專利名稱：源自山玉蘭、紫玉蘭、白玉蘭的小白菊內(nèi)酯的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物提取技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明涉及一種小白菊內(nèi)酯的制備方法，具體涉及從山玉蘭、紫玉蘭、白玉蘭根皮中提取小白菊內(nèi)酯的方法。
背景技術(shù)：
腫瘤極大威脅著人類健康，我國現(xiàn)有癌癥患者約200萬人，每年新發(fā)160萬例，這是一個不小的群體，抗腫瘤研究是當(dāng)今生命科學(xué)領(lǐng)域極具挑戰(zhàn)性且意義重大的領(lǐng)域。過去的治療方法側(cè)重于對癌細(xì)胞的鏟除和殺傷，目前，臨床上常用的抗腫瘤藥物主要是細(xì)胞毒類藥物，這類抗癌藥具有選擇性差、毒副作用強、易產(chǎn)生耐藥性等缺點，是典型的雙面刃藥物，而且難以根除癌癥，不少癌癥的復(fù)發(fā)比例較高。惡性腫瘤的高復(fù)發(fā)率一直是困擾腫瘤醫(yī)生的難題，越來越多的研究證實腫瘤細(xì)胞群體中存在少數(shù)能使群體擴增的腫瘤干細(xì)胞。它們通常處于慢周期狀態(tài)，對化療藥物敏感性低，是腫瘤復(fù)發(fā)的根源。因此腫瘤干細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)·給腫瘤治療帶來新的靶標(biāo)，針對腫瘤干細(xì)胞的藥物研究為徹底治愈癌癥提供可能。近年來，從天然產(chǎn)物中尋找抗癌活性化合物已經(jīng)成為抗癌藥物的開發(fā)熱點，前20年間，全世界推出的藥物小分子新化學(xué)實體中，有61 %可追朔到天然產(chǎn)物。天然產(chǎn)物在某些治療領(lǐng)域出現(xiàn)率非常高78%的抗菌化合物和74%的抗腫瘤化合物都是天然產(chǎn)物，或從某個天然產(chǎn)物衍生而來，實踐證明，天然產(chǎn)物在抗癌藥物發(fā)現(xiàn)中的獨特作用重新引起高度重視。傳統(tǒng)治療腫瘤的化療藥物均存在耐藥問題，尤其是腫瘤干細(xì)胞更不敏感?？拱┲兴幉┐缶?，高效低毒，從中有可能篩選出高效殺傷腫瘤干細(xì)胞，從而治療惡性腫瘤的藥物。倍半職內(nèi)酯類化合物小白菊內(nèi)酯(Parthenolide)是從小白菊中提取的化合物，最初被用來治療皮膚感染、風(fēng)濕病以及偏頭痛。近期研究表明，小白菊內(nèi)酯可抑制前列腺癌、乳腺癌、胃癌、白血病癌、腎癌、肺癌、結(jié)腸腺癌、成神經(jīng)管細(xì)胞瘤等癌細(xì)胞的生長，在動物模型上小白菊內(nèi)酯還能治療紫外線引起的皮膚癌。對其作用機理研究發(fā)現(xiàn)，小白菊內(nèi)酯能抑制轉(zhuǎn)錄因子NF-K B的激活，其活性可能主要來源于p65/NF-K B亞基的Cys38上的巰基與含笑內(nèi)酯發(fā)生了 Michael加成反應(yīng)，由于NF- κ B是調(diào)控腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移、藥物抗性的重要基因，抑制NF-κ B的激活有可能提高腫瘤對于抑瘤劑所引起的細(xì)胞凋亡的敏感性。最近，紐約羅切斯特大學(xué)醫(yī)學(xué)院的Jordan，C. T.博士及其同事發(fā)現(xiàn)小白菊內(nèi)酯能夠在基本不損傷正常干細(xì)胞的情況下，針對性地消滅引發(fā)急性和慢性骨髓性白血病的干細(xì)胞，從而有可能根本上遏制白血病復(fù)發(fā)，小白菊內(nèi)酯這一獨特的作用機制，已引起人們的廣泛關(guān)注。小白菊內(nèi)酯(parthenollde)的分子式C15H2tlO3,分子量248,性狀無色晶體,其
結(jié)構(gòu)如下
