專利名稱：一體化緩沖液及使用該一體化緩沖液分離核酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物學(xué)應(yīng)用領(lǐng)域的一種用一個從各式各樣的樣本來源中分離和純化核酸的一體化緩沖液，以及與使用固相硅膠基質(zhì)分離核酸的方法。
背景技術(shù)：
目前，核酸通常要求無雜質(zhì)，雜質(zhì)會干擾下游的處理或分析過程，例如逆轉(zhuǎn)錄，克隆，限制酶分析，測序，轉(zhuǎn)染，連接，體內(nèi)注射，聚合酶鏈反應(yīng)，等等。雜質(zhì)物常為(1)大分子例如蛋白，多糖，多核苷酸；( 鹽，化學(xué)藥品，有機溶劑，微量金屬，染料；C3)從生物的樣本而來的成分例如內(nèi)毒素，脂類，低分子量酶抑制劑，核苷酸。這些雜質(zhì)常常阻礙或抑制在許多分子生物學(xué)技術(shù)中廣泛應(yīng)用的化學(xué)反應(yīng)，或降解，分離或聚合核酸同其他成分。從復(fù)雜的系統(tǒng)中提取得到無雜質(zhì)的核酸的過程是繁復(fù)的。這些復(fù)雜的系統(tǒng)，例如細(xì)胞，組織，血液，瓊脂糖，聚丙烯酰胺凝膠，溶液，都包含大量雜質(zhì)。所以對于多數(shù)分子生物學(xué)應(yīng)用而言，使用簡單而有效的方法從復(fù)雜的系統(tǒng)中提取高純度核酸是必須的。在過去二十多年中已發(fā)展了許多關(guān)于從不同樣本來源分離核酸的方法。常規(guī)分離核酸的方法是借用有機溶劑，例如苯酚和氯仿，來裂解生物樣本和從而提取核酸，在鹽的存在下由乙醇或異丙醇將核酸沉淀出來。這些方法有重大的缺點第一它用有機物質(zhì)、化學(xué)物來提取核酸。對許多酶而言，這些物質(zhì)通常是強烈的抑制劑。第二，它需要用有機溶劑多次提取使核酸從其他生物成分例如蛋白，油脂，細(xì)胞的細(xì)胞器等等中分離。第三，這些使用的有機溶劑是有毒的，例如苯酚，氯仿。處理這些溶劑要特別的慎重和保護(hù)。最后，苯酚是一個強烈氧化劑——能氧化核酸從而導(dǎo)致毀損核酸。硅膠基質(zhì)技術(shù)是之后開發(fā)出來分離核酸的一種方法。與以上描述的傳統(tǒng)方法比較，硅膠基質(zhì)技術(shù)優(yōu)勢在于簡單，高效，無需有機溶劑，提取的核酸高純度。硅膠基質(zhì)分離核酸基本原理主要包括(1)在高的鹽濃度下，鈉離子打破水和二氧化硅中帶負(fù)電荷的氧離子間的氫鍵。鈉作為一個陽離子橋，吸引核酸分子中磷酸鹽帶負(fù)電荷的氧離子。(2)通過幾次洗滌脫氧核糖核酸-硅膠基質(zhì)后，鹽被消除，基因能被三羥甲基氨基甲烷-乙二胺四乙酸溶劑或水從硅膠基質(zhì)上洗脫分離。當(dāng)然，硅膠基質(zhì)包括很多二氧化硅材料例如玻璃顆粒，玻璃粉，二氧化硅顆粒，玻璃超細(xì)纖維，硅膠膜等等。二氧化硅顆粒和硅酸顆粒存在的問題是很大程度上取決于如何被包裝，并且很難被復(fù)制。硅膠膜技術(shù)能提供一個一致且均一的二氧化硅表面從而使結(jié)果可重復(fù)，過程更簡單。核酸分子結(jié)合到硅膠表面依賴于某些鹽的存在，在并需要一定的pH條件。一般來說，離液試劑和某些非離液鹽強度和PH值條件是核酸與硅膠結(jié)合所必需的。許多離液試劑如胍鹽酸鹽，異硫氰酸胍，碘化鈉，鈉高氯酸鹽和三氯乙酸鈉已在這個方面使用。然而，不同研究者發(fā)現(xiàn)這些離液試劑的最佳濃度并不同，從0. 5M至7M，和pH值范圍從3. 