專利名稱：人免疫系統(tǒng)毒性蛋白顆粒酶h特異性抑制劑、制備方法及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種新的人免疫系統(tǒng)毒性蛋白顆粒酶H抑制劑、它的制備方法以及用途。
背景技術(shù)：
細胞毒性T淋巴細胞(CTL)和自然殺傷細胞(NK)在機體進行抗病毒及細胞內(nèi)細菌感染、器官移植排斥和抗腫瘤應(yīng)答中具有重要作用。死亡受體途徑(FAS/FASL)以及釋放細胞毒性顆粒是這兩類殺傷細胞導(dǎo)致靶細胞凋亡及清除的重要通路，而后者是最重要且最有效的殺傷武器。細胞毒性顆粒內(nèi)主要含有打孔蛋白穿孔素(perforin)和顆粒酶(granzymes)。顆粒酶是一類高度保守的絲氨酸蛋白酶家族成員，具有經(jīng)典的絲氨酸蛋白酶折疊構(gòu)象及催化三聯(lián)體結(jié)構(gòu)。在人類中目前一共發(fā)現(xiàn)5種顆粒酶(A、B、K、H和M)。顆粒酶H的基因定位于14qll. 2，在顆粒酶B以及組織蛋白酶G(cath印sin G)基因簇之間。盡管從基因進化上分析，顆粒酶H基因部分被顆粒酶B所取代，兩者之間有著71 %的氨基酸序列同源性，顆粒酶H卻具有完全不同于顆粒酶B的酶學(xué)特性。顆粒酶H僅在疏水性芳香族氨基酸酪氨酸、苯丙氨酸后特異性水解底物。功能上，顆粒酶H—方面通過切割I(lǐng)CAD (人凋亡蛋白酶激活因子I)，Bid等底物導(dǎo)致細胞凋亡；另一方面通過水解宿主自身抗原蛋白La，可抑制La介導(dǎo)的HCV(Hepatitis virus C)的轉(zhuǎn)錄復(fù)制。更重要的是，顆粒酶H通過直接切割腺病毒蛋白組裝蛋白100K和DNA結(jié)合蛋白，解除100K對顆粒酶B的抑制，并且有效抑制腺病毒的組裝和復(fù)制。鑒于顆粒酶H唯一高表達于NK細胞中，其表達量不受NK細胞活化狀態(tài)的影響，關(guān)于顆粒酶H的研究證明其中天然免疫過程中的獨特作用。根據(jù)顆粒酶H的特殊結(jié)構(gòu)，設(shè)計顆粒酶H特異性的抑制劑，可在相關(guān)領(lǐng)域的科學(xué)研究，及臨床抑制器官移植排斥反應(yīng)和自身免疫性疾病的治療中發(fā)揮重要的作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明在人顆粒酶H結(jié)構(gòu)與功能的解析基礎(chǔ)上，設(shè)計合成了一種人顆粒酶H特異
性的抑制劑，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下
權(quán)利要求
1.式(1)的化合物
2.權(quán)利要求I所述的化合物，其特征在于多肽組成以及它們的相對結(jié)構(gòu)位置為Pro-Thr-Ser-Tyr ；ACE表示乙?；?；CMK表示氯甲基酮。
3.權(quán)利要求I或2所述的式(I)的化合物，其是人免疫系統(tǒng)毒性蛋白顆粒酶H結(jié)合口袋識別多肽序列。
4.權(quán)利要求3所述的式(I)的化合物，其中Tyr-CMK與人免疫系統(tǒng)毒性蛋白顆粒酶H的結(jié)合口袋之間形成的共價鍵。
5.式(I)的化合物的制備方法，該方法包括以下步驟 (1)根據(jù)化學(xué)式(I)的化合物的氨基酸組成及其相對位置，合成肽段； (2)對步驟(I)中合成肽段的N端進行乙?；揎?；和 (3)對步驟(2)中修飾完成的肽段進行C端CMK修飾。
6.權(quán)利要求5所述的制備方法，進一步包括分離純化和通過質(zhì)譜法鑒定所得肽段。
7.權(quán)利要求I或2所述的式(I)的化合物在制備人免疫系統(tǒng)毒性蛋白顆粒酶H抑制劑中的用途。
8.權(quán)利要求7所述的用途，其中所述抑制劑用于減少器官移植排斥、治療自身免疫病和/或治療腫瘤。
全文摘要
本發(fā)明涉及新的式(I)的化合物，其中ACE(乙?；珹CE)為乙?；?，CMK(氯甲基酮，CMK)為氯甲基酮，Pro、Thr、Ser、Tyr分別代指脯氨酸、蘇氨酸、絲氨酸、酪氨酸四種氨基酸。式(I)化合物可作為顆粒酶H抑制劑用于相關(guān)科學(xué)研究，并具有應(yīng)用于臨床器官移植和自身免疫病治療等的潛在應(yīng)用價值。
文檔編號C07K5/117GK102718834SQ20111025829
公開日2012年10月10日 申請日期2011年9月2日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月2日
發(fā)明者吳連鋒, 唐海東, 孫飛, 李翀, 王麗, 翟羽佳, 范祖森 申請人:中國科學(xué)院生物物理研究所