專利名稱：一種可溶性突變baff蛋白及其編碼基因與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種可溶性突變BAFF蛋白及其編碼基因與應(yīng)用，屬于生物技術(shù)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
B 細(xì)胞 舌化因子(B-cell activator factor belonging to the TNF family, BAFF)屬腫瘤壞死因子(Tumor NecrosisFactor, TNF)家族成員，主要參與B細(xì)胞分化發(fā)育成熟的功能調(diào)節(jié)。BAFF 又稱為 BLyS(B lymphocyte stimulator)、TALL-1 (TNF-and apoptosisligand-felated leukocyte expressed ligand 1)、 THANK(TNF homo logue that act ivatesapoptosis, NF-KB and JNK)、zTN F4 等，是 B 細(xì)胞存活與成熟和 T 細(xì)胞激活的必需因子。人BAFF基因編碼285個(gè)氨基酸，其中47 73氨基酸為跨膜區(qū)，74 285氨基酸為胞外區(qū)，133 285氨基酸為其發(fā)揮功能的主要區(qū)域。BAFF屬II型跨膜蛋白，N端在胞內(nèi)， 缺少信號(hào)肽序列，C端在胞外，其胞外段與TNF超家族成員IPRIL有高度同源性。具有TNF 家族特征性結(jié)構(gòu)，富含β 2片層的同源三聚體，在三聚體的中央含2個(gè)鎂離子，能夠穩(wěn)定蛋白功能。BAFF主要表達(dá)在單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞，樹突狀細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和活化的T細(xì)胞表面。BAFF有膜結(jié)合蛋白和可溶性配體(hsBAFF)兩種形式存在，上述BAFF表達(dá)免疫細(xì)胞活化后，釋放hsBAFF，后者通過與B細(xì)胞表面的BAFF受體結(jié)合，使B細(xì)胞活化并分化為漿細(xì)胞， 分泌免疫球蛋白，產(chǎn)生相應(yīng)的生理和病理性免疫應(yīng)答，參與機(jī)體正常免疫調(diào)節(jié)和免疫病理。 另外，hsBAFF還通過活化CD4+T細(xì)胞和NK細(xì)胞，參與機(jī)體固有和獲得性免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)。 BAFF 有三禾中受體BCMA(B cell maturation antigen), TACI (transmembrane activator andcalcium modulator cyclophilin ligand intercator)禾口 BAFF 受體(BAFF receptor, BAFF-R)，主要表達(dá)在B細(xì)胞上，三種受體均屬于TNF受體家族成員，三者均通過一個(gè)小的結(jié)構(gòu)域結(jié)合BAFF，他們的表達(dá)受T、B細(xì)胞的控制。BAFF與其三種受體結(jié)合而發(fā)揮著不同的作用。TACI表達(dá)于B細(xì)胞及部分活化的T細(xì)胞，其表達(dá)水平可由絲裂原和抗⑶3單抗上調(diào)；而BCMA僅見表達(dá)于B細(xì)胞，但其表達(dá)強(qiáng)度要低于TACI，TACI和BCMA除了與BAFF結(jié)合外，還可與TNF家族成員APRIL結(jié)合，介導(dǎo)APRIL的部分功能。因?yàn)锽AFF能與不表達(dá)TACI 和BCMA的細(xì)胞系BJAB結(jié)合，提示BAFF還可能有新的受體存在。2001年Thompson等克隆了 BAFF 的第三種受體BAFF-R。(Thompson JS, Bixler SA, Qian F, et al. BAFF-R, anewIy identified TNF receptor thatspecifically interacts with BAFF. Science 2001, 293(5537) :2108-2111.