6至6. 8。沒有一個溶液優(yōu)化的濃度和組分被明確定義。此外，不同離液試劑用于不同目的的分離程序。例如，鹽酸胍，主要是用于在質(zhì)粒脫氧核糖核酸的提取和脫氧核糖核酸的純化，硫氰酸胍被廣泛應(yīng)用于核糖核酸的提取，碘化鈉被用于從瓊脂糖凝膠回收脫氧核糖核酸片段。研究人員不得不購買不同的溶液以用于不同目的核酸分離，紛繁復(fù)雜。綜上所述，為了避免上述情形，一種新的，從復(fù)雜的系統(tǒng)中提取高純度核酸的方法的發(fā)明是勢在必行的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是解決如下技術(shù)問題常規(guī)借用有機溶劑分離核酸的方法，有機溶劑或者是強烈的抑制劑，或者是有毒的、或者是能氧化核酸從而導(dǎo)致毀損核酸；而之后開發(fā)出來分離核酸的硅膠基質(zhì)技術(shù)由于沒有一個溶液優(yōu)化的濃度和組分被明確定義，而且，不同分離液試劑用于不同目的的分離程序，造成研究人員不得不購買不同的溶液以用于不同目的核酸分離，紛繁復(fù)雜；都不能簡單，高效的從復(fù)雜的系統(tǒng)中提取高純度核酸。本發(fā)明提供了一種從復(fù)雜的系統(tǒng)中提取高純度核酸的方法，該方法中提供了一種一體化緩沖液，其包括優(yōu)化的離液試劑，非離液鹽強度，PH值，以實現(xiàn)最大的硅膠膜與核酸結(jié)合。這溶液可用于所有目的的核酸分離，包括質(zhì)粒脫氧核糖核酸的提取，脫氧核糖核酸凝膠回收和溶液中脫氧核糖核酸純化等；不再需要研究人員購買不同的溶液以用于不同目的核酸分離，簡單便捷。本發(fā)明提供一種本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)一種一體化緩沖液，可用于不同目的的核酸分離，其特征在于，其包括離液試劑、 非離液試劑以及硅膠膜柱。所述離液試劑包括異硫氰酸胍，所述硫氰酸胍的終濃度為2. OM至2. 5M。所述非離液試劑包括氯化鈉和/或鉀醋酸，所述氯化鈉濃度為130mM至140mM ；醋酸鉀濃度為0. 3M。所述非離液試劑鹽濃度約為0. 43 0. 44mM。所述硅膠膜柱為佑科純化柱。所述佑科純化柱中硅膠膜填充厚度為2毫米或/和0. 5毫米。所述的使用該一體化緩沖液分離核酸的方法，可用于不同目的的核酸分離，包括質(zhì)粒脫氧核糖核酸的提取，脫氧核糖核酸凝膠回收和脫氧核糖核酸純化，其特征在于，包括如下步驟(1)將一體化緩沖液加入到包含核酸的溶液中，并使成分達(dá)到最后的最佳濃度；(2)在一體化緩沖液中的核酸會結(jié)合在硅膠膜柱的硅膠基質(zhì)上；(3)清洗核酸中的內(nèi)毒素和其他雜質(zhì)成分；(4)將核酸從固相硅膠基質(zhì)上洗脫下來。所述質(zhì)粒脫氧核糖核酸的提取，主要包括如下步驟第一，裂解細(xì)胞壁，質(zhì)粒脫氧核糖核酸被釋放但被變性；第二，變性的質(zhì)粒脫氧核糖核酸在加入1-4倍一體化緩沖液后恢復(fù)超螺旋結(jié)構(gòu)從而溶于水；第三，細(xì)胞裂解液穿過硅膠膜，脫氧核糖核酸將與之結(jié)合而其他成分將穿過硅膠膜；
