專(zhuān)利名稱(chēng)：一種從黃芩中提取黃芩苷的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥材的提取方法，尤其是一種從黃芩中提取黃芩苷的方法。
背景技術(shù)：
黃岑為唇形科植物黃岑(Scutellaria baicalensis Georgi)的干燥根,具有清熱燥濕、瀉火解毒、止血、安胎的功效。黃芩苷是黃芩的主要有效成分之一，具有顯著的生物活性，在藥理上已證實(shí)具有抑菌、清熱、降壓、鎮(zhèn)靜、利尿、利膽、抗炎、抗變態(tài)反應(yīng)、解毒、抗癌等作用。目前，黃芩苷已成功開(kāi)發(fā)成黃芩苷片、黃芩苷膠囊用于治療急慢性肝炎；此外，將黃芩苷與穿心蓮內(nèi)酯聯(lián)用，也已成功開(kāi)發(fā)成感咳雙清膠囊，用于治療急性上呼吸道感染和急性支氣管炎。由于黃芩苷具有較高的開(kāi)發(fā)利用前景，因此對(duì)提取和純化黃芩苷的方法進(jìn)行研究非常有現(xiàn)實(shí)意義。黃芩苷分子量為C21H18O11,是ー種黃酮類(lèi)化合物，其水溶性極小，具有一定的脂溶 性。目前已報(bào)道的黃芩苷的提取純化的方法很多，如水提酸沉法、醇提酸沉法、超濾法、微波提取法等[黃芩化學(xué)成分及黃芩苷提取方法研究進(jìn)展，李彤彤等，天津藥學(xué)2002年6月第14卷第3期，7-8頁(yè)]，另外，高速逆流色譜(HSCCC)、超臨界流體萃取法等新技術(shù)在黃芩苷分離純化中的應(yīng)用也有報(bào)道[黃芩總黃酮的提取與黃芩苷的分離，周芳，武漢工程大學(xué)碩士學(xué)位論文，2007年，11-14頁(yè)]。由于成本、規(guī)模、設(shè)備等原因，目前商業(yè)化生產(chǎn)仍是以傳統(tǒng)的水提酸沉法為主。酸沉法是利用黃芩苷在堿性條件下易溶解，在酸性條件下易析出的性質(zhì)對(duì)其進(jìn)行分離純化。然而，普通的水提酸沉法(酸沉?xí)r溶劑為水)黃芩提取物中黃芩苷含量并不高，周芳等[黃芩總黃酮的提取與黃芩苷的分離，周芳，武漢工程大學(xué)碩士學(xué)位論文，2007年，53-55頁(yè)]對(duì)黃芩水提物進(jìn)行酸沉純化研究，一次酸沉黃芩苷含量為39. 98%，二次酸沉黃芩苷含量為40. 02%，三次酸沉黃芩苷含量為43. 17%，可以看到即使通過(guò)增加純化次數(shù)也無(wú)法顯著提高黃芩苷的含量。而現(xiàn)行2010版藥典中對(duì)于黃芩提取物“含量測(cè)定”項(xiàng)中規(guī)定使用高效液相色譜法(HPLC)進(jìn)行含量測(cè)定；按干燥品計(jì)，黃芩苷不得少于85.0%。CN1454899A公開(kāi)了一種黃芩苷的水提酸沉エ藝，該エ藝需要將酸沉后所得沉淀在70-80°C保溫靜置12小時(shí)以上，該步驟能耗大，且所得產(chǎn)物中黃芩苷含量無(wú)法達(dá)到藥典要求，必須再次純化。李成文等[黃芩苷提取エ藝研究，中成藥，2003年8月，25卷，第八期，666-669頁(yè)]報(bào)道的水提酸沉エ藝，將酸沉I次所得粗品經(jīng)水洗后，再經(jīng)醇洗，其黃芩苷的HPLC含量提高到了 79%;胡上達(dá)等[黃芩提取エ藝的優(yōu)化，醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2002年7月，第21卷第7期，438-439頁(yè)]報(bào)道水提酸沉エ藝，可使提取物的黃芩苷含量(HPLC含量)達(dá)到88. 5%;CN101475618A公開(kāi)了ー種制備高純度黃芩苷的方法，所得提取物的黃芩苷的含量較高(92%以上，但未說(shuō)明是否是HPLC含量)。上述方法都必須在酸沉或洗滌過(guò)程中加入大量こ醇，雖然能提高產(chǎn)品中黃芩苷含量，但由于大量こ醇的使用，使生產(chǎn)成本和生產(chǎn)的安全風(fēng)險(xiǎn)都大大增加。US6290995報(bào)道了ー種在酸沉I次后加入活性炭進(jìn)行純化的方法，但我們通過(guò)重復(fù)該實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其產(chǎn)品收率很低。
