專利名稱：一種別隱品堿的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥有效部位的提取分離技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，涉及一種從夏天無中提取制備別隱品堿的方法。
背景技術(shù)：
別隱品堿(Allocryptopine)，分子式=C21H23NO5,分子量369. 40，是從罌粟科植物 (如博落回、血水草、白屈菜、夏天無等)中分離得到的一種叔胺生物堿，無色，溶于乙醇、氯仿、乙醚、乙酸乙酯及稀酸，mp. 160-161°C。別隱品堿結(jié)構(gòu)母核中具有與許多抗心律失常中藥成分相似的異喹啉結(jié)構(gòu)，劉謨焓通過實驗證明其具有多種抗實驗性心律失常的作用。別隱品堿抵抗由烏頭堿誘發(fā)的交感神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)放加強，進而促進內(nèi)源性兒茶酚胺釋放，使細胞膜鈣離子內(nèi)流增加所產(chǎn)生的心律失常；別隱品堿還可以抑制動作電位時程和有效不應(yīng)期縮短，最終抑制折返的形成，而具有抗心律失常的作用；文毅等通過實驗表明，別隱品堿通過對瞬間外向鉀電流的阻滯作用使心肌細胞內(nèi)鈣離子濃度減少，鉀離子增加，心室自律性降低，并抑制振蕩性后電位致異位節(jié)律，并且可抑制氧自由基的產(chǎn)生，從而具有抗心律失常的作用。另外，別隱品堿對烏頭堿引起的動物心律失常其抑制功效大于煙胺；能阻止烏頭堿引起的動物心肌缺鉀；靜脈注射10mg/kg時，能阻止電刺激引起的動物心房纖維顫動。夏天無為罌粟科植物伏生紫堇Corydalis decumbens (Thunb. ) Pers.的干燥根莖， 收載于2010版中國藥典一部，具活血止痛、舒筋活絡(luò)、祛風(fēng)除濕之功效，為中醫(yī)治療中風(fēng)偏癱、頭痛、跌撲損傷、風(fēng)濕痹痛、腰腿疼痛的常用藥物，主要含有生物堿類成分。夏天無的總生物堿具有拮抗β受體和抗心律失常作用。中國專利申請?zhí)?3118201. 1使用大孔樹脂分離得到血根堿和白屈菜紅堿，但涉及的別隱品堿是與原阿片堿的混合物，未分離純化得到別隱品堿單體成分。胡之壁等通過硅膠柱分離血根堿等生物堿單體，但只適合實驗室少量制備，不適合產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。經(jīng)檢索，在國內(nèi)僅有一件專利涉及別隱品堿單體的工業(yè)生產(chǎn)方法，即中國專利申請?zhí)?200810031701. 6，該方法采用乙醇提取，初始提取物再在酸醇中沉淀出大部分生物堿，用稀堿液調(diào)整濾液ΡΗ，過濾后再調(diào)ρΗ，重新過濾，濾渣即為粗提物，粗提物先后用乙酸乙酯、甲醇回流處理，減壓蒸干后在甲醇或氯仿-甲醇或無水乙醇中重結(jié)晶，得到別隱品堿單體，該方法反復(fù)使用酸堿，甚至使用濃硫酸，且有機溶劑用量大、產(chǎn)品雜質(zhì)含量高。李發(fā)旺等以博落回為原料，采用酸水浸提，提取出總生物堿的粗提物，再用陽離子交換樹脂吸附總堿，然后在索氏提取器中，用混合有機溶劑提取吸附了總堿的樹脂，在氮氣保護下，利用柱層析方法，分離、純化總堿，最后獲得四種生物堿，通過波譜分析與表征，證實四種生物堿分別為 別隱品堿，原阿片堿，血根堿，白屈菜紅堿。該方法有機溶劑用量大、分離得到的別隱品堿雜質(zhì)多。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對罌粟科植物提取別隱品堿時，酸堿使用頻繁、有機溶劑用量大、雜質(zhì)含量高等問題，采用大孔樹脂制備別隱品堿，具體內(nèi)容如下一種別隱品堿的制備方法，其特征在于包括以下步驟A.酸水提取以富含別隱品堿的罌粟科植物為原料，粉碎成粗粉，用質(zhì)量比體積含量為0. 2-1. 0%的稀酸水溶液浸泡8-M小時，滲漉提取，滲漉流速為4-6ml/min · kg ；B.大孔樹脂富集提取液調(diào)pH至7. 5-8. 