu)選長(zhǎng)約40-60個(gè)氨基酸殘基，最優(yōu)選長(zhǎng)約50個(gè)氨基酸殘基。典型的RSP制備物是各種長(zhǎng)度肽的混合物，主要是所需長(zhǎng)度的肽，但可含有某些較短或較長(zhǎng)的肽。一種適合于本說(shuō)明書(shū)描述的組合物和方法的特異性RSP是YEAK，它包含L-丙氨 酸㈧、L-谷氨酸(E)、L-賴氨酸⑷和L-酪氨酸⑴的組合，帶凈正電荷。一具體實(shí)施方式
是共聚體I (Cop-I),也稱為glatiramer acetate。幾個(gè)國(guó)家已批準(zhǔn)用Cop-I來(lái)治療多發(fā)性硬皮癥(MS)，其商品名為C0PAX0NETM(Teva藥物有限公司的商標(biāo)，Petah Tikva,以色列)。由于Cop-I是隨機(jī)多肽的混合物，可能它包含的肽的所有亞組或只有一個(gè)亞組是“活性肽”。受關(guān)注的Cop-IRSP分子量約2，000—13, 000道爾頓(Da)。Cop-I的平均分子量約4，700—13, OOODa，但也可包含較小和較大的肽。最受關(guān)注的Cop-I的平均分子量約
5,000—9, OOODa0因此，Cop-IRSP可以是由長(zhǎng)約15-100個(gè)氨基酸殘基(優(yōu)選長(zhǎng)約40-80個(gè)氨基酸殘基)組成的肽。在一種具體實(shí)施方式
中，Cop-IRSP的長(zhǎng)度在35—75個(gè)氨基酸殘基之間。更優(yōu)選的Cop-IRSP長(zhǎng)度在35—65個(gè)氨基酸殘基之間。在一種具體實(shí)施方式
中，Cop-I長(zhǎng)約50個(gè)氨基酸。在另一種具體實(shí)施方式
中，Cop-I長(zhǎng)約52個(gè)氨基酸。在某些實(shí)施方式中，用本領(lǐng)域熟知的液相或固相化學(xué)合成的Cop-I的平均輸出摩爾比Y E A K分別約為I. O : 2.0 : 6.0 : 5.0。與傳統(tǒng)的肽合成相反，但與其他RSP的制備相似，進(jìn)行Cop-I的合成是通過(guò)加入明確比例的受適當(dāng)保護(hù)的Y、E、A和K的混合物，而不是每輪只加入一種氨基酸。輸出比例的差異范圍在不同氨基酸之間約為10%。優(yōu)選形式Cop-I的分子量范圍和制備方法可參見(jiàn)美國(guó)專利No. 5，800，808，其全部?jī)?nèi)容納入本說(shuō)明書(shū)，特別是其中描述的RSP的結(jié)構(gòu)、制備和功能。在含約52個(gè)氨基酸殘基的Cop-IRSP的某些實(shí)施方式中，31_52位氨基酸中丙氨酸組分的比例高于11-30位氨基酸中的比例，和11-30位氨基酸中丙氨酸組分的比例高于1-10位氨基酸中的比例。在一種具體實(shí)施方式
中，Cop-IRSP序列中的1-10位殘基中的輸出摩爾比為約1.0 2. O 5. 5 5.0，而11-30位殘基的輸出摩爾比約為1.0 2.0 6.0 5. O ;31-52位殘基的輸出摩爾比約為L(zhǎng) O 2. O 6. 5 5. 0，以上標(biāo)示的所有比例是按Y、E、A、K順序的摩爾比。就本發(fā)明的目的而言，短語(yǔ)“Cop-Ι或Cop-I-相關(guān)肽或多肽”意味著包括與髓磷脂堿性蛋白(MBP)有功能交叉反應(yīng)、在抗原提呈中能與MBP競(jìng)爭(zhēng)MHC II類分子的任何肽或多肽。對(duì)于本說(shuō)明書(shū)所述的用途，預(yù)期如果只進(jìn)行以下一個(gè)或幾個(gè)氨基酸的替換，即天冬氨酸
(D)替換谷氨酸(E)，甘氨酸(G)替換丙氨酸(A)，精氨酸(R)替換賴氨酸(K)，色氨酸(W)替換酪氨酸(Y)，可保留Cop-I的活性。