因此，提供一種無(wú)有機(jī)溶劑特別是不涉及こ醇，生產(chǎn)成本低，更適合于エ業(yè)化大生產(chǎn)，同時(shí)產(chǎn)品各項(xiàng)指標(biāo)均符合藥典標(biāo)準(zhǔn)的黃芩苷的提取方法變得十分重要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題之一是尋找一種生產(chǎn)成本低，未使用任何有機(jī)溶剤，適合于エ業(yè)化大生產(chǎn)，產(chǎn)品各項(xiàng)指標(biāo)均符合藥典標(biāo)準(zhǔn)，并且產(chǎn)品質(zhì)量進(jìn)一步提升的從黃芩中提取黃芩苷的生產(chǎn)方法。為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了以下技術(shù)方案本發(fā)明提供了一種由黃芩中提取黃芩苷的方法步驟(I)為將黃芩切段或粉碎后用水提取，提取液過(guò)濾后用鹽酸調(diào)成酸性進(jìn)行第一次酸沉，靜置，過(guò)濾、洗滌、干燥得黃芩苷粗品；步驟(2)為將粗品用水混懸，先后加入氫氧化鈉、鹽酸，調(diào)成弱酸性，再加入適量活性炭，攪拌加熱后，過(guò)濾，濾液加入酸進(jìn)行第二次酸沉，過(guò)濾、洗滌、干燥，得黃芩苷。其中所述 活性炭用量為重量/體積百分比含量為O. 8%-1.6%，優(yōu)選I. 2%;所述步驟(2)中粗品用水混懸后，先用氫氧化鈉水溶液調(diào)pH值為7. 0-7. 5，再用鹽酸調(diào)pH值為6. 0-6. 5，優(yōu)選將步驟⑵中粗品加入10 15倍量水混懸后，加熱到80°C，用20%氫氧化鈉水溶液調(diào)pH為7. O 7. 5，再用濃鹽酸調(diào)pH為6. O 6. 5 ;所述黃芩提取之前優(yōu)選破碎成粒徑在2000微米以下；所述步驟(I)中第一次酸沉后，靜置4-22小時(shí)后，去除液體；優(yōu)選步驟(I)中第一次酸沉后，將溶液靜置4小時(shí)后，傾棄上層清液，再將剩余物繼續(xù)靜置12小時(shí)以上。本發(fā)明進(jìn)一歩提供了一種由黃芩中提取黃芩苷的方法，其具體步驟如下(I)黃芩藥材切段或粉后，第一次加10 15倍水，80_100°C加熱I. 5 2小時(shí)，第二次加8 10倍水，80-100°C加熱I. 5 2小時(shí)，過(guò)濾，提取液加熱到70_90°C，鹽酸調(diào)pH為I. 5 2. 0,70-90°C保溫I I. 5小時(shí)進(jìn)行第一次酸沉,靜置4小時(shí)后,傾去上清液,剩余沉淀和少量液體繼續(xù)靜置12小時(shí)以上，過(guò)濾，水洗，干燥得粗品。(2)粗品加入10 15倍量水混懸后，加熱到70_90°C，用氫氧化鈉水溶液調(diào)pH為7. O 7. 5，再用鹽酸調(diào)pH為6. O 6. 5，加入重量/體積百分含量為O. 8-1. 6%的活性炭，加熱、攪拌，沸騰O. 5-1小時(shí)，過(guò)濾，濾液加熱到70-90°C，用鹽酸調(diào)pH為I. 5 2. O, 70-90°C保溫30分鐘-I小時(shí)進(jìn)行第二次酸沉，靜置2-4小時(shí)，過(guò)濾，水洗，干燥得黃芩苷。