Zo H
O
專利CN101190258中公開了一種從廣玉蘭的葉子或花中提取富含小白菊內(nèi)酯提取物的方法，但該方法中所用廣玉蘭的葉子或花中小白菊內(nèi)酯的含量不太高(含量約為
0.3%),而且過程較繁瑣，生產(chǎn)成本較高。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，山玉蘭、紫玉蘭、白玉蘭的根皮中均富含小白菊內(nèi)酯，其含量高，提取分離過程簡單，易于工業(yè)化。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明還提供了一種從山玉蘭、紫玉蘭、白玉蘭根皮中提取小白菊內(nèi)酯的方法。具體地，本發(fā)明提供了一種從山玉蘭、紫玉蘭、白玉蘭根皮中分離提取小白菊內(nèi)酯的方法，該方法包括以下步驟(I)取山玉蘭、紫玉蘭、白玉蘭干燥根皮，粉碎成粉； (2)取粉碎的粗粉，用5 20倍重量的適當(dāng)?shù)奶崛∪軇┰谝欢囟认绿崛《啻危看蜪 108小時；(3)過濾，合并濾液，減壓回收溶劑得提取浸膏；(4)提取浸膏用質(zhì)量濃度10% 30%的乙醇或甲醇溶液溶解，再用適當(dāng)?shù)挠袡C溶劑萃取至顏色變淡，合并有機溶劑，減壓回收有機溶劑，干燥得總倍半萜內(nèi)酯類化合物；(5)取上述總倍半萜內(nèi)酯類化合物上硅膠色譜柱，以混合有機溶劑梯度淋洗，跟蹤檢測，收集含小白菊內(nèi)酯的流份，合并減壓回收混合有機溶劑，干燥得小白菊內(nèi)酯。該方法還包含小白菊內(nèi)酯的結(jié)晶過程，結(jié)晶過程如下(6)小白菊內(nèi)酯在適當(dāng)?shù)娜軇┲械脽o色結(jié)晶狀化合物小白菊內(nèi)酯。其中提取溶劑為甲醇、乙醇、丙酮、氯仿中的任一種或甲醇、乙醇、丙酮、氯仿分別與水按一定比例(水的百分含量為0% -100% )混合的提取溶劑。其中提取的溫度為(TC 100°C。其中萃取所用有機溶劑為乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、石油醚、正己烷中的任一種。其中淋洗所用混合有機溶劑為石油醚乙酸乙酯=20 : I I : 20，己烷乙酸乙酯=20 : I I : 20，石油醚丙酮=20 : I I : 20，己烷丙酮=20 I I 20,氯仿乙酸乙酯=40 : I I : I,氯仿丙酮=40 : I I : I,氯仿甲醇=200 : I I : I中的任一種。其中結(jié)晶所用有機溶劑選自石油醚/乙酸乙酯，己烷/乙酸乙酯，石油醚/丙酮，己烷/丙酮混合溶劑中的任一種。本發(fā)明還提供了山玉蘭、紫玉蘭、白玉蘭根皮用于提取小白菊內(nèi)酯的用途，應(yīng)用山玉蘭、紫玉蘭、白玉蘭根皮可以提取出小白菊內(nèi)酯，所以應(yīng)用山玉蘭、紫玉蘭或白玉蘭根皮提取小白菊內(nèi)酯是獲得小白菊內(nèi)酯的新的途徑，也發(fā)現(xiàn)了山玉蘭、紫玉蘭、白玉蘭根皮的一種新的有價值的用途。有益效果本發(fā)明提供的小白菊內(nèi)酯的制備方法解決了小白菊內(nèi)酯制備產(chǎn)率低、工藝過程復(fù)雜的技術(shù)缺陷，本發(fā)明所提供的小白菊內(nèi)酯的制備方法，提取分離過程簡單，易于工業(yè)化。
具體實施例方式為了理解本發(fā)明，下面以實施例進(jìn)一步說明本發(fā)明，但不限制本發(fā)明。