在其他實(shí)施方式中，RSP組合物包含以下組別的三種不同氨基酸(a)帶負(fù)電氨基酸(如天冬氨酸和谷氨酸)；(b)疏水性脂族氨基酸，即亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、甲硫氨酸；(c)大疏水性氨基酸，即酪氨酸、苯丙氨酸；和(d)小中性側(cè)鏈氨基酸，即絲氨酸、蘇氮酸、丙氨酸、甘氨酸；此外，所述共聚體可包含脯氨酸殘基。這些共聚體在本說(shuō)明書(shū)中指“三聚體”。平均分子量在約2，000-40, OOODa之間，優(yōu)選在約3，000—35，OOODa之間。在一種更具體實(shí)施方式
中，平均分子量約5，000—25，OOODa。以下表格中顯示了示例的三聚體。這些三元共聚體的氨基酸平均摩爾分?jǐn)?shù)可以不同，顯示為一般范圍。表A適合于本發(fā)明使用的三元共聚體
權(quán)利要求
1.一種檢測(cè)RSP組合物的方法，包括以下步驟 a.提供一種或多種捕獲多妝的基本純制劑； b.使一種或多種捕獲多肽附著于定量檢測(cè)RSP組合物的工具；和 c.測(cè)定RSP組合物與一種或多種所述捕獲多肽的結(jié)合。
2.一種改進(jìn)RSP組合物設(shè)計(jì)的方法，包括以下步驟 a.提供一種或多種捕獲多妝的基本純制劑； b.使一種或多種捕獲多肽附著于定量檢測(cè)RSP組合物的工具； c.測(cè)定RSP組合物與一種或多種所述捕獲多肽的結(jié)合； d.調(diào)整所述RSP組合物的設(shè)計(jì)以增加或減少所述RSP組合物與一種或多種捕獲多肽的結(jié)合； e.重復(fù)步驟(C)； f.任選地重復(fù)步驟(c_e), 其中調(diào)整所述RSP組合物的設(shè)計(jì)導(dǎo)致提高其生物利用度、減小毒性和提高效能中的一種或多種。
3.一種檢測(cè)RSP組合物中肽種類的方法，包括以下步驟 a.提供一種或多種捕獲多妝的基本純制劑； b.使一種或多種捕獲多肽附著于固體支持物上； c.使所述固體支持物與RSP組合物接觸；和 d.測(cè)定所述RSP組合物中單個(gè)肽種類與固體支持物的結(jié)合。
4.一種改進(jìn)RSP組合物中肽種類設(shè)計(jì)的方法，包括以下步驟 a.提供一種或多種捕獲多妝的基本純制劑； b.使一種或多種捕獲多肽附著于固體支持物上； c.使所述固體支持物與RSP組合物接觸； d.測(cè)定所述RSP組合物中單個(gè)肽種類與固體支持物的結(jié)合； e.調(diào)整所述RSP組合物的設(shè)計(jì)以增加或減少所述RSP組合物與一種或多種捕獲多肽的結(jié)合； f.重復(fù)步驟⑷； g.任選地重復(fù)步驟(d-f), 其中調(diào)整所述RSP組合物的設(shè)計(jì)導(dǎo)致提高生物利用度、減小毒性和提高效能中的一種或多種。
5.如權(quán)利要求1-4之一所述的方法，其中(a)所述一種或多種捕獲多肽通過(guò)以下步驟進(jìn)行鑒定 i.使RSP組合物附著于固體支持物上； .使(i)中所述固體支持物與含蛋白質(zhì)生物液體接觸； iii.鑒定特異性結(jié)合于(i)所述固體支持物的(ii)所述的蛋白質(zhì)； 其中，Qi)中的蛋白質(zhì)是一種捕獲多肽。
6.如權(quán)利要求1-5之一所述的方法，其中所述捕獲多肽選自補(bǔ)體組分C3，載脂蛋白A-I前原蛋白，載脂蛋白A-II前原蛋白(載脂蛋白D)，補(bǔ)體組分C4A，胰蛋白酶抑制劑，間-α-胰蛋白酶抑制劑家族重鏈相關(guān)蛋白(IHRP)、α-I-B-糖蛋白，α-I-抗胰蛋白酶，載脂蛋白A-IV，血漿銅藍(lán)蛋白，未命名的蛋白產(chǎn)物(NCBI基因座/登錄號(hào)No. CAA34971)，載脂蛋白E，補(bǔ)體因子B，前白蛋白，載脂蛋白C-III，a2-HS糖蛋白，載脂蛋白J前體，C鏈，IgM，免疫球蛋白λ輕鏈，凝血因子II (凝血酶)，IgK鏈V-III (KAU冷凝集素)，載脂蛋白J前體，Ig Al Bur，富含組氨酸的糖蛋白前體，a-2-HS糖蛋白，凝溶膠蛋白同工型a前體，抑制劑Kunitz型蛋白酶，未命名的蛋白產(chǎn)物(NCBI基因座/登記號(hào)No. CAA28659)，及IgJ-鏈。
