專利名稱：一種從牦牛血中提取免疫球蛋白的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然藥物提取技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種從牦牛血中提取免疫球蛋白的方法。
背景技術(shù)：
免疫球蛋白(Immimoglobulin，簡(jiǎn)稱Ig)是指具有抗體活性，能與相應(yīng)的抗原發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)的球蛋白，普遍存在于哺乳動(dòng)物的血液、組織液、淋巴液及外分泌液中。免疫球蛋白在動(dòng)物體內(nèi)具有重要的免疫和生理調(diào)節(jié)作用，是動(dòng)物體內(nèi)免疫系統(tǒng)最為關(guān)鍵的組成物質(zhì)之一。免疫球蛋白可以分為IgG、IgA、IgM、IgD、IgE五類。人體血清免疫球蛋白的主要成分是IgG，它占總的免疫球蛋白的70-75 %，分子量約15萬，含糖2 3 %。盡管免疫球蛋白千變?nèi)f化，但都有類似的結(jié)構(gòu)?？贵w分子是由兩對(duì)長(zhǎng)短不同的多肽鏈所組成，四條鏈通過鏈間二硫鍵構(gòu)成Y型基本結(jié)構(gòu)(H2U)。人體血清免疫球蛋白IgG是初級(jí)免疫應(yīng)答中最持久、最重要的抗體，它僅以單體形式存在。大多是抗菌性、抗毒性和抗病毒抗體屬于IgG， 它在抗感染中起到主力軍作用，它能夠促進(jìn)單核巨噬細(xì)胞的吞噬作用(調(diào)理作用)，中和細(xì)菌毒素的毒性(中和毒素)和病毒抗原結(jié)合使病毒失去感染宿主細(xì)胞的能力(中和病毒)。 免疫球蛋白一般用牛乳和豬血提取。近年來，免疫球蛋白廣泛應(yīng)用于開發(fā)新型功能性食品添加劑，仔畜飼料以及生物新藥和醫(yī)藥生化診斷中，已成為研究和商業(yè)等部門重要的物質(zhì)， 前景十分廣闊。然而，免疫球蛋白對(duì)熱的不穩(wěn)定性使得其產(chǎn)品開發(fā)受到很大的限制。牦牛是我國(guó)特有的高原牛種，被稱為“高原之舟”，受到高原惡劣但無污染環(huán)境的選拔，擁有很強(qiáng)的免疫力。又因?yàn)槭艿礁咴瓘?qiáng)紫外線的照射，因此牦牛是天然的無菌資源寶庫(kù)。牦牛宰殺取肉后其血液往往沒有得到利用，全部當(dāng)做污水排放，不但使牦牛的價(jià)值無法充分利用，而且增加了環(huán)境負(fù)擔(dān)。從血液中提取免疫球蛋白，常用的方法有鹽析法(如多聚磷酸鈉絮凝法，硫酸氨鹽析法)、有機(jī)溶劑沉淀法(如冷乙醇分離法、辛酸沉淀法)、有機(jī)聚合物沉淀法、變性沉淀法、纖維素層析法、凝膠層析法、超濾法等，許多學(xué)者對(duì)提取免疫球蛋白作過一些深入的研究，但對(duì)抗體純化的綜合方法比較的較多，而限制純化純度和得率的瓶頸階段——粗提階段則研究較少。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是針對(duì)上述存在的不足，提供一種從牦牛血中提取免疫球蛋白的方法。本發(fā)明說提供的技術(shù)方案是1)離心分離在新鮮的牦牛血中加入抗凝劑，離心，保留血漿；2)超濾將血漿用水稀釋后通過超濾膜濃縮，洗滌除雜，得截留相；3)超聲提取將截留相加入到乙醇中超聲提取重復(fù)2次，合并提取液；4)沉淀將提取液調(diào)酸，離心得沉淀；
5)冷凍干燥將沉淀冷凍干燥即得。所述步驟1)中的抗凝劑為檸檬酸鈉，用量為0. 3% (V/V)。所述步驟2、中的超濾膜為截留分子量3000 10000D的多孔纖維超濾膜。所述步驟3)中的提取溶劑用量為10-15倍量(V/W)，提取時(shí)間為20-30min，室溫操作。所述步驟4)中的酸為鹽酸或硫酸之一，酸化后的pH為7. 3-7. 7。綜上所述，本發(fā)明存在以下優(yōu)點(diǎn)1)用牦牛血為原料，變廢為寶，解決了牦牛宰殺后留下的問題；2)溶劑簡(jiǎn)單易得，毒性小，因此后處理簡(jiǎn)單，成本低，而產(chǎn)品安全性更高；3)膜分離只需要推動(dòng)力，不需要蒸發(fā)耗熱，因此能耗小，低碳化；4)超聲提取速度比一般的溶劑提取效率高，提取溫度低，不會(huì)使產(chǎn)品因受熱分解而損失，也不會(huì)引入其他污染物；5)免疫球蛋白的析出PH離中性近，因此酸用量不大；6)各步驟處理量大，速度快，適合大規(guī)模生產(chǎn)。下面將結(jié)合具體實(shí)施方式
