專利名稱：一種從梔子中工業(yè)化制備梔子苷的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，涉及一種從桅子中工業(yè)化制備桅子苷的方法。
背景技術(shù)：
桅子苷是從菌草科桅子Garfenia jasminoides Ellis干燥成熟果實(shí)中提取精制得到的產(chǎn)品。桅子苷為環(huán)烯醚萜苷類化合物，異名京尼平苷，是桅子藥材中含有的有效成分，也是生產(chǎn)桅子藍(lán)、桅子紅、桅子紫的中間體。桅子苷有多種藥用用途，有報(bào)道表明桅子苷具有緩瀉、止痛、利膽、抗炎、治療軟組織損傷以及抑制胃液分泌和降低胰淀粉酶等作用，也是用于治療心腦血管、肝膽等疾病及糖尿病的原料藥物，亦可用于生產(chǎn)農(nóng)作物增產(chǎn)劑。因此，對(duì)桅子苷的分離和純化成為桅子苷深度開發(fā)的關(guān)鍵技術(shù)?，F(xiàn)有技術(shù)中，桅子苷粗品的制備多采用大孔樹脂法，但是目前多處于小試、中試階段，如放大到車間進(jìn)行批量生產(chǎn)，工藝不穩(wěn)定，重復(fù)性較差。對(duì)桅子苷粗品的精制大多采用有機(jī)溶劑萃取、活性炭吸附或重結(jié)晶等方法，而這些方法難以實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)操作，且得到的桅子苷純度較低；有文獻(xiàn)報(bào)道用普通硅膠層析柱精制桅子苷，能得到純度較高的桅子苷，但普通硅膠層析浪費(fèi)填料，洗脫速度慢，桅子苷得率低，不適合工業(yè)化生產(chǎn)操作。工業(yè)色譜法是目前分離與純化領(lǐng)域中處理多組分復(fù)雜體系最有效的方法之一。因此，針對(duì)桅子苷制備現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，本發(fā)明將大孔樹脂法分離得到的桅子苷粗品直接通過(guò)工業(yè)硅膠色譜純化，得到高得率、高純度桅子苷。本發(fā)明提供的方法具有誤差小、產(chǎn)量大、重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)，克服了多個(gè)梯度分段洗脫的繁瑣步驟，節(jié)約了大量的硅膠，縮短了洗脫時(shí)間，降低了生產(chǎn)成本，更加適合工業(yè)化生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此，本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題在于提供一種從桅子中工業(yè)化制備桅子苷的方法，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為(I)提取濃縮步驟取桅子果實(shí)，粉碎，加入8 15倍量水回流提取I 3次，每次I 3h，合并提取液，減壓濃縮，得濃縮液，其中桅子果實(shí)藥材的高效液相色譜見(jiàn)附圖
I ;(2)大孔樹脂分離步驟取濃縮液經(jīng)大孔樹脂吸附，用2 5倍樹脂體積的水洗脫、2 4倍樹脂體積20 % 40 %乙醇溶液洗脫，收集20 % 40 %乙醇溶液洗脫液，洗脫液減壓濃縮，得粗提取物浸膏，所得浸膏的高效液相色譜見(jiàn)附圖2 ；(3)工業(yè)硅膠色譜純化步驟將硅膠加入到粗提取物浸膏中，攪拌均勻，烘干研磨后得到樣品硅膠，將其加入工業(yè)硅膠色譜柱中，有機(jī)溶劑洗脫，洗脫液減壓濃縮、抽濾，得高純度桅子苷，所得桅子苷的高效液相色譜圖見(jiàn)附圖3，桅子苷對(duì)照品的高效液相圖譜見(jiàn)附圖4。所述的制備方法，在提取濃縮步驟中，水回流提取次數(shù)優(yōu)選為2次，加水量依次為10倍量、8倍量，每次2h，濾液減壓濃縮，相對(duì)真空度為O. 06 O. IMPa,真空濃縮溫度為40 6(TC。