7.一種測(cè)定RSP組合物存在的方法，包括以下步驟 a.將一種或多種蛋白質(zhì)附著于定量檢測(cè)樣品中所述RSP組合物的工具，所述一種或多種蛋白質(zhì)選自以下物質(zhì)補(bǔ)體組分C3，載脂蛋白A-I前原蛋白，載脂蛋白A-II前原蛋白(載脂蛋白D)，補(bǔ)體組分C4A，胰蛋白酶抑制劑，間-α -胰蛋白酶抑制劑家族重鏈相關(guān)蛋白(IHRP)、α-I-B-糖蛋白，α-I-抗胰蛋白酶，載脂蛋白A_IV，血漿銅藍(lán)蛋白，未命名的蛋白產(chǎn)物(NCBI基因座/登錄號(hào)NO.CAA34971)，載脂蛋白E，補(bǔ)體因子B，前白蛋白，載脂蛋白C-III，a2-HS糖蛋白，載脂蛋白J前體，C鏈，IgM，免疫球蛋白λ輕鏈，凝血因子ΙΙ(凝血酶)，IgK鏈V-III (KAU冷凝集素)，載脂蛋白J前體，IgAI Bur，富含組氨酸的糖蛋白前體，a -2-HS糖蛋白，凝溶膠蛋白同工型a前體,抑制劑Kunitz型蛋白酶,未命名的蛋白產(chǎn)物(NCBI基因座/登記號(hào)No. CAA28659)，及IgJ-鏈；和 b.測(cè)定所述樣品中所述RSP組合物的水平。
8.如權(quán)利要求1-4之一所述的方法，其中所述捕獲多肽選自補(bǔ)體組分C3，載脂蛋白A-I前原蛋白，載脂蛋白A-II前原蛋白(載脂蛋白D)，補(bǔ)體組分C4A，胰蛋白酶抑制劑，間-α-胰蛋白酶抑制劑家族重鏈相關(guān)蛋白(IHRP)、α-I-B-糖蛋白，α-I-抗胰蛋白酶，載脂蛋白A-IV，血漿銅藍(lán)蛋白，未命名的蛋白產(chǎn)物(NCBI基因座/登錄號(hào)No. CAA34971)，載脂蛋白Ε，補(bǔ)體因子B，前白蛋白，載脂蛋白C-III，a2-HS糖蛋白，載脂蛋白J前體，C鏈，IgM，免疫球蛋白λ輕鏈，凝血因子II (凝血酶)，IgK鏈V-III (KAU冷凝集素)，載脂蛋白J前體，IgAI Bur，富含組氨酸的糖蛋白前體，a-2-HS糖蛋白，凝溶膠蛋白同工型a前體，抑制劑Kunitz型蛋白酶，未命名的蛋白產(chǎn)物(NCBI基因座/登記號(hào)No. CAA28659)，及IgJ-鏈。
9.一種檢測(cè)生物樣品中RSP組合物存在的方法，包括以下步驟 a.將生物樣品與正常人血清、正常非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物血清、正常家兔血清、正常小鼠血清、正常大鼠血清、正常雪貂血清、正常豬血清、正常狗血清、正常馬血清、正常綿羊血清、正常母牛血清中所含的至少一種捕獲多肽接觸；和 b.檢測(cè)捕獲多肽與RSP組合物的結(jié)合存在與否， 其中，存在這種結(jié)合表明生物樣品中RSP組合物的存在。
10.如權(quán)利要求9所述的方法，其中所述捕獲多肽選自包括HDL蛋白質(zhì)組、LDL蛋白質(zhì)組的至少一種組分或至少一種血清蛋白的多肽。
11.如權(quán)利要求9所述的方法，其中所述RSP組合物包含YFAK肽。
12.如權(quán)利要求9所述的方法，其中所述RSP組合物包含YEAK肽。
13.一種檢測(cè)生物樣品中包含YFAK肽或YEAK肽的RSP組合物存在的方法，包括以下步驟 a.將生物樣品與至少一種捕獲多肽接觸，所述捕獲多肽包括選自以下物質(zhì)的肽補(bǔ)體組分C3，載脂蛋白A-I前原蛋白，載脂蛋白A-II前原蛋白(載脂蛋白D)，補(bǔ)體組分C4A，胰蛋白酶抑制劑，間-α-胰蛋白酶抑制劑家族重鏈相關(guān)蛋白(IHRP)、α-I-B-糖蛋白，α-I-抗胰蛋白酶，載脂蛋白A-IV，血漿銅藍(lán)蛋白，未命名的蛋白產(chǎn)物(NCBI基因座/登錄號(hào)NO.CAA34971)，載脂蛋白Ε，補(bǔ)體因子B，前白蛋白，載脂蛋白C-III，a2_HS糖蛋白，載脂蛋白J前體，C鏈，IgM，免疫球蛋白λ輕鏈，凝血因子II (凝血酶)，IgK鏈V-III (KAU冷凝集素)，載脂蛋白J前體，Ig Al Bur，富含組氨酸的糖蛋白前體，a-2-HS糖蛋白，凝溶膠蛋白同工型a前體，抑制劑Kunitz型蛋白酶，未命名的蛋白產(chǎn)物(NCBI基因座/登記號(hào)No. CAA28659)，及 IgJ-鏈；和 b.檢測(cè)捕獲多肽與RSP組合物的結(jié)合存在與否， 其中，存在這種結(jié)合表明生物樣品中YFAK肽或YEAK肽的存在。