第四，結(jié)合在硅膠膜上的脫氧核糖核酸洗滌除去內(nèi)毒素和其它雜質(zhì)后被洗脫。所述脫氧核糖核酸凝膠回收，主要包括如下步驟第一，脫氧核糖核酸片段從瓊脂糖凝膠中切除，加入3-5倍凝膠體積的一體化緩沖液；第二，50-55度孵育5-10分鐘以完全溶解瓊脂糖凝膠；第三，將所有溶液穿過硅膠膜，脫氧核糖核酸將與之結(jié)合而其他成分將穿過硅膠膜；第四，結(jié)合在硅膠膜上的脫氧核糖核酸洗滌除去其它雜質(zhì)后被洗脫。所述溶液中脫氧核糖核酸的純化，主要包括如下步驟第一，加入3-5倍溶液體積的一體化緩沖液，第二，將所有溶液穿過硅膠膜，脫氧核糖核酸將與之結(jié)合而其他成分將穿過硅膠膜；第三，結(jié)合在硅膠膜上的脫氧核糖核酸洗滌除去其它雜質(zhì)后被洗脫。本發(fā)明相對現(xiàn)有技術(shù)具有以下優(yōu)點和有益效果本發(fā)明所提供的一種從復(fù)雜的系統(tǒng)中提取高純度核酸的一體化緩沖液及使用該緩沖液的方法，該一體化緩沖液，其包括優(yōu)化的離液試劑，非離液鹽強度，PH值，以實現(xiàn)最大的硅膠膜與核酸結(jié)合。這溶液可用于所有目的的核酸分離，包括質(zhì)粒脫氧核糖核酸的提取，脫氧核糖核酸凝膠回收和溶液中脫氧核糖核酸純化等；不再需要研究人員購買不同的溶液以用于不同目的核酸分離，簡單便捷。


通過以下對本發(fā)明的實施例結(jié)合其附圖的描述，可以進(jìn)一步理解其發(fā)明的目的、 具體結(jié)構(gòu)特征和優(yōu)點。其中，附圖為圖1為本發(fā)明一體化緩沖液中的硅膠膜柱-佑科純化柱的示意圖；圖2是本發(fā)明使用一體化緩沖液和佑科純化柱-1提取質(zhì)粒的示意圖；圖3是本發(fā)明使用一體化緩沖液和佑科純化柱-2對瓊脂糖凝膠脫氧核糖核酸片段回收的示意圖；圖4是本發(fā)明使用一體化緩沖液和佑科純化柱-2從溶液中回收和純化脫氧核糖核酸的示意圖。
具體實施例方式下面結(jié)合圖中的實例對本發(fā)明作進(jìn)一步的描述。本發(fā)明是有關(guān)于用一個從各式各樣的樣本來源中分離和純化核酸的一體化緩沖液；本發(fā)明公開了的所述一體化緩沖液以及使用該緩沖液從復(fù)雜的系統(tǒng)中提取高純度核酸的方法，本發(fā)明也與使用固相硅膠基質(zhì)分離核酸的方法相關(guān)，或者說是從各個的來源(包括但不局限于生物樣本，瓊脂糖凝膠，和溶液，等等)來分離與凈化核酸以用于各種目的的
一種方法。本發(fā)明所述的一體化緩沖液，其包括一個優(yōu)化濃度的硫氰酸胍和非離液序列高的鹽，例如氯化鈉，醋酸鉀，以實現(xiàn)核酸與固相硅膠基質(zhì)的最大結(jié)合力；本發(fā)明所述的這個方法適合從細(xì)菌中分離質(zhì)粒基因，從瓊脂糖凝膠中提取脫氧核糖核酸片斷，從溶液中回收脫氧核糖核酸片斷?；镜某Ｒ?guī)流程包括(1)包含核酸的樣本一體化緩沖液直接破壞或一體化緩沖液被加入到包含核酸的溶液中。任何一種方法均可使每個成分都能達(dá)到最后最佳濃度；( 在一體化緩沖液中核酸會結(jié)合在固相硅膠基質(zhì)上；C3)清洗核酸中的內(nèi)毒素和其他雜質(zhì)成分；(4)將核酸從固相硅膠基質(zhì)上洗脫下來。本發(fā)明提出一體化緩沖液的優(yōu)化緩沖液組分可用于不同目的的核酸分離，包括質(zhì)粒脫氧核糖核酸的提取，脫氧核糖核酸凝膠回收和脫氧核糖核酸純化等。所述的一體化緩沖液包括離液試劑，所使用的離液試劑是異硫氰酸胍。其中，硫氰酸胍的終濃度為2. OM至 2. 5M，一體化緩沖液的pH4. 8-4. 9。其中，所述硫氰酸胍有以下幾個作用(1)分解生物材料或其他材料，如瓊脂糖，充分釋放核酸；( 促進(jìn)硅膜與核酸結(jié)合；C3)足夠的酶抑制力，包括脫氧核糖核酸酶和核糖核酸酶，從而防止在分離過程中核酸的降解；(4)充分去除一些雜質(zhì)，如內(nèi)毒素。