所述的制備方法，在大孔樹脂分離步驟中，樹脂選擇D-101大孔吸附樹脂或XDA-IB大孔吸附樹脂或XDA-7均孔脫色樹脂或HPD-100大孔吸附樹脂或AB-8大孔吸附樹脂中的任意一種。所述的制備方法，在大孔樹脂分離步驟中，所用的樹脂優(yōu)選為D-101大孔吸附樹脂，大孔樹脂柱體積為200 400L,柱徑高比為20 40cm 300 400cm。所述的制備方法，在大孔樹脂分離步驟中，水洗脫用量以將有色雜質(zhì)洗脫干凈并不將桅子苷洗脫出為準(zhǔn)，20% 40%乙醇溶液洗脫液用量以桅子苷洗脫完畢為準(zhǔn)，洗脫液減壓濃縮，相對(duì)真空度O. 06 O. IMPa,真空濃縮溫度為40 60°C。所述的制備方法，在工業(yè)硅膠色譜純化步驟中，工業(yè)色譜柱的直徑為10 50cm。所述的制備方法，在工業(yè)硅膠色譜純化步驟中，有機(jī)溶劑洗脫體系為氯仿-甲醇、乙酸乙酯-甲醇、乙酸乙酯-丙酮中的任意一種，優(yōu)選乙酸乙酯-甲醇洗脫溶劑，溶劑比例為15 : I 9 : 1，用量為6 10倍量工業(yè)色譜柱體積，洗脫時(shí)間為2 4. 5h。對(duì)本發(fā)明提供的桅子苷制備方法的研究與說(shuō)明發(fā)明人對(duì)本發(fā)明提供的技術(shù)方案進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究，用來(lái)證明本發(fā)明的技術(shù)效果，下述實(shí)驗(yàn)用于進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)效果，但不限制本發(fā)明。實(shí)驗(yàn)一本發(fā)明工業(yè)色譜純化工藝與活性炭吸附、有機(jī)溶劑萃取工藝的比較I.儀器與材料桅子(菌草科桅子Garfenia jasminoides Ellis干燥成熟果實(shí))、桅子苷(天津中新藥業(yè)中藥現(xiàn)化代技術(shù)工程中心，供含量測(cè)定用)；樹脂(天津農(nóng)藥總廠)；甲醇(色譜純，TEDIA，USA;工業(yè)級(jí)，購(gòu)于科鵬科學(xué)儀器有限公司)；水(重蒸餾，自制)；乙酸乙酯、丙酮(工業(yè)級(jí)購(gòu)于江蘇索普(集團(tuán))有限公司)；氯仿(工業(yè)級(jí)購(gòu)于連云港龍河生物化工有限公司)；硅膠(購(gòu)于青島海洋化工廠分廠)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(申生R5003型)；Agilent 1100高效液相色譜儀，配自動(dòng)進(jìn)樣器，四元泵，VffD檢測(cè)器；電子分析天平(MettlerAE240)。2.實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)分3組，取三份25kg的桅子果實(shí)經(jīng)過(guò)本發(fā)明中的提取工藝，大孔樹脂純化工藝，得到三份濃縮液，將其中一份按照本發(fā)明工藝拌入硅膠，烘干研磨后加到工業(yè)色譜柱中，乙酸乙酯-甲醇體系(10 I)洗脫，洗脫液濃縮，抽濾得到桅子苷成品A ;將另一份濃縮液加入5%活性炭加熱、攪拌、吸附一定的時(shí)間后，抽濾得淡黃色桅子苷成品B ;將最后一份濃縮液加4倍體積量的乙酸乙酯萃取，萃取液濃縮得到黃色桅子苷成品C。高效液相色譜測(cè)量成品桅子苷的純度、觀察桅子苷成品的色澤、計(jì)算桅子苷得率，每組試驗(yàn)分別重復(fù)三次，數(shù)據(jù)取平均值。3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析表I標(biāo)示了三種工藝得到的桅子苷成品的得率、純度以及色澤，結(jié)果顯示桅子苷粗品經(jīng)活性炭工藝得到的桅子苷純度偏低，顏色偏黃，得率偏低；經(jīng)乙酸乙酯萃取后得到的桅子苷成品C的得率較高，但是所含雜質(zhì)較多，使成品的顏色偏黃、純度偏低，試驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明工藝能得到得率和純度都較高的桅子苷。計(jì)算桅子苷成品得率的公式如下^ /n/、 成品梔子苷的重量X梔子苷的純度