14.一種測(cè)定生物樣品中包含YFAK肽或YEAK肽的RSP組合物含量的方法，包括以下步驟 a.將生物樣品與至少一種捕獲多肽接觸，所述捕獲多肽包括選自以下物質(zhì)的肽補(bǔ)體組分C3，載脂蛋白A-I前原蛋白，載脂蛋白A-II前原蛋白(載脂蛋白D)，補(bǔ)體組分C4A，胰蛋白酶抑制劑，間-α-胰蛋白酶抑制劑家族重鏈相關(guān)蛋白(IHRP)、α-I-B-糖蛋白，α -I-抗胰蛋白酶，載脂蛋白A-IV，血漿銅藍(lán)蛋白，未命名的蛋白產(chǎn)物(NCBI基因座/登錄號(hào)NO.CAA34971)，載脂蛋白Ε，補(bǔ)體因子B，前白蛋白，載脂蛋白C-III，a2_HS糖蛋白，載脂蛋白J前體，C鏈，IgM，免疫球蛋白λ輕鏈，凝血因子II (凝血酶)，IgK鏈V-III (KAU冷凝集素)，載脂蛋白J前體，Ig Al Bur，富含組氨酸的糖蛋白前體，a-2-HS糖蛋白，凝溶膠蛋白同工型a前體，抑制劑Kunitz型蛋白酶，未命名的蛋白產(chǎn)物(NCBI基因座/登記號(hào)No. CAA28659)，及 IgJ-鏈；和 b.定量測(cè)定捕獲多肽與RSP組合物的結(jié)合水平， 其中，結(jié)合水平表示生物樣品中RSP組合物的量。
15.一種測(cè)定含YFAK肽或YEAK肽的RSP組合物在哺乳動(dòng)物體內(nèi)生物利用度的方法，包括以下步驟 a.給予哺乳動(dòng)物一個(gè)劑量的含RSP組合物的組合物； b.從受試對(duì)象取生物樣品； c.將該生物樣品與至少一種捕獲多肽接觸，所述捕獲多肽包括選自以下物質(zhì)的肽補(bǔ)體組分C3，載脂蛋白A-I前原蛋白，載脂蛋白A-II前原蛋白(載脂蛋白D)，補(bǔ)體組分C4A，胰蛋白酶抑制劑，間-α-胰蛋白酶抑制劑家族重鏈相關(guān)蛋白(IHRP)、α-I-B-糖蛋白，α-I-抗胰蛋白酶，載脂蛋白A-IV，血漿銅藍(lán)蛋白，未命名的蛋白產(chǎn)物(NCBI基因座/登錄號(hào)No. CAA34971)，載脂蛋白Ε，補(bǔ)體因子B，前白蛋白，載脂蛋白C-III，a 2-HS糖蛋白，載脂蛋白J前體，C鏈，IgM，免疫球蛋白λ輕鏈，凝血因子II (凝血酶)，IgK鏈V-III (KAU冷凝集素)，載脂蛋白J前體，Ig Al Bur，富含組氨酸的糖蛋白前體，α-2-HS糖蛋白，凝溶膠蛋白同工型a前體，抑制劑Kunitz型蛋白酶，未命名的蛋白產(chǎn)物(NCBI基因座/登記號(hào)No. CAA28659)，及 IgJ-鏈； 從而確定生物樣品中RSP組合物的生物利用度。
16.一種確定對(duì)有需要的對(duì)象給予含YFAK或YEAK肽RSP組合物的合適劑量的方法，包括以下步驟 a.給予受試對(duì)象一個(gè)劑量RSP組合物； b.從受試對(duì)象取生物樣品；C.使生物樣品與至少一種捕獲多肽接觸，所述捕獲多肽包括選自以下物質(zhì)的肽補(bǔ)體組分C3，載脂蛋白A-I前原蛋白，載脂蛋白A-II前原蛋白(載脂蛋白D)，補(bǔ)體組分C4A，胰蛋白酶抑制劑，間-α-胰蛋白酶抑制劑家族重鏈相關(guān)蛋白(IHRP)、α-I-B-糖蛋白，α-I-抗胰蛋白酶，載脂蛋白A-IV，血漿銅藍(lán)蛋白，未命名的蛋白產(chǎn)物(NCBI基因座/登錄號(hào)No. CAA34971)，載脂蛋白Ε，補(bǔ)體因子B，前白蛋白，載脂蛋白C-III，a 2-HS糖蛋白，載脂蛋白J前體，C鏈，IgM，免疫球蛋白λ輕鏈，凝血因子II (凝血酶)，IgK鏈V-III (KAU冷凝集素)，載脂蛋白J前體，Ig Al Bur，富含組氨酸的糖蛋白前體，α-2-HS糖蛋白，凝溶膠蛋白同工型a前體，抑制劑Kunitz型蛋白酶，未命名的蛋白產(chǎn)物(NCBI基因座/登記號(hào)No. CAA28659)，及 IgJ-鏈； d.檢測(cè)該生物樣品中捕獲多肽的水平； e.任選地用不同劑量重復(fù)步驟(a)至(d)； f.將生物樣品中測(cè)得的這些水平與RSP組合物預(yù)定的合適水平比較； 其中合適劑量是導(dǎo)致生物樣品中RSP組合物達(dá)到預(yù)定合適水平的劑量。
