專利名稱：靶向性聚乙二醇化脂質(zhì)藥用材料的合成方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥用脂質(zhì)材料的合成技術(shù)，特別涉及一種靶向性聚乙二醇化脂質(zhì)藥用材料的合成方法，屬于藥用脂質(zhì)材料合成技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
近年來，在生物材料和高分子化學(xué)高速發(fā)展的推動(dòng)下，各種功能的高分子材料不斷涌現(xiàn)，促使藥物制劑和劑型的研究飛速發(fā)展，并進(jìn)入給藥系統(tǒng)(Drug delivery system, DDS)時(shí)代，使研制長效、高效、靶向性等新型給藥系統(tǒng)成為藥劑學(xué)研究發(fā)展的方向。聚乙二醇(PEG)具有良好的水溶性、生物相容性、無抗原、毒性小等特點(diǎn)。常用來修飾磷脂酰膽堿及脂肪酸作為制備乳劑或脂質(zhì)體的輔料，該輔料對(duì)脂質(zhì)載體表面進(jìn)行修飾后，可增加脂質(zhì)載體的親水性和空間位阻，還可以避免其被體內(nèi)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬，并且能提高脂質(zhì)載體的穩(wěn)定性，使脂質(zhì)載體具有更長的體內(nèi)循環(huán)時(shí)間，更高的血藥濃度聚集，使得在病變部位更好的發(fā)揮療效，且能減輕毒副作用。在PEG的另一端接上靶向分子，被修飾的脂質(zhì)材料，也具有良好的生物相容性、無抗原、毒性小等特點(diǎn)，將它作為藥物載體，其優(yōu)點(diǎn)包括用于臨床能賦予藥用載體靶向性，可提高靶向組織的藥物濃度，增加藥物的治療指數(shù)以及擴(kuò)大臨床應(yīng)用等。有專利申請(qǐng)?zhí)枮?00610150050. 3的發(fā)明專利申請(qǐng)公開了一種聚乙二醇和膽固醇通過小分子的脂肪酸連接，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)此方法過程復(fù)雜，聚乙二醇與膽固醇相連的是酯鍵連接，在酸堿的條件下不穩(wěn)定，尤其在堿性條件下酯鍵易斷裂。其聚乙二醇(PEG) 鏈的長度不能在反應(yīng)中自控，而必須在反應(yīng)中加入一定長度的PEG鏈；又有專利申請(qǐng)?zhí)枮?00610168130. 1的發(fā)明專利申請(qǐng)，公開了將PEG通過小分子的化合物以醚鍵接至于甾醇(ChoL)合成共聚物(PGC)，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，雖然以醚鍵連接結(jié)構(gòu)較穩(wěn)定，但制備甾醇和聚乙二醇以醚鍵連接的過程較為復(fù)雜、且成本高；而聚乙二醇鏈也需購買，其長度不能在反應(yīng)中自控的，必須在反應(yīng)中加入一定長度的PEG鏈；還有文獻(xiàn)[Hyperbranched polyglycerol-based lipids via oxyanionic polymerization toward multifunctional stealth liposomes. Biomacromolecules. 2010，11，568-574]中僅僅只有陰離子聚乙二醇化膽固醇的合成和空白脂質(zhì)體的制備，并未涉及其它脂質(zhì)化合物的聚乙二醇化，此外沒有對(duì)PEG的端基更進(jìn)一步的修飾。以上幾種所述方法制備的脂質(zhì)材料不僅存在制備過程復(fù)雜，生產(chǎn)成本高，而且均存在其結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性差，PEG鏈的長度不能自控，載體沒有主動(dòng)靶向性等缺陷。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的正是為了克服現(xiàn)有技術(shù)中所存在的不足，提供一種聚乙二醇(PEG) 化脂質(zhì)藥用材料和一種靶向性聚乙二醇(PEG)化脂質(zhì)藥用材料的合成方法；該方法是采用陰離子聚合法，由引發(fā)劑直接誘發(fā)環(huán)氧乙烷單體聚合，并通過酸化和純化得到生物相容性良好的聚乙二醇化脂質(zhì)材料，或進(jìn)一步通過化學(xué)方法將聚乙二醇化脂質(zhì)材料偶聯(lián)上靶向分子，將具有靶向分子的聚乙二醇化脂質(zhì)材料作為藥用材料時(shí)，能賦予藥用載體的靶向性，用于臨床可提高靶向組織的藥物濃度。為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)措施構(gòu)成的技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明的靶向性聚乙二醇化脂質(zhì)藥用材料的合成方法，按照本發(fā)明，采用陰離子聚合法，以帶有羥基的脂質(zhì)作為引發(fā)劑，直接誘發(fā)環(huán)氧乙烷單體聚合，通過控制環(huán)氧乙烷單體和引發(fā)劑的比例，并經(jīng)酸化和純化后，得到聚乙二醇化脂質(zhì)藥用材料；或進(jìn)一步通過化學(xué)方法偶聯(lián)靶向分子，即得到具有靶向功能的聚乙二醇化脂質(zhì)藥用材料；包括以下工藝步驟(1)將1 3摩爾份量的堿金屬剪碎入瓶，并在室溫下、氮?dú)饣蛩逍詺怏w保護(hù)下，與 1 3摩爾份量的萘在無水四氫呋喃(THF)中攪拌反應(yīng)4 48h，生成堿金屬萘溶液；(2)在堿金屬萘溶液中加入1摩爾份量的含有羥基的脂質(zhì)作為引發(fā)劑，在氮?dú)饣蛩逍詺怏w保護(hù)下，于室溫下反應(yīng)1 1 后，在冰水浴條件下，再加入4. 5 900摩爾份量的環(huán)氧乙烷單體，攪拌反應(yīng)12 4 后，用3 10摩爾份量的無水醇終止反應(yīng)，得到聚乙二醇化脂質(zhì)溶液；(3)將步驟O)中的聚乙二醇化脂質(zhì)溶液經(jīng)酸化和純化后，即可得到聚乙二醇鏈長為200 20000Da的末端為羥基的聚乙二醇化脂質(zhì)材料；(4)將步驟(3)中的末端為羥基的聚乙二醇化脂質(zhì)材料采用三種偶聯(lián)方法偶聯(lián)上靶向分子，再經(jīng)純化后，即可得到靶向性聚乙二醇化脂質(zhì)藥用材料。上述技術(shù)方案中，所述的堿金屬為鈉或鉀。上述技術(shù)方案中，所述的無水醇為甲醇，或乙醇，或甘油，或正丁醇，或異丙醇中的一種或多種混合使用；所述酸化的酸包括有機(jī)酸和無機(jī)酸；其中，有機(jī)酸為甲酸，或乙酸， 或枸櫞酸；無機(jī)酸為鹽酸，或硫酸，或磷酸，或硼酸中的一種或多種混合使用。上述技術(shù)方案中，所述的含有羥基的脂質(zhì)引發(fā)劑為含有羥基的磷脂類化合物，或甾醇類化合物，或1，2-十八酰基-SN-甘油。上述技術(shù)方案中，所述的含有羥基的磷脂類化合物為心磷脂、或二硬脂酰磷脂酰甘油、或二油酰磷脂酰甘油、或二棕櫚酰磷脂酰甘油、或二月桂酰磷脂酰甘油、或二葵酰磷脂甘油。上述技術(shù)方案中，所述的留醇類化合物為膽固醇、或維生素D2、或維生素D3、或 7-脫氫膽固醇、或麥角膽固醇。本發(fā)明所述的靶向性聚乙二醇化脂質(zhì)藥用材料的合成方法，其特征在于將末端為羥基的聚乙二醇化脂質(zhì)偶聯(lián)上靶向分子，其方法一即將聚乙二醇化脂質(zhì)末端羥基與靶向分子酯化反應(yīng)偶聯(lián)，包括以下工藝步驟(i)將0. 1 0. 4摩爾份量的靶向分子葉酸、或生物素、或含有羧基的磁球溶于無水二甲基亞砜(DMSO)中，在氮?dú)饣蚨栊詺怏w的保護(hù)及磁力攪拌下，緩慢滴加入0.2 1.0 摩爾份量的N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)和0.2 1.0摩爾份量的1，3-二環(huán)己基碳二亞胺 (DCC)，攪拌0. 5 池，得到羧基活化的靶向分子溶液；(ii)將0. 1摩爾份量末端為羥基的聚乙二醇化脂質(zhì)材料溶解于DMSO中，并緩慢地滴加入羧基活化的靶向分子溶液中，室溫下酯化反應(yīng)12 48h，經(jīng)純化，真空干燥，得含有靶向分子的聚乙二醇化脂質(zhì)藥用材料。
