專利名稱：一種苦玄參苷I_A的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，涉及一種苦玄參苷I A的制備方法，特別是涉及一種利用高速逆流色譜法純化苦玄參苷IA的方法。
背景技術(shù)：
苦玄參苷I A (Picfeltarraenin IA),為三職類化合物，分子式C41H62O13,分子量762. 92318，分子結(jié)構(gòu)式為
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5 '苦玄參為玄參科植物苦玄參(Picria fel-terrae Lour.)的干燥全草,又名苦草，蛇總管，產(chǎn)于我國廣東、廣西、云南和貴州南部，在廣西作藥用歷史已久?？嘈⑿院犊?，用于治療高熱、蛇傷及癰癤等，具有清熱解毒，涼血消腫之功效。該藥已收載于《中國藥典》2010年版?，F(xiàn)代研究表明，苦玄參的化學(xué)成分主要為葫蘆苦素三萜成分和黃酮類化合物，藥理實(shí)驗(yàn)證明，苦玄參干浸膏具有明顯的抗炎及鎮(zhèn)痛作用。苦玄參苷I A是苦玄參三萜部分中含量最高的成分，在干燥植物中的含量約為O. 25%，有中樞抑制作用和抗補(bǔ)體作用，是苦玄參的主要活性成分。目前學(xué)者對苦玄參定量分析方面報道最多的是苦玄參苷IA的含量測定，各地苦玄參藥材中苦玄參苷I A的含量差異較大，含量差異與產(chǎn)地、藥用部位、采收季節(jié)等均有關(guān)系。目前分離制備苦玄參苷IA的方法主要是采用大孔樹脂和硅膠柱分離，鄒節(jié)明采用HPD50樹脂精制苦玄參提取物；王力生等以TLC為檢測手段，利用DlOl大孔樹脂對苦玄參總皂苷進(jìn)行吸附洗脫，把苦玄參總皂苷含量由浸膏中的8. 7%提高至27. 3%，這些方法僅提取得到總皂苷，未涉及單體化合物的分離純化。潘小嬌等發(fā)表的文獻(xiàn)“從苦玄參中制備苦玄參苷Ia的實(shí)驗(yàn)研究”，該文獻(xiàn)采用水煮，醇溶，正丁醇萃取，硅膠柱分離得到苦玄參苷IAo在生產(chǎn)實(shí)踐中，硅膠柱層析成本高、重現(xiàn)性較差且生產(chǎn)周期長。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種苦玄參苷I A的制備方法，應(yīng)用高速逆流色譜分離純化苦玄參苷I A，操作簡單、生產(chǎn)周期短。
為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下一種苦玄參苷I A的制備方法，具體包括提取、總皂苷制備、脫色以及分離純化四道工序，其特征在于提取工序(I)中，以苦玄參為原料，用甲醇或乙醇微波提取，減壓濃縮后獲得提取浸膏；總皂苷制備工序(2)中，提取浸膏用熱水分散，通過大孔吸附樹脂柱，用水和60-90%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液；脫色工序(3)中，乙醇洗脫液加活性炭，加熱攪拌脫色，過濾，脫色液減壓回收乙醇，干燥得粗品；分離純化工序(4)中，采用高速逆流色譜法對所得粗品進(jìn)行分離純化，制備得到苦玄參苷I A。所述總皂苷制備工序(2)中，采用的大孔吸附樹脂為AB-8、HPD100、D3520、ADS-7、DA201、SA-I等樹脂中的一種或幾種混合。
所述分離純化工序(4)中，采用高速逆流色譜法分離純化苦玄參苷I A，溶劑系統(tǒng)選用乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-O. 05% TFA，體積比為(5-10) (8-15) (2-5) (15-30)，溶劑系統(tǒng)配制后靜置分層，以上相為固定相，下相為流動相，流動相流速控制在l_4ml/min，主機(jī)轉(zhuǎn)速控制在850-1000r/min。本發(fā)明的有益效果是采用大孔吸附樹脂和高速逆流色譜法分離純化，工藝簡單、生產(chǎn)周期短、成本低、產(chǎn)品含量高。下面將結(jié)合具體實(shí)施方式
