專利名稱：一種從珠子參中提取純化竹節(jié)參皂苷Ⅳa的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種從珠子參中提取純化竹節(jié)參皂苷IVa的方法。
背景技術(shù)：
珠子參為五加科植物珠子參Panax japonicns C. A. Mey. var. major (Burk.) C. Y. Wu etK. M. Feng 或習(xí)習(xí)葉三七 panax japonicus C. A. Mey. var. bipinnatif idus (Seem.) C.Y.Wu et K.M. Feng的干燥根莖，俗稱紐子七。性味苦、甘，微寒，歸肝、肺、胃經(jīng)。具有補肺養(yǎng)陰，祛瘀止痛，止血的功效。用于氣陰兩虛，煩熱口渴，虛勞咳嗽，跌撲損傷，關(guān)節(jié)痹痛，咳血，吐血，衄血，崩漏，外傷出血等癥。現(xiàn)代研究表明，珠子參主要化學(xué)成分為皂苷、多糖、氨基酸和多種微量元素，其皂苷具有擴血管、降血壓、中樞抑制、抗炎、增強免疫功能、抗腦缺血、促進骨髓造血功能、抗腫瘤等活性，另外，珠子參總皂苷對四氯化碳、對乙酰氨基酚、氯化鎘和丙烯醇誘導(dǎo)的雄性CF-I鼠實驗性肝損傷有保護作用。珠子參被歷年藥典收入之后， 在2010年版中首次規(guī)定其指標性成分，為竹節(jié)參皂苷IVa。竹節(jié)參皂苷IVa是一種齊墩果烷型五環(huán)三萜皂苷類成分，分子式=C42H66O14，分子量794. 965。宋小妹等對不同產(chǎn)區(qū)珠子參藥材中的主要皂苷成分竹節(jié)參皂苷IVa的含量進行了比較研究，8個不同產(chǎn)地的珠子參藥材中竹節(jié)參皂苷IVa的質(zhì)量分數(shù)在2. 17-7. 38%。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種從珠子參中提取純化竹節(jié)參皂苷IVa的方法，產(chǎn)品竹節(jié)參皂苷IVa含量高，經(jīng)HPLC測定含量在98%以上。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案將珠子參適當(dāng)粉碎，加入乙醇水溶液或甲醇水溶液提取，提取1-4次，每次
O.2-4. 5小時，抽濾，合并濾液，減壓濃縮得膏狀物，將膏狀物分散于水中，用有機溶劑萃取， 濃縮得濃縮液，濃縮液再經(jīng)水分散，先后采用大孔樹脂柱和高速逆流色譜分離制備得到高純度竹節(jié)參皂苷IVa，經(jīng)HPLC測定產(chǎn)品竹節(jié)參皂苷IVa的含量為98%以上。所述提取溶劑乙醇水溶液或甲醇水溶液的體積百分比為30-80%，提取方法為微波輔助提取、加熱回流提取或滲漉提取中的一種。所述有機溶劑萃取前分散膏狀物的水用量為5-10倍膏狀物量,有機溶劑為乙酸乙酯和水飽和正丁醇溶液，乙酸乙酯加入量為分散液體積的O. 5-3倍，水飽和正丁醇加入量為分散液體積的O. 5-3倍，萃取2-5次。所述大孔樹脂柱分離，將濃縮液用水分散，置于樹脂柱中，用水洗至水洗液無色， 洗液棄去，再用50-70%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮、干燥得樣品。所述高速逆流色譜分離方法，將樣品溶于溶劑系統(tǒng)中，備用，將溶劑系統(tǒng)置于分液漏斗中振搖，放置，取上相作為固定相，下相為流動相，將固定相泵入色譜柱中，使柱中充滿，再啟動主機轉(zhuǎn)動，轉(zhuǎn)速控制在750-1200r/min，同時將流動相以l_5ml/min流速泵入，待流動相從出液端流出、兩相達到動態(tài)平衡后，將樣品溶液注入色譜系統(tǒng)中，紫外檢測，與竹節(jié)參皂苷IVa標準圖譜對應(yīng)，收集流出液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮、干燥得產(chǎn)品。所述高速逆流色譜溶劑系統(tǒng)由三個組分構(gòu)成，A組分可選自氯仿、二氯甲烷，B 組分可選自乙醇、甲醇，C組分為水，優(yōu)選二氯甲烷-甲醇-水體系，A、B、C的體積比為
