專利名稱：一種玉米肽的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物蛋白質(zhì)組合物的制備方法，尤其涉及一種玉米肽的制備方法。
背景技術(shù)：
肽是由氨基酸通過(guò)肽鍵連接而成的化合物，它是機(jī)體組織細(xì)胞的基本組成成分。 最簡(jiǎn)單的肽是由兩個(gè)氨基酸組成的二肽，其中含有1個(gè)肽鍵；含有3個(gè)、4個(gè)、5個(gè)等氨基酸的肽分別稱為三肽、四肽、五肽等。由2個(gè)到10個(gè)氨基酸通過(guò)肽鍵形成的直鍵肽稱為寡肽或小肽；由肽鍵結(jié)合起來(lái)的多于10個(gè)氨基酸的聚合體則稱為多肽?？茖W(xué)家已在人體中發(fā)現(xiàn)了 100多種生物活性肽，這些肽具有傳遞生理信息，調(diào)節(jié)生理功能的作用，對(duì)于人體的神經(jīng)、消化、生殖、生長(zhǎng)、運(yùn)動(dòng)、代謝、循環(huán)等系統(tǒng)的正常生理活動(dòng)的維持非常重要，所有疾病的發(fā)生、發(fā)展、治療、康復(fù)都與多肽有關(guān)系。隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，玉米蛋白作為飼料遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足淀粉工業(yè)對(duì)副產(chǎn)品玉米蛋白粉處理的要求。在世界蛋白質(zhì)資源嚴(yán)重缺乏的情況下，深入開發(fā)玉米蛋白粉的高附加值產(chǎn)品，以提高企業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益，提高玉米資源的綜合利用率，具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。玉米肽是玉米蛋白經(jīng)酶解后的產(chǎn)物，是小分子肽類混合物。玉米肽改善了玉米蛋白粉和玉米醇溶蛋白的水不溶性，具有溶解性好、酸性條件下不易凝聚、等電點(diǎn)不易沉淀、乳化性和起泡性強(qiáng)以及穩(wěn)定性好等特點(diǎn)，易于作為功能因子添加到各種食品中。玉米肽還具有的許多生理活性，如可以利用其易消化吸收性、促進(jìn)微生物發(fā)酵、抗氧化活性作為生產(chǎn)酸奶、醬油等食品的添加劑；可以利用其抗疲勞、促進(jìn)乙醇代謝等活性，開發(fā)成運(yùn)動(dòng)飲料、醒酒產(chǎn)品等。玉米蛋白粉(CGM，俗稱玉米渣，又稱玉米黃粉)，大約含有60%的蛋白質(zhì)，其中玉米醇溶蛋白約占68%。由于玉米蛋白粉中含有高比例的谷氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、 丙氨酸等疏水性氨基酸，很少含有賴氨酸等堿性氨基酸，這種獨(dú)特的氨基酸組成使玉米蛋白水溶性差，但是能溶于70% 95%的乙醇。目前，國(guó)內(nèi)生產(chǎn)玉米肽的主要方法是以玉米蛋白粉為原料，采用單一蛋白酶在水相中進(jìn)行酶解。該方法的主要不足在于玉米蛋白中的醇溶蛋白組分不能溶解于水中，蛋白酶不能對(duì)醇溶蛋白進(jìn)行酶解，大部分的玉米蛋白沒(méi)有酶解，浪費(fèi)了寶貴的蛋白資源。另外， 由于在酶解過(guò)程中要維持蛋白酶在最適的PH條件，需不斷加入酸性或堿性試劑來(lái)調(diào)節(jié)pH 值，而傳統(tǒng)工藝中沒(méi)有脫鹽處理，使水解液總存在大量鹽分，影響了玉米肽的質(zhì)量，因此，需要對(duì)水解液進(jìn)行脫鹽處理。玉米蛋白水解液中，還有一部分的玉米蛋白大分子物質(zhì)沒(méi)有酶解，或者由于酶解不充分，有較大的多肽分子存在，因此，為了保證玉米肽分子量在一定范圍內(nèi)，需要對(duì)玉米肽粗品進(jìn)行分級(jí)。因此，該方法不是有效生產(chǎn)玉米肽的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了提供一種玉米肽的制備方法。本發(fā)明的玉米肽的制備方法包括如下步驟