人 BAFF-R 定位于染色體 22ql3. 1-13. 31，其 mRNA 長(zhǎng)約 4. 5Kb，在脾臟及淋巴結(jié)高表達(dá)，而在胸腺、外周血低表達(dá)。在骨髓中不能檢測(cè)到BAFF-R mRNA。BAFF-R 是BAFF特異性的高親和力受體，它僅與BAFF結(jié)合而不與TNF家族成員結(jié)合。BAFF與它的三種特異性細(xì)胞膜受體結(jié)合后，能促進(jìn)B淋巴細(xì)胞增殖、分化發(fā)育、激活，刺激免疫球蛋白產(chǎn)生，并在自身免疫性疾病發(fā)病的過程中發(fā)揮重要作用。系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systematic Lupus Erythematosus, SLE)是以B細(xì)胞異?；罨痛罅孔陨砜贵w產(chǎn)生為特征的慢性全身性自身免疫性疾病。BAFF作為最重要的B細(xì)胞活化因子，參與SLE的免疫病理過程。在兩種SLE小鼠模型-MRL/Mp21pr/lpr和NZB/WF1小鼠， 發(fā)病時(shí)均存在血清BAFF水平增高，并與腎臟損害相關(guān)，阻斷BAFF的作用可顯著改善狼瘡鼠的生存。BAFF轉(zhuǎn)基因鼠出現(xiàn)嚴(yán)重B細(xì)胞增生、高滴度抗dsDNA自身抗體、蛋白尿和免疫復(fù)合物在腎臟沉積等狼瘡樣表現(xiàn)，也提示BAFF參與SLE發(fā)病。另外SLE患者的血清BAFF水平與IgG和抗dsDNA抗體滴度相關(guān)。綜上所述，臨床病例研究和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均提示BAFF參與 SLE發(fā)生和發(fā)展的免疫病理進(jìn)程。BAFF受體表達(dá)僅限于免疫球蛋白陽性的B細(xì)胞，BAFF和其受體特異性結(jié)合特性提示BAFF作為放射性同位素和化療藥物靶向蛋白載體，特異性的殺傷清除B細(xì)胞，用于B細(xì)胞惡性增殖性疾病和異?；罨约膊〉陌邢蛑委煛Ｑ芯匡@示，放射性同位素標(biāo)記的重組人 BAFF可在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)與B細(xì)胞結(jié)合，并靶向富集于BAFF受體陽性的小鼠移植腫瘤。由于天然BAFF具有刺激B細(xì)胞增殖的作用，基于BAFF的放射性同位素和化療藥物靶向制劑在殺傷BAFF受體陽性細(xì)胞的同時(shí)也刺激其增殖，用于B細(xì)胞惡性增殖性疾病和異?；罨约膊〉闹委煷嬖诎踩[患，因而只有受體結(jié)合活性而無B細(xì)胞活化作用的BAFF突變體及其靶向制劑的研究，對(duì)提高基于BAFF的放射性同位素和化療藥物靶向制劑的治療作用，減少安全隱患具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種可溶性突變BAFF蛋白及其編碼基因與應(yīng)用。本發(fā)明的另一目的就是提供一種高效表達(dá)重組可溶性突變BAFF(S0luble mutated BAFF, smBAFF)蛋白的方法，以及用于該方法的表達(dá)載體及工程細(xì)胞的構(gòu)建。發(fā)明概述本發(fā)明根據(jù)編碼人BAFF天然氨基酸的核苷酸序列，進(jìn)行人工突變，將位于251-277位的核苷酸序列g(shù)tccatgtctttggggatgaattgagt刪除，插入核苷酸序列 ggtggttca,獲得具有受體結(jié)合活性而缺乏B細(xì)胞活化作用的突變?nèi)薆AFF的基因。同時(shí)，本發(fā)明還利用生物技術(shù)將上述突變基因?qū)胭|(zhì)粒并轉(zhuǎn)化宿主菌表達(dá)重組可溶性突變 BAFF(soluble mutated BAFF, smBAFF)蛋白。一種可溶性突變BAFF基因，其特征在于，核苷酸序列如SEQ ID No. 1所示。