專利名稱：一種從虎杖根莖中提取白藜蘆醇的新方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從虎杖根莖中提取白藜蘆醇的新方法，屬于天然產(chǎn)物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
虎杖苷(polydatinl又名白藜蘆醇苷，其結(jié)構(gòu)式如下
白藜蘆醇(resveratrol)，結(jié)構(gòu)式如下
白藜蘆醇是從蓼科植物虎杖的根和根 莖及葡萄科葡萄的皮中提取出來的一種黃酮類物質(zhì)。白藜蘆醇在虎杖藥材中主要以苷的形式存在，少量以游離的白藜蘆醇并存，是虎杖藥材中的主要活性成分?；⒄溶占鞍邹继J醇具有多種生物活性。如抗氧化、抗腫瘤、改善微循環(huán)、降血脂、降血壓等。目前，從虎杖中提取白藜蘆醇的方法現(xiàn)主要包括利用藥材自身酶酶解后提取、外加酶酶解后提取或者先提取再加酶酶解等如專利CN1251361A、CN101698634A, CN101338327、CN1896255A等，提取溶劑大多為有機(jī)溶劑，這些方法都需經(jīng)過酶解將虎杖苷轉(zhuǎn)化為白藜蘆醇。但酶解過程溫度需恒定，這樣才能保證酶解充分，且酶解占用生產(chǎn)空間較大，酶解時間長，且發(fā)酵好的藥材如果不及時處理，就會導(dǎo)致發(fā)酵物中白藜蘆醇的含量降低，這就需要耗費(fèi)較大的人力物力，勢必導(dǎo)致生產(chǎn)效率降低，成本增高。專利CN1513823 A公開了一種超臨界CO2提取白藜蘆醇的工藝，其采用超臨界CO2 萃取工藝，并用無水乙醇和2-丙醇混合溶劑作為改性劑。此法工藝簡單、生產(chǎn)周期短、溶劑用量減少、成本低、收率高，但是超臨界(X)2萃取技術(shù)目前用于規(guī)模化生產(chǎn)尚有一定難度，只能停留在實(shí)驗(yàn)階段。專利CN1546503A公開了一種虎杖苷和白藜蘆醇的新制備方法和專利 CN101397242A公開一種從新鮮虎杖中提取、純化白藜蘆醇的工藝方法，由于虎杖中含有的白藜蘆醇含量很低，絕大部分是以苷的形式存在以虎杖中。此種制備方法因沒有把苷轉(zhuǎn)化出來，導(dǎo)致收率低，損失大。且前者用聚酰胺層析分離，但聚酰胺粒度較細(xì)，柱子易堵塞。
專利CN17M495A公開一種從中草藥植物虎杖中制備白藜蘆醇的方法，通過乙醇溶液提取，濃縮，乙酸乙酯萃取后用纖維素作為固定相進(jìn)行柱層析，由于操作過程中需用超聲波來超聲溶解浸膏才能進(jìn)行萃取，且乙酸乙酯萃取過程乳化現(xiàn)象很明顯，損失大。盡管首次將纖維素作為固定相，但是還是難于推廣使用。專利CN1962592A公開一種從中藥虎杖中分離純化白藜蘆醇苷和白藜蘆醇的方法。用乙醇提取，大孔吸附樹脂柱預(yù)分離，再進(jìn)行高速逆流色譜法純化，這一方法有機(jī)溶劑用量大，耗時長，成本高。專利CN1513822A公開了一種從虎杖中提取白藜蘆醇的工藝，其首先采用加入專用微生物進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化提高虎杖白藜蘆醇含量，利用40 %乙醇與4-甲基-2-戊醇混合劑作為萃取溶劑，進(jìn)行微波提取。本發(fā)明雖然簡化了工藝和操作流程，縮短生產(chǎn)周期，降低成本， 但是微波提取技術(shù)僅限于實(shí)驗(yàn)室操作。專利CN101348805A公開了一種提取白藜蘆醇新工藝。堿提取，提取液經(jīng)過調(diào)pH 值、用絮凝劑、澄清劑處理、酶解、過濾，沉淀物干燥后可得含量50%白藜蘆醇；進(jìn)一步將其用稀堿液洗，再用水洗至中性，然后溶于大量熱水中，將水液在室溫下放置，析出沉淀，過濾干燥后即得到白藜蘆醇含量為98%的產(chǎn)品。堿提取液粘度大，過濾時間長，濾液損失大，能耗高，周期長，操作繁瑣。專利CN1621401A公開一種從虎杖中提取高純度白藜蘆醇的方法，是通過不同極性的溶劑經(jīng)過多次回流提取而得，這種方法工藝復(fù)雜，溶劑量消耗大，生產(chǎn)周期長，溶劑回收困難。