5，過大孔吸附樹脂柱，先以水洗，再用 20-45%乙醇洗脫，濃縮洗脫液；C.溶劑萃取采用1-1. 5倍濃縮液體積的二氯甲烷或氯仿萃取，萃取3-5次，合并萃取液，濃縮得浸膏；D.色譜柱層析用氧化鋁或硅膠作為柱填料，粒度為100-300目，乙酸乙酯-甲醇梯度洗脫，分段收集流分；E.結(jié)晶用混合溶劑結(jié)晶，得到純度達95%以上的別隱品堿產(chǎn)品。本發(fā)明所采用的富含別隱品堿的罌粟科植物可選夏天無、博落回、血水草等。步驟A所述酸水為鹽酸或硫酸。步驟B所述大孔吸附樹脂可選DA201、DM301、DS401型大孔吸附樹脂。步驟E所述混合溶劑為石油醚-甲醇或乙酸乙酯-乙醇混合溶劑，按體積比，由高到低，依次按50 1,20 UlO 1、5 1和1 1，分段收集流分。本發(fā)明采用大孔樹脂和氧化鋁應(yīng)用于別隱品堿的制備，大大縮短了提取制備時間、去除了雜質(zhì)，避免酸堿反復(fù)使用，尤其是濃酸濃堿的使用，具有簡便快速、易于洗脫和再生、產(chǎn)品純度高等優(yōu)點，適于夏天無等藥材中別隱品堿的大量制備。
具體實施例方式實施例1:將夏天無藥材500g粉碎成粗粉，用0. 6% (質(zhì)量體積比)的鹽酸溶液浸泡10小時，滲漉，滲漉速度為5ml/min *kg，將滲漉液調(diào)至pH7. 5，過DA201大孔樹脂柱，先以水洗除雜，再用30%乙醇洗脫，收集并濃縮洗脫液，用1.2倍濃縮液體積的二氯甲烷萃取，反復(fù)萃取4次，合并萃取液，濃縮，濃縮液與適量氧化鋁拌樣上柱，氧化鋁粒度為100-300目，洗脫劑為乙酸乙酯-甲醇混合溶劑，按體積比，由高到低，依次按50 1,20 UlO 1、5 1 和1 1，分段收集流分，合并別隱品堿流分，減壓濃縮析晶，濾出粗晶，再以乙酸乙酯-乙醇 (5 1)重結(jié)晶，得到純度95. 5%的無色結(jié)晶產(chǎn)品，即別隱品堿l.lg。實施例2:將夏天無藥材Ikg粉碎成粗粉，用0. 4% (質(zhì)量體積比)的鹽酸溶液浸泡16小時， 滲漉，滲漉速度為5ml/min *kg，將滲漉液調(diào)至pH8. 0，過DM301大孔樹脂柱，先以水洗除雜， 再用25%乙醇洗脫，收集并濃縮洗脫液，用1. 5倍濃縮液體積的氯仿萃取，反復(fù)萃取5次，合并萃取液，濃縮，濃縮液與適量氧化鋁拌樣上柱，氧化鋁粒度為100-300目，洗脫劑為乙酸乙酯-甲醇混合溶劑，按體積比，由高到低，依次按50 1,20 UlO 1、5 1和1 1， 分段收集流分，合并別隱品堿流分，減壓濃縮析晶，濾出粗晶，再以石油醚-甲醇(6 1)重結(jié)晶，得到純度96. 0%的無色結(jié)晶產(chǎn)品，即別隱品堿2. lg。實施例3:將博落回根Ikg粉碎成粗粉，用0. 2% (質(zhì)量體積比)的硫酸溶液浸泡15小時，滲漉，滲漉速度為6ml/min *kg，將滲漉液調(diào)至pH8. 5，過DS401大孔樹脂柱，先以水洗除雜，再用40 %乙醇洗脫，收集并濃縮洗脫液，用等倍濃縮液體積的二氯甲烷萃取，反復(fù)萃取3次， 合并萃取液，濃縮，濃縮液與適量氧化鋁拌樣上柱，氧化鋁粒度為100-300目，洗脫劑為乙酸乙酯-甲醇混合溶劑，按體積比，由高到低，依次按50 1,20 UlO 1、5 1和1 1， 分段收集流分，合并別隱品堿流分，減壓濃縮析晶，濾出粗晶，再以石油醚-甲醇G 1)重結(jié)晶，得到純度95. 3%的無色結(jié)晶產(chǎn)品，即別隱品堿5. 6g。實施例4 將博落回果莢2kg粉碎成粗粉，用0. 5% (質(zhì)量體積比)的鹽酸溶液浸泡12小時， 滲漉，滲漉速度為5ml/min *kg，將滲漉液調(diào)至pH7. 5，過DM301大孔樹脂柱，先以水洗除雜， 再用20%乙醇洗脫，收集并濃縮洗脫液，用1. 4倍濃縮液體積的氯仿萃取，反復(fù)萃取3次，合并萃取液，濃縮，濃縮液與適量氧化鋁拌樣上柱，氧化鋁粒度為100-300目，洗脫劑為乙酸乙酯-甲醇混合溶劑，按體積比，由高到低，依次按50 1,20 UlO 1、5 1和1 1， 分段收集流分，合并別隱品堿流分，減壓濃縮析晶，濾出粗晶，再以乙酸乙酯-乙醇(5 1) 重結(jié)晶，得到純度95. 