17.一種治療或預(yù)防受試對(duì)象不希望有的免疫應(yīng)答反應(yīng)的方法，包括以下步驟 a.給予受試對(duì)象合適劑量的含YFAK或YEAK肽RSP組合物，其中所述合適劑量由如下步驟確定 (i)給予受試對(duì)象一個(gè)劑量的RSP組合物； ( )從受試對(duì)象取生物樣品； (iii)使生物樣品與至少一種捕獲多肽接觸，所述捕獲多肽包括選自以下物質(zhì)的肽補(bǔ)體組分C3，載脂蛋白A-I前原蛋白，載脂蛋白A-II前原蛋白(載脂蛋白D)，補(bǔ)體組分C4A，胰蛋白酶抑制劑，間-α -胰蛋白酶抑制劑家族重鏈相關(guān)蛋白(IHRP)、α _1_Β_糖蛋白，α-I-抗胰蛋白酶，載脂蛋白A-IV，血漿銅藍(lán)蛋白，未命名的蛋白產(chǎn)物(NCBI基因座/登錄號(hào)NO.CAA34971)，載脂蛋白Ε，補(bǔ)體因子B，前白蛋白，載脂蛋白C-III，a2_HS糖蛋白，載脂蛋白J前體，C鏈，IgM，免疫球蛋白λ輕鏈，凝血因子II (凝血酶)，IgK鏈V-III (KAU冷凝集素)，載脂蛋白J前體，Ig Al Bur，富含組氨酸的糖蛋白前體，a-2-HS糖蛋白，凝溶膠蛋白同工型a前體，抑制劑Kunitz型蛋白酶，未命名的蛋白產(chǎn)物(NCBI基因座/登記號(hào)No. CAA28659)，及 IgJ-鏈； (iv)檢測(cè)生物樣品中該捕獲多肽的水平； (v)任選地用不同劑量重復(fù)步驟(i)至(iv);和 (vi)將生物樣品中測(cè)得的水平與預(yù)定的RSP組合物合適水平作比較；其中合適劑量是導(dǎo)致生物樣品中RSP組合物達(dá)到預(yù)定合適水平的劑量。
18.如權(quán)利要求13-17之一所述的方法，其中所述捕獲多肽是被標(biāo)記的多肽。
19.如權(quán)利要求13-17之一所述的方法，其中所述捕獲多肽附著于固體支持物上。
20.如權(quán)利要求13-17之一所述的方法，還包括分離含結(jié)合于RSP組合物的捕獲多肽的復(fù)合物。
21.如權(quán)利要求13-17之一所述的方法，還包括用抗捕獲多肽的抗體檢測(cè)捕獲多肽與RSP組合物的結(jié)合。
22.如權(quán)利要求13-17之一所述的方法，其中所述組合物是皮下注射給予的。
23.一種用于檢測(cè)生物樣品中含YFAK或YEAK肽RSP組合物的組合物，其包含至少一種捕獲多肽，所述捕獲多肽包括選自以下組的肽補(bǔ)體組分C3，載脂蛋白A-I前原蛋白，載脂蛋白A-II前原蛋白(載脂蛋白D)，補(bǔ)體組分C4A，胰蛋白酶抑制劑，間-α-胰蛋白酶抑制劑家族重鏈相關(guān)蛋白(IHRP)、α-I-B-糖蛋白，α-I-抗胰蛋白酶，載脂蛋白A_IV，血漿銅藍(lán)蛋白，未命名的蛋白產(chǎn)物(NCBI基因座/登錄號(hào)NO.CAA34971)，載脂蛋白E，補(bǔ)體因子B，前白蛋白，載脂蛋白C-III，a2-HS糖蛋白，載脂蛋白J前體，C鏈，IgM，免疫球蛋白λ輕鏈，凝血因子II (凝血酶)，IgK鏈V-III (KAU冷凝集素)，載脂蛋白J前體，IgAI Bur,富含組氨酸的糖蛋白前體，ct -2-HS糖蛋白，凝溶膠蛋白同工型a前體,抑制劑Kunitz型蛋白酶，未命名的蛋白產(chǎn)物(NCBI基因座/登記號(hào)No. CAA28659)，及IgJ-鏈。
24.—種分離含YFAK或YEAK肽RSP組合物樣品中的肽的方法，包括以下步驟 a.將樣品與至少一種捕獲多肽接觸，所述捕獲多肽包含選自以下物質(zhì)的肽補(bǔ)體組分C3，載脂蛋白A-I前原蛋白，載脂蛋白A-II前原蛋白(載脂蛋白D)，補(bǔ)體組分C4A，胰蛋白酶抑制劑，間-α-胰蛋白酶抑制劑家族重鏈相關(guān)蛋白(IHRP)、α-I-B-糖蛋白，α -I-抗胰蛋白酶，載脂蛋白A-IV，血漿銅藍(lán)蛋白，未命名的蛋白產(chǎn)物(NCBI基因座/登錄號(hào)NO.CAA34971)，載脂蛋白Ε，補(bǔ)體因子B，前白蛋白，載脂蛋白C-III，a2_HS糖蛋白，載脂蛋白J前體，C鏈，IgM，免疫球蛋白λ輕鏈，凝血因子II (凝血酶)，IgK鏈V-III (KAU冷凝集素)，載脂蛋白J前體，Ig Al Bur，富含組氨酸的糖蛋白前體，a-2-HS糖蛋白，凝溶膠蛋白同工型a前體，抑制劑Kunitz型蛋白酶，未命名的蛋白產(chǎn)物(NCBI基因座/登記號(hào)No. CAA28659)，及 IgJ-鏈；和 b.從混合物中分離結(jié)合于捕獲多肽的肽。