專利CN1384088A公開了一種從虎杖植物中提取白藜蘆醇的制備方法，通過有機(jī)溶劑提取出虎杖中的虎杖甙、經(jīng)有機(jī)合成手段使其水解富集，將其與復(fù)合填充料按其配比、 在專用的高壓層析柱設(shè)備中加壓后、利用高效液相色譜原理進(jìn)行高壓柱層析分離，用氯仿及乙酸乙酯梯度洗脫。本法操作繁瑣，生產(chǎn)周期長，且洗脫過程使用毒性極大的氯仿。專利CN1760166A公開一種從虎杖中提取純化白藜蘆醇的新方法，該方法采用水提取，再將提取物中白藜蘆醇甙通過酸催化水解反應(yīng)富集出來，而后將富集產(chǎn)物以一定配比上預(yù)先處理好的大孔吸附樹脂柱進(jìn)行分離純化，用水和乙醇洗脫?；⒄溶瘴⑷苡谒?，白藜蘆醇難溶于水，用水做為溶劑提取，虎杖苷提取不完全，且原料中的白藜蘆醇未能提取出來。近年來，有專利報道，用堿溶液進(jìn)行提取，其缺點(diǎn)就是堿提取液黏度大，過濾速度很慢，易堵塞，過濾耗時長。專利CN101811939A公開一種罐組動態(tài)逆流提取白藜蘆醇的工藝，采用堿提酸水解再醇沉、活性碳脫色出去部分雜質(zhì)，在過樹脂柱和硅膠柱。本發(fā)明由于采用罐組提取，設(shè)備占用空間大，提取溶劑為堿水，堿提液黏度較大，過濾困難，且水解后量大，后續(xù)處理設(shè)備壓力大，能耗高。Cm01805755A公開一種從虎杖中提取純化白藜蘆醇的工藝，其方法是利用虎杖的自身酶進(jìn)行酶解后，發(fā)酵物經(jīng)堿提酸沉，過柱。其工藝存在酶解時間長，酶解不充分，堿提液難于過濾的缺點(diǎn)。為解決上述存在的問題，本發(fā)明提供了一種從植物虎杖根莖中提取白藜蘆醇的新方法，該方法不需酶解，柱層析，直接用醇提取得到虎杖苷和白藜蘆醇，然后加酸把虎杖苷上的糖苷鍵分解，再加堿中和多余的酸，放置析晶。此法操作簡單，溶劑消耗小，生產(chǎn)周期短，成本低，收率高，適用于工業(yè)化大生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所述的方法是以植物虎杖根莖為原料，經(jīng)提取、濃縮、水解、析晶、過濾、干燥而制得。操作步驟如下
a.將虎杖根莖粉碎。b.按1 :8 1 :20 (m/v)虎杖粗粉與60 90%甲醇(乙醇)的比例對虎杖進(jìn)行回
流提取。c.濃縮至無醇味。d.濃縮液中加酸和穩(wěn)定劑進(jìn)行攪拌水解。e.調(diào)節(jié)水解液pH至中性。f.靜置析晶，過濾，干燥晶體。其中步驟a中粉碎粒度過10目篩，得粗粉。其中步驟b中回流提取時間為1 3h、0. 5 2h、0. 5 lh，提取三次，提取溫度控制在50°C 85°C之間。其中步驟d所用的酸為硫酸、鹽酸、乙酸、磷酸中的任一種，穩(wěn)定劑為檸檬酸鈉，水解溫度為50°C 80°C之間，水解時間0. 5 3小時。濃縮液酸穩(wěn)定劑=100 :0. 5 5 1
其中步驟e中調(diào)PH所用的試劑為氫氧化鈉、碳酸氫鈉和碳酸鈉、氧化鈣、氫氧化鈣的固體或溶液。
具體實(shí)施例方式
以下實(shí)施例用于進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明不限于下列實(shí)施例所包含的內(nèi)容。實(shí)施例一取虎杖粗粉500g，加入65%的甲醇5000ml，在80°C 85°C回流提取3 小時，過濾，收集第一次提取液。濾渣中加入65%的甲醇5000ml，在80°C 85°C回流提取2 小時，過濾，收集第二次提取液。濾渣中加入65%的甲醇5000ml，在80°C 85°C回流提取 1小時，過濾，收集第三次提取液。合并三次提取液，減壓濃縮至無醇味。按濃縮液、鹽酸與檸檬酸鈉的體積比100 3 1的比例加入鹽酸和檸檬酸鈉，在75 80°C水浴中攪拌水解1 小時，放冷，加10%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至中性，放置過夜結(jié)晶，過濾，收集晶體進(jìn)行減壓干燥，得白藜蘆醇8. Ig0 HPLC測定含量為51. 18%。實(shí)施例二 取虎杖粗粉500g，加入70%的甲醇4000ml，在80°C 85°C回流提取2 小時，過濾，收集第一次提取液。濾渣中加入70%的甲醇4000ml，在80°C 85°C回流提取2 小時，過濾，收集第二次提取液。