7%的無色結(jié)晶產(chǎn)品，即別隱品堿11. 5g。實施例5 將血水草藥材5kg粉碎成粗粉，用0. 8 % (質(zhì)量體積比)的硫酸溶液浸泡M小時， 滲漉，滲漉速度為細1/min *kg，將滲漉液調(diào)至pH8. 0，過DS-401大孔樹脂柱，先以水洗除雜， 再用45%乙醇洗脫，收集并濃縮洗脫液，用1. 3倍濃縮液體積的二氯甲烷萃取，反復(fù)萃取4 次，合并萃取液，濃縮，濃縮液與適量硅膠拌樣上柱，硅膠粒度為100-300目，洗脫劑為乙酸乙酯-甲醇混合溶劑，按體積比，由高到低，依次按50 1,20 UlO 1、5 1和1 1， 分段收集流分，合并別隱品堿流分，減壓濃縮析晶，濾出粗晶，再以乙酸乙酯-乙醇G 1) 重結(jié)晶，得到純度95. 6%的無色結(jié)晶產(chǎn)品，即別隱品堿10. 4g。實施例6 將血水草藥材5kg粉碎成粗粉，用1. 0 % (質(zhì)量體積比)的鹽酸溶液浸泡18小時， 滲漉，滲漉速度為6ml/min *kg，將滲漉液調(diào)至pH7. 5，過DA201大孔樹脂柱，先以水洗除雜， 再用30%乙醇洗脫，收集并濃縮洗脫液，用1.5倍濃縮液體積的氯仿萃取，反復(fù)萃取5次， 合并萃取液，濃縮，濃縮液與適量硅膠拌樣上柱，硅膠粒度為100-300目，洗脫劑為乙酸乙酯-甲醇混合溶劑，按體積比，由高到低，依次按50 1,20 UlO 1、5 1和1 1，分段收集流分，合并別隱品堿流分，減壓濃縮析晶，濾出粗晶，再以石油醚-甲醇(7 1)重結(jié)晶，得到純度96. 4%的無色結(jié)晶產(chǎn)品，即別隱品堿10. lg。
權(quán)利要求
1.一種別隱品堿的制備方法，其特征在于包括以下步驟A.酸水提取以富含別隱品堿的罌粟科植物為原料，粉碎成粗粉，用質(zhì)量比體積含量為0. 2-1. 0%的稀酸水溶液浸泡8-M小時，滲漉提取，滲漉流速為4-6ml/min · kg ；B.大孔樹脂富集提取液調(diào)pH至7.5-8. 5，過大孔吸附樹脂柱，先以水洗，再用 20-45%乙醇洗脫，濃縮洗脫液；C.溶劑萃取采用1-1.5倍濃縮液體積的二氯甲烷或氯仿萃取，萃取3-5次，合并萃取液，濃縮得浸膏；D.色譜柱層析用氧化鋁或硅膠作為柱填料，粒度為100-300目，乙酸乙酯-甲醇梯度洗脫，分段收集流分；E.結(jié)晶用混合溶劑結(jié)晶，得到純度達95%以上的別隱品堿產(chǎn)品。
2.如權(quán)利要求1所述的一種別隱品堿的制備方法，其特征在于步驟A所述酸水為鹽酸或硫酸。
3.如權(quán)利要求1所述的一種別隱品堿的制備方法，其特征在于步驟B所述大孔吸附樹脂可選DA201、DM301、DS401型大孔吸附樹脂。
4.如權(quán)利要求1所述的一種別隱品堿的制備方法，其特征在于步驟E所述混合溶劑為石油醚-甲醇或乙酸乙酯-乙醇混合溶劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種別隱品堿的制備方法，它按如下工藝步驟進行A.酸水提取以富含別隱品堿的罌粟科植物為原料，酸水浸泡后滲漉提??；B.大孔樹脂富集提取液調(diào)pH至7.5-8.5，過大孔吸附樹脂柱，濃縮洗脫液；C.溶劑萃取采用有機溶劑萃取洗脫濃縮液；D.色譜柱層析用氧化鋁或硅膠作為柱填料，乙酸乙酯-甲醇梯度洗脫，分段收集流分；E.結(jié)晶用混合溶劑結(jié)晶，得到純度達95％以上的別隱品堿產(chǎn)品。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明工藝簡單，成本低廉，對環(huán)境污染少，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號C07D491/056GK102234282SQ20111011756
公開日2011年11月9日 申請日期2011年5月6日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月6日
發(fā)明者劉東鋒, 楊成東, 郭琴 申請人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司