(A)取玉米蛋白粉按固液比1 20至1 60加入至65% 90%的乙醇溶液，攪拌，加熱溶液至35 55°C，用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至8.0 11.0，按E/S比(酶用量玉米醇溶蛋白)為6% 12%添加堿性蛋白酶，按此條件下在醇相中水解2 5h，酶解過(guò)程中用 NaOH溶液保持pH值在8. 0 11. 0 ；(B)步驟(A)結(jié)束后，蒸發(fā)出部分乙醇溶液，加水補(bǔ)齊至原水解液的體積，攪拌均勻，加熱溶液至45 65°C，用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至8. 0 11. 0，按E/S比(酶用量玉米醇溶蛋白)為2% 10%添加復(fù)合酶(堿性蛋白酶中性蛋白酶=1 1)，按此條件下在醇相中水解10 60min，酶解過(guò)程中用NaOH溶液保持pH值在8. 0 11. 0 ；(C)步驟(B)結(jié)束后，用HCl溶液調(diào)節(jié)pH至5. 0 3. 0，3000 5000rpm，離心15 30min，得上清液，為玉米肽粗制液；(D)將步驟(C)中的玉米肽粗制液注入儲(chǔ)槽中，溶液經(jīng)微濾后通過(guò)分子量截留量為3000Da超濾膜，溶液中的小分子物質(zhì)經(jīng)中空纖維膜的內(nèi)壁滲透出來(lái)成為超濾液，收集超濾液，為玉米肽超濾液；溶液中的蛋白等大分子物質(zhì)得以保留并得到濃縮，將濃縮液回收至步驟(B)進(jìn)行二次酶解；(E)交換樹脂于去離子水中浸泡處理M小時(shí)后裝柱，然后分別用7. 5%鹽酸和 10% NaOH對(duì)其進(jìn)行浸泡，轉(zhuǎn)化為H+型陽(yáng)離子交換樹脂和0H_型陰離子交換樹脂，再用去離子水清洗至pH為7. 0待用；將步驟⑶中所得的玉米肽超濾液，以5 10倍柱體積/h的流速通過(guò)H+型陽(yáng)離子交換樹脂來(lái)脫除陽(yáng)離子，待流出液PH = 4. 0左右時(shí)停止加樣，之后將此流出液以同樣流速通過(guò)Off型陰離子交換樹脂來(lái)脫除陰離子，至流出液呈pH為7. O時(shí)停止加樣，收集為玉米肽精制液；(F)由步驟(E)中得到的玉米肽精制液，減壓濃縮至固型物含量20% 30% ；(G)玉米肽液濃縮后，經(jīng)噴霧干燥或冷凍干燥制成干粉。上述步驟(A)中加入乙醇的目的是為了使玉米蛋白更充分的溶解于溶劑中，因?yàn)橛衩椎鞍字?8%左右的蛋白是醇溶性的，在乙醇條件下能夠被溶解，蛋白在溶解的條件下容易被酶解，提高蛋白的水解度；酶解的目的是將大分子玉米蛋白酶解為小分子蛋白質(zhì)和肽。上述步驟(B)中添加水的目的是為了將玉米蛋白中的水溶性蛋白充分溶解在水中，蛋白在溶解的條件下容易被酶解，提高蛋白的水解度；同時(shí)添加堿性蛋白酶和中性蛋白酶的目的是為了提高提高蛋白的水解度，原因?yàn)閴A性蛋白酶屬于絲氨酸蛋白酶，是內(nèi)切酶， 它的水解部位是芳香族或疏水性氨基酸的羧基，而中性蛋白酶屬于金屬蛋白酶，它的水解部位是亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸等疏水大分子氨基酸的氨基。因此，這兩種酶復(fù)合水解比單一酶水解效果好，水解度高。通過(guò)(A)、⑶處理后，水解度可達(dá)到30%左右，而普通的單相單一酶酶解法，水解度只要18%左右。上述步驟(C)中調(diào)酸的目的是為了使酶失活，停止酶解反應(yīng)；離心的目的是為了固液分離，收集酶解液。