實施例I :從山玉蘭根皮中分離純化小白菊內(nèi)酯取山玉蘭干燥根皮I公斤，粉碎成粉。取粉碎的粗粉，用10倍(重量)的95%乙醇在回流提取3次，每次3小時。過濾，合并濾液，減壓回收溶劑得提取浸膏。浸膏用20%的乙醇溶解，再用乙酸乙酯萃取至萃取液的顏色變淡，合并有機溶劑，減壓回收溶劑，干燥得固體114克。上硅膠色譜柱，以石油醚乙酸乙酯=15 : I 4 : I梯度淋洗，TLC跟蹤檢測，與小白菊內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)品對照，收集含小白菊內(nèi)酯的流份，合并減壓回收溶劑，得干燥固體。在石油醚丙酮=10 I的混合溶劑中結(jié)晶得無色結(jié)晶狀小白菊內(nèi)酯52g(純度99. 2% )，得率為 5. 2%。譜圖數(shù)據(jù)1H NMR (CDCl3, 400MHz) δ 6. 25 (s，1H)，5. 55 (s，1H)，5. 12 (d，J = 11·6Ηζ，1Η)，3. 79 (t, J = 8· 4Hz，1Η)，2· 71 (d，J = 8· 0Hz，2Η)，2· 28-2. 34 (m，2Η)，2· 06-2. 13 (m，4Η)，
I.64 (br s，4H)，I. 22(s，3H)，I. 24(s，1Η) ；13C NMR(CDC13，400MHz) δ 169. 2，139. 1，134. 5，124. 9，121. 1,82. 3,66. 0,61. 4,47. 3,40. 9,36. 1,30. 4,23. 9，17. 1，16. 8。譜圖數(shù)據(jù)表明實施例的方法制備得到的化合物是小白菊內(nèi)酯。實施例2 :從紫玉蘭根皮中分離純化小白菊內(nèi)酯取紫玉蘭干燥根皮I公斤，粉碎成粉。取粉碎的粗粉，用10倍(重量)的95%乙醇在回流提取3次，每次3小時。過濾，合并濾液，減壓回收溶劑得提取浸膏。浸膏用20%的乙醇溶解，再用乙酸乙酯萃取至萃取液的顏色變淡，合并有機溶劑，減壓回收溶劑，干燥得固體102克。上硅膠色譜柱，以石油醚乙酸乙酯=15 : I 4 : I梯度淋洗，TLC跟蹤檢測，與小白菊內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)品對照，收集含小白菊內(nèi)酯的流份，合并減壓回收溶劑，得干燥固體。在石油醚丙酮=10 I的混合溶劑中結(jié)晶得無色結(jié)晶狀小白菊內(nèi)酯32g(純度99. 6% )，得率為 3.2%。實施例3 :從白玉蘭根皮中分離純化小白菊內(nèi)酯取白玉蘭干燥根皮I公斤，粉碎成粉。取粉碎的粗粉，用10倍(重量)的95%乙醇在回流提取3次，每次3小時。過濾，合并濾液，減壓回收溶劑得提取浸膏。浸膏用20%的乙醇溶解，再用乙酸乙酯萃取至萃取液的顏色變淡，合并有機溶劑，減壓回收溶劑，干燥得固體112克。上硅膠色譜柱，以石油醚乙酸乙酯=15 : I 4 : I梯度淋洗，TLC跟蹤檢測，與小白菊內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)品對照，收集含小白菊內(nèi)酯的流份，合并減壓回收溶劑，得干燥固體。在石油醚丙酮=10 I的混合溶劑中結(jié)晶得無色結(jié)晶狀小白菊內(nèi)酯36g(純度99. 4% )，得率為 3.6%。實施例4 :與廣玉蘭干葉的對比實施例為了更好的說明本發(fā)明，按照CN101190258中公開的提取富含小白菊內(nèi)酯提取物的方法，從I公斤廣玉蘭干葉中分離純化得小白菊內(nèi)酯2. 5g，得率僅為O. 25%。而且過程較繁瑣,生產(chǎn)成本較高。本發(fā)明的方法已經(jīng)通過具體的實施例進(jìn)行了描述。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本發(fā)明的內(nèi)容適當(dāng)改變工藝條件等環(huán)節(jié)來實現(xiàn)相應(yīng)的其它目的，其相關(guān)改變都沒有脫離本發(fā)明的內(nèi)容，所有類似的替換和改動對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，都被視為包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種從山玉蘭、紫玉蘭、白玉蘭根皮中分離提取小白菊內(nèi)酯的方法，該方法包括以下步驟 (1)取山玉蘭、紫玉蘭、白玉蘭干燥根皮，粉碎成粉； (2)取粉碎的粗粉，用5 20倍重量的適當(dāng)?shù)奶崛∪軇┰谝欢囟认绿崛《啻?