由上述基因表達(dá)的可溶性突變BAFF蛋白，其特征在于，氨基酸序列如SEQ ID No. 2 所示。 上述可溶性突變BAFF基因全長(zhǎng)438個(gè)堿基，與天然BAFF基因序列有76. 03 %以上同源性。它具有如SEQ ID No. 2所示氨基酸序列，全長(zhǎng)145個(gè)氨基酸，與天然BAFF蛋白的氨基酸序列有98. 62%以上同源性。一種含有SEQ ID No. 1所示核苷酸序列的表達(dá)載體。含有上述SEQ ID No. 1所示核苷酸序列或上述表達(dá)載體的重組細(xì)胞。所述重組細(xì)胞的宿主細(xì)胞為大腸桿菌BL21 (DE3)。上述重組細(xì)胞構(gòu)建的方法，通過將smBAFF編碼序列與表達(dá)載體是pET41a連接，轉(zhuǎn)入大腸桿菌，抗生素篩選獲得高表達(dá)工程細(xì)胞。上述可溶性突變BAFF蛋白在制備化療藥物、放射性同位素藥物及以B細(xì)胞為靶細(xì)胞的靶向治療制劑中的應(yīng)用。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于1、本發(fā)明所述突變的smBAFF保留結(jié)合BAFF受體能力而喪失活化受體的能力，因而不刺激B細(xì)胞增殖活化，作為B細(xì)胞靶向載體更為安全。2、本發(fā)明所述突變后的重組smBAFF蛋白基因非常適合在大腸桿菌BL21 (DE3)宿主細(xì)胞中表達(dá)，具有高表達(dá)、穩(wěn)定的特點(diǎn)；3、選用的是大腸桿菌BL21(DE3)宿主細(xì)胞，通過施加抗生素篩選出多拷貝轉(zhuǎn)化細(xì)胞，進(jìn)而篩選出高表達(dá)工程細(xì)胞。


圖1. smBAFF蛋白誘導(dǎo)表達(dá)篩選電泳圖；圖中1、PET41a誘導(dǎo)前，2、PET41a 誘導(dǎo)后，3、PET4Ia-BAFF 誘導(dǎo)前，4-9、 PET4Ia-BAFF 誘導(dǎo)后，M 自下而上依次為10KD，17KD，26KD，34KD，43KD，55KD，72KD，95KD， 130KD,170KD(Fermentas SM 0671)；圖2. smBAFF蛋白表達(dá)形式確定電泳圖；圖中l(wèi)、PET41a誘導(dǎo)前全菌，2、PET41a誘導(dǎo)后全菌，3、PET41a_BAFF誘導(dǎo)后全菌， 4、PET4Ia-BAFF誘導(dǎo)前全菌，5、PET4Ia-BAFF誘導(dǎo)后細(xì)菌裂解上清，6、PET4Ia-BAFF誘導(dǎo)后細(xì)菌裂解包涵體，M 自下而上依次為19. 9KD，25KD，34KD，47KD，85KD，117KD (Fermentas SM 0441)；圖3.免疫熒光檢測(cè)smBAFF與BAFF-R(+) B細(xì)胞表面受體具有特異性結(jié)合能力的顯微鏡照片；其中a、Hmy2. CIR細(xì)胞在熒光顯微鏡下的照片；b、Hmy2. CIR細(xì)胞在普通顯微鏡下的照片；c、U937細(xì)胞在熒光顯微鏡下的照片；d、U937細(xì)胞在普通顯微鏡下的照片。圖4. smBAFF與BAFF蛋白細(xì)胞學(xué)活性比較圖。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明人通過深入而廣泛的研究，通過基因編碼序列的優(yōu)化設(shè)計(jì)，將人smBAFF編碼序列轉(zhuǎn)入大腸桿菌，從而實(shí)現(xiàn)了人smBAFF高效表達(dá)。在此基礎(chǔ)上完成了本發(fā)明。本發(fā)明根據(jù)編碼人BAFF天然氨基酸的核苷酸序列，進(jìn)行人工突變，將天然BAFF基因中第 251-277 位的 gtccatgtctttggggatgaattgagt 序列刪除，插入 ggtggttca 序列。獲得具有受體結(jié)合活性而缺乏B細(xì)胞活化作用的可溶性突變smBAFF的基因序列；全基因合成 pUC57-smBAFF, PCR擴(kuò)增sm BAFF，將該基因克隆到pMD中測(cè)序驗(yàn)證。