本發(fā)明所描述的一體化緩沖液包括非離液試劑，所使用的非離液試劑是氯化鈉和鉀醋酸。這兩種鹽均可增強硅膜與核酸結(jié)合。氯化鈉濃度為130mM至140mM;醋酸鉀濃度為0. 3M。整個非離液試劑鹽濃度約為0. 43 0. 44mM。本發(fā)明所描述的一體化緩沖液包括硅膠膜柱，所用的硅膠膜柱為佑科純化柱，如圖1顯示。柱中硅膠膜填充厚度為2毫米(用于質(zhì)粒脫氧核糖核酸提取)，和0.5毫米(用于脫氧核糖核酸凝膠回收和純化)。即，所述的佑科純化柱硅膜的厚度在膜組成分一致的條件下根據(jù)目的實驗中核酸提取量而定，分別是質(zhì)粒提取純化柱內(nèi)部硅膜的厚度為2mm、凝膠回收純化柱內(nèi)部硅膜的厚度為0. 5mm。在這個條件下可最大化的發(fā)揮試劑的效力，使樣本與硅膜的結(jié)合度達(dá)到最優(yōu)。本發(fā)明如下所述的實施例中只對佑科純化柱的具體應(yīng)用有詳細(xì)闡述，即，如下所述的實施例中的一體化緩沖液是為佑科純化柱設(shè)計且對其進(jìn)行測試。當(dāng)然， 本發(fā)明所描述的一體化緩沖液也可用于其他硅膠基質(zhì)或硅膠膜。其他類似物質(zhì)的類似操作方法本領(lǐng)域的技術(shù)人員皆無須通過創(chuàng)造性勞動即可知曉，在此不在贅述。使用上述的一體化緩沖分離提取高純度核酸，用于不同目的的核酸分離，包括質(zhì)粒脫氧核糖核酸的提取，脫氧核糖核酸凝膠回收和脫氧核糖核酸純化等，主要包括如下步驟(1)對于質(zhì)粒脫氧核糖核酸提取，首先用十二烷基硫酸鈉和氫氧化鈉裂解細(xì)胞壁， 質(zhì)粒脫氧核糖核酸被釋放但被變性；第二變性的質(zhì)粒脫氧核糖核酸在加入2. 3倍一體化緩沖液后恢復(fù)超螺旋結(jié)構(gòu)從而溶于水；細(xì)胞裂解液穿過硅膠膜，脫氧核糖核酸將與之結(jié)合而其他成分將穿過硅膠膜；結(jié)合在硅膠膜上的脫氧核糖核酸洗滌除去內(nèi)毒素和其它雜質(zhì)后被洗脫。(2)對于脫氧核糖核酸凝膠回收，脫氧核糖核酸片段從瓊脂糖凝膠中切除，加入 3-5倍凝膠體積的一體化緩沖液。55度孵育10分鐘以完全溶解瓊脂糖凝膠。然后，將所有溶液穿過硅膠膜，脫氧核糖核酸將與之結(jié)合而其他成分將穿過硅膠膜；結(jié)合在硅膠膜上的脫氧核糖核酸洗滌除去其它雜質(zhì)后被洗脫。(3)對于溶液中脫氧核糖核酸的純化，加入3-5倍溶液體積的一體化緩沖液，然后，將所有溶液穿過硅膠膜，脫氧核糖核酸將與之結(jié)合而其他成分將穿過硅膠膜；結(jié)合在硅膠膜上的脫氧核糖核酸洗滌除去其它雜質(zhì)后被洗脫。如下將通過實例的具體的實驗數(shù)據(jù)，對上述發(fā)明內(nèi)容進(jìn)行進(jìn)一步的詳細(xì)敘述
以下溶液將在下述的實例中使用Pl緩沖液50mM三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液，pH 8. 0，IOmM乙二胺四乙酸， 100ug/mL核糖核酸酶A ；P2緩沖液200mM氫氧化鈉，1 %十二烷基硫酸鈉；P3緩沖液2. 3x 一體化緩沖液；內(nèi)毒素洗滌緩沖液lx —體化緩沖液，70%異丙醇；洗滌緩沖液三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液(pH = 8. 0)，乙二胺四乙酸， 80%乙醇；洗脫緩沖液10mM三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液，pH 8. 0 ；實例1，質(zhì)粒脫氧核糖核酸提取實驗，如圖2所示用50毫升或15毫升離心管離心1-10毫升細(xì)菌培養(yǎng)液5分鐘0000-6000轉(zhuǎn)/分