上述步驟(D)中超濾的目的是為了截取需要分子量的產(chǎn)品；二次酶解的目的是為了將分子量3000Da以上的大分子蛋白水解成小分子，提高原料利用率。中脫鹽的目的是為了去除酶解液中因酶解過(guò)程中不斷調(diào)節(jié)pH而帶入的鹽離子，沒(méi)有脫鹽的產(chǎn)品鹽分含量8%左右，采用此脫鹽工藝的產(chǎn)品鹽分為2%左右；上述步驟(H)中動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的目的是為了證明本方法制備的玉米肽具有醒酒功能。多肽的分子量并不是越小越好，不同肽鏈長(zhǎng)度的多肽具有不同的生理功能，本發(fā)明制備的玉米肽分子量主要集中在600 3000之間，在此分子量之間的玉米肽具備較好的醒酒活性。用小白鼠進(jìn)行的翻正反射實(shí)驗(yàn)表明，以1. Og/kg體重食用本發(fā)明的玉米肽后，睡眠耐受時(shí)間從38 延長(zhǎng)到469s，睡眠維持時(shí)間增加由135min縮短到lianin。醒酒活性實(shí)驗(yàn)取小白鼠20只，隨機(jī)分為2組，每組10只?？瞻讓?duì)照組，給生理鹽水；按1. Og/kg 小白鼠體重給食玉米肽，按0. 2ml/10g小白鼠體重灌胃30min后，按照(0. 2ml/10g小白鼠體重)給食乙醇。計(jì)算小鼠耐受時(shí)間，即從給乙醇至翻正反射消失的時(shí)間，及維持時(shí)間，即從翻正反射到恢復(fù)的時(shí)間?？瞻捉M的平均睡眠耐受時(shí)間為382s，服食玉米肽組的平均睡眠耐受時(shí)間為469s，空白組的平均睡眠維持時(shí)間為135min，服食玉米肽組的平均睡眠維持時(shí)間為 112min。除了所提取的玉米肽有較好的醒酒效果，本發(fā)明的工藝步驟還有如下優(yōu)點(diǎn)(1)采用醇相和水相雙相酶解法，使玉米蛋白充分溶解于溶液中，提高酶解時(shí)的水解度。(2)采用堿性蛋白酶和中性蛋白酶復(fù)合酶法，提高酶解時(shí)的水解度。(3)本方法中的雙相復(fù)合酶水解法可將單相單一酶水解法的水解度從18%提高至30%左右。(3)利用陰陽(yáng)交換樹脂對(duì)玉米肽粗品進(jìn)行脫鹽，沒(méi)有脫鹽的產(chǎn)品鹽分含量8%左右，采用次方法中的脫鹽工藝的產(chǎn)品鹽分為2%左右；(4)采用超濾法對(duì)玉米肽進(jìn)行分級(jí)處理，保證100%的玉米肽分子量在3000Da以下，并對(duì)于分子量3000Da以上的玉米肽進(jìn)行二次酶解，提高原料的利用率。


下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明。附圖為本發(fā)明的制作流程圖。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明中所述的E/S比是指酶的用量與玉米蛋白的質(zhì)量比；本發(fā)明中所述的復(fù)合酶由堿性蛋白酶與中性蛋白酶按照相等的質(zhì)量混合而成。實(shí)施例1—種玉米肽的制備方法，該方法包括如下步驟(A)取玉米蛋白粉50g，加入至2L濃度為90%的乙醇溶液，攪拌，加熱溶液至 550C，用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至10. 0，添加堿性蛋白酶5g，按此條件下在醇相中水解2h，酶解過(guò)程中用NaOH溶液保持pH值在10. 0 ；(B)步驟(A)結(jié)束后，蒸發(fā)出IL乙醇溶液，加水補(bǔ)齊至原水解液的體積，攪拌均勻，加熱溶液至45 °C，用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至10. 0，添加復(fù)合酶2g，按此條件下在醇相中水解 20min,酶解過(guò)程中用NaOH溶液保持pH值在10. 