進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施方式。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I :苦玄參葉粉碎，取3kg，加8倍量60 %乙醇微波提取2次，提取液合并后減壓濃縮得到提取浸膏，將提取浸膏用水分散后通過AB-8大孔樹脂柱，飽和吸附后，先用水洗脫至無色，再用3BV75 %乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，加入I %活性炭加熱攪拌脫色，過濾，脫色液減壓回收乙醇，干燥得到粗品；取乙酸乙酯、正丁醇、乙醇、O. 05% TFA，按體積比5:8:3: 15在分液漏斗中混合充分,分層后取下相作為流動相，上相為固定相,將固定相充滿高速逆流色譜柱，開啟主機(jī)轉(zhuǎn)速調(diào)至900r/min，泵入下相作流動相，動態(tài)平衡后，流動相流速調(diào)至2ml/min，將粗品溶于下相由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，HPLC檢測，根據(jù)圖譜收集目標(biāo)成分，減壓濃縮干燥流分，制得苦玄參苷I a7. 34g，含量98. 2%。實(shí)施例2:苦玄參葉粉碎，取3kg，加10倍量65%甲醇微波提取2次，提取液合并后減壓濃縮得到提取浸膏，將提取浸膏用水分散后通過HPD100大孔樹脂柱，飽和吸附后，先用水洗脫至無色,再用4BV60%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，加入2 %活性炭加熱攪拌脫色，過濾，脫色液減壓回收乙醇，干燥得到粗品；取乙酸乙酯、正丁醇、乙醇、O. 05% TFA，按體積比8 : 13 : 5 : 28在分液漏斗中混合充分,分層后取下相作為流動相，上相為固定相,將固定相充滿高速逆流色譜柱，開啟主機(jī)轉(zhuǎn)速調(diào)至950r/min，泵入下相作流動相，動態(tài)平衡后，流動相流速調(diào)至3ml/min，將粗品溶于下相由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，HPLC檢測，根據(jù)圖譜收集目標(biāo)成分，減壓濃縮干燥流分，制得苦玄參苷I a5. 18g，含量98. 5%。實(shí)施例3:苦玄參葉粉碎，取3kg，加8倍量75 %乙醇微波提取2次，提取液合并后減壓濃縮得到提取浸膏，將提取浸膏用水分散后通過SA-I大孔樹脂柱，飽和吸附后，先用水洗脫至無色，再用3BV80%甲醇洗脫，收集乙醇洗脫液，加入1%活性炭加熱攪拌脫色，過濾，脫色液減壓回收乙醇，干燥得到粗品；取乙酸乙酯、正丁醇、乙醇、O. 05% TFA，按體積比
6 10 2 20在分液漏斗中混合充分,分層后取下相作為流動相,上相為固定相,將固定相充滿高速逆流色譜柱，開啟主機(jī)轉(zhuǎn)速調(diào)至850r/min，泵入下相作流動相，動態(tài)平衡后，流動相流速調(diào)至4ml/min，將粗品溶于下相由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，HPLC檢測，根據(jù)圖譜收集目標(biāo)成分，減壓濃縮干燥流分，制得苦玄參苷I a5. 21g，含量98. 0%。實(shí)施例4:苦玄參葉粉碎，取5kg，加6倍量65 %乙醇微波提取2次，提取液合并后減壓濃縮得到提取浸膏，將提取浸膏用水分散后通過DA201大孔樹脂柱，飽和吸附后，先用水洗脫至無色，再用3BV90%甲醇洗脫，收集乙醇洗脫液，加入3%活性炭加熱攪拌脫色，過濾，脫色液減壓回收乙醇，干燥得到粗品；取乙酸乙酯、正丁醇、乙醇、O. 05% TFA，按體積比10 10 3 25在分液漏斗中混合充分，分層后取下相作為流動相，上相為固定相，將固 定相充滿高速逆流色譜柱，開啟主機(jī)轉(zhuǎn)速調(diào)至900r/min，泵入下相作流動相，動態(tài)平衡后，流動相流速調(diào)至4ml/min，將粗品溶于下相由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，HPLC檢測，根據(jù)圖譜收集目標(biāo)成分，減壓濃縮干燥流分，制得苦玄參苷I A10. 56g，含量98. 6%。實(shí)施例5:苦玄參葉粉碎，取5kg，加7倍量60 %甲醇微波提取2次，提取液合并后減壓濃縮得到提取浸膏，將提取浸膏用水分散后通過ADS-7大孔樹脂柱，飽和吸附后，先用水洗脫至無色，再用4BV70%甲醇洗脫，收集乙醇洗脫液，加入O. 5%活性炭加熱攪拌脫色，過濾，脫色液減壓回收乙醇，干燥得到粗品；取乙酸乙酯、正丁醇、乙醇、O. 05% TFA，按體積比