本發(fā)明所述的靶向性聚乙二醇化脂質(zhì)藥用材料的合成方法，其特征在于將末端為羥基的聚乙二醇化脂質(zhì)偶聯(lián)上靶向分子，其方法二即將聚乙二醇化脂質(zhì)末端的羥基羧基化后，再偶聯(lián)上靶向分子，包括以下工藝步驟(i)將0. 5摩爾份量末端為羥基的聚乙二醇化脂質(zhì)材料溶解于無水有機(jī)溶劑中， 在氮?dú)饣蚨栊詺怏w保護(hù)及冰水浴下，磁力攪拌下，加入0. 5 2. 5摩爾份量的4- 二甲氨基吡啶(DMAP)，反應(yīng)0. 5 2h ；緩慢加入0. 5 2. 5摩爾份量的三乙胺和0. 5 2. 5摩爾份量的丁二酸酐，反應(yīng)2 24h，經(jīng)純化，真空干燥，得含有羧基的聚乙二醇化脂質(zhì)材料；(ii)將0. 1摩爾份量含有羧基的聚乙二醇化脂質(zhì)溶于無水DMSO中，在氮?dú)饣蚨栊詺怏w的保護(hù)及磁力攪拌下，緩慢滴加入0. 1 0. 5摩爾份量的1-(3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC · HCL)和0. 1 0. 5摩爾份量的N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)攪拌 0. 5 2h，得到羧基活化的聚乙二醇化脂質(zhì)溶液；(iii)將0. 1 0. 4摩爾份量的靶向分子半乳糖、或RGD、或含有氨基的磁球溶解于無水DMSO中，緩慢滴加入羧基活化的聚乙二醇化脂質(zhì)溶液中，室溫反應(yīng)12 48h，純化， 真空干燥，得到含有靶向分子的聚乙二醇化脂質(zhì)藥用材料。本發(fā)明所述的靶向性聚乙二醇化脂質(zhì)藥用材料的合成方法，其特征在于將末端為羥基的聚乙二醇化脂質(zhì)偶聯(lián)上靶向分子，其方法三即將聚乙二醇化脂質(zhì)末端的羥基氨基化后，再偶聯(lián)上靶向分子，包括以下工藝步驟(i)將0. 5摩爾份量的末端為羥基的聚乙二醇化脂質(zhì)材料溶解于無水的有機(jī)溶劑中，在氮?dú)饣蚨栊詺怏w的保護(hù)及冰水浴下，攪拌滴加1. 0 5. 0摩爾份量的三乙胺和1. 0 5. 0摩爾份量的甲基磺酰氯，再在室溫條件下，攪拌反應(yīng)4 12h ；經(jīng)純化，真空干燥，得到甲基磺?；垡叶蓟|(zhì)材料；(ii)將0. 2摩爾份量的甲基磺?；垡叶蓟|(zhì)加入1. 0 100. 0ml25%的氨水中溶解，在室溫下攪拌反應(yīng)2 4天，經(jīng)純化，真空干燥，得到氨基化的聚乙二醇化脂質(zhì)材料；(iii)在氮?dú)饣蚨栊詺怏w保護(hù)下，將0. 1 0. 4摩爾份量的靶向分子葉酸、或生物素、或含有羧基的磁球溶解于無水DMSO中，磁力攪拌下緩慢滴加入0. 2 1. 0摩爾份量的 EDC · HCL和0. 2 1. 0摩爾份量的NHS，攪拌0. 5 2h，得到羧基活化的靶向分子溶液；(iv)將(ii)步中0. 1摩爾份量的氨基化聚乙二醇化脂質(zhì)溶解于無水DMSO中，緩慢地滴加入(iii)步的羧基活化靶向分子溶液中，室溫下進(jìn)行酰胺反應(yīng)12 48h ；再經(jīng)純化，真空干燥，得到含有靶向分子的聚乙二醇化脂質(zhì)藥用材料。本發(fā)明上述任一所述的合成方法得到的聚乙二醇化脂質(zhì)藥用材料，或靶向性聚乙二醇化脂質(zhì)藥用材料，其特征在于所述藥用材料的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下其中，R1為含有羥基的磷脂類化合物、或留醇類化合物、或1，2_十八酰基-SN-甘油；R2為羥基、或羧基、或氨基；或酯鍵、或酰胺鍵連接的靶向分子；η為從4 500的整數(shù)， 即聚乙二醇分子量為200 20000Da。本發(fā)明靶向性聚乙二醇化脂質(zhì)藥用材料的合成方法具有以下特點(diǎn)及有益技術(shù)效果
1、本發(fā)明的合成方法所制備的聚乙二醇化脂質(zhì)藥用材料，以含有羥基的脂質(zhì)為引發(fā)劑，直接誘發(fā)環(huán)氧乙烷單體聚合而成，不是偶聯(lián)反應(yīng)，通過控制環(huán)氧乙烷單體與引發(fā)劑的比例，得到分子量及分子量分布可控的PEG鏈。2、本發(fā)明的合成方法所制備的聚乙二醇化脂質(zhì)藥用材料的化學(xué)穩(wěn)定性好，且有羥基作為末端活性分子，易于進(jìn)一步偶聯(lián)靶向分子；且整個(gè)合成純化方法簡便，成本低。3、采用本發(fā)明合成的聚乙二醇化脂質(zhì)藥用材料制備成的藥物載體，既具有良好的物理穩(wěn)定性、粒徑分布均一特點(diǎn)，又能有利細(xì)胞吞噬，降低藥物用量，并減少藥物的毒副作用；在體內(nèi)使用時(shí)降低了清除速率，提高了血藥濃度。4、本發(fā)明合成的聚乙二醇化脂質(zhì)材料偶聯(lián)上靶向分子后用做藥物載體時(shí)，靶向分子可識(shí)別靶細(xì)胞膜上的特異受體，引導(dǎo)藥物載體在靶向組織器官的濃集，從而提高了細(xì)胞內(nèi)的藥物濃度，賦予了載體的主動(dòng)靶向性能力。


圖1本發(fā)明實(shí)施例10采用核磁鑒定末端為羥基的聚乙二醇(600Da)化膽固醇的結(jié)構(gòu)和其中聚乙二醇鏈長度的核磁圖(氘代DMSO為溶劑)；圖2是本發(fā)明實(shí)施例10采用紅外鑒定末端為羥基的聚乙二醇(600Da)化膽固醇的結(jié)構(gòu)紅外圖；圖3是本發(fā)明實(shí)施例10采用紫外檢測(cè)葉酸的特征吸收，從上到下分別是葉酸靶向性聚乙二醇(600Da)化膽固醇脂質(zhì)材料、葉酸、氨基化聚乙二醇(600Da)化膽固醇脂質(zhì)材料紫外特征吸收?qǐng)D；圖4是本發(fā)明實(shí)施例12采用GPC鑒定末端為羥基的聚乙二醇QOOODa)化膽固醇鏈分布曲線；圖5是本發(fā)明實(shí)施例12采用核磁鑒定末端為羥基的聚乙二醇QOOODa)化膽固醇的結(jié)構(gòu)和其中聚乙二醇鏈長度的核磁圖(氘代氯仿為溶劑)；圖6是本發(fā)明實(shí)施例12采用紅外鑒定末端為羥基的聚乙二醇QOOODa)化膽固醇的結(jié)構(gòu)紅外圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明，以助于理解本發(fā)明的內(nèi)容。本發(fā)明的靶向性聚乙二醇化脂質(zhì)藥用材料的合成方法，按照前面所述合成方法的工藝步驟進(jìn)行。所用儀器磁力攪拌器、真空泵、兩口燒瓶；所用試劑DMS0、二氯甲烷、三氯甲烷、四氫呋喃、甲醇、乙醇、正丁醇、異丙醇、甘油、石油醚、DCC、EDC · HCL、NHS、DMAP ；所用材料心磷脂、或二硬脂酰磷脂酰甘油、或二油酰磷脂酰甘油、或二棕櫚酰磷脂酰甘油、或二月桂酰磷脂酰甘油、或二葵酰磷脂酰甘油、膽固醇、維生素D2、維生素D3、 7-脫氫膽固醇、麥角膽固醇、1，2-十八?；?SN-甘油、葉酸、生物素、半乳糖、含羧基磁球、 RGD、含氨基磁球、丁二酸酐、三乙胺、鉀、鈉和環(huán)氧乙烷。實(shí)施例1
