專利名稱：一種從植物藥材柳杉葉馬尾杉中提取高純度石杉?jí)A甲和石杉?jí)A乙的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從植物藥材柳杉葉馬尾杉中提取高純度石杉?jí)A甲和石杉?jí)A乙的 方法，屬于天然產(chǎn)物化學(xué)的技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
石杉?jí)A甲和石杉?jí)A乙由石杉科植物中提取的一種生物堿，是一強(qiáng)效的膽堿酯酶可 逆性抑制劑，其作用特點(diǎn)與新斯的明相似，但作用維持時(shí)間比后者為長。對(duì)真性膽堿酯酶具 有選擇性的抑制，抑制強(qiáng)度是假性膽堿酯酶的數(shù)千倍；抑制方式為競爭性和非競爭性的混 合型抑制，與單純競爭性抑制劑有顯著不同；易通過血腦屏障進(jìn)入中樞，兼具有中樞及外周 治療作用；有效時(shí)間長；從胃腸道吸收良好；安全指數(shù)大；穩(wěn)定性好。它易透過血腦屏障，對(duì) 腦內(nèi)乙酰膽堿脂酶經(jīng)注射或ig該藥，有明顯促進(jìn)學(xué)習(xí)、記憶過程或明顯改善記憶障礙的作 用，且選擇性分布在皮質(zhì)海馬等與學(xué)習(xí)、記憶有關(guān)的腦區(qū).I(AchE)具有強(qiáng)效抑制作用，明 顯提高腦內(nèi)乙酰膽堿水平，是AchE —種可逆性的抑制劑石杉?jí)A甲片用于治療良性衰老性 遺忘癥(BenigaSenescent Forgetfulners BSF)禾口阿爾米末病(Alzeheimers Disease,AD) 有良好療效。到目前為止，已在多種植物中發(fā)現(xiàn)了石杉?jí)A甲和石杉?jí)A乙，如石杉科的千層塔、蛇 足石杉、皺邊石杉、四川石杉、金絲條馬尾杉、、閩浙馬尾杉等。目前石杉?jí)A甲和石杉?jí)A乙的 來源主要是從千層塔，含量極為有限。千層塔中的石杉?jí)A甲的含量被認(rèn)為是最高的，也僅達(dá) 0. 9-2/ 萬。。因此，公開號(hào)為 CN200710099907. 8、CN200410042760. 5、CN200710098440. 5、 CN200910014866. 7的中國專利介紹了一種從中藥千層塔中提取石杉?jí)A甲和石杉?jí)A乙的方 法，是將千層塔粉碎，用酸水提取；過大孔樹脂柱或者制備色譜分離，減壓濃縮，萃取得石杉 堿甲和石杉?jí)A乙精品。這些專利都是以千層塔為原材料進(jìn)行提取石杉?jí)A甲和石杉?jí)A乙，現(xiàn) 在資源面臨潰乏，價(jià)格從原來的20元/kg漲到了 160元/kg。原材料的成本增加，98%白藜 蘆醇的價(jià)格從4000元/kg漲到了 10000元左右/kg。公開號(hào)為CN1448390的中國專利介紹了一種從中草藥千層塔中提取石杉?jí)A甲的 方法，它依次包括以下工藝步驟原料處理粉碎一浸漬一濃縮一萃取(反復(fù))一柱層析一結(jié) 晶一高效液相色譜選段一濃縮干燥一成品。本方法由于其原料采用超微粉粉料，并利用制 備型高效液相色譜儀進(jìn)行分離提純，可使收率達(dá)到十萬分之七至九，提高收率30 %，純度也 得以提高，達(dá)到98%以上，受制于設(shè)備及其原料，不利于工業(yè)化大生產(chǎn)。柳杉葉馬尾杉，石杉科小型蕨類。株高20 25厘米，莖簇生，直立，上部傾斜至下 垂，3 4回二叉分枝，葉螺旋狀排列，斜展而外指，孢子葉與營養(yǎng)葉同大同形，孢子囊圓腎 形。