4-9 5-10 2-5。所述高速逆流色譜溶劑系統(tǒng)由四個組分構(gòu)成，A組分可選自庚烷、乙醚，B組分可選自氯仿、二氯甲烷、丙酮、正丁醇，C組分可選乙醇、甲醇，D組分為水，優(yōu)選乙醚-正丁醇-甲醇-水、乙醚-丙酮-甲醇-水體系，A、B、C、D的體積比為4-8 3-5 5-10 2_4。本發(fā)明的有益效果(I)本發(fā)明方法操作簡單，可行性強；(2)本發(fā)明采用大孔樹脂柱色譜和高速逆流色譜法分離純化，具有分離效果好，高效、快速、廣品純度聞等特點。
具體實施例方式下面將結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步的說明。實施例I :取珠子參藥材1kg，適當(dāng)粉碎，加入10kg55%乙醇水溶液微波提取3次，每次20分鐘，抽濾，合并濾液，減壓濃縮得膏狀物，將膏狀物分散于相當(dāng)于膏狀物質(zhì)量8倍的水中制成分散液，加入乙酸乙酯萃取3次，每次加入量為900ml，再加入水飽和正丁醇萃取3次，每次加入量為900ml，正丁醇萃取液減壓回收試劑，得到濃縮液，將濃縮液溶解于400ml水中， 上AB-8大孔吸附樹脂柱，用水洗至水洗液無色，洗液棄去，再用60%乙醇洗脫，回收試劑， 減壓濃縮得到樣品。然后采用高速逆流色譜法分離，先將樣品溶解于二氯甲烷-甲醇-水 (4:8:3)溶劑系統(tǒng)中，備用，室溫下將系統(tǒng)二氯甲烷-甲醇-水(4:8:3)置于分液漏斗中振搖，放置，平衡一段時間后，取上相作為固定相，下相為流動相，將固定相泵入色譜柱中，使柱中充滿，再啟動主機轉(zhuǎn)動，轉(zhuǎn)速控制在950r/min，同時將流動相以5ml/min流速泵入，待流動相從出液端流出、兩相達到動態(tài)平衡后，將樣品溶液注入色譜系統(tǒng)中，每次進樣200mg，紫外檢測，與竹節(jié)參皂苷IVa標準圖譜對應(yīng)，收集流出液，減壓蒸干得竹節(jié)參皂苷產(chǎn)品 IVa41. 4g，含量 98. 6%0實施例2:取珠子參藥材1kg，適當(dāng)粉碎，加入8kg50%甲醇水溶液滲漉提取I次，提取4小時，抽濾，合并濾液，減壓濃縮得膏狀物，將膏狀物分散于相當(dāng)于膏狀物質(zhì)量5倍的水中制成分散液，加入乙酸乙酯萃取4次，每次加入量為600ml，再加入水飽和正丁醇萃取4次， 每次加入量為600ml，正丁醇萃取液減壓回收試劑，得到濃縮液，將濃縮液溶解于300ml水中，上HZ806大孔吸附樹脂柱，用水洗至水洗液無色，洗液棄去，再用70 %乙醇洗脫，回收試劑，減壓濃縮得到樣品。然后采用高速逆流色譜法分離，先將樣品溶解于乙醚-正丁醇-甲醇-水(5 3 10 3)溶劑系統(tǒng)中，備用，室溫下將系統(tǒng)乙醚-正丁醇-甲醇-水 (5 3 10 3)置于分液漏斗中振搖，放置，平衡一段時間后，取上相作為固定相，下相為流動相，將固定相泵入色譜柱中，使柱中充滿，再啟動主機轉(zhuǎn)動，轉(zhuǎn)速控制在1000r/min，同時將流動相以2. 5ml/min流速泵入，待流動相從出液端流出、兩相達到動態(tài)平衡后，將樣品溶液注入色譜系統(tǒng)中，每次進樣150mg，紫外檢測，與竹節(jié)參皂苷IVa標準圖譜對應(yīng)，收集流出液，減壓蒸干得竹節(jié)參皂苷產(chǎn)品IVa42. 8g，含量98. 3 %。實施例3 取珠子參藥材2. 5kg，適當(dāng)粉碎，加入25kg60%乙醇水溶液回流提取4次，每次I 小時，抽濾，合并濾液，減壓濃縮得膏狀物，將膏狀物分散于相當(dāng)于膏狀物質(zhì)量7倍的水中制成分散液，加入乙酸乙酯萃取4次，每次加入量為2500ml，再加入水飽和正丁醇萃取3次， 每次加入量為2500ml，正丁醇萃取液減壓回收試劑，得到濃縮液，將濃縮液溶解于IOOOml 水中，上SP825大孔吸附樹脂柱，用水洗至水洗液無色，洗液棄去，再用50%乙醇洗脫，回收試劑，減壓濃縮得到樣品。然后采用高速逆流色譜法分離，先將樣品溶解于二氯甲烷-甲醇-水(8 10 4)溶劑系統(tǒng)中，備用，室溫下將系統(tǒng)二氯甲烷-甲醇-水(8 10 4) 置于分液漏斗中振搖，放置，平衡一段時間后，取上相作為固定相，下相為流動相，將固定相泵入色譜柱中，使柱中充滿，再啟動主機轉(zhuǎn)動，轉(zhuǎn)速控制在850r/min，同時將流動相以4ml/ min流速泵入，待流動相從出液端流出、兩相達到動態(tài)平衡后，將樣品溶液注入色譜系統(tǒng)中， 每次進樣250mg，紫外檢測，與竹節(jié)參皂苷IVa標準圖譜對應(yīng)，收集流出液，減壓蒸干得竹節(jié)參皂苷產(chǎn)品IVal04g，含量98. 