制備生物素靶向分子聚乙二醇(2000Da)化心磷脂脂質(zhì)材料(1)將2. Ommol鈉在50ml石油醚下剪碎轉(zhuǎn)移至兩口瓶中，除去石油醚，室溫及氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將2. Ommol萘加入25ml無水的四氫呋喃中溶解，磁力攪拌反應(yīng)4h，生產(chǎn)鈉萘溶液；(2)用40ml無水的THF溶液，將1. Ommol引發(fā)劑心磷脂溶解，與鈉萘溶液混合，室溫及磁力攪拌下lh，冰水浴條件下，加入-20°C保存的環(huán)氧乙烷單體45. Ommol，磁力攪拌反應(yīng)12h，用3. Ommol無水乙醇終止反應(yīng)，過濾溶液，得到聚乙二醇(2000Da)化心磷脂脂質(zhì)溶液；(3)將聚乙二醇(2000Da)化心磷脂脂質(zhì)溶液用甲酸調(diào)節(jié)pH值為4，將其溶液與乙醚的比例1 50沉淀三次，過200 300目的硅膠柱，透析兩天，用乙醇重結(jié)晶，真空干燥， 得到末端為羥基的聚乙二醇(2000Da)化心磷脂脂質(zhì)材料；(4)將末端為羥基的聚乙二醇(2000Da)化心磷脂脂質(zhì)偶聯(lián)上生物素靶向分子，即將聚乙二醇(2000Da)化心磷脂脂質(zhì)末端羥基與靶向分子通過酯化反應(yīng)偶聯(lián)，其操作步驟如下(i)將0. Immol的生物素靶向分子溶于無水DMSO中，在氮?dú)獾谋Ｗo(hù)下，磁力攪拌下緩慢滴加入0. 2mmol的NHS和0. 2mmol的DCC，攪拌0. 5h，得到羧基活化的生物素靶向分子溶液；(ii)將0. Immol的末端為羥基的聚乙二醇(2000Da)化心磷脂脂質(zhì)材料溶解于無水DMSO中，并緩慢滴加入羧基活化的生物素靶向分子溶液中，室溫下反應(yīng)12h，反應(yīng)終止后，產(chǎn)物過濾，濾液用水洗兩次，用水透析，乙醇重結(jié)晶兩次，真空干燥，得到含有生物素靶向分子的聚乙二醇(2000Da)化心磷脂質(zhì)脂材料。實(shí)施例2制備磁球靶向分子聚乙二醇(200Da)化二油酰磷脂酰甘油脂質(zhì)材料(1)將3. Ommol鉀在50ml石油醚下剪碎轉(zhuǎn)移至兩口瓶中，除去石油醚，在室溫及氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將3. Ommol萘加入25ml無水的四氫呋喃中溶解，磁力攪拌反應(yīng)48h，生產(chǎn)鉀萘溶液；(2)用40ml無水的THF溶液，將1. Ommol引發(fā)劑二油酰磷脂酰甘油溶解，與鉀萘溶液混合，室溫及磁力攪拌下12h，冰水浴條件下，加入-20°C保存的環(huán)氧乙烷單體9. Ommol, 磁力攪拌反應(yīng)48h，用3. Ommol無水甲醇終止反應(yīng)，過濾溶液，得到聚乙二醇(200Da)化二油酰磷脂酰甘油脂質(zhì)溶液；(3)將聚乙二醇(200Da)化二油酰磷脂酰甘油脂質(zhì)溶液用乙酸調(diào)節(jié)pH值為4，將其溶液與乙醚的比例1 50沉淀三次，過200 300目的硅膠柱，透析兩天，用乙醇重結(jié)晶， 得到末端為羥基的聚乙二醇(200Da)化二油酰磷脂酰甘油脂質(zhì)材料；(4)將末端為羥基的聚乙二醇(200Da)化二油酰磷脂酰甘油脂質(zhì)偶聯(lián)上靶向分子，即將聚乙二醇(200Da)化二油酰磷脂酰甘油末端羥基與含有羧基磁球靶向分子通過酯化反應(yīng)偶聯(lián)，其操作步驟如下(i)將0. 4mmol的含有羧基磁球靶向分子溶于無水DMSO中，在氮?dú)獾谋Ｗo(hù)及磁力攪拌下，緩慢滴加入1. Ommol的NHS和1. Ommol的DCC，攪拌0. 5h，得到羧基活化的磁球靶向分子溶液；(ii)另將0. Immol的末端為羥基的聚乙二醇(200Da)化二油酰磷脂酰甘油脂質(zhì)
8材料溶于無水DMSO中，并緩慢滴加入羧基活化的磁球靶向分子靶向分子溶液中，室溫下反應(yīng)12h，反應(yīng)終止后，產(chǎn)物過濾，水洗，最后用乙醚沉淀，過柱，重結(jié)晶除去雜質(zhì)，得到含有磁球靶向分子的聚乙二醇(200Da)化二油酰磷脂酰甘油脂質(zhì)材料。實(shí)施例3制備磁球靶向分子聚乙二醇(IOOODa)化二棕櫚酰磷脂酰甘油脂質(zhì)材料(1)將2. Ommol鉀在50ml石油醚下剪碎轉(zhuǎn)移至兩口瓶中，除去石油醚，在室溫及氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將2. Ommol萘加入25ml無水的四氫呋喃中溶解，磁力攪拌反應(yīng)Mh，生產(chǎn)鉀萘溶液；(2)用40ml無水的THF溶液，將1. Ommol引發(fā)劑二棕櫚酰磷脂酰甘油溶解，與鉀萘溶液混合，室溫及磁力攪拌下6h，冰水浴條件下，加入-20°C保存的環(huán)氧乙烷單體 45. Ommol,磁力攪拌反應(yīng)Mh，用6. Ommol無水甘油終止反應(yīng)，過濾溶液，得到聚乙二醇 (IOOODa)化二棕櫚酰磷脂酰甘油脂質(zhì)溶液；(3)將聚乙二醇(IOOODa)化二棕櫚酰磷脂酰甘油脂質(zhì)溶液用枸櫞酸調(diào)節(jié)pH值為 4，將其溶液與乙醚的比例1 50沉淀三次，過200 300目的硅膠柱，透析兩天，用乙醇重結(jié)晶，得到末端為羥基的聚乙二醇(IOOODa)化二棕櫚酰磷脂酰甘油脂質(zhì)材料；(4)將末端為羥基的聚乙二醇(IOOODa)化二棕櫚酰磷脂酰甘油脂質(zhì)偶聯(lián)上靶向分子，即將聚乙二醇(IOOODa)化二棕櫚酰磷脂酰甘油脂質(zhì)末端羥基與含有羧基磁球靶向分子通過酯化反應(yīng)偶聯(lián)，其操作步驟如下(i)將0. 2mmol的含有羧基磁球靶向分子溶于無水DMSO中，在氮?dú)獾谋Ｗo(hù)及磁力攪拌下，緩慢滴加入0. 5mmol的NHS和0. 5mmol的DCC，攪拌lh，得到羧基活化的磁球靶向分子溶液；(ii)另將0. Immol的末端為羥基的聚乙二醇(IOOODa)化二棕櫚酰磷脂酰甘油脂質(zhì)材料溶于無水DMSO中，并緩慢地滴加入羧基活化的磁球靶向分子溶液中，室溫下反應(yīng) 24h,反應(yīng)終止后，產(chǎn)物過濾，水洗，最后用乙醚沉淀，過柱，重結(jié)晶除去雜質(zhì)，得到含有磁球靶向分子的聚乙二醇(IOOODa)化二棕櫚酰磷脂酰甘油脂質(zhì)材料。實(shí)施例4制備磁球靶向分子聚乙二醇QOOODa)化二月桂酰磷脂酰甘油脂質(zhì)材料(1)將1. Ommol鉀在50ml石油醚下剪碎轉(zhuǎn)移至兩口瓶中，除去石油醚，室溫及氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將1. Ommol萘加入25ml無水的四氫呋喃中溶解，磁力攪拌反應(yīng)4h，生產(chǎn)鉀萘溶液；(2)用40ml無水的THF溶液，將1. Ommol引發(fā)劑二月桂酰磷脂酰甘油溶解， 與鉀萘溶液混合，室溫及磁力攪拌下lh，冰水浴條件下，加入-20°C保存的環(huán)氧乙烷單體90. Ommol，攪拌反應(yīng)12h，用10. Ommol無水異丙醇終止反應(yīng)，過濾溶液，得到聚乙二醇 (2000Da)化二月桂酰磷脂酰甘油脂質(zhì)溶液；(3)將聚乙二醇QOOODa)化二月桂酰磷脂酰甘油脂質(zhì)溶液用鹽酸調(diào)節(jié)pH值為4， 將其溶液與乙醚的比例1 50沉淀三次、過200 300目的硅膠柱、透析兩天、用乙醇重結(jié)晶，得到末端為羥基的聚乙二醇QOOODa)化二月桂酰磷脂酰甘油脂質(zhì)材料；(4)將末端為羥基的聚乙二醇QOOODa)化二月桂酰磷脂酰甘油脂質(zhì)偶聯(lián)上靶向分子，即將聚乙二醇QOOODa)化二月桂酰磷脂酰甘油脂質(zhì)末端羥基與含有羧基磁球靶向分子通過酯化反應(yīng)偶聯(lián)，其操作步驟如下