全草入藥，有活絡(luò)祛瘀、清熱解毒、解表透疹之功效。產(chǎn)于江西、浙江、臺(tái)灣等省區(qū)。迄今 為止的文獻(xiàn)對(duì)柳杉葉馬尾杉中石杉?jí)A甲和石杉?jí)A乙的提取工藝沒有研究。而且柳杉葉馬尾 杉中石杉?jí)A甲和石杉?jí)A乙含量較高，約為9-20/萬，是千層塔的10倍左右，其價(jià)格便宜，更 有利于替代千層塔。因而，對(duì)柳杉葉馬尾杉進(jìn)行深加工意義非凡。探索從柳杉葉馬尾杉中石杉?jí)A甲和石杉?jí)A乙，其意義相當(dāng)遠(yuǎn)大，不但可以解決石杉?jí)A甲和石杉?jí)A乙生產(chǎn)原料問題， 還可以增加農(nóng)民收入，服務(wù)該中藥的地方經(jīng)濟(jì)。

發(fā)明內(nèi)容
種從植物藥材柳杉葉馬尾杉中提取高純度石杉?jí)A甲和石杉?jí)A乙的方法。將經(jīng)過前 處理的柳葉杉馬尾杉干燥全株粗粉加入一定量的溶劑回流提取，采用離子交換樹脂吸附操 作，濃縮，用有機(jī)溶劑萃取，反相柱層析，脫色處理后結(jié)晶和重結(jié)晶得到高純度石杉?jí)A甲和 石杉?jí)A乙純品。(1)粉碎干燥柳杉葉馬尾杉干燥粉碎至1-10目，待用；(2)加去離子水配成飽和的酸水PH值=5，提取2次，溶劑用量按其體積配比分別 為原料的10倍、8倍，提取時(shí)間分別為2、1. 5小時(shí)，合并各次提取液，過濾得濾液；(3)將所得的濾液上陽離子交換樹脂(型號(hào)001 X 3，長沙大禹化工有限公司)，吸 附30min后，用3倍上柱液體積的氨水洗脫，濃縮，調(diào)PH值在中性后靜置10h，過濾得濾液， 濃縮至原體積的1/15 ；(4)將濾液上反相色譜柱(型號(hào)TSK_L，日本東曹株式會(huì)社)分離，分段收集液 體，得液體1，液體2 ；(5)分別用乙酸乙酯和石油醚(體積比=1 1)混合溶液萃取，得到石杉?jí)A甲粗 品和石杉?jí)A乙粗品；(6)分別往石杉?jí)A甲和石杉?jí)A乙粗品中加80%乙醇按其體積配比加入100-150倍 量，加熱充分溶解后加0.1倍量的弱酸性活性炭，間歇攪拌脫色lh，趁熱過濾，濾液濃縮至 原體積的1/15，結(jié)晶8h，過濾得粗結(jié)晶；(7)分別往粗結(jié)晶中加入95%乙醇按其體積比100-150倍量，加熱溶解，濃縮至 1/15，放置析晶，析出白色針狀結(jié)晶，過濾得到結(jié)晶，經(jīng)真空干燥即得純度大于95%的石杉 堿甲和石杉?jí)A乙產(chǎn)品在一個(gè)實(shí)驗(yàn)要求1的方法，其中步驟1的酸水的PH值=5。在另外一個(gè)實(shí)驗(yàn)1或2的方法要求，其中步驟2的過濾過程是陶瓷膜過濾。在另一個(gè)實(shí)驗(yàn)方案要求1的方法，其中步驟5的混合溶劑為乙酸乙酯和石油醚 (1 1)混合溶劑。在一個(gè)實(shí)驗(yàn)方案中要求，其中步驟4中所加入的80%乙醇、活性碳，其體積(V)/重 量(kg)比=100-150 1。在另一個(gè)實(shí)驗(yàn)方案中，其中步驟5中必須添加95%以上的乙醇重結(jié)晶。技術(shù)效果1、本發(fā)明方法中所用的原料、設(shè)備均為常見的普通原料、設(shè)備，避免了工業(yè)化生產(chǎn) 過程中對(duì)于昂貴原材料、儀器的依賴，大大地降低了生產(chǎn)成本；2、柳杉葉馬尾杉價(jià)格低，來源方便。使用柳杉葉馬尾杉作為千層塔等藥材的替代， 既大大提高了柳杉葉馬尾杉的利用效率，提高柳杉葉馬尾杉的附加值，又?jǐn)[脫了對(duì)于千層 塔等藥材的依賴，完全緩解了市場對(duì)千層塔等藥材的大量需求，保護(hù)了千層塔等藥用資源。