進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施方式。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1在100L新鮮的牦牛血中加0.3%檸檬酸鈉，高速離心，使血液分層，保留血漿，通過截留分子量3000 10000D的多孔纖維超濾膜濃縮，加水洗滌，取截留相。截留相用10 倍量(V/W)乙醇超聲提取20min，重復(fù)2次，合并提取液，加入鹽酸調(diào)解pH為7. 3-7. 7，離心得沉淀，冷凍干燥即得免疫球蛋白，純度為78. %。實(shí)施例2在100L新鮮的牦牛血中加0.3%檸檬酸鈉，高速離心，使血液分層，保留血漿，通過截留分子量3000 10000D的多孔纖維超濾膜濃縮，加水洗滌，取截留相。截留相用15 倍量(V/W)乙醇超聲提取30min，重復(fù)2次，合并提取液，加入鹽酸調(diào)解pH為7. 3-7. 7，離心得沉淀，冷凍干燥即得免疫球蛋白，純度為78.4%。實(shí)施例3在100L新鮮的牦牛血中加0.3%檸檬酸鈉，高速離心，使血液分層，保留血漿，通過截留分子量3000 10000D的多孔纖維超濾膜濃縮，加水洗滌，取截留相。截留相用10 倍量(V/W)乙醇超聲提取20min，重復(fù)2次，合并提取液，加入鹽酸調(diào)解pH為7. 3-7. 7，離心得沉淀，冷凍干燥即得免疫球蛋白，純度為79. 1%。實(shí)施例4在100L新鮮的牦牛血中加0.3%檸檬酸鈉，高速離心，使血液分層，保留血漿，通過截留分子量3000 10000D的多孔纖維超濾膜濃縮，加水洗滌，取截留相。截留相用15 倍量(V/W)乙醇超聲提取30min，重復(fù)2次，合并提取液，加入鹽酸調(diào)解pH為7. 3-7. 7，離心得沉淀，冷凍干燥即得免疫球蛋白，純度為77. 9%。實(shí)施例5
在100L新鮮的牦牛血中加0.3%檸檬酸鈉，高速離心，使血液分層，保留血漿，通過截留分子量3000 10000D的多孔纖維超濾膜濃縮，加水洗滌，取截留相。截留相用12 倍量(V/W)乙醇超聲提取25min，重復(fù)2次，合并提取液，加入鹽酸調(diào)解pH為7. 3-7. 7，離心得沉淀，冷凍干燥即得免疫球蛋白，純度為79. 5%。實(shí)施例6在100L新鮮的牦牛血中加0.3%檸檬酸鈉，高速離心，使血液分層，保留血漿，通過截留分子量3000 10000D的多孔纖維超濾膜濃縮，加水洗滌，取截留相。截留相用15 倍量(V/W)乙醇超聲提取20min，重復(fù)2次，合并提取液，加入鹽酸調(diào)解pH為7. 3-7. 7，離心得沉淀，冷凍干燥即得免疫球蛋白，純度為77. 4%。
權(quán)利要求
1.一種從牦牛血中提取免疫球蛋白的方法，其特征在于所述的方法包括下列步驟1)離心分離在新鮮的牦牛血中加入抗凝劑，離心，保留血漿；2)超濾將血漿用水稀釋后通過超濾膜濃縮，洗滌除雜，得截留相；3)超聲提取將截留相加入到乙醇中超聲提取重復(fù)2次，合并提取液；4)沉淀將提取液調(diào)酸，離心得沉淀；5)冷凍干燥將沉淀冷凍干燥即得。
2.一種從牦牛血中提取免疫球蛋白的方法，其特征在于所述步驟1)中的抗凝劑為檸檬酸鈉，用量為0.3% (V/V)。
3.—種從牦牛血中提取免疫球蛋白的方法，其特征在于所述步驟幻中的超濾膜為截留分子量3000 10000D的多孔纖維超濾膜。
4.一種從牦牛血中提取免疫球蛋白的方法，其特征在于所述步驟幻中的提取溶劑用量為10-15倍量(V/W)，提取時(shí)間為20-30min，室溫操作。
5.一種從牦牛血中提取免疫球蛋白的方法，其特征在于所述步驟4)中的酸為鹽酸或硫酸之一，酸化后的PH為7. 3-7. 7。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從牦牛血中提取免疫球蛋白的方法。新鮮牦牛血加抗凝劑，離心出血漿。血漿通過超濾膜除雜濃縮。截留相用乙醇超聲提取，冷凍干燥即得。這種提取方法簡(jiǎn)單、快速、安全、無污染，且成本低、低碳無公害。
文檔編號(hào)C07K1/36GK102229670SQ20111011938
公開日2011年11月2日 申請(qǐng)日期2011年5月10日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月10日
發(fā)明者劉寶巖, 張翼, 李法慶 申請(qǐng)人:蘇州瑞藍(lán)博中藥技術(shù)開發(fā)有限公司