濾渣中加入70%的甲醇4000ml，在80°C 85°C回流提取1 小時，過濾，收集第三次提取液。合并三次提取液，減壓濃縮至無醇味。按濃縮液、硫酸與檸檬酸鈉的體積比100 2 1的比例加入硫酸和檸檬酸鈉，在70 80°C水浴中攪拌水解2小時，放冷，加5%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至中性，放置過夜結(jié)晶，過濾，收集晶體進(jìn)行減壓干燥， 得白藜蘆醇8. lg, HPLC測定含量為51. 34%。實(shí)施例三取虎杖粗粉500g，加入80%的甲醇9000ml，在80°C 85°C回流提取2 小時，過濾，收集第一次提取液。濾渣中加入80%的甲醇9000ml，在80°C 85°C回流提取2 小時，過濾，收集第二次提取液。濾渣中加入80%的甲醇9000ml，在80°C 85°C回流提取1 小時，過濾，收集第三次提取液。合并三次提取液，減壓濃縮至無醇味。按濃縮液、鹽酸與檸檬酸鈉的體積比100 3 1的比例加入鹽酸和檸檬酸鈉，在70 80°C水浴中攪拌水解2小時，放冷，加氫氧化鈉固體調(diào)節(jié)PH至中性，放置過夜結(jié)晶，過濾，收集晶體進(jìn)行減壓干燥，得白藜蘆醇8. 5g，HPLC測定含量為51. 75%。實(shí)施例四虎杖粗粉500g，加入85%的甲醇7000ml，在80°C 85°C回流提取2小時，過濾，收集第一次提取液。濾渣中加入85%的甲醇7000ml，在80°C 85°C回流提取2小時，過濾，收集第二次提取液。濾渣中加入85%的甲醇7000ml，在80°C 85°C回流提取1小時，過濾，收集第三次提取液。合并三次提取液，減壓濃縮至無醇味。按濃縮液、磷酸與檸檬酸鈉的體積比100 3 1的比例加入磷酸和檸檬酸鈉，在70 80°C水浴中攪拌水解2小時， 放冷，加5%碳酸氫鈉溶液調(diào)節(jié)pH至中性，放置過夜結(jié)晶，過濾，收集晶體進(jìn)行減壓干燥，得白藜蘆醇8. 7g，用HPLC測定含量為50. 46%。實(shí)施例五虎杖粗粉^g，加入85%的甲醇50L，在80°C 85°C回流提取2小時， 過濾，收集第一次提取液。濾渣中加入85%的甲醇50L，在80°C 85°C回流提取2小時，過濾，收集第二次提取液。濾渣中加入85%的甲醇50L，在80°C 85°C回流提取1小時，過濾， 收集第三次提取液。合并三次提取液，減壓濃縮至無醇味。按濃縮液、鹽酸與檸檬酸鈉的體積比100 4 1的比例加入鹽酸和檸檬酸鈉，，在70 80°C攪拌水解2小時，放冷，加5%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH至中性，放置過夜結(jié)晶，過濾，收集晶體進(jìn)行減壓干燥，得白藜蘆醇91g， 用HPLC測定含量為51. 27%。實(shí)施例六虎杖粗粉500kg，加入80%的甲醇5000L，在80°C 85°C回流提取2小時，過濾，收集第一次提取液。濾渣中加入80%的甲醇5000L，在80°C 85°C回流提取2小時，過濾，收集第二次提取液。濾渣中加入80%的甲醇5000L，在80°C 85°C回流提取1小時，過濾，收集第三次提取液。合并三次提取液，減壓濃縮至無醇味。按100L濃縮液加入鹽酸3L，加入檸檬酸鈉1kg，在70 80°C攪拌水解2小時，放冷，加5%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH 至中性，放置過夜結(jié)晶，過濾，收集晶體進(jìn)行減壓干燥，得白藜蘆醇8. 8kg, HPLC測定含量為 52. 34%ο實(shí)施例七虎杖粗粉500kg，加入85%的甲醇4000L，在80°C 85°C回流提取3小時，過濾，收集第一次提取液。濾渣中加入85%的甲醇4000L，在80°C 85°C回流提取2小時，過濾，收集第二次提取液。濾渣中加入85%的甲醇4000L，在80°C 85°C回流提取1小時，過濾，收集第三次提取液。合并三次提取液，減壓濃縮至無醇味。按濃縮液、鹽酸與檸檬酸鈉的體積比100 3 1的比例加入鹽酸和檸檬酸鈉，在70 75°C攪拌水解2小時，放冷， 加氫氧化鈉固體調(diào)節(jié)PH至中性，放置過夜結(jié)晶，過濾，收集晶體進(jìn)行減壓干燥，得白藜蘆醇 8. 