25.如權(quán)利要求24所述的方法，其中所述捕獲多肽固定于固體支持物上。
26.如權(quán)利要求25所述的方法，其中所述捕獲多肽是表位標(biāo)記的多肽。
27.如權(quán)利要求24所述的方法，還包括從捕獲多肽分離結(jié)合的肽。
28.如權(quán)利要求24所述的方法，還包括測(cè)定所分離的肽的特性。
29.如權(quán)利要求28所述的方法，其中所述測(cè)定所述特性包括測(cè)定結(jié)合肽的氨基酸序列或測(cè)定結(jié)合肽中氨基酸的相對(duì)比例。
30.一種在受試對(duì)象上鑒定含YFAK或YEAK肽的RSP組合物的生物可利用肽的方法，包括以下步驟 a.在第一時(shí)間給予受試對(duì)象RSP組合物； b.在給藥后的第二時(shí)間從受試對(duì)象取組織樣品；和 c.鑒定樣品中結(jié)合于至少一種捕獲多肽的肽，所述捕獲多肽包含選自以下物質(zhì)的肽補(bǔ)體組分C3，載脂蛋白A-I前原蛋白，載脂蛋白A-II前原蛋白(載脂蛋白D)，補(bǔ)體組分C4A，胰蛋白酶抑制劑，間-α-胰蛋白酶抑制劑家族重鏈相關(guān)蛋白(IHRP)、α-I-B-糖蛋白，α-I-抗胰蛋白酶，載脂蛋白A-IV，血漿銅藍(lán)蛋白，未命名的蛋白產(chǎn)物(NCBI基因座/登錄號(hào)NO.CAA34971)，載脂蛋白Ε，補(bǔ)體因子B，前白蛋白，載脂蛋白C-III，a2_HS糖蛋白，載脂蛋白J前體，C鏈，IgM，免疫球蛋白λ輕鏈，凝血因子II (凝血酶)，IgK鏈V-III (KAU冷凝集素)，載脂蛋白J前體，Ig Al Bur，富含組氨酸的糖蛋白前體，a-2-HS糖蛋白，凝溶膠蛋白同工型a前體，抑制劑Kunitz型蛋白酶，未命名的蛋白產(chǎn)物(NCBI基因座/登記號(hào)No. CAA28659)，及 IgJ-鏈。
31.一種制備含毒性減弱的YFAK或YEAK肽的RSP組合物的方法，包括以下步驟a.將RSP組合物與至少一種捕獲多肽接觸，所述捕獲多肽包含選自以下物質(zhì)的肽補(bǔ)體組分C3，載脂蛋白A-I前原蛋白，載脂蛋白A-II前原蛋白(載脂蛋白D)，補(bǔ)體組分C4A，胰蛋白酶抑制劑，間-α-胰蛋白酶抑制劑家族重鏈相關(guān)蛋白(IHRP)、α-I-B-糖蛋白，α -I-抗胰蛋白酶，載脂蛋白A-IV，血漿銅藍(lán)蛋白，未命名的蛋白產(chǎn)物(NCBI基因座/登錄號(hào)No. CAA34971)，載脂蛋白Ε，補(bǔ)體因子B，前白蛋白，載脂蛋白C-III，a 2-HS糖蛋白，載脂蛋白J前體，C鏈，IgM，免疫球蛋白λ輕鏈，凝血因子II (凝血酶)，IgK鏈V-III (KAU冷凝集素)，載脂蛋白J前體，Ig Al Bur，富含組氨酸的糖蛋白前體，α-2-HS糖蛋白，凝溶膠蛋白同工型a前體，抑制劑Kunitz型蛋白酶，未命名的蛋白產(chǎn)物(NCBI基因座/登記號(hào)No. CAA28659)，及 IgJ-鏈； b.將結(jié)合于捕獲多肽的肽與混合物分離； c.測(cè)定所分離肽的特性；和 d.制備具有所分離肽的特性的一系列肽。