3、本發(fā)明方法操作簡單，所用柳杉葉馬尾杉的石杉?jí)A甲和石杉?jí)A乙的含量是千層 塔的10倍左右，這極大的降低了石杉?jí)A甲和石杉?jí)A乙的生產(chǎn)成本，其技術(shù)路線根簡短，簡化了生產(chǎn)過程。4、本發(fā)明所用的試劑均為無毒、廉價(jià)、量產(chǎn)的化學(xué)試劑，整個(gè)過程中可利用成熟的 試劑回收的常規(guī)技術(shù)，這極大地降低了向環(huán)境排放廢棄物。5、經(jīng)過長期摸索，本發(fā)明確定了采用85-95 %的乙醇在室溫條件下進(jìn)行結(jié) 晶，一方面可以減少乙醇的損耗，另一方面石杉?jí)A甲和石杉?jí)A乙的純度是最高，可達(dá)到 98. 57-99. 53%。


附圖1 石杉?jí)A甲的高效液相色譜圖附圖2 石杉?jí)A乙的高效液相色譜圖
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明，以下實(shí)施例旨在說明本發(fā)明而不是 對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步限定。實(shí)施例1粉碎干燥柳杉葉馬尾杉50kg，兩次提取加去離子水配成飽和的酸水(PH = 5)的量 分別為500L、400L，8(TC加熱攪拌分別提取2h、l. 5h，微濾器過濾，將所得的濾液上離子交 換樹脂，吸附30min后，用3BV上柱液氨水洗脫，濃縮，調(diào)PH值在中性后靜置10h，過濾得濾 液，濃縮至原體積的1/15 ；將濾液上反相色譜柱分離，分段收集液體，得液體1 (石杉?jí)A甲)， 液體2(石杉?jí)A乙)；分別用乙酸乙酯和石油醚(體積比=1 1)混合溶液萃取兩液，得到 石杉?jí)A甲粗品和石杉?jí)A乙粗品；分別往石杉?jí)A甲和石杉?jí)A乙粗品中加80%乙醇按其體積 配比加入100-150倍量，加熱充分溶解后加0. 1倍量的弱酸性活性炭，間歇攪拌脫色lh，趁 熱過濾，濾液濃縮至原體積的1/15，結(jié)晶他，過濾得粗結(jié)晶；分別往粗結(jié)晶中加入95%乙醇 按其體積比100-150倍量，加熱溶解，濃縮至1/15，放置析晶，析出白色針狀結(jié)晶，過濾得到 結(jié)晶，經(jīng)真空干燥即得石杉?jí)A甲30g和石杉?jí)A乙35g樣品，回收率分別為60%，50%。經(jīng)檢測，AgilentllOO高效液相色譜儀，色譜柱為 Hypersil 0DS(150mmX4. 6mm, 5μ)，流動(dòng)相為乙腈磷酸鹽緩沖液=14 86 ；檢測波長為310nm ；流速為lml/min ；進(jìn)樣 量為20 μ L。石杉?jí)A甲樣品的純度為98. 5% HPLC，石杉?jí)A乙樣品純度為98. 12% HPLC。結(jié) 果如圖1所示。實(shí)施例2粉碎干燥柳杉葉馬尾杉100kg，兩次提取加去離子水配成飽和的酸水(PH = 5)的 量分別為900L、700L，8(TC加熱攪拌分別提取2h、l. 5h，微濾器過濾，將所得的濾液上離子 交換樹脂，吸附30min后，用3BV上柱液氨水洗脫，濃縮，調(diào)PH值在中性后靜置10h，過濾 得濾液，濃縮至原體積的1/15 ；將濾液上反相色譜柱分離，分段收集液體，得液體1(石杉 堿甲)，液體2(石杉?jí)A乙)；分別用乙酸乙酯和石油醚(體積比=1 1)混合溶液萃取兩 液，得到石杉?jí)A甲粗品和石杉?jí)A乙粗品；分別往石杉?jí)A甲和石杉?jí)A乙粗品中加80%乙醇按 其體積配比加入100-150倍量，加熱充分溶解后加0. 