鐘)，棄上清。加入200微升Pl的緩沖液(冷)管中和完全重懸細(xì)菌沉淀，轉(zhuǎn)移懸浮液到的一個新的1.5毫升離心管中。再加入200微升的P2緩沖液，反復(fù)倒置離心管4-5次以混勻溶液。在室溫下放置3-4分鐘。加入300微升P3的緩沖液(一體化緩沖液)，反復(fù)倒置離心管4-5次以混勻溶液。不要旋渦震蕩，于冰上裂解液孵育10分鐘。在4°C，離心樣品彡 10，OOOxg, 10-15 分鐘。將佑科純化柱-1放置于收集管上，小心將第5步的上清加入佑科純化柱-1，不要把任何顆粒細(xì)胞碎片加入。離心佑科純化柱-1/收集管，30-60秒，彡IOOOOxg0廢棄收集管中液體，重組佑科純化柱-1/收集管。在佑科純化柱-1加入200微升內(nèi)毒素洗滌緩沖液，離心> 60秒10，OOOxgo廢棄收集管中液體，重組佑科純化柱-1/收集管。在佑科純化柱-1加入750微升洗滌緩沖液，離心彡60秒10，OOOxgo清空收集管，離心佑科純化柱-1/收集管1分鐘，^ 10，OOOxg,去除殘留洗滌緩沖液。將佑科純化柱-1轉(zhuǎn)移到一個干凈的1. 5ml離心管上，然后加入50微升洗脫緩沖液于佑科純化柱-1中硅膠膜的中央，靜置1分鐘。離心60秒，^ 10，OOOxg，洗脫質(zhì)粒脫氧核糖核酸。如圖2片段中使用本發(fā)明的一體化緩沖液和佑科純化柱-1提取質(zhì)粒。M 脫氧核糖核酸分子量標(biāo)記；1 質(zhì)粒脫氧核糖核酸的小量制備，采用Qiagen公司提供的試劑盒中的純化柱及緩沖試劑；2和4 質(zhì)粒脫氧核糖核酸的小量制備，使用本發(fā)明一體化緩沖液和佑科純化柱-1 ；3 質(zhì)粒脫氧核糖核酸的小量制備，使用Qiagen公司的純化柱和本發(fā)明一體化緩沖液。本發(fā)明一體化緩沖液可以增加Qiagen純化柱的脫氧核糖核酸產(chǎn)量。實例2，脫氧核糖核酸凝膠回收試驗，如圖3所示用一個干凈的刀片或手術(shù)刀切除含脫氧核糖核酸片段的瓊脂糖凝膠，并將其轉(zhuǎn)移至1. 5ml的離心管中。
加入3倍體積的一體化緩沖液于切除的瓊脂糖凝膠體積(如100微升(毫克)瓊脂糖凝膠片加入300微升一體化緩沖液)。55°C孵育10分鐘，直到凝膠片完全溶解。每3-5分鐘混合溶液與凝膠3_5次，以幫助凝膠完全溶解。融化的瓊脂糖凝膠溶液轉(zhuǎn)移入佑科純化柱-2中，并置于收集管上。離心彡lOOOOxg，30-60秒。清空收集管。加入200微升洗滌緩沖液至佑科純化柱-2中，離心> 30秒10，OOOxgo清空收集
管。重復(fù)洗滌步驟。將佑科純化柱-2放入一個新的1. 5ml離心管中。加12微升微升洗脫緩沖液或水于佑科純化柱-2中硅膠膜的中央，靜置1分鐘。離心60秒，^ 10，OOOxg，洗脫脫氧核糖核酸。如圖3所示，使用本發(fā)明的一體化緩沖液和佑科純化柱-2對瓊脂糖凝膠脫氧核糖核酸片段回收。M 脫氧核糖核酸分子量標(biāo)記；1-2 使用Zymo凝膠回收試劑盒回收的脫氧核糖核酸片段；3-4 使用本發(fā)明一體化緩沖液和佑科純化柱-2回收的脫氧核糖核酸片段； 5-6 凝膠回收前的脫氧核糖核酸片段。