優(yōu)化后的sm BAFF編碼序列與表達(dá)載體pET41a連接，轉(zhuǎn)入大腸桿菌，通過實(shí)施抗生素篩選出表達(dá)工程細(xì)胞，再通過小量誘導(dǎo)表達(dá)篩選獲得高表達(dá)工程細(xì)胞。下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，例如Sambrook等人，分子克隆實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)(New York =Cold Spring Harbor LaboratoryPress, 1989)中所述的條件，或按照制造商所建議的條件。實(shí)施例1表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建和高表達(dá)工程菌株的獲得
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根據(jù)人天然BAFF氨基酸序列，進(jìn)行人工突變，全基因合成smBAFF蛋白的目的基因序列，通過PCR擴(kuò)增得到目的基因smBAFF，目的基因序列如SEQ ID NO. 1所示，將該目的基因克隆到PMD中并測(cè)序驗(yàn)證。用NdeI 和 Xhol 雙酶切(Buffer o，37°C，購自 NEB 公司)pMD-smBAFF 及 pET41a 質(zhì)粒(購自MBI公司)。將兩個(gè)片段用T4DNA連接酶進(jìn)行連接，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化進(jìn)入大腸桿菌 DH5 α (購自北京全式金公司)，在含有卡那霉素的LB平板上挑選克隆，小量制備質(zhì)粒，通過雙酶切/PCR鑒定篩選出陽性克隆。大量擴(kuò)增確證的pET41a-SmBAFF質(zhì)粒，獲得含有smBAFF 的重組質(zhì)粒pEI^la-smBAFF。表達(dá)質(zhì)粒pET41a-SmBAFF經(jīng)測(cè)序驗(yàn)證后，轉(zhuǎn)化進(jìn)入已制備好的大腸桿菌 BL21 (DE3)感受態(tài)細(xì)胞，涂布含50ug/mL卡那霉素的LB平板，然后在轉(zhuǎn)化平板上調(diào)取單克隆，用堿裂解法抽提并檢測(cè)質(zhì)粒。將確證含有表達(dá)質(zhì)粒pET41a-SmBAFF的單克隆在含50ug/ mL卡那霉素的LB平板上保存。實(shí)施例kmBAFF的表達(dá)及表達(dá)形式的確定挑選一株確證好的表達(dá)工程菌BL21 (DE3) /pET41a-smBAFF,用LB培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)并用IPTG(異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷)誘導(dǎo)表達(dá)，SDS-PAGE電泳檢測(cè)是否有目的條帶出現(xiàn)，并分析表達(dá)量。取一部分發(fā)酵后的菌液離心，重懸于pH7.4，20mM PBS和2. 5mM EDTA緩沖液，在冰浴下超聲破碎，離心收集超聲上清和超聲沉淀，SDS-PAGE電泳檢測(cè)，確定其表達(dá)形式。分析其超聲上清和超聲沉淀，目的蛋白絕大多數(shù)在沉淀中，表明目的蛋白是以包涵體形式表達(dá)。實(shí)施例3smBAFF蛋白的純化取SDS-PAGE確證好的IPTG誘導(dǎo)的pEI^la-smBAFF表達(dá)工程菌BL21 (DE3)菌體超聲沉淀，用8M尿素，IOOmM NaH2PO4 ·2Η20，IOmM Tris緩沖液(ΡΗ8. 0)重懸，加至用上述緩沖液活化好的Ni-NTA柱，混勻，置4°C搖床上結(jié)合3小時(shí)，用8M尿素，IOOmM NaH2PO4 · 2H20， IOmM Tris 緩沖液(PH6. 3)洗；再用 8M 尿素，IOOmM NaH2PO4 · 2H20, IOmM Tris 緩沖液 (PH4. 5)洗脫，收集smBAFF純化蛋白，分別用6M尿素，IOOmM NaH2PO4 · 2H20 ；4M尿素， IOOmMNaH2PO4 · 2H20 ；2M 尿素，IOOmM NaH2PO4 · 2H20 ； IM 尿素，IOOmM NaH2PO4 · 2H20 ；0. 