32.一種制備含效應(yīng)增強(qiáng)的YFAK或YEAK肽的RSP組合物的方法，包括以下步驟 a.將RSP組合物與至少一種捕獲多肽接觸，所述捕獲多肽包含選自以下物質(zhì)的肽補(bǔ)體組分C3，載脂蛋白A-I前原蛋白，載脂蛋白A-II前原蛋白(載脂蛋白D)，補(bǔ)體組分C4A，胰蛋白酶抑制劑，間-α-胰蛋白酶抑制劑家族重鏈相關(guān)蛋白(IHRP)、α-I-B-糖蛋白，α -I-抗胰蛋白酶，載脂蛋白A-IV，血漿銅藍(lán)蛋白，未命名的蛋白產(chǎn)物(NCBI基因座/登錄號(hào)No. CAA34971)，載脂蛋白Ε，補(bǔ)體因子B，前白蛋白，載脂蛋白C-III，a 2-HS糖蛋白，載脂蛋白J前體，C鏈，IgM，免疫球蛋白λ輕鏈，凝血因子II (凝血酶)，IgK鏈V-III (KAU冷凝集素)，載脂蛋白J前體，Ig Al Bur，富含組氨酸的糖蛋白前體，α-2-HS糖蛋白，凝溶膠蛋白同工型a前體，抑制劑Kunitz型蛋白酶，未命名的蛋白產(chǎn)物(NCBI基因座/登記號(hào)No. CAA28659)，及 IgJ-鏈； b.將結(jié)合于捕獲多肽的肽與混合物分離； c.測(cè)定所分離肽的特性；和 d.制備具有所分離肽的特性的一系列肽。
33.一種治療或預(yù)防受試對(duì)象不希望有的免疫應(yīng)答反應(yīng)的方法，包括 a.提供一種含YFAK或YEAK肽的RSP組合物； b.給予受試對(duì)象該RSP組合物； c.從受試對(duì)象取生物樣品； d.將此生物樣品與至少一種捕獲多肽接觸，所述捕獲多肽包含選自以下物質(zhì)的肽序列補(bǔ)體組分C3，載脂蛋白A-I前原蛋白，載脂蛋白A-II前原蛋白(載脂蛋白D)，補(bǔ)體組分C4A，胰蛋白酶抑制劑，間- α -胰蛋白酶抑制劑家族重鏈相關(guān)蛋白(IHRP)、α _1_Β_糖蛋白，α-I-抗胰蛋白酶，載脂蛋白A-IV，血漿銅藍(lán)蛋白，未命名的蛋白產(chǎn)物(NCBI基因座/登錄號(hào)No. CAA34971)，載脂蛋白Ε，補(bǔ)體因子B，前白蛋白，載脂蛋白C-III，a 2-HS糖蛋白，載脂蛋白J前體，C鏈，IgM，免疫球蛋白λ輕鏈，凝血因子II (凝血酶)，IgK鏈V-III (KAU冷凝集素)，載脂蛋白J前體，Ig Al Bur,富含組氨酸的糖蛋白前體，a -2-HS糖蛋白，凝溶膠蛋白同工型a前體，抑制劑Kunitz型蛋白酶，未命名的蛋白產(chǎn)物(NCBI基因座/登記號(hào)No. CAA28659)，及 IgJ-鏈； e.將結(jié)合于捕獲多肽的肽與混合物分離；f.測(cè)定所分離肽的特性； g.制備具有所分離肽的特性的一組肽；和 h.將這組新的肽給予受試對(duì)象。
34.如權(quán)利要求30或33所述的方法，其中所述肽給予受試對(duì)象一次以上。
35.如權(quán)利要求34所述的方法，其中所述肽以1，2，3，4，6，12，18，24，36，48或72小時(shí)的間隔給予受試對(duì)象。
36.一種比較含YFAK或YEAK肽的RSP組合物不同制劑的方法，包括以下步驟 a.將第一種RSP組合物與正常人血清、正常非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物血清、正常家兔血清、正常血清、正常大鼠血清、正常雪貂血清、正常豬血清、正常狗血清、正常馬血清、正常綿羊血清、正常母牛血清中所含的至少一種捕獲多肽接觸； b.使第二種RSP組合物與正常人血清、正常非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物血清、正常家兔血清、正常小鼠血清、正常大鼠血清、正常雪貂血清、正常豬血清、正常狗血清、正常馬血清、正常綿羊血清、正常母牛血清中所含的至少一種捕獲多肽接觸； c.必要時(shí)重復(fù)步驟(b)； d.從步驟(a-c)的混合物中分離結(jié)合于捕獲多肽的肽； e.測(cè)定步驟(d)分離的肽的特性；和 f.比較具有步驟(d)分離的肽的特性的所述一組分離肽。
37.一種制備靶向受試對(duì)象組織的治療劑的方法，包括以下步驟 a.提供含YFAK或YEAK肽的RSP組合物；和 b.將治療劑與RSP組合物偶聯(lián)以形成偶聯(lián)物。