0 ；(C)步驟(B)結(jié)束后，用HCl溶液調(diào)節(jié)pH至3. 0，在離心機(jī)轉(zhuǎn)速3000r/m的條件下離心20 30min，得上清液，為玉米肽粗制液；(D)將步驟(C)中的玉米肽粗制液注入儲(chǔ)槽中，溶液經(jīng)微濾后通過(guò)分子量截留量為3000Da超濾膜，溶液中的小分子物質(zhì)經(jīng)中空纖維膜的內(nèi)壁滲透出來(lái)成為超濾液，收集超濾液，為玉米肽超濾液；溶液中的蛋白等大分子物質(zhì)得以保留并得到濃縮，將濃縮液回收至步驟(B)進(jìn)行二次酶解；(E)交換樹脂于去離子水中浸泡處理M小時(shí)后裝柱，然后分別用7. 5%鹽酸和 10% NaOH對(duì)其進(jìn)行浸泡，轉(zhuǎn)化為H+型陽(yáng)離子交換樹脂和0H_型陰離子交換樹脂，再用去離子水清洗至pH為7. 0待用；將步驟⑶中所得的玉米肽超濾液，以5倍柱體積/h的流速通過(guò)H+型陽(yáng)離子交換樹脂來(lái)脫除陽(yáng)離子，待流出液pH = 4. 0左右時(shí)停止加樣，之后將此流出液以同樣流速通過(guò) Off型陰離子交換樹脂來(lái)脫除陰離子，至流出液呈pH為7. O時(shí)停止加樣，收集為玉米肽精制液；(F)由步驟(E)中得到的玉米肽精制液，減壓濃縮至固型物含量30% ；(G)玉米肽液濃縮后，經(jīng)噴霧干燥或冷凍干燥制成干粉。按照上述步驟制備的玉米肽稱重為19. 8g，經(jīng)檢測(cè)總氮含量(以干基計(jì))95. 5%, 肽含量(以干基計(jì))彡91. 3%，所得的相對(duì)分子質(zhì)量均在3000Da以下，水分含量5. 9%，灰分含量(以干基計(jì))< 1. 1%，粗脂肪含量(以干基計(jì))<0.9%。實(shí)施例2一種玉米肽的制備方法，該方法包括如下步驟(A)取玉米蛋白粉100g，加入至2L濃度為80%的乙醇溶液，攪拌，加熱溶液至 450C，用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至9. 0，添加堿性蛋白酶9g，按此條件下在醇相中水解池，酶解過(guò)程中用NaOH溶液保持pH值在9. 0 ；(B)步驟㈧結(jié)束后，蒸發(fā)出乙醇溶液IOOOmL,加水補(bǔ)齊至原水解液的體積，攪拌均勻，加熱溶液至45°C，用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至8. 0，添加復(fù)合酶5g，按此條件下在醇相中水解30min，酶解過(guò)程中用NaOH溶液保持pH值在8. 0 ；(C)步驟⑶結(jié)束后，用HCl溶液調(diào)節(jié)pH至4. 5，3000rpm，離心15min，得上清液， 為玉米肽粗制液；(D)將步驟(C)中的玉米肽粗制液注入儲(chǔ)槽中，溶液經(jīng)微濾后通過(guò)分子量截留量為3000Da超濾膜，溶液中的小分子物質(zhì)經(jīng)中空纖維膜的內(nèi)壁滲透出來(lái)成為超濾液，收集超濾液，為玉米肽超濾液；溶液中的蛋白等大分子物質(zhì)得以保留并得到濃縮，將濃縮液回收至步驟(B)進(jìn)行二次酶解；(E)交換樹脂于去離子水中浸泡處理M小時(shí)后裝柱，然后分別用7. 5%鹽酸和 10% NaOH對(duì)其進(jìn)行浸泡，轉(zhuǎn)化為H+型陽(yáng)離子交換樹脂和0H_型陰離子交換樹脂，再用去離子水清洗至pH為7. 0待用；將步驟(D)中所得的玉米肽超濾液，以10倍柱體積/h的流速通過(guò)H+型陽(yáng)離子交換樹脂來(lái)脫除陽(yáng)離子，待流出液PH = 4.0左右時(shí)停止加樣，之后將此流出液以同樣流速通過(guò)0H_型陰離子交換樹脂來(lái)脫除陰離子，至流出液呈pH為7. 