專利名稱：一種延齡草苷的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種延齡草苷的制備方法。
背景技術(shù)：
延齡草苷(Trillin)，異名Diosgeninglucoside，分子式=C33H52O8 ；分子量 576. 7658，CAS登錄號(hào)14144_06_0，分子結(jié)構(gòu)式如下
延齡草苷是為天然化合物，是一種留體皂苷，具有降血脂、抗凝、抗自由基活性等作用， 來源于百合科植物腫tschonoskii Maxim的根莖，也有文獻(xiàn)從穿龍薯蕷(Dioscorea nipponica Mak.)等植物中分離得到延齡草苷。中藥延齡草為傳統(tǒng)的名貴中藥，又名頭頂一顆珠，含有多種留體皂苷，黃酮和萜類成分。具有鎮(zhèn)靜安神、祛風(fēng)活血、延年益壽的功效。主治頭暈?zāi)垦?、失眠、跌打損傷、外傷出血、神經(jīng)衰弱、高血壓、腦震蕩后遺癥等疾病等。黃麗亞等研究表明頭頂一顆珠抗衰老作用與增強(qiáng)腦組織S0D、GSH-Px活性，減少M(fèi)DA蓄積有關(guān)。也有文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)頭頂一顆珠能明顯提高缺血-再灌注損傷后的左心功能，可提高血中SOD和GSH-Px活性，降低MDA的含量。現(xiàn)有技術(shù)中，延齡草苷的提取方法主要是用60%_70%乙醇回流提取，純化方法主要采用硅膠柱、ODS中低壓柱層析及半制備高效液相色譜等，但這些提取純化方法得到的延齡草苷含量低，生產(chǎn)周期長、成本高，且不利大生產(chǎn)操作。本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種利于大生產(chǎn)操作、提取率高、產(chǎn)品純度高的延齡草苷的制備方法。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用下列技術(shù)方案
取延齡草根莖，加入4-10倍量體積的醇溶液溫浸2-8小時(shí)，濾過，取濾液減壓回收乙醇，加入等體積石油醚脫脂，脫脂后的藥液加入氧化鋁柱層析，乙醚-乙醇(65:35)洗脫，收集洗脫液，濃縮，加丙酮析出黃色沉淀，離心，沉淀用丙酮洗滌，再采用高速逆流色譜法進(jìn)行分離純化，流出物濃縮、低溫干燥即得產(chǎn)品。所述溫浸溫度60-85 °C。所述高速逆流色譜溶劑系統(tǒng)為正庚烷-乙酸乙酯-乙腈，其體積比為(3-7): (1-3):(2-4)。所述高速逆流色譜溶劑系統(tǒng)為石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水，其體積比為(4-8)
發(fā)明內(nèi)容(3-5)(4-7):(3-6)。采用上述技術(shù)方案制備延齡草苷，操作簡單、提取率高、樣品損失少、產(chǎn)品純度高， 利于大生產(chǎn)操作。下面將結(jié)合具體實(shí)施方式
對本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不僅限于下列實(shí)施方式。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1
取延齡草^cg,加入其重量6倍量體積的65%乙醇加熱至80°C，溫浸4小時(shí)，濾過，取濾液減壓回收乙醇，加入等體積石油醚脫脂，將脫脂后的藥液加入中性氧化鋁柱層析，用乙醚-乙醇(65 35)洗脫，收集洗脫液，濃縮，加丙酮析出黃色沉淀，離心，沉淀再用丙酮洗滌， 低溫干燥得延齡草苷粗品。取正庚烷、乙酸乙酯、乙腈按體積比7 3 4置于分液漏斗中混合均勻，靜置分層，分離上下相，以上相為固定相，下相為流動(dòng)相，取上述延齡草苷粗品150mg 溶于IOml下相中待用，開啟高速逆流色譜儀，以3ml/min流速泵入流動(dòng)相，待平衡后開始連續(xù)進(jìn)樣，轉(zhuǎn)速為900rpm，收集延齡草苷流分，濃縮，低溫干燥即得延齡草苷，經(jīng)HPLC測定，純度為98. 7%。實(shí)施例2:
取延齡草^cg,加入其重量4倍量體積的65%乙醇加熱至80°C，溫浸2小時(shí)，濾過，取濾液減壓回收乙醇，加入等體積石油醚脫脂，將脫脂后的藥液加入中性氧化鋁柱層析，用乙醚-乙醇(65 35)洗脫，收集洗脫液，濃縮，加丙酮析出黃色沉淀，離心，沉淀再用丙酮洗滌， 低溫干燥得延齡草苷粗品。取正庚烷、乙酸乙酯、乙腈按體積比5:2:3置于分液漏斗中混合均勻，靜置分層，分離上下相，以上相為固定相，下相為流動(dòng)相，取上述延齡草苷粗品150mg 溶于IOml下相中待用，開啟高速逆流色譜儀，以2ml/min流速泵入流動(dòng)相，待平衡后開始連續(xù)進(jìn)樣，轉(zhuǎn)速為900rpm，收集延齡草苷流分，濃縮，低溫干燥即得延齡草苷，經(jīng)HPLC測定，純度為98. 4%ο實(shí)施例3:
取延齡草^cg,加入其重量5倍量體積的70%乙醇加熱至80°C，溫浸8小時(shí)，濾過，取濾液減壓回收乙醇，加入等體積石油醚脫脂，將脫脂后的藥液加入中性氧化鋁柱層析，用乙醚-乙醇(65 35)洗脫，收集洗脫液，濃縮，加丙酮析出黃色沉淀，離心，沉淀再用丙酮洗滌， 低溫干燥得延齡草苷粗品。取正庚烷、乙酸乙酯、乙腈按體積比3:2:2置于分液漏斗中混合均勻，靜置分層，分離上下相，以上相為固定相，下相為流動(dòng)相，取上述延齡草苷粗品150mg 溶于IOml下相中待用，開啟高速逆流色譜儀，以3ml/min流速泵入流動(dòng)相，待平衡后開始連續(xù)進(jìn)樣，轉(zhuǎn)速為900rpm，收集延齡草苷流分，濃縮，低溫干燥即得延齡草苷，經(jīng)HPLC測定，純度為98. 5%ο實(shí)施例4:
取延齡草^cg,加入其重量6倍量體積的65%乙醇加熱至80°C，溫浸5小時(shí)，濾過，取濾液減壓回收乙醇，加入等體積石油醚脫脂，將脫脂后的藥液加入中性氧化鋁柱層析，用乙醚-乙醇(65 35)洗脫，收集洗脫液，濃縮，加丙酮析出黃色沉淀，離心，沉淀再用丙酮洗滌， 低溫干燥得延齡草苷粗品。取正庚烷、乙酸乙酯、乙腈按體積比4:1:4置于分液漏斗中混合均勻，靜置分層，分離上下相，以上相為固定相，下相為流動(dòng)相，取上述延齡草苷粗品150mg 溶于IOml下相中待用，開啟高速逆流色譜儀，以3ml/min流速泵入流動(dòng)相，待平衡后開始連續(xù)進(jìn)樣，轉(zhuǎn)速為850rpm，收集延齡草苷流分，濃縮，低溫干燥即得延齡草苷，經(jīng)HPLC測定，純度為98. 1%。實(shí)施例5:
取延齡草^cg,加入其重量5倍量體積的65%乙醇加熱至80°C，溫浸3小時(shí)，濾過，取濾液減壓回收乙醇，加入等體積石油醚脫脂，將脫脂后的藥液加入中性氧化鋁柱層析，用乙醚-乙醇(65 35)洗脫，收集洗脫液，濃縮，加丙酮析出黃色沉淀，離心，沉淀再用丙酮洗滌， 低溫干燥得延齡草苷粗品。取石油醚、乙酸乙酯、乙醇、水按體積比4:4:5:3置于分液漏斗中混合均勻，靜置分層，分離上下相，以上相為固定相，下相為流動(dòng)相，取上述延齡草苷粗品 150mg溶于IOml下相中待用，開啟高速逆流色譜儀，以3ml/min流速泵入流動(dòng)相，待平衡后開始連續(xù)進(jìn)樣，轉(zhuǎn)速為850rpm，收集延齡草苷流分，濃縮，低溫干燥即得延齡草苷，經(jīng)HPLC 測定，純度為98. 3%。實(shí)施例6:
取延齡草3kg，加入其重量8倍量體積的70%乙醇加熱至80°C，溫浸4小時(shí)，濾過，取濾液減壓回收乙醇，加入等體積石油醚脫脂，將脫脂后的藥液加入中性氧化鋁柱層析，用乙醚-乙醇(65 35)洗脫，收集洗脫液，濃縮，加丙酮析出黃色沉淀，離心，沉淀再用丙酮洗滌， 低溫干燥得延齡草苷粗品。取石油醚、乙酸乙酯、乙醇、水按體積比8:3:4:6置于分液漏斗中混合均勻，靜置分層，分離上下相，以上相為固定相，下相為流動(dòng)相，取上述延齡草苷粗品 150mg溶于IOml下相中待用，開啟高速逆流色譜儀，以2ml/min流速泵入流動(dòng)相，待平衡后開始連續(xù)進(jìn)樣，轉(zhuǎn)速為900rpm，收集延齡草苷流分，濃縮，低溫干燥即得延齡草苷，經(jīng)HPLC 測定，純度為98. 8%。實(shí)施例7:
取延齡草^g，加入其重量4倍量體積的70%乙醇加熱至80°C，溫浸7小時(shí)，濾過，取濾液減壓回收乙醇，加入等體積石油醚脫脂，將脫脂后的藥液加入中性氧化鋁柱層析，用乙醚-乙醇(65 35)洗脫，收集洗脫液，濃縮，加丙酮析出黃色沉淀，離心，沉淀再用丙酮洗滌， 低溫干燥得延齡草苷粗品。取石油醚、乙酸乙酯、乙醇、水按體積比5:5:7:4置于分液漏斗中混合均勻，靜置分層，分離上下相，以上相為固定相，下相為流動(dòng)相，取上述延齡草苷粗品 150mg溶于IOml下相中待用，開啟高速逆流色譜儀，以3ml/min流速泵入流動(dòng)相，待平衡后開始連續(xù)進(jìn)樣，轉(zhuǎn)速為900rpm，收集延齡草苷流分，濃縮，低溫干燥即得延齡草苷，經(jīng)HPLC 測定，純度為98. 4%。實(shí)施例8:
取延齡草^g，加入其重量7倍量體積的65%乙醇加熱至80°C，溫浸6小時(shí)，濾過，取濾液減壓回收乙醇，加入等體積石油醚脫脂，將脫脂后的藥液加入中性氧化鋁柱層析，用乙醚-乙醇(65:35)洗脫，收集洗脫液，濃縮，加丙酮析出黃色沉淀，離心，沉淀再用丙酮洗滌， 低溫干燥得延齡草苷粗品。取石油醚、乙酸乙酯、乙醇、水按體積比7:4:6:5置于分液漏斗中混合均勻，靜置分層，分離上下相，以上相為固定相，下相為流動(dòng)相，取上述延齡草苷粗品 150mg溶于IOml下相中待用，開啟高速逆流色譜儀，以3ml/min流速泵入流動(dòng)相，待平衡后開始連續(xù)進(jìn)樣，轉(zhuǎn)速為900rpm，收集延齡草苷流分，濃縮，低溫干燥即得延齡草苷，經(jīng)HPLC測定，純度為98. 2%。
權(quán)利要求
1.一種延齡草苷的制備方法，其特征在于所述的方法包括下列步驟取延齡草根莖， 加入4-10倍量體積的醇溶液溫浸2-8小時(shí)，濾過，取濾液減壓回收乙醇，加入等體積石油醚脫脂，脫脂后的藥液加入氧化鋁柱層析，乙醚_乙醇(65 35)洗脫，收集洗脫液，濃縮，加丙酮析出黃色沉淀，離心，沉淀用丙酮洗滌，再采用高速逆流色譜法進(jìn)行分離純化，流出物濃縮、低溫干燥即得產(chǎn)品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述延齡草苷的制備方法，其特征在于所述溫浸溫度60-85°C。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述延齡草苷的制備方法，其特征在于所述高速逆流色譜溶劑系統(tǒng)為正庚烷_乙酸乙酯_乙腈，其體積比為(3-7) (1-3) (2-4)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述延齡草苷的制備方法，其特征在于所述高速逆流色譜溶劑系統(tǒng)為石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水，其體積比為(4-8) (3-5) (4-7) (3-6)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種延齡草苷的制備方法，延齡草經(jīng)乙醇提取后，采用石油醚脫脂處理，脫脂后的藥液經(jīng)氧化鋁柱層析，用乙醚-乙醇混合溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮，加丙酮析出黃色沉淀，離心，沉淀用丙酮洗滌，再采用高速逆流色譜法進(jìn)行分離純化，流出物濃縮、低溫干燥即得產(chǎn)品。本發(fā)明具有工藝操作簡單、提取率高、產(chǎn)品純度高的特點(diǎn)。
文檔編號(hào)C07J71/00GK102286063SQ20111018774
公開日2011年12月21日 申請日期2011年7月6日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月6日
發(fā)明者劉東鋒, 郭琴 申請人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司