付率(％)=--運(yùn)爾材福-Xl0°%表I三種工藝得到的桅子苷的得率、純度以及色澤
梔子苷成品梔子苷得率梔子苷純度梔子苷色澤成品A (本發(fā)明工藝)2. 5 3%97. 52%白色成品BI. 62%81. 91%淡黃色成品C2. 71%65. 20%黃色實(shí)驗(yàn)二 本發(fā)明工業(yè)色譜純化工藝與現(xiàn)有常壓柱色譜技術(shù)、工業(yè)色譜技術(shù)工藝的比較I.儀器與材料同實(shí)驗(yàn)一。2.實(shí)驗(yàn)方法將25kg桅子果實(shí)經(jīng)過(guò)本發(fā)明中的提取濃縮工藝，大孔樹脂純化工藝得粗提取物浸膏，浸膏拌入硅膠，烘干研磨后得樣品硅膠?，F(xiàn)有工藝I (現(xiàn)有常壓柱色譜技術(shù))取200g樣品硅膠加入到常壓玻璃柱頂端(IOOOg硅膠預(yù)先干法上柱)，用20 1、15 1、9 1、5 1、1 I比例的乙酸乙酯-甲醇梯度洗脫硅膠柱，直至桅子苷洗脫完全為止，記錄洗脫用時(shí)，薄層分析法對(duì)得到的含有桅子苷的多份洗脫液合并濃縮，得到桅子苷成品。現(xiàn)有工藝II (現(xiàn)有工業(yè)色譜技術(shù))取200g樣品硅膠加入到工業(yè)色譜中(IOOOg硅膠預(yù)先干法上柱)，按常規(guī)工藝，20 1、15 1、9 1、5 1、1 I比例的乙酸乙酯-甲醇梯度高壓快速洗脫硅膠柱，直至桅子苷洗脫完全為止，記錄洗脫用時(shí)，薄層分析法對(duì)得到的含有桅子苷的多份洗脫液合并濃縮，得到桅子苷成品。本發(fā)明工藝III (本發(fā)明工業(yè)色譜技術(shù))按本發(fā)明工藝，取200g樣品硅膠加入到工業(yè)色譜柱中，乙酸乙酯甲醇=10 I洗脫，直至將桅子苷洗脫完全為止，記錄洗脫用時(shí)，得到的洗脫液濃縮，抽濾得到白色桅子苷，抽干得到桅子苷成品。本發(fā)明工藝III (本發(fā)明工業(yè)色譜技術(shù))按本發(fā)明工藝，取200g樣品硅膠加入到工業(yè)色譜柱中，用氯仿-甲醇、乙酸乙酯-甲醇、乙酸乙酯-丙酮中的任意一種洗脫體系洗脫，本試驗(yàn)用乙酸乙酯-甲醇(體積比為10 I)洗脫，直至將桅子苷洗脫完全為止，記錄洗脫用時(shí)，得到的洗脫液濃縮、抽濾，得到桅子苷成品。高效液相色譜測(cè)量三種工藝得到的桅子苷純度、觀察桅子苷成品的色澤、計(jì)算桅子苷得率(同實(shí)驗(yàn)一)，每組工藝分別重復(fù)三次試驗(yàn)，數(shù)據(jù)取平均值。3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析表2標(biāo)示了三種工藝的試驗(yàn)參數(shù)，試驗(yàn)結(jié)果顯示工藝I (現(xiàn)有常壓柱色譜技術(shù))浪費(fèi)填料、洗脫速度慢，洗脫工藝繁瑣、桅子苷得率低，因設(shè)備本身原因生產(chǎn)量不可能太大，無(wú)法實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)操作；工藝II (現(xiàn)有工業(yè)色譜技術(shù))應(yīng)用工業(yè)色譜設(shè)備，采用高壓快速洗脫方法，節(jié)約了洗脫時(shí)間，設(shè)備允許生產(chǎn)量大，合適工業(yè)化生產(chǎn)桅子苷，但是此工藝中硅膠用量大、乙酸乙酯-甲醇洗脫梯度繁瑣；本發(fā)明工藝III應(yīng)用工業(yè)色譜設(shè)備本身優(yōu)勢(shì)，優(yōu)
5化工藝，除了具備常規(guī)工業(yè)色譜技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)之外，還節(jié)省了硅膠用量，單梯度洗脫富集桅子苷。工藝Ι、Π得到的桅子苷得率較低，可能是因?yàn)椴糠治ψ榆毡恢又械拇罅抗枘z死吸附而損失掉。表2三種工藝的實(shí)驗(yàn)參數(shù)
權(quán)利要求