8%。實施例4 取珠子參藥材2. 5kg，適當(dāng)粉碎，加入15kg80%甲醇水溶液滲漉提取3次，每次4. 5 小時，合并濾液，減壓濃縮得膏狀物，將膏狀物分散于相當(dāng)于膏狀物質(zhì)量8倍的水中制成分散液，加入乙酸乙酯萃取2次，每次加入量為3000ml，再加入水飽和正丁醇萃取2次，每次加入量為3000ml，正丁醇萃取液減壓回收試劑，得到濃縮液，將濃縮液溶解于1200ml水中，上 SP825大孔吸附樹脂柱，用水洗至水洗液無色，洗液棄去，再用55%乙醇洗脫，回收試劑，減壓濃縮得到樣品。然后采用高速逆流色譜法分離，先將樣品溶解于乙醚-丙酮-甲醇-水 (8 4 7 3)溶劑系統(tǒng)中，備用，室溫下將系統(tǒng)乙醚-丙酮-甲醇-水(8 : 4 : 7 : 3) 置于分液漏斗中振搖，放置，平衡一段時間后，取上相作為固定相，下相為流動相，將固定相泵入色譜柱中，使柱中充滿，再啟動主機轉(zhuǎn)動，轉(zhuǎn)速控制在700r/min，同時將流動相以2ml/ min流速泵入，待流動相從出液端流出、兩相達到動態(tài)平衡后，將樣品溶液注入色譜系統(tǒng)中， 每次進樣200mg,紫外檢測,與竹節(jié)參阜苷IVa標準圖譜對應(yīng),收集流出液,減壓蒸干得竹節(jié)參皂苷產(chǎn)品IValOlg，含量99. 2%0實施例5 取珠子參藥材5kg，適當(dāng)粉碎，加入35kg75%乙醇水溶液加熱回流提取2次，每次 3小時，抽濾，合并濾液，減壓濃縮得膏狀物，將膏狀物分散于相當(dāng)于膏狀物質(zhì)量6倍的水中制成分散液，加入乙酸乙酯萃取3次，每次加入量為3400ml，再加入水飽和正丁醇萃取3次， 每次加入量為3400ml，正丁醇萃取液減壓回收試劑，得到濃縮液，將濃縮液溶解于2000ml 水中，上HZ806大孔吸附樹脂柱，用水洗至水洗液無色，洗液棄去，再用60%乙醇洗脫，回收試劑，減壓濃縮得到樣品。然后采用高速逆流色譜法分離，先將樣品溶解于庚烷-丙酮-甲醇-水(7 : 4 : 8 : 4)溶劑系統(tǒng)中，備用，室溫下將系統(tǒng)庚烷-丙酮-甲醇-水 (7 : 4 : 8 : 4)置于分液漏斗中振搖，放置，平衡一段時間后，取上相作為固定相，下相為流動相，將固定相泵入色譜柱中，使柱中充滿，再啟動主機轉(zhuǎn)動，轉(zhuǎn)速控制在850r/min，同時將流動相以3ml/min流速泵入，待流動相從出液端流出、兩相達到動態(tài)平衡后，將樣品溶液注入色譜系統(tǒng)中，每次進樣250mg，紫外檢測，與竹節(jié)參皂苷IVa標準圖譜對應(yīng)，收集流出液，減壓蒸干得竹節(jié)參皂苷產(chǎn)品IVa207g，含量98. 2%。實施例6 取珠子參藥材5kg，適當(dāng)粉碎，加入40kg30%乙醇水溶液微波提取4次，每次30分鐘，抽濾，合并濾液，減壓濃縮得膏狀物，將膏狀物分散于相當(dāng)于膏狀物質(zhì)量5倍的水中制成分散液，加入乙酸乙酯萃取3次，每次加入量為2800ml，再加入水飽和正丁醇萃取3次， 每次加入量為2800ml，正丁醇萃取液減壓回收試劑，得到濃縮液，將濃縮液溶解于2000ml 水中，上AB-8大孔吸附樹脂柱，用水洗至水洗液無色，洗液棄去，再用50 %乙醇洗脫，回收試劑，減壓濃縮得到樣品。然后采用高速逆流色譜法分離，先將樣品溶解于庚烷-正丁醇-甲醇-水(4 : 5 : 5 : 2)溶劑系統(tǒng)中，備用，室溫下將系統(tǒng)庚烷-正丁醇-甲醇-水 (4 5 5 2)置于分液漏斗中振搖，放置，平衡一段時間后，取上相作為固定相，下相為流動相，將固定相泵入色譜柱中，使柱中充滿，再啟動主機轉(zhuǎn)動，轉(zhuǎn)速控制在750r/min，同時將流動相以3. 5ml/min流速泵入，待流動相從出液端流出、兩相達到動態(tài)平衡后，將樣品溶液注入色譜系統(tǒng)中，每次進樣200mg，紫外檢測，與竹節(jié)參皂苷IVa標準圖譜對應(yīng)，收集流出液，減壓蒸干得竹節(jié)參皂苷產(chǎn)品IVa203g，含量98. 7%。