1倍量的弱酸性活性炭，間歇攪拌脫 色lh，趁熱過濾，濾液濃縮至原體積的1/15，結(jié)晶8h，過濾得粗結(jié)晶；分別往粗結(jié)晶中加入 95%乙醇按其體積比100-150倍量，加熱溶解，濃縮至1/15，放置析晶，析出白色針狀結(jié)晶，過濾得到結(jié)晶，經(jīng)真空干燥即得石杉?jí)A甲55g和石杉?jí)A乙64g樣品。
權(quán)利要求
1.一種從植物藥材柳杉葉馬尾杉中提取高純度石杉?jí)A甲和石杉?jí)A乙的方法，步驟包括(1)粉碎干燥柳杉葉馬尾杉干燥粉碎至1-10目，待用；(2)加去離子水配成飽和的酸水PH值=5，提取2次，溶劑用量按其體積配比分別為原 料的10倍、8倍，提取時(shí)間分別為2、1. 5小時(shí)，合并各次提取液，過濾得濾液；(3)將所得的濾液上離子交換樹脂，，吸附30min后，用3BV上柱液氨水洗脫，濃縮，調(diào) PH值在中性后靜置10h，過濾得濾液，濃縮至原體積的1/15 ；(4)將濾液上反相色譜柱分離，分段收集液體，得液體1，液體2；(5)分別用乙酸乙酯和石油醚(體積比=1 1)混合溶液萃取，得到石杉?jí)A甲粗品和 石杉?jí)A乙粗品；(6)分別往石杉?jí)A甲和石杉?jí)A乙粗品中加80%乙醇按其體積配比加入100-150倍量， 加熱充分溶解后加0. 1倍量的弱酸性活性炭，間歇攪拌脫色lh，趁熱過濾，濾液濃縮至原體 積的1/15，結(jié)晶8h，過濾得粗結(jié)晶；(7)分別往粗結(jié)晶中加入95%乙醇按其體積比100-150倍量，加熱溶解，濃縮至1/15， 放置析晶，析出白色針狀結(jié)晶，過濾得到結(jié)晶，經(jīng)真空干燥即得純度大于95%的石杉?jí)A甲和 石杉?jí)A乙產(chǎn)品
2.權(quán)利要求1的方法，其中步驟1的酸水的PH值=5。
3.權(quán)利要求1或2的方法，其中步驟2的過濾過程是陶瓷膜過濾。
4.權(quán)利要求1的方法，其中步驟5的混合溶劑為乙酸乙酯和石油醚(1 1)混合溶劑。
5.權(quán)利要求1或2的方法，其中步驟4中所加入的80%乙醇、活性碳，其體積(V)/重 量(kg)比=100-150 1。
6.權(quán)利要求5的方法，其中步驟5中必須添加95%以上的乙醇重結(jié)晶。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種從植物藥材柳杉葉馬尾杉中提取分離高純度石杉?jí)A甲和石杉?jí)A乙的方法，大大地增加了從新物種提取石杉?jí)A甲和石杉?jí)A乙的依據(jù)。提出了一整套從柳杉葉馬尾杉分離提取得到高純度的石杉?jí)A甲和石杉?jí)A乙，采用酸水提取，過離子交換樹脂，濃縮，萃取，反相柱層析，活性炭脫色，結(jié)晶和重結(jié)晶，得到石杉?jí)A甲和石杉?jí)A乙純品。整個(gè)分離過程中對(duì)環(huán)境條件要求不高，分離時(shí)間較短，純度最高。分離材料易得便宜，分離操作過程簡單，易控制，采用結(jié)晶和重結(jié)晶，純化效率高，使用試劑無毒。
文檔編號(hào)C07D221/22GK102070527SQ20111002648
公開日2011年5月25日 申請(qǐng)日期2011年1月25日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月25日
發(fā)明者趙勇彪 申請(qǐng)人:趙勇彪