(i)將0. Immol的含有羧基磁球靶向分子溶于無水DMSO中，在氬氣的保護(hù)及磁力攪拌下，緩慢滴加入0. 2mmol的NHS和0. 2mmol的DCC，攪拌2h，得到羧基活化的磁球靶向分子溶液；(ii)另將0. Immol的末端為羥基的聚乙二醇(2000Da)化二月桂酰磷脂酰甘油脂質(zhì)材料溶解于DMSO中，并緩慢滴加入羧基活化的葉酸靶向分子溶液中，室溫下反應(yīng)48h，反應(yīng)終止后，產(chǎn)物過濾，水洗，最后用乙醚沉淀，過柱，重結(jié)晶除去雜質(zhì)，得到含有磁球靶向分子的聚乙二醇(2000Da)化二月桂酰磷脂酰甘油脂質(zhì)材料。實(shí)施例1-4在所用的工藝條件和工藝參數(shù)相同情況下，只將含有羧基磁球換成葉酸靶向分子、或生物素靶向分子，也可以制備出相應(yīng)的脂質(zhì)材料。實(shí)施例5制備半乳糖靶向分子聚乙二醇(4000Da)化二葵酰磷脂酰甘油脂質(zhì)材料(1)將3mmol鉀在50ml石油醚下剪碎轉(zhuǎn)移至兩口瓶中，除去石油醚，室溫及氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將1. 5mmol萘加入50ml無水的四氫呋喃中溶解，磁力攪拌反應(yīng)48h，生產(chǎn)鉀萘溶液；(2)用40ml無水的THF溶液，將Immol引發(fā)劑二葵酰磷脂酰甘油溶解，與鉀萘溶液混合，室溫及磁力攪拌下12h，冰水浴條件下，加入-20°C保存的環(huán)氧乙烷單體180. Ommol, 磁力攪拌反應(yīng)48h，用3. Ommol無水丁醇終止反應(yīng)，過濾溶液，得到聚乙二醇(4000Da)化二葵酰磷脂酰甘油脂質(zhì)溶液；(3)將聚乙二醇(4000Da)化二葵酰磷脂酰甘油脂質(zhì)溶液用硫酸調(diào)節(jié)pH值為4，將其溶液與乙醚的比例1 50沉淀三次，過200 300目的硅膠柱，透析兩天，用乙醇重結(jié)晶， 得到末端為羥基的聚乙二醇(4000Da)化二葵酰磷脂酰甘油脂質(zhì)材料；(4)將末端為羥基的聚乙二醇(4000Da)化二葵酰磷脂酰甘油偶聯(lián)上靶向分子，即將聚乙二醇(4000Da)化二葵酰磷脂酰甘油脂質(zhì)末端的羥基羧基化后，再偶聯(lián)上半乳糖靶向分子，其操作步驟如下(i)將0. 5mmol的末端為羥基的聚乙二醇(4000Da)化二葵酰磷脂酰甘油脂質(zhì)溶解于無水DMSO中，在氮?dú)獾谋Ｗo(hù)及冰水浴下，緩慢滴加入2. 5mmol的DMAP磁力攪拌下0. 5h， 再緩慢滴加入Immol的三乙胺和2. 5mmol的丁二酸酐，反應(yīng)時(shí)間2h，過濾反應(yīng)產(chǎn)物除去雜質(zhì)，水洗，將其溶液與乙醚的比例1 50，沉淀兩次，乙醇進(jìn)行重結(jié)晶兩次，得到含有羧基的聚乙二醇(4000Da)化二葵酰磷脂酰甘油；(ii)在氮?dú)獾谋Ｗo(hù)下，將0. Immol羧基化的聚乙二醇(4000Da)化二葵酰磷脂酰甘油脂質(zhì)材料溶解于無水DMSO中，室溫及磁力攪拌下，緩慢滴加入0. 5mmol的EDC -HCL和 0. 5mmol的NHS攪拌0. 5h，得到羧基活化的聚乙二醇(4000Da)化二葵酰磷脂酰甘油脂質(zhì)溶液；(iii)將0. 4mmol的半乳糖靶向分子溶解于DMSO中，緩慢的滴加到羧基活化的聚乙二醇(4000Da)化二葵酰磷脂酰甘油脂質(zhì)材料溶液中，在室溫下反應(yīng)12h，將反應(yīng)產(chǎn)物過濾，1000的透析袋透析兩天，最后用乙醚沉淀，過200 300目硅膠柱，乙醇重結(jié)晶兩次，得到含有半乳糖靶向分子的聚乙二醇(4000Da)化二葵酰磷脂酰甘油脂質(zhì)材料。實(shí)施例6制備半乳糖靶向分子聚乙二醇(IOOOODa)化麥角膽固醇脂質(zhì)材料(1)將2mmol鉀在50ml石油醚下剪碎轉(zhuǎn)移至兩口瓶中，除去石油醚，室溫及氮?dú)獗?br> 10護(hù)下，將1. 5mmol萘加入50ml無水的四氫呋喃中溶解，磁力攪拌反應(yīng)Mh，生產(chǎn)鉀萘溶液；(2)用40ml無水的THF溶液，將Immol引發(fā)劑麥角麥角膽固醇溶解，與鉀萘溶液混合，室溫及磁力攪拌下他，冰水浴條件下，加入-20°C保存的環(huán)氧乙烷單體225mmol，磁力攪拌反應(yīng)Mh，用6. Ommol無水正丁醇終止反應(yīng)，過濾溶液，得到聚乙二醇(IOOOODa)化麥角膽固醇脂質(zhì)溶液；(3)將聚乙二醇(IOOOODa)化麥角膽固醇脂質(zhì)溶液用磷酸調(diào)節(jié)pH值為4，將其溶液與乙醚的比例1 50沉淀三次，過200 300目的硅膠柱，透析兩天，用乙醇重結(jié)晶，得到末端為羥基的聚乙二醇(IOOOODa)化麥角膽固醇脂質(zhì)材料；(4)將末端為羥基的聚乙二醇(IOOOODa)化麥角膽固醇偶聯(lián)上靶向分子，即將聚乙二醇(IOOOODa)化麥角膽固醇脂質(zhì)末端的羥基羧基化后，再偶聯(lián)上半乳糖靶向分子，其操作步驟如下(i)將0. 5mmol的末端為羥基的聚乙二醇(IOOOODa)化麥角膽固醇溶解于無水二氯甲烷中，在氦氣的保護(hù)及冰水浴下，緩慢加入Immol的DMAP磁力攪拌下lh，再緩慢加入Immol的三乙胺和Immol的丁二酸酐，反應(yīng)時(shí)間lh，過濾反應(yīng)產(chǎn)物除去雜質(zhì)，水洗，將其溶液與乙醚的比例1 50，沉淀兩次，乙醇進(jìn)行重結(jié)晶兩次，得到含有羧基的聚乙二醇 (IOOOODa)化麥角膽固醇脂質(zhì)材料；(ii)在氮?dú)獾谋Ｗo(hù)下，將0. Immol羧基化的PEG化麥角膽固醇脂質(zhì)材料溶解于無水DMSO中，室溫及磁力攪拌下，緩慢滴加入0. 2mmol的EDC -HCL和0. 2mmol的NHS磁力攪拌lh，得到羧基活化的聚乙二醇(IOOOODa)化麥角膽固醇脂質(zhì)溶液；(iii)將0.2mmol的半乳糖靶向分子溶解于DMSO中，緩慢的滴加到羧基活化的聚乙二醇(IOOOODa)化麥角膽固醇脂質(zhì)材料溶液中，在室溫下反應(yīng)Mh，將反應(yīng)產(chǎn)物過濾， 5000的透析袋透析兩天，最后用乙醚沉淀，過200 300目硅膠柱，乙醇重結(jié)晶兩次，得到含有半乳糖靶向分子的聚乙二醇(IOOOODa)化麥角膽固醇脂質(zhì)材料。實(shí)施例7制備半乳糖靶向分子聚乙二醇(15000Da)化維生素D2脂質(zhì)材料(1)將l.Ommol鉀在50ml石油醚下剪碎轉(zhuǎn)移至兩口瓶中，除去石油醚，室溫及氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將1. Ommol萘加入50ml無水的四氫呋喃中溶解，磁力攪拌反應(yīng)12h，生產(chǎn)鉀萘溶液；(2)用40ml無水的THF溶液，將Immol引發(fā)劑維生素D2溶解，與鉀萘溶液混合，室溫及磁力攪拌下lh，冰水浴條件下，加入-20°C保存的環(huán)氧乙烷單體337. 