0時(shí)停止加樣，收集為玉米肽精制液；(F)由步驟(E)中得到的玉米肽精制液，減壓濃縮至固型物含量30% ；(G)玉米肽液濃縮后，經(jīng)噴霧干燥或冷凍干燥制成干粉。按照上述步驟制備的玉米肽稱重為50. 8g，經(jīng)檢測(cè)總氮含量(以干基計(jì))92. 1%, 肽含量(以干基計(jì))彡85.7%，所得的相對(duì)分子質(zhì)量均在3000Da以下，水分含量5.7%，灰分含量(以干基計(jì))< 1.2%，粗脂肪含量(以干基計(jì))<0.8%。實(shí)施例3一種玉米肽的制備方法，該方法包括如下步驟(A)取玉米蛋白粉500g，加入至15L濃度為85%的乙醇溶液，攪拌，加熱溶液至 500C，用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至8. 5，添加堿性蛋白酶50g，按此條件下在醇相中水解3h，酶解過(guò)程中用NaOH溶液保持pH值在8. 5 ；(B)步驟(A)結(jié)束后，蒸發(fā)出乙醇溶液10L，加水補(bǔ)齊至原水解液的體積，攪拌均勻，加熱溶液至50°C，用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至8. 5，添加復(fù)合酶15g，按此條件下在醇相中水解40min，酶解過(guò)程中用NaOH溶液保持pH值在8. 5 ；(C)步驟⑶結(jié)束后，用HCl溶液調(diào)節(jié)pH至4. 0，3000rpm,離心15min，得上清液， 為玉米肽粗制液；(D)將步驟(C)中的玉米肽粗制液注入儲(chǔ)槽中，溶液經(jīng)微濾后通過(guò)分子量截留量為3000Da超濾膜，溶液中的小分子物質(zhì)經(jīng)中空纖維膜的內(nèi)壁滲透出來(lái)成為超濾液，收集超濾液，為玉米肽超濾液；溶液中的蛋白等大分子物質(zhì)得以保留并得到濃縮，將濃縮液回收至步驟(B)進(jìn)行二次酶解；(E)交換樹脂于去離子水中浸泡處理M小時(shí)后裝柱，然后分別用7. 5%鹽酸和 10% NaOH對(duì)其進(jìn)行浸泡，轉(zhuǎn)化為H+型陽(yáng)離子交換樹脂和0H_型陰離子交換樹脂，再用去離子水清洗至pH為7. 0待用；將步驟⑶中所得的玉米肽超濾液，以5倍柱體積/h的流速通過(guò)H+型陽(yáng)離子交換樹脂來(lái)脫除陽(yáng)離子，待流出液pH = 4. 0左右時(shí)停止加樣，之后將此流出液以同樣流速通過(guò) Off型陰離子交換樹脂來(lái)脫除陰離子，至流出液呈pH為7. O時(shí)停止加樣，收集為玉米肽精制液；(F)由步驟(E)中得到的玉米肽精制液，減壓濃縮至固型物含量30% ；(G)玉米肽液濃縮后，經(jīng)噴霧干燥或冷凍干燥制成干粉。按照上述步驟制備的玉米肽稱重為273. 9g，經(jīng)檢測(cè)總氮含量(以干基計(jì))90. 5%, 肽含量(以干基計(jì))彡84.2%，所得的相對(duì)分子質(zhì)量均在3000Da以下，水分含量6.7%，灰分含量(以干基計(jì))< 1.3%，粗脂肪含量(以干基計(jì))<1.0%。實(shí)施例4一種玉米肽的制備方法，該方法包括如下步驟(A)取玉米蛋白粉250g，加入至IOL濃度為75%的乙醇溶液，攪拌，加熱溶液至 450C，用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至9. 5，添加堿性蛋白酶20g，按此條件下在醇相中水解4h，酶解過(guò)程中用NaOH溶液保持pH值在9. 5 ；(B)步驟(A)結(jié)束后，蒸發(fā)出乙醇溶液4L，加水補(bǔ)齊至原水解液的體積，攪拌均勻，加熱溶液至45°C，用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至9. 0，添加復(fù)合酶20g，按此條件下在醇相中水解 30min,酶解過(guò)程中用NaOH溶液保持pH值在9. 