專利名稱：一種從發(fā)酵液中分離提取西羅莫司的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種從發(fā)酵液中快速分離提取西羅莫司的方 法。
背景技術(shù)：
西羅莫司是含大環(huán)三稀內(nèi)酯類化合物，分子結(jié)構(gòu)如(I)，由吸水鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)， 是一種具有抗真菌、抗增殖和抗腫瘤活性的新型強(qiáng)效免疫抑制劑。
權(quán)利要求
1. 一種從發(fā)酵液中分離提取西羅莫司的方法，其步驟如下(1)西羅莫司發(fā)酵菌絲體取西羅莫司發(fā)酵液進(jìn)行過濾或離心分離，去除發(fā)酵上清液， 得西羅莫司菌絲體；(2)萃取、脫色采用丙酮、甲醇或乙醇溶劑提取菌絲體1-3次，萃取液進(jìn)一步用乙酸乙 酯進(jìn)行萃取廣3次，用活性炭脫色，減壓濃縮后得到西羅莫司粗提物；(3)高速逆流色譜分離高速逆流色譜儀采用上海同田生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的 TBE-300A型、TBE-1000A或TBE-5000A型，分離方法為以正己烷-乙酸乙酯_乙醇_水按體 積比例(壙9) -(3飛)44、)- (3^7)混合為兩相溶劑系統(tǒng)，上相為固定相，下相為流動(dòng)相， 在流速2 5 mL/min，轉(zhuǎn)速600 1000 r/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為觀0 nm條件下，取西羅莫司粗提物 5(T250mg溶解于下相中，進(jìn)樣，收集西羅莫司分離峰，得西羅莫司分離樣品；(4)干燥將西羅莫司分離樣品溶液進(jìn)行減壓濃縮后，冷凍干燥，得到純度較高的白色 西羅莫司樣品粉末。
全文摘要
本發(fā)明提出一種以逆流色譜為核心的西羅莫司快速分離提取方法，其提取流程如下西羅莫司發(fā)酵菌絲體——萃取、脫色——高速逆流色譜分離——干燥。本發(fā)明采用逆流色譜分離技術(shù)，取代傳統(tǒng)提取工藝的多次層析的步驟，采用萃取和逆流相結(jié)合，一次逆流分離可以得到純度接近90%的雷帕霉素產(chǎn)品。相對(duì)復(fù)雜的雷帕霉素傳統(tǒng)提取工藝相比，采用發(fā)酵菌絲體粗提后經(jīng)高速逆流色譜方法具有分離路線簡(jiǎn)單，并且有利于工藝放大，適合于大規(guī)模從發(fā)酵液中快速分離制備高附加值雷帕霉素單體。本發(fā)明具有收率高，提取步驟簡(jiǎn)單、節(jié)省溶劑等優(yōu)點(diǎn)，可應(yīng)用于工業(yè)實(shí)際放大生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C07D498/18GK102070652SQ201110041509
公開日2011年5月25日 申請(qǐng)日期2011年2月21日 優(yōu)先權(quán)日2011年2月21日
發(fā)明者李進(jìn), 鄒祥 申請(qǐng)人:西南大學(xué)