5mmol，磁力攪拌反應(yīng)12h，用10. Ommol無水乙醇終止反應(yīng)，過濾溶液，得到聚乙二醇(15000Da)化維生素D2 脂質(zhì)溶液；(3)將聚乙二醇(15000Da)化維生素D2脂質(zhì)溶液用硼酸調(diào)節(jié)pH值為4，將其溶液與乙醚的比例1 50沉淀三次，過200 300目的硅膠柱，透析兩天，用乙醇重結(jié)晶，得到末端為羥基的聚乙二醇(15000Da)化維生素D2脂質(zhì)材料；(4)將末端為羥基的聚乙二醇(15000Da)化維生素D2偶聯(lián)上靶向分子，即將聚乙二醇(15000Da)化維生素D2脂質(zhì)末端的羥基羧基化后，再偶聯(lián)上半乳糖靶向分子，其操作步驟如下(i)將0. 5mmol的末端為羥基的聚乙二醇(15000Da)化維生素D2脂質(zhì)材料溶解于無水三氯甲烷中，在氮?dú)獾谋Ｗo(hù)及冰水浴下，緩慢加入0. 5mmol的DMAP，磁力攪拌下2h，再緩慢加入0. 5mmol的三乙胺和0. 5mmol的丁二酸酐，反應(yīng)時(shí)間2h，過濾反應(yīng)產(chǎn)物除去雜質(zhì)， 水洗，將其溶液與乙醚的比例1 50，沉淀兩次，乙醇進(jìn)行重結(jié)晶兩次，得到含有羧基的聚乙二醇(15000Da)化維生素D2脂質(zhì)材料；(ii)在氮?dú)獾谋Ｗo(hù)下，將0. Immol羧基化的聚乙二醇化維生素D2脂質(zhì)材料溶解于無水DMSO中，室溫及磁力攪拌下，緩慢滴加入0. 5mmol的EDC -HCL和0. 5mmol的NHS攪拌 2h，得到羧基活化的聚乙二醇(15000Da)化維生素D2脂質(zhì)溶液；(iii)將0. Immol的半乳糖靶向分子溶解于DMSO中，緩慢的滴加到羧基活化的聚乙二醇(15000Da)化維生素D2脂質(zhì)溶液中，在室溫下反應(yīng)48h，將反應(yīng)產(chǎn)物過濾，10000的透析袋透析兩天，最后用乙醚沉淀，過200 300目硅膠柱，乙醇重結(jié)晶兩次，得到含有半乳糖靶向分子的聚乙二醇(15000Da)化維生素D2脂質(zhì)材料。實(shí)施例5-7在所用的工藝條件和工藝參數(shù)相同情況下，只將半乳糖靶向分子換成含有氨基的磁球靶向分子、或RGD靶向分子，也可以制備出相應(yīng)的脂質(zhì)材料。實(shí)施例8制備葉酸靶向分子聚乙二醇(20000Da)化二硬脂酰磷脂酰甘油脂質(zhì)材料(1)將3. Ommol鉀在50ml石油醚下剪碎轉(zhuǎn)移至兩口瓶中，除去石油醚，室溫及氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將3. Ommol萘加入50ml無水的四氫呋喃(THF)中溶解，磁力攪拌反應(yīng)4h，生產(chǎn)鉀萘溶液；(2)用40ml無水的THF溶液，將Immol引發(fā)劑二硬脂酰磷脂酰甘油溶解，與鉀萘溶液混合，室溫及磁力攪拌下lh，冰水浴條件下，加入_20°C保存的環(huán)氧乙烷單體單體 900. Ommol，磁力攪拌反應(yīng)12h，用3. Ommol無水乙醇終止反應(yīng)，過濾溶液，得到聚乙二醇 (20000Da)化二硬脂酰磷脂酰甘油脂質(zhì)溶液；(3)將聚乙二醇(20000Da)化二硬脂酰磷脂酰甘油脂質(zhì)溶液用鹽酸調(diào)節(jié)pH值為 4，將其溶液與乙醚的比例1 50沉淀三次，過200 300目的硅膠柱，透析兩天，用乙醇重結(jié)晶，得到末端為羥基的聚乙二醇(20000Da)化二硬脂酰磷脂酰甘油脂質(zhì)材料；(4)將末端為羥基的聚乙二醇(20000Da)化二硬脂酰磷脂酰甘油偶聯(lián)葉酸靶向分子，即將乙二醇(20000Da)化二硬脂酰磷脂酰甘油脂質(zhì)末端的羥基氨基化后，再偶聯(lián)上葉酸靶向分子，其操作步驟如下(i)將0. 5mmol的末端為羥基的聚乙二醇(20000Da)化二硬脂酰磷脂酰甘油脂質(zhì)材料溶解于無水的二氯甲烷中，在氮?dú)獾谋Ｗo(hù)及冰水浴下，磁力攪拌下，緩慢滴加1. Ommol 的三乙胺和l.Ommol的甲基磺酰氯，攪拌4h，過濾反應(yīng)產(chǎn)物，產(chǎn)物在乙醇中進(jìn)行重結(jié)晶，得到甲基磺?；垡叶?20000Da)化二硬脂酰磷脂酰甘油脂質(zhì)材料；(ii)另將0. 2mmol的甲基磺酰化聚乙二醇(20000Da)化二硬脂酰磷脂酰甘油脂質(zhì)材料加入IOml 25%的氨水中溶解，在室溫下高速攪拌下反應(yīng)2天，溶液進(jìn)行萃取，粗產(chǎn)品在乙醇中進(jìn)行重結(jié)晶兩次，得到氨基化的聚乙二醇(20000Da)化二硬脂酰磷脂酰甘油脂質(zhì)材料；(iii)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將0. Immol的葉酸靶向分子溶解于無水DMSO中，在室溫及磁力攪拌下，緩慢滴加入0. 2mmol的EDC · HCL和0. 2mmol的NHS攪拌0. 5h，得到羧基活化的葉酸靶向分子溶液；
(iv)在室溫下，將0. Immol的氨基化聚乙二醇(20000Da)化二硬脂酰磷脂酰甘油脂質(zhì)材料溶解于無水DMSO中，緩慢的滴加到羧基活化的葉酸靶向分子溶液中，反應(yīng)12h，過濾反應(yīng)產(chǎn)物，用水透析，進(jìn)行重結(jié)晶，得到含有葉酸靶向分子的聚乙二醇(20000Da)化二硬脂酰磷脂酰甘油脂質(zhì)材料。實(shí)施例9制備葉酸靶向分子聚乙二醇(20000Da)化7_脫氫膽固醇脂質(zhì)材料(1)將3. Ommol鉀在50ml石油醚下剪碎轉(zhuǎn)移至兩口瓶中，除去石油醚，室溫及氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將3. Ommol萘加入50ml無水的四氫呋喃(THF)中溶解，磁力攪拌反應(yīng)4h，生產(chǎn)鉀萘溶液；(2)用40ml無水的THF溶液，將Immol引發(fā)劑7_脫氫膽固醇溶解，與鉀萘溶液混合，室溫及磁力攪拌下lh，冰水浴條件下，加入-20°C保存的環(huán)氧乙烷單體450. Ommol，磁力攪拌反應(yīng)12h，用3. Ommol無水乙醇終止反應(yīng)，過濾溶液，得到聚乙二醇(20000Da)化7-脫氫膽固醇脂質(zhì)溶液；(3)將聚乙二醇(20000Da)化7_脫氫膽固醇脂質(zhì)溶液用鹽酸調(diào)節(jié)pH值為4，將其溶液與乙醚的比例1 50沉淀三次，過200 300目的硅膠柱，透析兩天，用乙醇重結(jié)晶， 得到末端為羥基的聚乙二醇(20000Da)化7-脫氫膽固醇脂質(zhì)材料；(4)將末端為羥基的聚乙二醇(20000Da)化7_脫氫膽固醇偶聯(lián)葉酸靶向分子，即將乙二醇(20000Da)化7-脫氫膽固醇脂質(zhì)末端的羥基氨基化后，再偶聯(lián)上葉酸靶向分子， 其操作步驟如下(i)將0. 5mmol的末端為羥基的聚乙二醇(20000Da)化7_脫氫膽固醇脂質(zhì)材料溶解在無水的三氯甲烷中，在氮?dú)獾谋Ｗo(hù)及冰水浴下，磁力攪拌下，緩慢滴加1. Ommol的三乙胺和l.Ommol的甲基磺酰氯，攪拌4h，過濾反應(yīng)產(chǎn)物，產(chǎn)物在乙醇中進(jìn)行重結(jié)晶，得到甲基磺?；垡叶?20000Da)化7-脫氫膽固醇脂質(zhì)材料；(ii)另將0. 2mmol的甲基磺?