專利名稱：小球藻蛋白質的低溫超高壓制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及生物制藥工程和保健食品原料小球藻蛋白質的制備，特別是涉及小球藻蛋白質的低溫超高壓制備方法。
背景技術：
小球藻為單細胞植物可快速繁殖和生長是地球上植物中唯一能在20 h增長4倍的物種。小球藻營養(yǎng)價值高具有抑瘤、抗癌、增強免疫、抗感染能力、解毒保肝、降壓作用其干粉的蛋白質含量在50%左右而且品質也很好因此小球藻是一種良好的蛋白源。然而由于小球藻有比較完整的細胞壁結構因此其胞內蛋白質的提取比較困難一般都需要進行破壁處理才能有效提取。目前傳統(tǒng)的小球藻蛋白質提取方法大多還是采用反復凍融、超聲、酶法、酸法和堿法破壁后進行提取提取率低處理量小能耗高。特別是通常要使用高溫(100°c )蛋白質活性容易被破壞。

發(fā)明內容
為解決上述相關技術的缺陷和不足，同時為小球藻蛋白在生物制藥工程和保健食品生產領域的規(guī)模化開發(fā)利用，本發(fā)明提供小球藻蛋白質的低溫超高壓制備方法。為實現(xiàn)本發(fā)明目的，采用如下技術方案
(1)將小球藻粉和純水以1 10 1 30的質量比混合后，攪拌30分鐘 90分鐘得混合溶液；
(2)將上述混合溶液在溫度為4°C 8°C、壓力為IOOMPa 200MPa的條件下提取小球藻蛋白質，得到粗提液；
(3)將上述粗提液進行離心分離，將分離后的上清液進行濃縮、干燥，得到小球藻蛋白質粉。作為優(yōu)選的，所述步驟(1)小球藻粉和純水以1:15 1:25的質量比混合。作為優(yōu)選的，所述步驟(2)壓力為120MPa 180MPa。為進一步實現(xiàn)本發(fā)明目的，所述步驟(2)提取后收集的溶液作為下一次的待提取溶液進行再提取，提取的次數為1次 5次，每次提取的時間為IOmin 30min。以上操作步驟如無特別說明，均按本領域常規(guī)操作。與現(xiàn)有技術相比本發(fā)明具有如下優(yōu)點
(1)本發(fā)明使用超高壓IOOMPa 200MPa提取小球藻蛋白，使小球藻在破壁徹底后蛋白質能快速釋放出來；
(2)本發(fā)明使用低溫4°C 8°C提取小球藻蛋白，有利于保護小球藻蛋白的生物活性；
(3)本發(fā)明的制備方法工藝簡單、耗時短、可工業(yè)化制備。
具體實施例方式下面結合具體實施方式
對本發(fā)明作進一步的詳細描述，但具體實施方式
不應理解為是對本發(fā)明保護范圍的限定。實施例1
(1)將小球藻粉和純水按1:15的質量比混合并攪拌60分鐘，得混合溶液； (2 )所得混合溶液送入低溫超高壓連續(xù)流細胞破碎機提取小球藻蛋白質， 控制溫度為5°C、壓力為180MPa，提取收集的溶液作為下一次提取的待提取溶液，重復提取操作3次，每次提取時間為lOmin，得到抽提液；
(3)將上述粗提液以10000 r/min的速度于4°C下離心20min，將分離后得到的上清液用30kDa超濾膜超濾濃縮，濃縮后的濾液在-20。C冷凍干燥得到小球藻蛋白質粉。實施例2
(1)將小球藻粉和純水按1:25的質量比混合并攪拌70分鐘，得混合溶液；
(2)將所得混合溶液送入低溫超高壓連續(xù)流細胞破碎機提取小球藻蛋白質，控制溫度為4°C、壓力為140MPa，提取時間為30min，得到抽提液；
(3)將上述粗提液以10000r/min的速度于4°C下離心30min，離心后得到的上清液再用20kDa超濾膜超濾濃縮，濃縮后的濾液在_20°C冷凍干燥得到小球藻蛋白質粉。實施例3
(1)將小球藻粉和純水按1:30的質量比混合并攪拌90分鐘，得混合溶液；
(2)所得混合溶液送入低溫超高壓連續(xù)流細胞破碎機提取小球藻蛋白質，控制溫度為 8°C、壓力為150MPa將提取收集的溶液作為下一次提取操作的待提取溶液，重復提取操作4 次，每次提取時間為25min，得到粗提液；
(3)上述粗提液以12000r/min的速度于4°C下離心20min，離心后得到的上清液再用 40kDa超濾膜超濾濃縮，濃縮后的濾液在-20。C冷凍干燥得到小球藻蛋白質粉。實施例4
(1)將小球藻粉和純水按1:25的質量比混合并攪拌70分鐘，得混合溶液；
(2)將所得混合溶液送入低溫超高壓連續(xù)流細胞破碎機提取小球藻蛋白質，控制溫度為7V、壓力為130MPa，將提取收集的溶液作為下一次提取操作的待提取溶液，重復提取操作5次，每次提取時間為15min，得到粗提液；
(3)將上述粗提液離心后以12000r/min的速度于8°C下離心20min，離心后得到的上清液再用50kDa超濾膜超濾濃縮，濃縮后的濾液在_20°C冷凍干燥得到小球藻蛋白質粉。
權利要求
1.小球藻蛋白質的低溫超高壓制備方法，其特征在于提取步驟如下(1)將小球藻粉和純水以1:10 1:30的質量比混合后攪拌30分鐘 90分鐘得混合溶液；(2)將上述混合溶液在溫度為4°C 8°C、壓力為100MPa 200MPa的條件下提取小球藻蛋白質得到粗提液；(3)將上述粗提液進行離心分離，將分離后的上清液進行濃縮、干燥得到小球藻蛋白質粉。
2.根據權利要求1所述的低溫超高壓制備方法，其特征在于所述步驟(1)小球藻粉和純水以1:15 1:25的質量比混合。
3.根據權利要求1或2所述的低溫超高壓制備方法，其特征在于所述步驟(2)壓力為 120 MPa 180 MPa。
4.根據權利要求1所述的低溫超高壓制備方法，其特征在于所述步驟(2)提取后收集的溶液作為下一次的待提取溶液進行再提取，提取的次數為1次 5次，每次提取的時間為 IOmin 30mino
全文摘要
本發(fā)明提供小球藻蛋白質的低溫超高壓制備方法，是將小球藻粉和純水以1:10～1:30的質量比混合后，攪拌30分鐘～90分鐘得混合溶液；再將上述混合溶液在溫度為4℃～8℃、壓力為100MPa～200MPa的條件下提取小球藻蛋白質，得到粗提液；粗提液進行離心分離，取上清液進行濃縮、干燥，得到小球藻蛋白質粉。本發(fā)明中超高壓的應用使小球藻破壁徹底，而且無須加熱，在低溫下操作有利于保護蛋白質的生物活性；無需加酶，有望減少成本；無需加酸和加堿，可避免酸堿污染。本方法制備工藝簡單、耗時短、易于大量制備，是一種可工業(yè)化制備小球藻蛋白的安全高效方法。
文檔編號C07K1/14GK102304168SQ20111023494
公開日2012年1月4日 申請日期2011年8月17日 優(yōu)先權日2011年8月17日
發(fā)明者張學武, 王曉琴 申請人:華南理工大學