5M 尿素，IOOmM NaH2PO4 · 2H20和IOOmM NaH2PO4 · 2H20梯度緩沖液透析，洗脫樣品中的尿素。過濾除菌。產(chǎn)物經(jīng)測(cè)定，氨基酸序列如SEQ ID NO. 2所示，smBAFF蛋白較天然BAFF蛋白相比， 天然BAFF蛋白第84-91位氨基酸VHVFGDEL突變?yōu)镚G。實(shí)施例如mBAFF的細(xì)胞學(xué)活性的測(cè)定1. smBAFF對(duì)BAFF-R (+) B細(xì)胞表面受體具有特異性結(jié)合能力用含10 %胎牛血清的IMDM培養(yǎng)基分別接種BAFF-R⑴的B細(xì)胞Hmy. CIR和 BAFF-R(-)的U937細(xì)胞于12孔細(xì)胞培養(yǎng)板，接種密度為IO5細(xì)胞/孔，每孔加smBAFF蛋白， 使其終濃度達(dá)5ng/ml,37°C ,5% CO2培養(yǎng)24小時(shí)。1200轉(zhuǎn)/分離心3分鐘，棄上清，用PBS 洗細(xì)胞2遍，每次1200轉(zhuǎn)/分，離心3分鐘，棄上清。加0.5ml PBS重懸細(xì)胞，制備細(xì)胞涂片，把細(xì)胞涂片浸入95%乙醇中固定20分鐘，然后放入蓋片染色缸，用PBS振洗5min，取出吹干。加1 500稀釋的抗BAFF(羊抗人)一抗(購自R&D公司)，置于免疫組化濕盒內(nèi)， 4°C冰箱過夜。PBS振洗3次，每次5min，吹干。加1 5000稀釋的熒光素標(biāo)記的抗羊二抗 (購自R&D公司)，置于免疫組化濕盒內(nèi)，37度保溫60分鐘。PBS振洗2次，每次5min，然后用蒸餾水振洗1次。50%緩沖甘油封片。倒置熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖3。由圖3可以看出經(jīng)免疫熒光染色后在倒置熒光顯微鏡下可觀察到BAFF_R(+) Hmy2. CHR細(xì)胞有較強(qiáng)紅色熒光出現(xiàn)(如圖3. a)，而陰性對(duì)照組BAFF-R(-)U937細(xì)胞則未見熒光(如圖3. c)，表明重組蛋白與BAFF-R (+) Hmy2. CHR細(xì)胞表面受體具有特異性結(jié)合能力。2. smBAFF對(duì)BAFF-R (+) B細(xì)胞有刺激增殖作用以BCA法測(cè)定smBAFF蛋白濃度為30ug/ml，無菌條件下，用IMDM細(xì)胞培養(yǎng)基將蛋白稀釋5個(gè)濃度梯度，分別為0ug/ml、0· 6ug/ml 1. 2ug/ml、l. 8ug/ml和3. 6ug/ml，分別作為五個(gè)實(shí)驗(yàn)組，并設(shè)立對(duì)照組和空白組。將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的BAFF-R(+)的B細(xì)胞株Hmy. CHR和BAFF-R(-)的U937懸浮細(xì)胞接種于含10%胎牛血清的IMDM培養(yǎng)基的96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，接種密度均為5000細(xì)胞/50ul/孔，空白組不接種細(xì)胞，加空白培養(yǎng)基補(bǔ)足50ul/孔， 每組做3個(gè)復(fù)孔，邊緣孔加無菌PBS以維持濕潤(rùn)環(huán)境。每組分別加相應(yīng)濃度梯度的smBAFF 蛋白50ul，對(duì)照組不加蛋白，以空白培養(yǎng)基50ul/孔取代。以天然BAFF蛋白做平行實(shí)驗(yàn)。 37°C,5% CO2培養(yǎng)72小時(shí)，加CCK8溶液(日本Dojindo公司產(chǎn)品)IOul混勻，繼續(xù)培養(yǎng)3 小時(shí)，450nm測(cè)定OD值，計(jì)算每組平均OD值。以每組平均OD值，按下列公式計(jì)算出smBAFF蛋白和天然BAFF蛋白分別對(duì)Hmy. CIR細(xì)胞和U937細(xì)胞的增值率。