；垡叶?20000Da)化7_脫氫膽固醇脂質(zhì)材料加入IOml 25%的氨水中溶解，在室溫下高速攪拌下反應(yīng)2天，溶液進(jìn)行萃取，粗產(chǎn)品在乙醇中進(jìn)行重結(jié)晶兩次，得到氨基化的聚乙二醇(20000Da)化7-脫氫膽固醇脂質(zhì)材料；(iii)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將0. Immol的葉酸靶向分子溶解于無水DMSO中，在室溫及磁力攪拌下，緩慢滴加入0. 2mmol的EDC · HCL和0. 2mmol的NHS攪拌0. 5h，得到羧基活化的葉酸靶向分子溶液；(iv)在室溫下，將0. Immol的氨基化聚乙二醇(20000Da)化7_脫氫膽固醇脂質(zhì)材料溶解于無水DMSO中，緩慢的滴加到羧基活化的葉酸靶向分子溶液中，反應(yīng)12h，過濾反應(yīng)產(chǎn)物，用水透析，進(jìn)行重結(jié)晶，得到含有葉酸靶向分子的聚乙二醇(20000Da)化7-脫氫膽固醇脂質(zhì)材料。實(shí)施例10制備葉酸性靶向分子聚乙二醇(600Da)化膽固醇脂質(zhì)材料(1)將2mmol鉀在50ml石油醚下剪碎轉(zhuǎn)移至兩口瓶中，除去石油醚，室溫及氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將1. 5mmol萘加入50ml無水的四氫呋喃(THF)中溶解，磁力攪拌反應(yīng)Mh，生產(chǎn)鉀萘溶液；(2)用40ml無水的THF溶液，將Immol引發(fā)劑膽固醇溶解，與鉀萘溶液混合，室溫及磁力攪拌下6h，冰水浴條件下，加入-20°C保存的環(huán)氧乙烷單體13. 5mmol，磁力攪拌反應(yīng) 24h，用6. Ommol無水乙醇終止反應(yīng)，過濾溶液，得到聚乙二醇(600Da)化膽固醇脂質(zhì)溶液；(3)將聚乙二醇(600Da)化膽固醇脂質(zhì)溶液用鹽酸調(diào)節(jié)pH值為4，將其溶液與乙醚的比例1 50沉淀三次，過200 300目的硅膠柱，用乙醇重結(jié)晶，得到末端為羥基的聚乙二醇(600Da)化膽固醇脂質(zhì)材料，采用核磁鑒定末端為羥基的聚乙二醇(600Da)化膽固醇的結(jié)構(gòu)和其中聚乙二醇鏈長度的核磁圖，IH NMR(400MHz, d6-DMS0) d/ppm δ 0. 64ppm為單峰，是膽固醇18位上的氫；δ 3. 36ppm為多重峰，是膽固醇3位上的氫；δ 3. 40-3. 58ppm 為聚乙二醇上的氫；δ 5. 15ppm為單峰，是膽固醇的6位上的氫；δ 2. 49_2. 51ppm為溶劑峰，并根據(jù)積分面積計(jì)算，得到聚乙二醇鏈部分分子量約為600Da。如圖1所示；采用紅外鑒定末端為羥基的聚乙二醇(600Da)化膽固醇的結(jié)構(gòu)，在紅外光譜上，產(chǎn)物中既具有膽固醇不飽和雙鍵的特征吸收:1639cm"1 (C = C),2934和2868CHT1 (C-H飽和振動(dòng)及C-H不飽和振動(dòng))；同時(shí)也具有PEG片段的特征吸收1112cm"1 (C-O-C), 3000-2800cm^ (C-H)及 3436cm-1 (O-H)；這說明所得到產(chǎn)物確實(shí)是由膽固醇引發(fā)環(huán)氧乙烷開環(huán)聚合形成的PEG齊聚物，如圖2所示；(4)將末端為羥基的聚乙二醇(600Da)化膽固醇偶聯(lián)葉酸靶向分子，即將聚乙二醇(600Da)化膽固醇脂質(zhì)末端的羥基氨基化后，再偶聯(lián)上葉酸靶向分子，其操作步驟如下(i)將0. 5mmol的末端為羥基的聚乙二醇(600Da)化膽固醇脂質(zhì)材料溶解于無水的DMSO中，在氮?dú)獾谋Ｗo(hù)及冰水浴下，磁力攪拌下，緩慢滴加2. 5mmol的三乙胺和2. 5mmol 的甲基磺酰氯，攪拌8h，過濾反應(yīng)產(chǎn)物，產(chǎn)物在乙醇中進(jìn)行重結(jié)晶，得到甲基磺?；垡叶?600Da)化膽固醇脂質(zhì)材料；(ii)另將0. 2mmol的甲基磺酰化聚乙二醇(600Da)化膽固醇脂質(zhì)材料加入50ml 25%的氨水中溶解，在室溫下高速攪拌下反應(yīng)3天，溶液進(jìn)行萃取，粗產(chǎn)品在乙醇中進(jìn)行重結(jié)晶兩次，在真空下干燥，得到氨基化的聚乙二醇(600Da)化膽固醇脂質(zhì)材料；(iii)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將0. 2mmol的葉酸靶向分子溶解于無水的DMSO中，在室溫及磁力攪拌下，緩慢滴加入0. 5mmol的EDC · HCL和0. 5mmol的NHS攪拌lh，得到羧基活化的葉酸靶向分子溶液；(iv)在室溫下，將0. Immol的氨基化聚乙二醇(600Da)化膽固醇脂質(zhì)材料溶解于無水DMSO中，緩慢的滴加到羧基活化的葉酸靶向分子溶液中，反應(yīng)24h，過濾反應(yīng)產(chǎn)物，用水透析，進(jìn)行重結(jié)晶，得到含有葉酸靶向分子的聚乙二醇(600Da)化膽固醇脂質(zhì)材料；采用紫外檢測(cè)葉酸靶向聚乙二醇(600Da)化膽固醇脂質(zhì)材料，檢測(cè)葉酸靶向分子特征吸收，采用DMSO為溶劑，此圖可以看出葉酸靶向聚乙二醇(600Da)化膽固醇脂質(zhì)材料上已經(jīng)偶聯(lián)上葉酸靶向分子，如圖3所示。實(shí)施例11制備葉酸靶向分子聚乙二醇(2000Da)化1，2_十八?；?SN-甘油脂質(zhì)材料(1)將Immol鉀在50ml石油醚下剪碎轉(zhuǎn)移至兩口瓶中，除去石油醚，室溫及氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將Immol萘加入50ml無水的四氫呋喃(THF)中溶解，磁力攪拌反應(yīng)48h，生產(chǎn)鉀萘溶液；(2)用40ml無水的THF溶液，將Immol引發(fā)劑1，2-十八?；?SN-甘油溶解， 與鉀萘溶液混合，室溫及磁力攪拌下12h，冰水浴條件下，加入-20°C保存的環(huán)氧乙烷單體45. Ommol，磁力攪拌反應(yīng)48h，用10. Ommol無水乙醇終止反應(yīng)，過濾溶液，得到聚乙二醇 (2000Da)化1，2-十八?；?SN-甘油脂質(zhì)溶液；(3)將聚乙二醇QOOODa)化1，2_十八?；?SN-甘油脂質(zhì)溶液用枸櫞酸調(diào)節(jié)pH 值為4，將其溶液與乙醚的比例1 50沉淀三次，過200 300目的硅膠柱，透析兩天，用乙醇重結(jié)晶，得到末端為羥基的聚乙二醇QOOODa)化1，2-十八?；?SN-甘油脂質(zhì)材料；(4)將末端為羥基的聚乙二醇QOOODa)化1，2_十八?；?SN-甘油偶聯(lián)葉酸靶向分子，即將聚乙二醇QOOODa)化1，2-十八?；?SN-甘油脂質(zhì)末端的羥基氨基化后，再偶聯(lián)上葉酸靶向分子，其操作步驟如下(i)將0. 5mmol的末端為羥基的聚乙二醇QOOODa)化1，2_十八?；鵢SN_甘油脂質(zhì)材料溶解于無水的二氯甲烷中，在氮?dú)獾谋Ｗo(hù)及冰水浴下，磁力攪拌下，緩慢滴加 5. Ommol的三乙胺和5. Ommol的甲基磺酰氯，攪拌12h，過濾反應(yīng)產(chǎn)物，產(chǎn)物在乙醇中進(jìn)行重結(jié)晶，甲基磺?；垡叶糛OOODa)化1，2-十八?；?SN-甘油脂質(zhì)材料；(ii)另將0. 2mmol的甲基磺?；垡叶糛OOODa)化1，2_十八?