專利名稱：1-甲氧基鉤吻堿的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種I-甲氧基鉤吻堿(gelsevirine)的制備方法,特別是涉及一種從鉤吻提取物中分離制備I-甲氧基鉤吻堿的方法。
背景技術(shù)：
鉤吻(Gelsemium elegans Benth.)為馬錢科胡蔓藤屬植物,分中國鉤吻和北美鉤吻兩種。我國盛產(chǎn)于福建、浙江、廣西、廣東、湖南等地，又名斷腸草。其藥用部位為全草。具有祛風攻毒，消腫止痛的功效。鉤吻堿類化合物是存在于鉤吻中的一類化合物，被證明在腫瘤、鎮(zhèn)痛等方面有較好的活性。臨床上用于抑制腫瘤細胞生長、治療神經(jīng)痛、局部用于擴瞳等作用，可以被認為是鉤吻藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)之一。
I-甲氧基鉤吻堿(gelsevirine式I)是自鉤吻中分離得到的一種鉤吻堿類化合物，其含量較高，具有一定的開發(fā)新藥的潛力。其藥理作用主要包括其能抑制腫瘤細胞生長，鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜等作用。目前，未見到I-甲氧基鉤吻堿的制備工藝的相關(guān)報道，因此，I-甲氧基鉤吻堿分離手段的不足是限制其醫(yī)藥用途的一個主要原因。式I

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種從鉤吻提取物中制備I-甲氧基鉤吻堿的方法，以解決現(xiàn)有技術(shù)中制備手段繁瑣，產(chǎn)率極低的技術(shù)問題。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的從鉤吻提取物中制備I-甲氧基鉤吻堿的方法，包括步驟(I)乙酸乙酯萃取步驟將鉤吻提取物的水溶液用體積比為0. 5 : I 2 : I的乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯層，減壓回收溶劑，得萃取純化的浸膏A ；(2)硅膠色譜純化步驟將步驟(I)所得浸膏A用100-200目或200-300目柱層析硅膠柱色譜分離，并以體積比為50 I 25 I的氯仿-甲醇溶液進行洗脫，將洗脫液作TLC檢識，合并含有I-甲氧基鉤吻堿的流份，減壓回收溶劑，得浸膏B。將浸膏B再用薄層層析硅膠柱色譜分離，并以氯仿洗脫5BV后，用氯仿-甲醇100 I洗脫，收集洗脫液，并作TLC檢識，合并含有I-甲氧基鉤吻堿的流份，回收溶劑，即得浸膏C。(3) Sephadex LH-20 色譜純化步驟將步驟(2)所得的浸膏C Sephadex LH-20柱色譜分離，甲醇洗脫，洗脫液作TLC檢識，合并含有I-甲氧基鉤吻堿的流份，減壓回收溶劑，即得純化的I-甲氧基鉤吻堿。其中，所述娃膠色譜純化步驟與Sephadex LH-20色譜純化步驟的順序能夠顛倒。所述步驟⑴中鉤吻提取物中所用的提取溶劑為體積濃度為70% 95%的乙醇溶液。采用本發(fā)明的方法依次經(jīng)⑴乙酸乙酯萃取，⑵硅膠色譜純化，(3)SephadexLH-20色譜純化，能極大地提高得率，因此，該方法是一種制備1_甲氧基鉤吻堿的 簡化工藝，可用于I-甲氧基鉤吻堿的工業(yè)制備。


圖I為I-甲氧基鉤吻堿的1H-NMR圖。圖2為I-甲氧基鉤吻堿的13C-NMR圖。圖3為I-甲氧基鉤吻堿的DEPT圖。
具體實施例方式下面將結(jié)合具體實施例對本發(fā)明做進一步詳細說明。實施例I I-甲氧基鉤吻堿的制備鉤吻藥材1kg，去除雜質(zhì)后粉碎成粗粉，體積濃度為70%乙醇5L回流提取3次，每次2小時，合并提取液，回收溶劑得提取液約1L。將提取液用2L乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯層，減壓回收溶劑得浸膏A約40g。