本發(fā)明又進(jìn)ー步提供了一種由黃芩中提取黃芩苷的方法，具體步驟如下(I)黃芩藥材切段或粉碎至粒徑2000微米以下，第一次加12倍水，100°C加熱I. 5小時(shí)，第二次加10倍水，100°c加熱I. 5小時(shí)，過(guò)濾，提取液加熱到80°C，濃鹽酸調(diào)pH為I. 5，80°C保溫I小時(shí)進(jìn)行第一次酸沉，靜置4小時(shí)后，傾去上清液，剩余沉淀和少量液體繼續(xù)靜置12小時(shí)以上，過(guò)濾，水洗，干燥得粗品。(2)粗品加入10 15倍量水混懸后，加熱到80°C，用20%氫氧化鈉水溶液調(diào)pH為7.0’再用濃鹽酸調(diào)pH為6. 0，加入重量/體積百分含量為I. 2 %的活性炭，加熱、攪拌，沸騰O. 5小吋，過(guò)濾，濾液加熱到80°C，用鹽酸調(diào)pH為I. 5，80°C保溫30分鐘進(jìn)行第二次酸沉，靜置3小時(shí)，過(guò)濾，水洗，干燥得黃芩苷。本發(fā)明相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)的技術(shù)優(yōu)勢(shì)在于I、本發(fā)明的整個(gè)提制過(guò)程中，只使用水作為溶劑，無(wú)任何有機(jī)溶劑，生產(chǎn)安全系數(shù)高，大大降低了生產(chǎn)成本。整個(gè)エ藝中無(wú)需加入こ醇，通過(guò)2次酸沉就可以得到符合藥典標(biāo)準(zhǔn)的產(chǎn)品。2、本發(fā)明提制所得的黃芩提取物，經(jīng)用高效液相色譜測(cè)定，黃芩苷的含量在85%以上，有關(guān)物質(zhì)在10%以下，熾灼殘?jiān)贠. I %以下，符合現(xiàn)行藥典標(biāo)準(zhǔn)，且經(jīng)過(guò)エ藝驗(yàn)證，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定；此外，該方法收率相對(duì)于藥材可穩(wěn)定在8%以上。下面通過(guò)具體的實(shí)驗(yàn)方案對(duì)本發(fā)明作進(jìn)ー步說(shuō)明所有最終產(chǎn)品均按照以下方法進(jìn)行檢測(cè)I、含量測(cè)定(中國(guó)藥典2010版一部黃芩苷提取物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn))對(duì)照品購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所，純度96. 0%，批號(hào)110715-201016。對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取在60°C減壓干燥6小時(shí)的黃芩苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每ImL含60 μ g的溶液，作為對(duì)照品溶液。

供試品溶液的制備精密稱(chēng)取本品7mg，置250mL燒瓶中，加甲醇適量，置水浴回流提取30分鐘，放冷，移至IOOmL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水-磷酸(47 53 0.2)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm。理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算，應(yīng)不低于2500。測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μ L，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，測(cè)定，即得。2、熾灼殘?jiān)鼫y(cè)定按照中國(guó)藥典2010版附錄IXJ方法測(cè)定。3、有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法取本品，加甲醇溶液并稀釋制成每ImL中含O. 27mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取適量，加甲醇稀釋制成每ImL中含27 μ g的溶液，作為對(duì)照溶液。照含量測(cè)定項(xiàng)下的色譜條件，取對(duì)照溶液10 μ I注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成分色譜峰的峰高為記錄儀滿量程的20% 25% ;再精密量取上述兩種溶液各10 μ L分別進(jìn)樣，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的4倍。(一)第一次酸沉靜置方法篩選發(fā)明人通過(guò)大量實(shí)驗(yàn)研究獲知，在第一次酸沉過(guò)程中，靜置時(shí)間較長(zhǎng)，會(huì)使得部分雜質(zhì)隨著黃芩苷一起沉淀，產(chǎn)品含量有所降低，而酸沉?xí)r間較短可減少雜質(zhì)的沉淀，但黃芩苷沉淀不緊密，且粒徑較小，過(guò)濾時(shí)容易發(fā)生堵塞，這種情況在大生產(chǎn)時(shí)會(huì)經(jīng)常遇到，且難以較好的解決。本發(fā)明通過(guò)大量實(shí)驗(yàn)研究獲知將酸沉后的靜置過(guò)程采用分步法，即在酸沉4小時(shí)后將上清液傾棄，再將沉淀和剰余少量液體繼續(xù)靜置12小時(shí)以上，所得沉淀更緊密，且粒徑變大，過(guò)濾時(shí)較順利，有效避免了堵塞的發(fā)生，使其更適合エ業(yè)化大生產(chǎn)。其中部分實(shí)驗(yàn)過(guò)程及結(jié)果如下實(shí)驗(yàn)ー黃芩藥材200g，粉碎至粒徑在2000微米以下，加水煎煮兩次，合并煎煮液，過(guò)濾，濾液加熱到800C，攪拌下用濃鹽酸調(diào)pH為1. 5-2. O，80°C保溫I小時(shí)，靜置4小時(shí)，過(guò)濾，水洗，干燥得黃芩苷粗品，約28. 5g。粗品加入15倍量(428mL)水混懸，加熱到80°C，攪拌下用20%氫氧化鈉調(diào)pH為7左右至粗品全溶，加入重量/體積百分含量為I %左右的活性炭，加熱、攪拌，沸騰O. 5小吋，濾過(guò)。濾液加熱到80°C，用濃鹽酸調(diào)pH為1. 5-2. O，80°C保溫30min，靜置4小吋，過(guò)濾，水洗，干燥得黃芩苷。實(shí)驗(yàn)ニ 第一次酸沉?xí)r靜置12小時(shí)；活性炭純化時(shí)分別加入重量/體積百分含量為1%、1. 5%左右的活性炭，其余步驟均和實(shí)驗(yàn)ー相同。實(shí)驗(yàn)三第一次酸沉?xí)r靜置22小時(shí)；活性炭純化時(shí)分別加入重量/體積百分含量為1%、1. 5%左右的活性炭，其余步驟均和實(shí)驗(yàn)ー相同。實(shí)驗(yàn)四第一次酸沉?xí)r靜置4小時(shí)，傾去上清液，剩余沉淀和少量液體繼續(xù)靜置12小時(shí)，其余步驟均和實(shí)驗(yàn)ー相同。表I第一次酸沉靜置方法篩選結(jié)果
活性炭用量產(chǎn)品重量產(chǎn)品中黃芩有關(guān)物質(zhì)熾灼殘?jiān)章? 靜置方法
__(%)___(g) 一苷含量(％) —(%)__(%)__(%)
實(shí)驗(yàn)ー _1% —靜置4小時(shí)，直接過(guò)濾 _15.30__ 83.30 __12.58__0.03 _ 7.65
1% 靜置 12小時(shí)，直接過(guò)濾 18.8080.1215.700.03 9.40
實(shí)驗(yàn)ニ-------
__1.5% 靜置 12小時(shí)，直接過(guò)濾 _16.52__ 82.88 __14.97__ 0.04 —— 8.26 —
1% 靜置22小時(shí)，直接過(guò)濾 18.9879.8215.690.04 9.49