；鵢SN_甘油脂質(zhì)材料加入100ml 25%的氨水中溶解，在室溫下高速攪拌下反應(yīng)4天，溶液進(jìn)行萃取，粗產(chǎn)品在乙醇中進(jìn)行重結(jié)晶兩次，在真空下干燥，得到氨基化的聚乙二醇QOOODa)化1，2_十八?；?SN-甘油脂質(zhì)材料；(iii)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將0. 4mmol的葉酸靶向分子溶解于無水的DMSO中，在室溫及磁力攪拌下，緩慢滴加入1. Ommol的EDC · HCL和1. Ommol的NHS攪拌2h，得到羧基活化的葉酸靶向分子溶液；(iv)在室溫下，將0. Immol的氨基化聚乙二醇QOOODa)化1，2_十八?；?SN-甘油脂質(zhì)材料溶解于無水DMSO中，緩慢的滴加到羧基活化的葉酸靶向分子溶液中，反應(yīng)48h， 過濾反應(yīng)產(chǎn)物，用水透析，進(jìn)行重結(jié)晶，得到含有葉酸靶向分子的聚乙二醇QOOODa)化1， 2-十八?；?SN-甘油脂質(zhì)材料。實(shí)施例12制備葉酸靶向分子聚乙二醇QOOODa)化膽固醇脂質(zhì)材料(1)將2mmol鉀在50ml石油醚下剪碎轉(zhuǎn)移至兩口瓶中，除去石油醚，室溫及氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將1. 5mmol萘加入50ml無水的四氫呋喃(THF)中溶解，磁力攪拌反應(yīng)Mh，生產(chǎn)鉀萘溶液；(2)用40ml無水的THF溶液，將Immol引發(fā)劑膽固醇溶解，與鉀萘溶液混合，室溫及磁力攪拌下他，冰水浴條件下，加入-20°C保存的環(huán)氧乙烷單體45. Ommol，磁力攪拌反應(yīng) 24h用6. Ommol無水乙醇終止反應(yīng)，過濾溶液，得到聚乙二醇QOOODa)化膽固醇脂質(zhì)溶液；(3)將聚乙二醇QOOODa)化膽固醇脂質(zhì)溶液用鹽酸調(diào)節(jié)pH值為4，將其溶液與乙醚的比例1 50沉淀三次，過200 300目的硅膠柱，透析兩天，用乙醇重結(jié)晶，得到末端為羥基的聚乙二醇QOOODa)化膽固醇脂質(zhì)材料；采用GPC鑒定末端為羥基的聚乙二醇 (2000Da)化膽固醇鏈分布曲線，其分子量分布較窄，圖4所示；采用核磁鑒定末端為羥基的聚乙二醇QOOODa)化膽固醇的結(jié)構(gòu)和其中聚乙二醇鏈長度的核磁圖，IH NMR(400MHz, ⑶CL3)d/ppm δ 0. 67ppm為單峰，是膽固醇18位上的氫；δ 3. 18ppm的多重峰，為膽固醇的3位上的氫；δ 3. 46-3. 82ppm為聚乙二醇上的氫；δ 5. 15ppm為單峰，是膽固醇6位上的氫，并根據(jù)積分面積計(jì)算，得到聚乙二醇鏈部分分子量約為2000Da。如圖5所示；采用紅外鑒定末端為羥基的聚乙二醇(2000Da)化膽固醇的結(jié)構(gòu)，在紅外光譜上，產(chǎn)物中既具有膽固醇不飽和雙鍵的特征吸收=IesOcnT1 (C = C)，3100和2800CHT1 (C-H飽和振動(dòng)及C-H 不飽和振動(dòng))；同時(shí)也具有PEG片段的特征吸收=IlHcnT1 (C-O-C)，3000-2800cm^ (C-H)及 3434cm-1 (O-H)；這說明所得到產(chǎn)物確實(shí)是由膽固醇引發(fā)環(huán)氧乙烷開環(huán)聚合形成的PEG齊聚物，如圖6所示；(4)將末端為羥基的聚乙二醇(2000Da)化膽固醇偶聯(lián)葉酸靶向分子，即將聚乙二醇(2000Da)化膽固醇脂質(zhì)末端的羥基氨基化后，再偶聯(lián)上葉酸靶向分子，其操作步驟如下(i)將0. 5mmol的末端為羥基的聚乙二醇(2000Da)化膽固醇脂質(zhì)材料溶解于無水的二氯甲烷中，在氮?dú)獾谋Ｗo(hù)及冰水浴下，攪拌下緩慢滴加2. 5mmol的三乙胺和2. 5mmol的甲基磺酰氯，攪拌8h，過濾反應(yīng)產(chǎn)物，產(chǎn)物在乙醇中進(jìn)行重結(jié)晶，得到甲基磺?；垡叶?(2000Da)化膽固醇脂質(zhì)材料；(ii)另將0.2mmol的甲基磺?；垡叶?2000Da)化膽固醇脂質(zhì)材料加入 50ml25%的氨水中溶解，在室溫及高速攪拌下反應(yīng)3天，溶液進(jìn)行萃取，粗產(chǎn)品在乙醇中進(jìn)行重結(jié)晶兩次，純化過的產(chǎn)品收集，在真空下干燥，得到氨基化的聚乙二醇(2000Da)化膽固醇脂質(zhì)材料；(iii)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將0. 2mmol的葉酸靶向分子溶解于無水DMSO中，在室溫及磁力攪拌下，緩慢滴加入0. 5mmol的EDC · HCL和0. 5mmol的NHS磁力攪拌lh，得到羧基活化的葉酸靶向分子溶液；(iv)在室溫下，將0. Immol的氨基化聚乙二醇(2000Da)膽固醇脂質(zhì)材料溶解于無水DMSO中，緩慢的滴加到羧基活化的葉酸靶向分子溶液中，反應(yīng)時(shí)間24h，過濾反應(yīng)產(chǎn)物， 用水透析，進(jìn)行重結(jié)晶，得到含有葉酸靶向分子的聚乙二醇(2000Da)化膽固醇材料。實(shí)施例8-12在所用的工藝條件和工藝參數(shù)相同情況下，只將葉酸靶向分子換成生物素靶向分子，或含有羧基的磁球靶向分子，也可以制備出相應(yīng)的脂質(zhì)材料。
1權(quán)利要求
1.一種靶向性聚乙二醇化脂質(zhì)藥用材料的合成方法，其特征在于采用陰離子聚合法， 以帶有羥基的脂質(zhì)作為引發(fā)劑，直接誘發(fā)環(huán)氧乙烷單體聚合，通過控制環(huán)氧乙烷單體和引發(fā)劑的比例，并經(jīng)酸化和純化后，得到聚乙二醇化脂質(zhì)藥用材料；或進(jìn)一步通過化學(xué)方法偶聯(lián)靶向分子，即得到具有靶向功能的聚乙二醇化脂質(zhì)藥用材料；包括以下工藝步驟(1)將1 3摩爾份量的堿金屬剪碎入瓶，并在室溫下、氮?dú)饣蛩逍詺怏w保護(hù)下，與1 3摩爾份量的萘在無水四氫呋喃(THF)中攪拌反應(yīng)4 48h，生成堿金屬萘溶液；(2)在堿金屬萘溶液中加入1摩爾份量的含有羥基的脂質(zhì)作為引發(fā)劑，在氮?dú)饣蛩逍詺怏w保護(hù)下，于室溫下反應(yīng)1 12h后，在冰水浴條件下，再加入4. 5 900摩爾份量的環(huán)氧乙烷單體，攪拌反應(yīng)12 48h后，用3 10摩爾份量的無水醇終止反應(yīng)，得到聚乙二醇化脂質(zhì)溶液；(3)將步驟(2)中的聚乙二醇化脂質(zhì)溶液經(jīng)酸化和純化后，即可得到聚乙二醇鏈長為 200 20000Da的末端為羥基的聚乙二醇化脂質(zhì)材料；(4)將步驟(3)中的末端為羥基的聚乙二醇化脂質(zhì)材料采用三種偶聯(lián)方法偶聯(lián)上靶向分子，再經(jīng)純化后，即可得到靶向性聚乙二醇化脂質(zhì)藥用材料。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向性聚乙二醇化脂質(zhì)藥用材料的合成方法，其特征在于所述堿金屬為鈉或鉀。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的靶向性聚乙二醇化脂質(zhì)藥用材料的合成方法，其特征在于所述無水醇為甲醇，或乙醇，或甘油，或正丁醇，或異丙醇中的一種或多種混合使用；所述酸化的酸包括有機(jī)酸和無機(jī)酸；其中，有機(jī)酸為甲酸，或乙酸，或枸櫞酸；無機(jī)酸為鹽酸，或硫酸，或磷酸，或硼酸中的一種或多種混合使用。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的靶向性聚乙二醇化脂質(zhì)藥用材料的合成方法，其特征在于所述的含有羥基的脂質(zhì)引發(fā)劑為含有羥基的磷脂類化合物，或留醇類化合物，或1， 2_十八?；?SN-甘油。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的靶向性聚乙二醇化脂質(zhì)藥用材料的合成方法，其特征在于所述的含有羥基的磷脂類化合物為心磷脂、或二硬脂酰磷脂酰甘油、或二油酰磷脂酰甘油、或二棕櫚酰磷脂酰甘油、或二月桂酰磷脂酰甘油、或二葵酰磷脂甘油。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的靶向性聚乙二醇化脂質(zhì)藥用材料的合成方法，其特征在于所述的留醇類化合物為膽固醇、或維生素D2、或維生素D3、或7-脫氫膽固醇、或麥角膽固