將浸膏A用硅膠柱色譜分離(硅膠為100-200目或200-300目柱層析硅膠，浸膏樣品與硅膠重量比為I : 30，硅膠柱規(guī)格0100*1000mm)，并以氯仿洗脫5BV后，換用體積比為50 I的氯仿-甲醇溶液進行洗脫，將洗脫液薄層硅膠板(GF254)點樣，以體積比為20 I的氯仿-甲醇溶液展開后置于紫外燈254nm下觀察，收集含有I-甲氧基鉤吻堿的部分，減壓回收溶劑，得浸膏B約12g。將浸膏B再用薄層硅膠柱色譜分離(浸膏樣品與硅膠重量比為I : 100，硅膠柱規(guī)格0100*1000mm)，并以體積比為100 I的氯仿-甲醇溶液洗脫，將洗脫液薄層硅膠板(GF254)點樣，以體積比為50 I的氯仿-甲醇溶液展開后置于紫外燈254nm下觀察，收集含有1_甲氧基鉤吻堿的部分，減壓回收溶劑，即得浸膏C約lg。將浸膏C Sephadex LH-20柱色譜分離(浸膏樣品與S印hadex LH-20重量比為I 100，硅膠柱規(guī)格O 20*1500mm)，甲醇洗脫，洗脫液作TLC檢識，合并含有I-甲氧基鉤吻堿的流份，減壓回收溶劑，即得純化的I-甲氧基鉤吻堿0. 3g。最終所得I-甲氧基鉤吻堿經(jīng)常規(guī)公知的NMR方法鑒定J. Nat. Prod. ,49(3)483-487,并經(jīng)高效液相檢測[Sapphire-C18柱(4. 6mm*250mm),檢測波長254nm,流動相為體積比50 50的水-甲醇溶液，流速ImL min—1，進樣量10 U 1，柱溫25°C，理論塔板數(shù)以I-甲氧基鉤吻堿計不低于5000含量在97%以上，其得率為0. 03%實施例2 I-甲氧基鉤吻堿的制備
鉤吻藥材1kg，去除雜質(zhì)后粉碎成粗粉，體積濃度為95%乙醇5L回流提取3次，每次2小時，合并提取液，回收溶劑得提取液約2L。將提取液用IL乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯層，減壓回收溶劑得浸膏A約35g。將浸膏A用硅膠柱色譜分離(硅膠為100-200目或200-300目柱層析硅膠，浸膏樣品與硅膠重量比為I : 50，硅膠柱規(guī)格0100*1000mm)，以體積比為25 I的氯仿-甲醇溶液進行洗脫，將洗脫液薄層硅膠板(GF254)點樣，以體積比為10 I的氯仿-甲醇溶液展開后置于紫外燈254nm下觀察，收集含有I-甲氧基鉤吻堿的部分，減壓回收溶劑，得浸膏B約Sg。將浸膏B再用薄層硅膠柱色譜分離(浸膏樣品與硅膠重量比為I : 50，硅膠柱規(guī)格0100*1000mm)，并以體積比為50 I的氯仿-甲醇溶液進行洗脫，將洗脫液薄層硅膠板(GF254)點樣，以體積比為20 I的氯仿-甲醇溶液展開后置于紫外燈254nm下觀察，收集含有I-甲氧基鉤吻堿的部分，減壓回收溶劑，即得浸膏C約2. 5g。將浸膏C Sephadex LH-20柱色譜分離(浸膏樣品與S印hadex LH-20重量比為I 125，硅膠柱規(guī)格O 20*1500mm)，甲醇洗脫，洗脫液作TLC檢識，合并含有I-甲氧基鉤吻堿的流份，減壓回收溶劑，即得純化的I-甲氧基鉤吻堿0. 35g。最終所得I-甲氧基鉤吻堿經(jīng)常規(guī)公知的NMR方法鑒定J. Nat. Prod. ,49(3)483-487,并經(jīng)高效液相檢測[Sapphire-C18柱(4. 6mm*250mm),檢測波長254nm,流動相為體積比50 50的水-甲醇溶液，流速ImL min—1，進樣量10 U 1，柱溫25°C，理論塔板數(shù)以I-甲氧基鉤吻堿計不低于5000含量在98%以上，其得率為0. 035%實施例3 I-甲氧基鉤吻堿的制備鉤吻藥材1kg，去除雜質(zhì)后粉碎成粗粉，體積濃度為80%乙醇5L回流提取3次，每次2小時，合并提取液，回收溶劑得提取液約1L。將提取液用0. 5L乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯層，減壓回收溶劑得浸膏A約35g。將浸膏A用S印hadex LH-20柱色譜分離(浸膏樣品與S印hadex LH-20重量比為