實(shí)驗(yàn)ニ-------
__1.5% 一靜置22小時(shí)，直接過(guò)濾 _16.88__81.52__15.13__0.03 _ 8.39
實(shí)驗(yàn)四 ___!% _ 靜置4小時(shí)，傾去上清 _17.94__ 83.22 __12.460.03 8.98
液，剰余沉淀和少量液
__一體繼續(xù)靜置12小時(shí)」_____分析及結(jié)論由上述結(jié)果可知，靜置4-22小時(shí)，產(chǎn)品含量都可以達(dá)到80%左右。但是可以看到實(shí)驗(yàn)ニ、三同實(shí)驗(yàn)ー相比，隨著酸沉后靜置時(shí)間的加長(zhǎng)，黃芩苷含量有所下降，即使將活性炭的用量加大至I. 5%，有關(guān)物質(zhì)也沒(méi)有明顯降低。實(shí)驗(yàn)四與實(shí)驗(yàn)ー相比發(fā)現(xiàn)，粗品和最終所得黃芩提取物中黃芩苷含量、有關(guān)物質(zhì)和熾灼殘?jiān)紱](méi)有明顯差異，但是該方法克服了由于沉淀物沉淀時(shí)間較短，沉淀物不緊密且粒徑較小，過(guò)濾較困難，以及黃芩苷損失較大，收率較低的缺點(diǎn)，更適合エ業(yè)化大生產(chǎn)。(ニ)活性炭用量篩選實(shí)驗(yàn)過(guò)程黃芩藥材800g，粉碎至粒徑在2000微米以下，加水煎煮兩次，合并煎煮液，過(guò)濾，濾液加熱到80°C，攪拌下用濃鹽酸調(diào)pH為I. 5-2. O, 80°C保溫I小吋，靜置4小吋，傾去上清液，剩余沉淀和少量液體繼續(xù)靜置12小時(shí)，過(guò)濾，水洗，干燥得黃芩苷粗品。將粗品平均分為四份，每份約28. 5g。每份加入15倍量水(428mL)混懸，加熱到80°C，攪拌下分別用20%氫氧化鈉調(diào)pH為7左右至粗品全溶，一份不加活性炭，其余三分分別加入粗品混懸液重量/體積百分含量為O. 8%、I. 2%、I. 6%的活性炭，加熱，攪拌，沸騰O. 5小吋，濾過(guò)。濾液加熱到80°C，用濃鹽酸調(diào)pH為I. 5-2. 0，80°C保溫30min，靜置3小吋，過(guò)濾，水洗，干燥得黃芩苷。表2活性炭用量篩選結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種由黃芩中提取黃芩苷的方法，其特征在于包含以下步驟 (1)黃芩切段或粉碎后用水提取，提取液過(guò)濾后用鹽酸調(diào)成酸性進(jìn)行第一次酸沉，靜置，過(guò)濾，水洗，干燥得黃芩苷粗品； (2)粗品用水混懸，先后加入氫氧化鈉、鹽酸，調(diào)成弱酸性，加入活性炭，攪拌加熱后，過(guò)濾，濾液加入鹽酸進(jìn)行第二次酸沉，過(guò)濾，水洗，干燥，得黃芩苷。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的由黃芩中提取黃芩苷的方法，其特征在于所述活性炭的重量/體積百分含量為0. 8-1. 6%。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的由黃芩中提取黃芩苷的方法，其特征在于所述活性炭的重量/體積百分含量為1.2*%。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述由黃芩中提取黃芩苷的方法，其特征在于步驟(2)中粗品用水混懸后，先用氫氧化鈉水溶液調(diào)pH值為7. 0-7. 5，再用鹽酸調(diào)pH值為6. 0-6. 5。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述由黃芩中提取黃芩苷的方法，其特征在于步驟(2)中粗品加入10 15倍量水混懸后，加熱到80°C，用20%氫氧化鈉水溶液調(diào)pH為7. 0 7. 5，再用濃鹽酸調(diào)pH為6.0 6. 5。