0 ；(C)步驟(B)結(jié)束后，用HCl溶液調(diào)節(jié)pH至4. 5，3000rpm,離心15min，得上清液， 為玉米肽粗制液；(D)將步驟(C)中的玉米肽粗制液注入儲(chǔ)槽中，溶液經(jīng)微濾后通過(guò)分子量截留量為3000Da超濾膜，溶液中的小分子物質(zhì)經(jīng)中空纖維膜的內(nèi)壁滲透出來(lái)成為超濾液，收集超濾液，為玉米肽超濾液；溶液中的蛋白等大分子物質(zhì)得以保留并得到濃縮，將濃縮液回收至步驟(B)進(jìn)行二次酶解；(E)交換樹脂于去離子水中浸泡處理M小時(shí)后裝柱，然后分別用7. 5%鹽酸和 10% NaOH對(duì)其進(jìn)行浸泡，轉(zhuǎn)化為H+型陽(yáng)離子交換樹脂和0H_型陰離子交換樹脂，再用去離子水清洗至pH為7. 0待用；將步驟⑶中所得的玉米肽超濾液，以10倍柱體積/h的流速通過(guò)H+型陽(yáng)離子交換樹脂來(lái)脫除陽(yáng)離子，待流出液PH = 4.0左右時(shí)停止加樣，之后將此流出液以同樣流速通過(guò)Off型陰離子交換樹脂來(lái)脫除陰離子，至流出液呈pH為7. O時(shí)停止加樣，收集為玉米肽精制液；(F)由步驟(E)中得到的玉米肽精制液，減壓濃縮至固型物含量30% ；(G)玉米肽液濃縮后，經(jīng)噴霧干燥或冷凍干燥制成干粉。按照上述步驟制備的玉米肽稱重為141. 2g，經(jīng)檢測(cè)總氮含量(以干基計(jì))85. 0%, 肽含量(以干基計(jì))彡80.4%，所得的相對(duì)分子質(zhì)量均在3000Da以下，水分含量7.7%，灰分含量(以干基計(jì))< 1.6%，粗脂肪含量(以干基計(jì))<1.2%。實(shí)施例5一種玉米肽的制備方法，該方法包括如下步驟(A)取玉米蛋白粉lOOOg，加入至20L濃度為90 %的乙醇溶液，攪拌，加熱溶液至 45°C，用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至9. 0，添加堿性蛋白酶100g，按此條件下在醇相中水解4h，酶解過(guò)程中用NaOH溶液保持pH值在9. 0 ；(B)步驟(A)結(jié)束后，蒸發(fā)出乙醇溶液5L，加水補(bǔ)齊至原水解液的體積，攪拌均勻， 加熱溶液至45°C，用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至8. 0，添加復(fù)合酶20g，按此條件下在醇相中水解 30min,酶解過(guò)程中用NaOH溶液保持pH值在8. 0 ；(C)步驟⑶結(jié)束后，用HCl溶液調(diào)節(jié)pH至4. 5，3000rpm,離心15min，得上清液， 為玉米肽粗制液；(D)將步驟(C)中的玉米肽粗制液注入儲(chǔ)槽中，溶液經(jīng)微濾后通過(guò)分子量截留量為3000Da超濾膜，溶液中的小分子物質(zhì)經(jīng)中空纖維膜的內(nèi)壁滲透出來(lái)成為超濾液，收集超濾液，為玉米肽超濾液；溶液中的蛋白等大分子物質(zhì)得以保留并得到濃縮，將濃縮液回收至步驟(B)進(jìn)行二次酶解；(E)交換樹脂于去離子水中浸泡處理M小時(shí)后裝柱，然后分別用7. 5%鹽酸和 10% NaOH對(duì)其進(jìn)行浸泡，轉(zhuǎn)化為H+型陽(yáng)離子交換樹脂和0H_型陰離子交換樹脂，再用去離子水清洗至pH為7. 0待用；將步驟⑶中所得的玉米肽超濾液，以10倍柱體積/h的流速通過(guò)H+型陽(yáng)離子交換樹脂來(lái)脫除陽(yáng)離子，待流出液PH = 4.0左右時(shí)停止加樣，之后將此流出液以同樣流速通