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向性聚乙二醇化脂質(zhì)材料的合成方法，其特征在于將末端為羥基的聚乙二醇化脂質(zhì)偶聯(lián)上靶向分子，其方法一即將聚乙二醇化脂質(zhì)末端羥基與靶向分子酯化反應(yīng)偶聯(lián)，包括以下工藝步驟(i)將0. 1 0. 4摩爾份量的靶向分子葉酸、或生物素、或含有羧基的磁球溶于無水二甲基亞砜(DMSO)中，在氮?dú)饣蚨栊詺怏w的保護(hù)及磁力攪拌下，緩慢滴加入0. 2 1. 0摩爾份量的N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)和0.2 1.0摩爾份量的1，3-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)， 攪拌0. 5 2h，得到羧基活化的靶向分子溶液；( )將0. 1摩爾份量末端為羥基的聚乙二醇化脂質(zhì)材料溶解于DMSO中，并緩慢地滴加入羧基活化的靶向分子溶液中，室溫下酯化反應(yīng)12 48h，經(jīng)純化，真空干燥，得含有靶向分子的聚乙二醇化脂質(zhì)藥用材料。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向性聚乙二醇化脂質(zhì)藥用材料的合成方法，其特征在于將末端為羥基的聚乙二醇化脂質(zhì)偶聯(lián)上靶向分子，其方法二即將聚乙二醇化脂質(zhì)末端的羥基羧基化后，再偶聯(lián)上靶向分子，包括以下工藝步驟(i)將0. 5摩爾份量末端為羥基的聚乙二醇化脂質(zhì)材料溶解于無水有機(jī)溶劑中，在氮?dú)饣蚨栊詺怏w保護(hù)及冰水浴下，磁力攪拌下，加入0. 5 2. 5摩爾份量的4- 二甲氨基吡啶 (DMAP)，反應(yīng)0. 5 ；緩慢加入0. 5 2. 5摩爾份量的三乙胺和0. 5 2. 5摩爾份量的丁二酸酐，反應(yīng)2 Mh，經(jīng)純化，真空干燥，得含有羧基的聚乙二醇化脂質(zhì)材料；( )將0. 1摩爾份量含有羧基的聚乙二醇化脂質(zhì)溶于無水DMSO中，在氮?dú)饣蚨栊詺怏w的保護(hù)及磁力攪拌下，緩慢滴加入0. 1 0. 5摩爾份量的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC -HCL)和0. 1 0. 5摩爾份量的N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)攪拌0. 5 池，得到羧基活化的聚乙二醇化脂質(zhì)溶液；(iii)將0. 1 0.4摩爾份量的靶向分子半乳糖、或RGD、或含有氨基的磁球溶解于無水DMSO中，緩慢滴加入羧基活化的聚乙二醇化脂質(zhì)溶液中，室溫反應(yīng)12 48h，純化，真空干燥，得到含有靶向分子的聚乙二醇化脂質(zhì)藥用材料。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向性聚乙二醇化脂質(zhì)藥用材料的合成方法，其特征在于將末端為羥基的聚乙二醇化脂質(zhì)偶聯(lián)上靶向分子，其方法三即將聚乙二醇化脂質(zhì)末端的羥基氨基化后，再偶聯(lián)上靶向分子，包括以下工藝步驟(i)將0.5摩爾份量的末端為羥基的聚乙二醇化脂質(zhì)材料溶解于無水的有機(jī)溶劑中， 在氮?dú)饣蚨栊詺怏w的保護(hù)及冰水浴下，攪拌滴加1. 0 5. 0摩爾份量的三乙胺和1. 0 5. 0 摩爾份量的甲基磺酰氯，再在室溫條件下，攪拌反應(yīng)4 12h ；經(jīng)純化，真空干燥，得到甲基磺?；垡叶蓟|(zhì)材料；(ii)將0.2摩爾份量的甲基磺?；垡叶蓟|(zhì)加入1. 0 100. 0ml25%的氨水中溶解，在室溫下攪拌反應(yīng)2 4天，經(jīng)純化，真空干燥，得到氨基化的聚乙二醇化脂質(zhì)材料；(iii)在氮?dú)饣蚨栊詺怏w保護(hù)下，將0.1 0. 4摩爾份量的靶向分子葉酸、或生物素、 或含有羧基的磁球溶解于無水DMSO中，磁力攪拌下緩慢滴加入0. 2 1.0摩爾份量的 EDC · HCL和0. 2 1. 0摩爾份量的NHS，攪拌0. 5 池，得到羧基活化的靶向分子溶液；(iv)將(ii)步中0.1摩爾份量的氨基化聚乙二醇化脂質(zhì)溶解于無水DMSO中，緩慢地滴加入(iii)步的羧基活化靶向分子溶液中，室溫下進(jìn)行酰胺反應(yīng)12 48h ；再經(jīng)純化，真空干燥，得到含有靶向分子的聚乙二醇化脂質(zhì)藥用材料。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-9任一所述的合成方法得到的聚乙二醇化脂質(zhì)藥用材料，或靶向性聚乙二醇化脂質(zhì)藥用材料，其特征在于所述藥用材料的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下R1-K-0V^r 2其中，R1為含有羥基的磷脂類化合物、或留醇類化合物、或1，2-十八酰基-SN-甘油出2 為羥基、或羧基、或氨基；或酯鍵、或酰胺鍵連接的靶向分子；η為從4 500的整數(shù)，即聚乙二醇分子量為200 20000Da。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種靶向性聚乙二醇化脂質(zhì)藥用材料的合成方法，屬于藥用脂質(zhì)材料合成技術(shù)領(lǐng)域。該方法是利用陰離子聚合法，以含有羥基的脂質(zhì)自身作為引發(fā)劑，直接誘發(fā)環(huán)氧乙烷單體聚合，通過控制環(huán)氧乙烷單體和引發(fā)劑的比例，并通過酸化和純化得到分子量及分子量分布可控的聚乙二醇化脂質(zhì)藥用材料，該藥用載體材料可在體內(nèi)實(shí)現(xiàn)長循環(huán)；進(jìn)一步對(duì)其修飾還可偶聯(lián)上靶向分子，使其在體內(nèi)實(shí)現(xiàn)靶向功能。本發(fā)明獲得的藥用脂質(zhì)材料結(jié)構(gòu)穩(wěn)定；合成工藝步驟簡單，反應(yīng)條件溫和；且成本低，易于實(shí)現(xiàn)功能靶向性。
文檔編號(hào)C07C43/11GK102174187SQ20111004761
公開日2011年9月7日 申請(qǐng)日期2011年2月28日 優(yōu)先權(quán)日2011年2月28日
發(fā)明者何斌, 吉麗, 常爽, 程剛, 聶宇, 謝麗, 顧忠偉, 龍春燕 申請(qǐng)人:四川大學(xué)