專利名稱：一種杯莧甾酮的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然植物提取領(lǐng)域，具體涉及ー種杯莧留酮的制備方法。
背景技術(shù)：
川牛膝為常用中藥，是著名的川產(chǎn)道地中藥材。具有逐瘀通經(jīng)、通利關(guān)節(jié)、利尿通淋之功效,用于經(jīng)閉癥瘕、胞衣不下、跌撲損傷、風(fēng)濕痹痛、足痿筋攣、尿血血淋。川牛膝的主要成分為生物堿和留醇類物質(zhì)，如杯莧留酮、頭花蒽草留酮、促脫皮留酮、紅留酮等，另外還有阿魏酸。川牛膝的主要藥理作用有活血通經(jīng)、祛風(fēng)濕、通利關(guān)節(jié)、利尿通淋，以及對(duì)高血壓性心臟病和痛經(jīng)等疾病的治療作用。杯覓甾酮(cyasterone)分子式C29H44O8,分子量 520. 65, mp. 168-173 V,為無(wú)色針狀結(jié)晶。杯莧留酮在白毛夏枯草和川牛膝均有分離得到，但在川牛膝中的含量較高。T. Konoshima等報(bào)道，從白毛夏枯草中分離得到的杯莧甾酮對(duì)由腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)促進(jìn)劑12-0-te-trade canoylphorbo 1-13-acetate (TPA)誘導(dǎo)產(chǎn)生的 Epstein-Barr 病毒早期抗原(EBV-EA)具有強(qiáng)烈的抑制作用，并顯出潛在的抗腫瘤活性。黎萬(wàn)壽等研究發(fā)現(xiàn)杯莧甾酮對(duì)去勢(shì)小鼠的體重和子宮系數(shù)有増加趨勢(shì)，子宮濕重有顯著增長(zhǎng)，提示其為川牛膝的雌激素樣活性的有效成分；杯莧留酮能増加去勢(shì)大鼠提肛肌重量，提示其有蛋白質(zhì)同化作用；實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，杯莧留酮的藥理活性與川牛膝強(qiáng)筋健骨“其滋補(bǔ)之功如牛之多力也”相符，與中醫(yī)臨床用藥功能主治基本吻合。目前主要采用溶劑萃取、常壓反復(fù)硅膠柱層析或氧化鋁柱層析進(jìn)行分離，存在產(chǎn)量小、得率低、生產(chǎn)周期長(zhǎng)等問(wèn)題，不適用于エ業(yè)生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供ー種杯莧留酮的制備方法，該方法操作簡(jiǎn)單、得率高、安全環(huán)保，可快速大量分離高純度杯莧甾酮。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下(I)提取取川牛膝藥材粉碎成粗粉，加甲醇或こ醇加熱至65°C _85°C，恒溫浸泡2-4小時(shí)，濾出，濾液減壓回收得川牛膝浸膏；(2)大孔樹(shù)脂柱富集將川牛膝浸膏過(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱，用水和こ醇洗脫，醇洗脫液濃縮后得到濃縮液；(3)制備液相分離取一定量的濃縮液，用甲醇溶解上反相C18色譜柱，用こ酸こ酷-甲醇或氯仿-甲醇作為流動(dòng)相，梯度洗脫，紫外檢測(cè)器檢測(cè)流出液，根據(jù)所得的色譜圖收集杯莧留酮組分，將洗脫液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，得杯莧留酮粗晶；(4)重結(jié)晶將杯莧甾酮粗晶用庚烷-丙酮重結(jié)晶，冷凍干燥得到高純度杯莧甾酮晶體。
步驟(2)所述大孔樹(shù)脂可選D1300、AB-8、D101、HPD100等非極性或弱極性大孔吸附樹(shù)脂。
步驟(2)所述大孔吸附樹(shù)脂洗脫用こ醇溶液體積百分比為70-80%，洗脫用量為原藥材的6-12倍。步驟(3)所述流動(dòng)相こ酸こ酷-甲醇中甲醇的體積百分比為20-80%。步驟(3)所述流動(dòng)相氯仿-甲醇中甲醇的體積百分比為20-80%。步驟(3)所述洗脫梯度程序如下 色譜柱填料為C18，流動(dòng)相為こ酸こ酯或氯仿(A)和甲醇(B)，洗脫梯度見(jiàn)下表，流速為2-10ml/min，柱溫為室溫。
權(quán)利要求
1.一種杯莧留酮的制備方法，其特征在于它包括以下步驟 (1)提取取川牛膝藥材粉碎成粗粉，加甲醇或乙醇加熱至65°C_85°C，恒溫浸泡2-4小時(shí)，濾出，濾液減壓回收得川牛膝浸膏； (2)大孔吸附樹(shù)脂柱富集將川牛膝浸膏過(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱，用水和乙醇洗脫，醇洗脫液濃縮后得到濃縮液； (3)制備液相分離取一定量的濃縮液，用甲醇溶解上反相C18色譜柱，用乙酸乙酯-甲醇或氯仿-甲醇作為流動(dòng)相，梯度洗脫，收集杯莧留酮組分，將洗脫液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，得杯莧甾酮粗晶； (4)重結(jié)晶將杯莧留酮粗晶用庚烷-丙酮重結(jié)晶，冷凍干燥得到高純度杯莧留酮晶體。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的杯莧甾酮的制備方法，其特征在于步驟(2)所述大孔樹(shù)脂可選D1300、AB-8、DlOl、HPDlOO等非極性或弱極性大孔吸附樹(shù)脂。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的杯莧留酮的制備方法，其特征在于步驟(2)所述大孔吸附樹(shù)脂洗脫用乙醇溶液體積百分比為70-80%，洗脫用量為原藥材的6-12倍。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的杯莧留酮的制備方法，其特征在于步驟(3)所述流動(dòng)相乙酸乙酯-甲醇中甲醇的體積百分比為20-80%。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的杯莧留酮的制備方法，其特征在于步驟(3)所述流動(dòng)相氯仿-甲醇中甲醇的體積百分比為20-80%。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的杯莧留酮的制備方法，其特征在于步驟(4)所述庚烷-丙酮的體積比為5-7 1。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種杯莧甾酮的制備方法，其制備方法是A.取川牛膝粗粉，用乙醇或甲醇提取后除渣；B.將提取液濃縮，再經(jīng)大孔樹(shù)脂吸附洗脫；C.制備液相分離；D.庚烷-丙酮重結(jié)晶，得到純度98.5％以上的杯莧甾酮結(jié)晶產(chǎn)品。本發(fā)明方法簡(jiǎn)單、得率高，可一次性得到大量高純度產(chǎn)品，具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和學(xué)術(shù)價(jià)值。
文檔編號(hào)C07J17/00GK102649804SQ20111004531
公開(kāi)日2012年8月29日 申請(qǐng)日期2011年2月25日 優(yōu)先權(quán)日2011年2月25日
發(fā)明者劉東鋒, 李法慶 申請(qǐng)人:蘇州寶澤堂醫(yī)藥科技有限公司