8過(guò)0H_型陰離子交換樹脂來(lái)脫除陰離子，至流出液呈pH為7. 0時(shí)停止加樣，收集為玉米肽精制液；(F)由步驟(E)中得到的玉米肽精制液，減壓濃縮至固型物含量30% ；(G)玉米肽液濃縮后，經(jīng)噴霧干燥或冷凍干燥制成干粉。按照上述步驟制備的玉米肽稱重為580. 4g，經(jīng)檢測(cè)總氮含量(以干基計(jì))85. 1%, 肽含量(以干基計(jì))彡80.7%，所得的相對(duì)分子質(zhì)量均在3000Da以下，水分含量8.7%，灰分含量(以干基計(jì))< 1.5%，粗脂肪含量(以干基計(jì))<1.2%。
權(quán)利要求
1. 一種玉米肽的制備方法，該方法包括如下步驟(A)取玉米蛋白粉按固液比1 20至1 60加入至65% 90%的乙醇溶液，攪拌， 加熱溶液至；35 55°C，用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至8. 0 11.0，按E/S比為6% 12%添加堿性蛋白酶，按此條件下在醇相中水解2 5h，酶解過(guò)程中用NaOH溶液保持pH值在8. 0 11. 0 ；(B)步驟(A)結(jié)束后，蒸發(fā)出部分乙醇溶液，加水補(bǔ)齊至原水解液的體積，攪拌均勻，加熱溶液至45 65°C，用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至8.0 11.0，按E/S比為2% 10%添加復(fù)合酶，按此條件下在醇相中水解10 60min，酶解過(guò)程中用NaOH溶液保持pH值在8. 0 11. 0 ；(C)步驟(B)結(jié)束后，用HCl溶液調(diào)節(jié)pH至5.0 3. 0,3000 5000rpm，離心15 30min，得上清液，為玉米肽粗制液；(D)將步驟(C)中的玉米肽粗制液注入儲(chǔ)槽中，溶液經(jīng)微濾后通過(guò)分子量截留量為 3000Da超濾膜，溶液中的小分子物質(zhì)經(jīng)中空纖維膜的內(nèi)壁滲透出來(lái)成為超濾液，收集超濾液，為玉米肽超濾液；溶液中的蛋白等大分子物質(zhì)得以保留并得到濃縮，將濃縮液回收至步驟(B)進(jìn)行二次酶解；(E)交換樹脂于去離子水中浸泡處理M小時(shí)后裝柱，然后分別用7.5%鹽酸和10% NaOH對(duì)其進(jìn)行浸泡，轉(zhuǎn)化為H+型陽(yáng)離子交換樹脂和0H_型陰離子交換樹脂，再用去離子水清洗至pH為7. 0待用；將步驟(D)中所得的玉米肽超濾液，以5 10倍柱體積/h的流速通過(guò)H+型陽(yáng)離子交換樹脂來(lái)脫除陽(yáng)離子，待流出液PH = 4.0左右時(shí)停止加樣，之后將此流出液以同樣流速通過(guò)Off型陰離子交換樹脂來(lái)脫除陰離子，至流出液呈pH為7. O時(shí)停止加樣，收集為玉米肽精制液；(F)由步驟(E)中得到的玉米肽精制液，減壓濃縮至固型物含量20% 30%；(G)玉米肽液濃縮后，經(jīng)噴霧干燥或冷凍干燥制成干粉。
全文摘要
本發(fā)明本發(fā)明涉及一種植物蛋白質(zhì)組合物的制備方法，尤其涉及一種玉米肽的制備方法。其制備過(guò)程是首先將玉米蛋白粉加入乙醇在醇相中進(jìn)行酶解，然后蒸發(fā)部分乙醇并添加等量的水，加入復(fù)合酶在水相中繼續(xù)酶解，接著對(duì)水解液進(jìn)行離心，超濾分級(jí)、陰陽(yáng)離子交換脫鹽，最后對(duì)其進(jìn)行濃縮、干燥得到玉米肽干粉。本發(fā)明制備的玉米肽分子量主要集中在600～3000之間，具有很好的醒酒功能。
文檔編號(hào)C07K1/18GK102174626SQ20111000480
公開日2011年9月7日 申請(qǐng)日期2011年1月12日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月12日
發(fā)明者亓培實(shí), 何東平, 何莉萍, 倪倩, 劉良忠, 劉雪姣, 宋洋, 江思佳, 陳燕飛, 黃迪惠 申請(qǐng)人:武漢百信食品有限公司