，每次I 108小時； (3)過濾，合并濾液，減壓回收溶劑得提取浸膏； (4)提取浸膏用質(zhì)量濃度10% 30%的乙醇或甲醇溶液溶解，再用適當(dāng)?shù)挠袡C溶劑萃取至顏色變淡，合并有機溶劑，減壓回收有機溶劑，干燥得總倍半萜內(nèi)酯類化合物； (5)取上述總倍半萜內(nèi)酯類化合物上硅膠色譜柱，以混合有機溶劑梯度淋洗，跟蹤檢測，收集含小白菊內(nèi)酯的流份，合并減壓回收混合有機溶劑，干燥得小白菊內(nèi)酯。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，該方法還包含小白菊內(nèi)酯的結(jié)晶過程，結(jié)晶過程如下 (6)小白菊內(nèi)酯在適當(dāng)?shù)娜軇┲械脽o色結(jié)晶狀化合物小白菊內(nèi)酯。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的方法，其中提取溶劑為甲醇、乙醇、丙酮、氯仿中的任一種或甲醇、乙醇、丙酮、氯仿分別與水按一定比例(水的百分含量為0%-100%)混合的提取溶劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求I或2所還的方法，其中提取的溫度為0°C 100°C。
5.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的方法，其中萃取所用有機溶劑為乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、石油醚、正己烷中的任一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的方法，其中淋洗所用混合有機溶劑為石油醚乙酸乙酯=20 : I I : 20，己烷乙酸乙酯=20 : I I : 20，石油醚丙酮=20 : I I 20，己烷丙酮=20 : I I : 20，氯仿乙酸乙酯=40 : I I : 1，氯仿丙酮=40 : I I : I,氯仿甲醇=200 : I I : I中的任一種。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中結(jié)晶所用有機溶劑選自石油醚/乙酸乙酯，己烷/乙酸乙酯，石油醚/丙酮，己烷/丙酮混合溶劑中的任一種。
8.—種山玉蘭、紫玉蘭、白玉蘭根皮用于提取小白菊內(nèi)酯的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種小白菊內(nèi)酯的提取制備方法，具體涉及從山玉蘭、紫玉蘭、白玉蘭根皮中提取小白菊內(nèi)酯的方法，以山玉蘭、紫玉蘭、白玉蘭根皮為原料，粉碎，經(jīng)極性有機溶劑提取，適當(dāng)有機溶劑萃取后得到總內(nèi)酯，總內(nèi)酯再經(jīng)柱層析分離，收集所需成分后，再用適當(dāng)溶劑結(jié)晶即得到小白菊內(nèi)酯。本發(fā)明從山玉蘭、紫玉蘭、白玉蘭根皮提取制備小白菊內(nèi)酯的方法，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號C07D493/04GK102863452SQ201110187388
公開日2013年1月9日 申請日期2011年7月6日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月6日
發(fā)明者張泉, 陳悅, 范洪霞, 龍菁, 翟佳黛 申請人:天津尚德藥緣科技有限公司, 南開大學(xué)