細(xì)胞增值率=(實(shí)驗(yàn)組OD-空白組0D) / (對(duì)照組OD-空白組0D)實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖4。由圖4可以看出天然BAFF蛋白和本發(fā)明所述蛋白smBAFF對(duì)BAFF-R(-)的U937 細(xì)胞均無增殖作用，增加蛋白濃度也未見變化；兩者比較無差異。而對(duì)BAFF-R(+)的B細(xì)胞株Hmy. CHR而言，天然BAFF蛋白對(duì)其有明顯的細(xì)胞增殖作用，且隨蛋白濃度的提高，天然BAFF蛋白對(duì)Hmy. CIR細(xì)胞的增殖率相應(yīng)提高，當(dāng)?shù)鞍诐舛葹?.6ug/ml時(shí)，天然BAFF蛋白對(duì)Hmy. CHR細(xì)胞的增殖率可達(dá)84%。本發(fā)明所述蛋白 smBAFF對(duì)Hmy. CIR細(xì)胞無增殖作用，兩者比較有明顯差異。本發(fā)明提及的所有文獻(xiàn)都在本申請(qǐng)中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨(dú)引用作為參考一樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落入本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書所限定的范圍。
權(quán)利要求
1.一種可溶性突變BAFF基因，其特征在于，核苷酸序列如SEQ ID No. 1所示。
2.一種由權(quán)利要求1所述基因表達(dá)的可溶性突變BAFF蛋白，其特征在于，氨基酸序列如 SEQ ID No. 2 所示。
3.一種含有SEQ ID No. 1所示核苷酸序列的表達(dá)載體。
4.含有權(quán)利要求1所述核苷酸序列或權(quán)利要求3所述表達(dá)載體的重組細(xì)胞。
5.如權(quán)利要求4所述的重組細(xì)胞，其特征在于，所述重組細(xì)胞的宿主細(xì)胞為大腸桿菌 BL21(DE3)。
6.權(quán)利要求4所述重組細(xì)胞的構(gòu)建的方法，其特征在于，通過將smBAFF編碼序列與表達(dá)載體是pET41a連接，轉(zhuǎn)入大腸桿菌，抗生素篩選獲得高表達(dá)工程細(xì)胞。
7.權(quán)利要求2所述可溶性突變BAFF蛋白在制備化療藥物、放射性同位素藥物及以B細(xì)胞為靶細(xì)胞的靶向治療制劑中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種可溶性突變BAFF蛋白及其編碼基因與應(yīng)用，屬于生物技術(shù)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明所述的可溶性突變BAFF蛋白，氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，編碼該可溶性突變BAFF蛋白的基因，核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。本發(fā)明所述的突變的smBAFF保留結(jié)合BAFF受體能力而喪失活化受體的能力，因而不刺激B細(xì)胞增殖活化，作為B細(xì)胞靶向載體更為安全；編碼smBAFF的基因，非常適合在大腸桿菌中表達(dá)，同時(shí)通過發(fā)酵與純化工藝優(yōu)化，提高表達(dá)量，具有高表達(dá)、高穩(wěn)定的優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明獲得保留受體結(jié)合活性而缺失受體活化活性的人BAFF突變體-smBAFF，并可高效、簡(jiǎn)便、低成本的制備重組人smBAFF。
文檔編號(hào)C07K14/525GK102250920SQ20111009677
公開日2011年11月23日 申請(qǐng)日期2011年4月18日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月18日
發(fā)明者焦玉蓮, 趙躍然, 陳子江, 馬金龍 申請(qǐng)人:趙躍然, 陳子江