38.一種向受試對(duì)象特定組織遞送治療劑的方法，包括以下步驟 a.通過(guò)以下步驟分離標(biāo)記肽 (i)使含YFAK或YEAK肽的RSP組合物與組織特異性肽接觸，所述組織特異性肽包含選自以下物質(zhì)的肽補(bǔ)體組分C3，載脂蛋白A-I前原蛋白，載脂蛋白A-II前原蛋白(載脂蛋白D)，補(bǔ)體組分C4A，胰蛋白酶抑制劑，間- α -胰蛋白酶抑制劑家族重鏈相關(guān)蛋白(IHRP)、α -I-B-糖蛋白，α -I-抗胰蛋白酶，載脂蛋白A_IV，血漿銅藍(lán)蛋白，未命名的蛋白產(chǎn)物(NCBI基因座/登錄號(hào)NO.CAA34971)，載脂蛋白E，補(bǔ)體因子B，前白蛋白，載脂蛋白C-III，a2-HS糖蛋白，載脂蛋白J前體，C鏈，IgM，免疫球蛋白λ輕鏈，凝血因子II (凝血酶)，IgK鏈V-III (KAU冷凝集素)，載脂蛋白J前體，IgAI Bur，富含組氨酸的糖蛋白前體，a-2-HS糖蛋白，凝溶膠蛋白同工型a前體，抑制劑Kunitz型蛋白酶，未命名的蛋白產(chǎn)物(NCBI基因座 / 登記號(hào) No. CAA28659)，及 IgJ-鏈； ( )從混合物中分離結(jié)合于組織特異性肽的肽； b.將標(biāo)記肽與治療劑偶聯(lián)；和 c.將偶聯(lián)物給予受試對(duì)象。
39.一種包含偶聯(lián)有標(biāo)記肽的治療劑的偶聯(lián)物，其中所述標(biāo)記肽包含YEAK或YFAK肽。
40.如權(quán)利要求39所述的偶聯(lián)物，其中所述肽根據(jù)其對(duì)以下物質(zhì)的結(jié)合親和力從RSP組合物中分離得到，所述物質(zhì)選自補(bǔ)體組分C3，載脂蛋白A-I前原蛋白，載脂蛋白A-II前原蛋白(載脂蛋白D)，補(bǔ)體組分C4A，胰蛋白酶抑制劑，間- α -胰蛋白酶抑制劑家族重鏈相關(guān)蛋白(IHRP)、α-I-B-糖蛋白，α-I-抗胰蛋白酶，載脂蛋白A_IV，血漿銅藍(lán)蛋白，未命名的蛋白產(chǎn)物(NCBI基因座/登錄號(hào)NO.CAA34971)，載脂蛋白E，補(bǔ)體因子B，前白蛋白，載脂蛋白C-III，a2-HS糖蛋白，載脂蛋白J前體，C鏈，IgM，免疫球蛋白λ輕鏈，凝血因子ΙΙ(凝血酶)，IgK鏈V-III (KAU冷凝集素)，載脂蛋白J前體，IgAI Bur，富含組氨酸的糖蛋白前體，a -2-HS糖蛋白，凝溶膠蛋白同工型a前體,抑制劑Kunitz型蛋白酶,未命名的蛋白產(chǎn)物(NCBI基因座/登記號(hào)No. CAA28659)，及IgJ-鏈。
41.如權(quán)利要求37或38所述的方法或權(quán)利要求39所述的偶聯(lián)物，其中所述治療劑是有機(jī)小分子或生物大分子。
42.如權(quán)利要求37或38所述的方法或權(quán)利要求39所述的偶聯(lián)物，其中所述組織是腦、肺或肝組織。
43.如權(quán)利要求37或38所述的方法或權(quán)利要求39所述的偶聯(lián)物，其中所述標(biāo)記肽包含YEAK或YFAK肽。
44.如權(quán)利要求37或38所述的方法或權(quán)利要求39所述的偶聯(lián)物，其中所述標(biāo)記肽通過(guò)共價(jià)鍵、絡(luò)合、離子鍵或氫鍵偶聯(lián)于治療劑。
全文摘要
本領(lǐng)域已有檢測(cè)簡(jiǎn)單肽的方法。然而，由于受檢肽的異質(zhì)性，檢測(cè)一組肽混合物而非具有明確氨基酸序列的各別肽的有效血漿濃度的方法很復(fù)雜。本申請(qǐng)?zhí)峁z測(cè)和評(píng)估隨機(jī)序列聚合物(RSP)組合物的改進(jìn)方法，檢測(cè)和和定量測(cè)定RSP組合物的方法，根據(jù)肽亞組與某些捕獲多肽的相互作用確定和富集RSP組合物中肽亞組的方法，和對(duì)需要的對(duì)象給予RSP組合物的方法，其中，劑量方案和用量可根據(jù)上述檢測(cè)和定量方法加以確定和評(píng)估。
文檔編號(hào)C07K4/00GK102869989SQ201080052757
公開(kāi)日2013年1月9日 申請(qǐng)日期2010年11月17日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月17日
發(fā)明者E·扎內(nèi)利, J·克里格, J·康諾利, K·H·柯林斯 申請(qǐng)人:阿雷斯貿(mào)易股份有限公司