7: 15 : 4 : 30在分液漏斗中混合充分，分層后取下相作為流動相，上相為固定相，將固定相充滿高速逆流色譜柱，開啟主機(jī)轉(zhuǎn)速調(diào)至950r/min，泵入下相作流動相，動態(tài)平衡后，流動相流速調(diào)至2. 5ml/min，將粗品溶于下相由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，HPLC檢測，根據(jù)圖譜收集目標(biāo)成分，減壓濃縮干燥流分，制得苦玄參苷I a9. 24g，含量97. 8%。實(shí)施例6 苦玄參葉粉碎，取5kg，加10倍量70%甲醇微波提取2次，提取液合并后減壓濃縮得到提取浸膏，將提取浸膏用水分散后通過D3520大孔樹脂柱，飽和吸附后，先用水洗脫至無色，再用4BV65 %乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，加入I. 5 %活性炭加熱攪拌脫色，過濾，脫色液減壓回收乙醇，干燥得到粗品；取乙酸乙酯、正丁醇、乙醇、O. 05% TFA，按體積比
6: 12 : 4 : 23在分液漏斗中混合充分,分層后取下相作為流動相，上相為固定相,將固定相充滿高速逆流色譜柱，開啟主機(jī)轉(zhuǎn)速調(diào)至1000r/min，泵入下相作流動相，動態(tài)平衡后，流動相流速調(diào)至2ml/min，將粗品溶于下相由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，HPLC檢測，根據(jù)圖譜收集目標(biāo)成分，減壓濃縮干燥流分，制得苦玄參苷I a9. 19g，含量98.0%。
權(quán)利要求
1.一種苦玄參苷I A的制備方法，具體包括提取、總皂苷制備、脫色以及分離純化四道工序，其特征在于提取工序(I)中，以苦玄參為原料，用甲醇或乙醇微波提取，減壓濃縮后獲得提取浸膏；總皂苷制備工序(2)中，提取浸膏用熱水分散，通過大孔吸附樹脂柱，用水和60-90%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液；脫色工序(3)中，乙醇洗脫液加活性炭，加熱攪拌脫色，過濾，脫色液減壓回收乙醇，干燥得粗品；分離純化工序(4)中，采用高速逆流色譜法對所得粗品進(jìn)行分離純化，制備得到苦玄參苷I A。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的苦玄參苷IA的制備方法，其特征在于所述總皂苷制備工序(2)中，采用的大孔吸附樹脂為AB-8、HPD100, D3520、ADS-7、DA201、SA-I等樹脂中的一種或幾種混合。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的苦玄參苷IA的制備方法，其特征在于所述分離純化工序(4)中，采用高速逆流色譜法分離純化苦玄參苷I A，溶劑系統(tǒng)選用乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-O. 05 % TFA，體積比為(5-10) (8-15) (2-5) (15-30)，溶劑系統(tǒng)配制后靜置分層，以上相為固定相，下相為流動相，流動相流速控制在l_4ml/min，主機(jī)轉(zhuǎn)速控制在850-1000r/min。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種苦玄參苷IA的制備方法，以苦玄參為原料，經(jīng)甲醇或乙醇為溶媒提取、濃縮、大孔樹脂吸附、脫色、高速逆流色譜法純化制備苦玄參苷IA。本方法制備的苦玄參苷IA純度高于95％，且具有簡便、快速、制備量大、樣品損失少等優(yōu)點(diǎn)，易于推廣使用。
文檔編號C07J53/00GK102911239SQ20111021874
公開日2013年2月6日 申請日期2011年8月2日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月2日
發(fā)明者李法慶, 劉東鋒 申請人:蘇州寶澤堂醫(yī)藥科技有限公司