5kg，用HPLC測定含量為51. 92%。實(shí)施例七虎杖粗粉500kg，加入85%的甲醇5500L，在80°C 85°C回流提取2小時，過濾，收集第一次提取液。濾渣中加入85%的甲醇5500L，在80°C 85°C回流提取2小時，過濾，收集第二次提取液。濾渣中加入85%的甲醇5500L，在80°C 85°C回流提取1小時，過濾，收集第三次提取液。合并三次提取液，減壓濃縮至無醇味。按濃縮液、硫酸與檸檬酸鈉的體積比100 3 1的比例加入硫酸和檸檬酸鈉，在70 75°C水浴中攪拌水解2小時， 放冷，加氫氧化鈉固體調(diào)節(jié)PH至中性，放置過夜結(jié)晶，過濾，收集晶體進(jìn)行減壓干燥，得白藜蘆醇8. 7kg，用HPLC測定含量為51. 51%。
權(quán)利要求
1.一種從虎杖根莖中提取白藜蘆醇的新方法，包括以下操作步驟將虎杖根莖粉碎， 加醇進(jìn)行回流提取，提取液濃縮至無醇味，加酸和穩(wěn)定劑進(jìn)行加熱水解，水解液調(diào)PH至中性，靜置析晶，過濾，干燥晶體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述從植物虎杖根莖中提取白藜蘆醇的新方法，其特征在于虎杖需粉碎為粗粉，粒度過10目篩。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述從植物虎杖根莖中提取白藜蘆醇的新方法，其特征在于虎杖不需進(jìn)行酶解，直接以已粉碎的虎杖根莖為原料加醇進(jìn)行提取。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述從植物虎杖根莖中提取白藜蘆醇的新方法，其特征在于提取溶劑為60 90%甲醇或乙醇。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述從植物虎杖根莖中提取白藜蘆醇的新方法，其特征在于虎杖原料與提取溶劑用量的比例控制在1 :8 1 :20 (m/v)根據(jù)權(quán)利要求1所述從植物虎杖根莖中提取白藜蘆醇的新方法，其特征在于需提取三次，提取時間分別是1 3h、0. 5 2h、0. 5 lh，提取溫度需控制在50°C 85°C之間。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述從植物虎杖根莖中提取白藜蘆醇的新方法，其特征在于水解所用的酸為硫酸、鹽酸、醋酸、磷酸中的任一種，所用穩(wěn)定劑為檸檬酸鈉，其水解溫度應(yīng)控制在 50°C 80°C之間，水解時間也應(yīng)控制0. 5 3小時。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述從植物虎杖根莖中提取白藜蘆醇的新方法，其特征在于濃縮液酸穩(wěn)定劑的用量為100 :0. 5 5 :1。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述從植物虎杖根莖中提取白藜蘆醇的新方法，其特征在于調(diào)PH所用的試劑為氫氧化鈉、碳酸氫鈉和碳酸鈉、氧化鈣、氫氧化鈣的固體或溶液。
全文摘要
本發(fā)明所述一種從虎杖根莖中提取白藜蘆醇的新方法。該方法包括粉碎、提取、濃縮、水解、析晶、過濾、干燥等步驟。該方法不需酶解、柱層析，直接用甲醇(乙醇)從虎杖中將虎杖苷及白藜蘆醇提取出來，然后加酸把虎杖苷上的糖苷鍵進(jìn)行分解，再加堿中和多余的酸，而得到含量大于50％的白藜蘆醇的方法。本發(fā)明不經(jīng)柱層析，溶劑消耗小，操作簡單，生產(chǎn)周期短、成本低，收率高，適用于工業(yè)化大生產(chǎn)。
文檔編號C07C37/055GK102320934SQ20111026648
公開日2012年1月18日 申請日期2011年9月9日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月9日
發(fā)明者嚴(yán)紹華, 李威, 李選民, 許育海 申請人:四川天予植物藥業(yè)有限公司