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述由黃芩中提取黃芩苷的方法，其特征在于黃芩在提取之前預(yù)先破碎至粒徑在2000微米以下。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述由黃芩中提取黃芩苷的方法，其特征在于步驟(I)中第一次酸沉后，靜置4-22小時(shí)后,去除液體。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述由黃芩中提取黃芩苷的方法，其特征在于步驟(I)中第一次酸沉后，將溶液靜置4小時(shí)后，傾棄上層清液，再將剩余物繼續(xù)靜置12小時(shí)以上。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任意一項(xiàng)所述由黃岑中提取黃岑苷的方法,其特征在于 (1)黃芩藥材切段或粉后，第一次加10 15倍水，80-100°C加熱I.5 2小時(shí)，第二次加8 10倍水，80-100°C加熱I. 5 2小時(shí)，過(guò)濾，提取液加熱到70-90°C，鹽酸調(diào)pH為I.5 2. 0,70-90°C保溫I I. 5小時(shí)進(jìn)行第一次酸沉,靜置4小時(shí)后,傾去上清液,剩余沉淀和少量液體繼續(xù)靜置12小時(shí)以上，過(guò)濾，水洗，干燥得粗品。
(2)粗品加入10 15倍量水混懸后，加熱到70-90°C，用氫氧化鈉水溶液調(diào)pH為7.0 7. 5，再用鹽酸調(diào)pH為6. 0 6. 5，加入重量/體積百分含量為0. 8-1. 6%的活性炭，加熱、攪拌，沸騰0. 5-1小時(shí)，過(guò)濾，濾液加熱到70-90°C，用鹽酸調(diào)pH為I. 5 2. 0,70-90°C保溫30分鐘-I小時(shí)進(jìn)行第二次酸沉，靜置2-4小時(shí)，過(guò)濾，水洗，干燥得黃芩苷。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述由黃芩中提取黃芩苷的方法，其特征在于 (1)黃芩藥材切段或粉碎至粒徑2000微米以下，第一次加12倍水，100°C加熱I.5小時(shí)，第二次加10倍水，100°C加熱I. 5小時(shí)，過(guò)濾，提取液加熱到80°C，濃鹽酸調(diào)pH為I. 5，80°C保溫I小時(shí)進(jìn)行第一次酸沉，靜置4小時(shí)后，傾去上清液，剩余沉淀和少量液體繼續(xù)靜置12小時(shí)以上，過(guò)濾，水洗，干燥得粗品。
(2)粗品加入10 15倍量水混懸后，加熱到80°C，用20%氫氧化鈉水溶液調(diào)pH為.7.0，再用濃鹽酸調(diào)pH為6. 0，加入重量/體積百分含量為I. 2%的活性炭，加熱、攪拌，沸騰.0.5小時(shí)，過(guò)濾，濾液加熱到80°C，用鹽酸調(diào)pH為I. 5，80°C保溫30分鐘進(jìn)行第二次酸沉，靜置3小時(shí)，過(guò)濾，水洗，干燥得黃芩苷。
全文摘要
本發(fā)明提供一種從黃芩中提取黃芩苷的方法。本發(fā)明將活性炭純化同酸沉純化相結(jié)合，最終得到質(zhì)量符合藥典標(biāo)準(zhǔn)的黃芩提取物。該方法未使用任何有機(jī)溶劑，成本低，操作簡(jiǎn)單，適合于工業(yè)化大生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C07H17/07GK102675387SQ201110065938
公開(kāi)日2012年9月19日 申請(qǐng)日期2011年3月18日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月18日
發(fā)明者任治軍, 楊剛, 鄭強(qiáng) 申請(qǐng)人:四川濟(jì)生堂藥業(yè)有限公司