1.一種從桅子中工業(yè)化制備桅子苷的方法，其特征在于該方法包括以下步驟(1)提取濃縮步驟取桅子果實(shí)，粉碎，加入8 15倍量水回流提取I 3次，每次I 3h，合并提取液，減壓濃縮，得濃縮液；(2)大孔樹脂分離步驟取濃縮液經(jīng)大孔樹脂吸附，用2 5倍量樹脂體積的水洗脫、2 4倍量樹脂體積20% 40%乙醇溶液洗脫，收集20% 40%乙醇溶液洗脫液，洗脫液減壓濃縮，得粗提取物浸膏；(3)工業(yè)硅膠色譜純化步驟將硅膠加入到粗提取物浸膏中，攪拌均勻，烘干研磨后得到樣品硅膠，將其加入工業(yè)硅膠色譜柱中，有機(jī)溶劑洗脫，洗脫液減壓濃縮、抽濾，得高純度桅子苷。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的制備方法，其特征在于，在提取濃縮步驟中，水回流提取次數(shù)優(yōu)選為2次，加水量依次為10倍量、8倍量，每次2h，濾液減壓濃縮，相對(duì)真空度為O. 06 O. IMPa，真空濃縮溫度為40 60°C。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的制備方法，其特征在于，在樹脂分離步驟中，大孔樹脂選擇D-101大孔吸附樹脂或XDA-IB大孔吸附樹脂或XDA-7均孔脫色樹脂或HPD-100大孔吸附樹脂或AB-8大孔吸附樹脂中的任意一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述選用的樹脂，其特征在于，所用樹脂選擇D-101大孔吸附樹脂，大孔樹脂柱體積為200 400L,柱徑高為為20 40cm 300 400cm。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的制備方法，其特征在于，在大孔樹脂分離步驟中，水洗脫用量以將有色雜質(zhì)洗脫干凈并不將桅子苷洗脫出為準(zhǔn)，20% 40%乙醇溶液洗脫液的用量以桅子苷洗脫完畢為準(zhǔn)，洗脫液減壓濃縮的相對(duì)真空度O. 06 O. IMPa，真空濃縮溫度為40 60。。。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的制備方法，其特征在于，在工業(yè)硅膠色譜純化步驟中，工業(yè)色譜柱直徑為10 50cm。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的制備方法，其特征在于，在工業(yè)硅膠色譜純化步驟中，有機(jī)溶劑洗脫體系為氯仿-甲醇、乙酸乙酯-甲醇、乙酸乙酯-丙酮中的任意一種。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的有機(jī)溶劑洗脫體系，其特征在于，有機(jī)溶劑洗脫體系選擇乙酸乙酯-甲醇體系，溶劑比例為15 : I 9 : 1，溶劑用量為6 10倍量工業(yè)色譜柱體積，洗脫時(shí)間為2 4. 5h。
全文摘要
本發(fā)明涉及中藥領(lǐng)域，公開了一種從梔子中工業(yè)化制備梔子苷的方法，該方法的特征是梔子果實(shí)經(jīng)提取濃縮、大孔樹脂分離、工業(yè)色譜純化等步驟得到高純度梔子苷。本發(fā)明所采用的工業(yè)色譜純化工藝避免了現(xiàn)有技術(shù)有機(jī)溶劑萃取，活性炭除雜等繁雜步驟；克服了現(xiàn)有色譜技術(shù)硅膠用量大、洗脫梯度繁瑣、洗脫時(shí)間長(zhǎng)、得率低等缺點(diǎn)，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C07H1/08GK102911221SQ20111022677
公開日2013年2月6日 申請(qǐng)日期2011年8月1日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月1日
發(fā)明者蕭偉, 王振中, 宋亞玲, 李丹鳳, 趙祎武, 王生陽(yáng), 唐修哲, 章晨峰, 陳鳳龍, 付小環(huán) 申請(qǐng)人:江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司