權(quán)利要求
1.一種從珠子參中提取純化竹節(jié)參皂苷IVa的方法，其特征在于其提取純化步驟包括將珠子參適當(dāng)粉碎，加入乙醇水溶液或甲醇水溶液提取，提取1-4次，每次O. 2-4. 5小時，抽濾，合并濾液，減壓濃縮得膏狀物，將膏狀物分散于水中，用有機溶劑萃取，濃縮得濃縮液，濃縮液再經(jīng)水分散，先后采用大孔樹脂柱和高速逆流色譜分離制備得到高純度竹節(jié)參皂苷IVa，經(jīng)HPLC測定產(chǎn)品竹節(jié)參皂苷IVa的含量為98%以上。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述方法，其特征在于所述提取溶劑乙醇水溶液或甲醇水溶液的體積百分比為30-80%，提取方法為微波輔助提取、加熱回流提取或滲漉提取中的一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述方法，其特征在于所述有機溶劑萃取前分散膏狀物的水用量為 5-10倍膏狀物量，有機溶劑為乙酸乙酯和水飽和正丁醇溶液，乙酸乙酯加入量為分散液體積的O. 5-3倍，水飽和正丁醇加入量為分散液體積的O. 5-3倍，萃取2-5次。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述方法，其特征在于所述大孔樹脂柱分離，將濃縮液用水分散，置于樹脂柱中，用水洗至水洗液無色，洗液棄去，再用50-70 %乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮、干燥得樣品。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述方法，其特征在于所述高速逆流色譜分離方法，將樣品溶于溶劑系統(tǒng)中，備用，將溶劑系統(tǒng)置于分液漏斗中振搖，放置，取上相作為固定相，下相為流動相，將固定相泵入色譜柱中，使柱中充滿，再啟動主機轉(zhuǎn)動，轉(zhuǎn)速控制在750-1200r/min，同時將流動相以l_5ml/min流速泵入，待流動相從出液端流出、兩相達到動態(tài)平衡后，將樣品溶液注入色譜系統(tǒng)中，紫外檢測，與竹節(jié)參皂苷IVa標準圖譜對應(yīng)，收集流出液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮、干燥得產(chǎn)品。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述高速逆流色譜溶劑系統(tǒng)由三個組分構(gòu)成，A組分可選自氯仿、二氯甲燒，B組分可選自乙醇、甲醇，C組分為水，優(yōu)選二氯甲烷-甲醇-水體系，A、B、C的體積比為 4-9 5-10 2-5。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述高速逆流色譜溶劑系統(tǒng)由四個組分構(gòu)成，A組分可選自庚烷、乙醚，B組分可選自氯仿、二氯甲烷、丙酮、正丁醇，C組分可選乙醇、甲醇，D組分為水，優(yōu)選乙醚-正丁醇-甲醇-水、乙醚-丙酮-甲醇-水體系，A、B、C、D的體積比為 4-8 3-5 5-10 2-4。
全文摘要
一種從珠子參中提取純化竹節(jié)參皂苷IVa的方法，采用珠子參為提取原料，經(jīng)適當(dāng)粉碎，用乙醇水溶液或甲醇水溶液提取，提取液抽濾，減壓濃縮得膏狀物，膏狀物分散于水中，有機溶劑萃取，濃縮得濃縮液，再經(jīng)水分散，分散液先后采用大孔樹脂柱和高速逆流色譜進行分離制備高濃度竹節(jié)參皂苷IVa。本發(fā)明工藝穩(wěn)定，產(chǎn)品竹節(jié)參皂苷IVa含量高，可達98％以上。
文檔編號C07J63/00GK102603851SQ20111002617
公開日2012年7月25日 申請日期2011年1月25日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月25日
發(fā)明者劉東鋒, 李法慶 申請人:蘇州寶澤堂醫(yī)藥科技有限公司