I 150，硅膠柱規(guī)格O 20*1500mm)，甲醇溶液洗脫，洗脫液作TLC檢識，合并含有I-甲氧基鉤吻堿的流份，減壓回收溶劑，得浸膏B約4g。浸膏B用薄層硅膠柱色譜分離(浸膏樣品與硅膠重量比為I : 70，硅膠柱規(guī)格060*600mm)，并以體積比為75 I的氯仿-甲醇溶液進行洗脫，將洗脫液薄層硅膠板(GF254)點樣，以體積比為20 I的氯仿-甲醇溶液展開后置于紫外燈254nm下觀察，收集含有I-甲氧基鉤吻堿的部分，減壓回收溶劑，即得純化的I-甲氧基鉤吻堿0. 28g。最終所得I-甲氧基鉤吻堿經(jīng)常規(guī)公知的NMR方法鑒定J. Nat. Prod. ,49(3) :483-487，并經(jīng)高效液相檢測[Sapphire-C18柱(4. 6mm*25Omm),檢測波長254nm,流動相為體積比50 : 50的水-甲醇溶液，流速ImL mirT1，進樣量10 yl，柱溫25°C，理論塔板數(shù)以I-甲氧基鉤吻堿計不低于5000含量在98%以上，其得率為0. 028%。以上實驗結(jié)果表明，本方法用于制備I-甲氧基鉤吻堿，工藝簡單，得率在萬分之一以上，因此，本發(fā)明可用于I-甲氧基鉤吻堿的工業(yè)制備。
權(quán)利要求
1.從鉤吻提取物中制備I-甲氧基鉤吻堿的方法，其特征在于包括步驟 (1)乙酸乙酯萃取步驟 將鉤吻提取物的水溶液用體積比為0.5 : I 2 : I的乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯層，減壓回收溶劑，得萃取純化的浸膏A ； (2)硅膠色譜純化步驟 將步驟(I)所得浸膏A用100-200目或200-300目柱層析硅膠柱色譜分離，并以體積比為50 : I 25 : I的氯仿-甲醇溶液進行洗脫，將洗脫液作TLC檢識，合并含有I-甲氧基鉤吻堿的流份，減壓回收溶劑，得浸膏B。將浸膏B再用薄層層析硅膠柱色譜分離，并以氯仿洗脫5BV后，用氯仿-甲醇100 I洗脫，收集洗脫液，并作TLC檢識，合并含有I-甲氧基鉤吻堿的流份，回收溶劑，即得浸膏C。
(3)Sephadex LH-20色譜純化步驟 將步驟(2)所得的浸膏C Sephadex LH-20柱色譜分離，甲醇洗脫，洗脫液作TLC檢識，合并含有I-甲氧基鉤吻堿的流份，減壓回收溶劑，即得純化的I-甲氧基鉤吻堿。
其中，所述娃膠色譜純化步驟與Sephadex LH-20色譜純化步驟的順序能夠顛倒。
2.如權(quán)利要求I所述的從鉤吻提取物中制備I-甲氧基鉤吻堿的方法，其特征在于所述步驟(I)中鉤吻提取物中所用的提取溶劑為體積濃度為70% 95%的乙醇溶液；鉤吻提取物的水溶液濃度相當于生藥0. 5g mr1 I. Og Inr1O
3.如權(quán)利要求I所述的從鉤吻提取物中制備I-甲氧基鉤吻堿的方法，其特征在于所述乙酸乙酯萃取中，鉤吻提取物的水溶液與乙酸乙酯溶液的體積比為0.5 I 2 : I。
4.如權(quán)利要求I所述的從鉤吻提取物中制備I-甲氧基鉤吻堿的方法，其特征在于所述硅膠色譜純化步驟中，硅膠為100-200目或200-300目柱層析硅膠或薄層層析硅膠，浸膏樣品與硅膠重量比為I : 30 I : 100。
5.如權(quán)利要求I所述的從鉤吻提取物中制備I-甲氧基鉤吻堿的方法，其特征在于所述S印hadex LH-20色譜純化步驟中，浸膏樣品與S印hadex LH-20重量比為I : 100 I 150。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從鉤吻提取物中制備1-甲氧基鉤吻堿的方法，包括步驟(1)乙酸乙酯萃取；(2)硅膠色譜純化；(3)Sephadex LH-20色譜純化。本發(fā)明是一種制備1-甲氧基鉤吻堿的簡化工藝，能極大地提高1-甲氧基鉤吻堿的得率，可用于1-甲氧基鉤吻堿的工業(yè)制備。
文檔編號C07D491/22GK102731514SQ201110081540
公開日2012年10月17日 申請日期2011年3月31日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月31日
發(fā)明者馮怡, 梁爽, 阮克鋒 申請人:上海張江中藥現(xiàn)代制劑技術(shù)工程研究中心