實例3，脫氧核糖核酸的純化試驗，如圖4所示于每個脫氧核糖核酸樣本中加入3-5倍體積的一體化緩沖液，(例如使用3倍體積的一體化緩沖液用于質(zhì)粒，基因組脫氧核糖核酸樣品，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)片段，酶消化產(chǎn)品；5倍體積的一體化緩沖液用于單鏈脫氧核糖核酸樣本)。例如加入300微升一體化緩沖液于100微升的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)產(chǎn)物中，混勻。將溶液加入佑科純化柱-2中，并置于收集管上。離心彡10，OOOxg 30-60秒。清空收集管。加入200微升洗滌緩沖液至佑科純化柱-2中，離心> 30秒10，OOOxgo清空收集
管。重復(fù)洗滌步驟。將佑科純化柱-2放入一個新的1. 5ml離心管中。加12微升洗脫緩沖液或水于佑科純化柱-2中硅膠膜的中央，靜置1分鐘。離心60秒，^ 10，OOOxg，洗脫脫氧核糖核酸。表1用Qiagen公司的相關(guān)試劑或本發(fā)明一體化緩沖液小量制備的質(zhì)粒脫氧核糖核酸濃度比較
權(quán)利要求
1.一種一體化緩沖液，可用于不同目的的核酸分離，其特征在于，其包括離液試劑、 非離液試劑以及硅膠膜柱。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一體化緩沖液，其特征在于，所述離液試劑包括異硫氰酸胍， 所述硫氰酸胍的終濃度為2. OM至2. 5M。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一體化緩沖液，其特征在于，所述非離液試劑包括氯化鈉和/ 或鉀醋酸，所述氯化鈉濃度為130mM至140mM ；醋酸鉀濃度為0. 3M。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一體化緩沖液，其特征在于所述非離液試劑鹽濃度約為 0. 43 0. 44mM0
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一體化緩沖液，其特征在于，所述硅膠膜柱為佑科純化柱。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一體化緩沖液，其特征在于，所述佑科純化柱中硅膠膜填充厚度為2毫米或/和0.5毫米。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的使用該一體化緩沖液分離核酸的方法，可用于不同目的的核酸分離，包括質(zhì)粒脫氧核糖核酸的提取，脫氧核糖核酸凝膠回收和脫氧核糖核酸純化，其特征在于，包括如下步驟(1)將一體化緩沖液加入到包含核酸的溶液中，并使成分達(dá)到最后的最佳濃度；(2)在一體化緩沖液中的核酸會結(jié)合在硅膠膜柱的硅膠基質(zhì)上；(3)清洗核酸中的內(nèi)毒素和其他雜質(zhì)成分；(4)將核酸從固相硅膠基質(zhì)上洗脫下來。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的使用該一體化緩沖液分離核酸的方法，其特征在于，所述質(zhì)粒脫氧核糖核酸的提取，主要包括如下步驟第一，裂解細(xì)胞壁，質(zhì)粒脫氧核糖核酸被釋放但被變性；第二，變性的質(zhì)粒脫氧核糖核酸在加入1-4倍一體化緩沖液后恢復(fù)超螺旋結(jié)構(gòu)從而溶于水；第三，細(xì)胞裂解液穿過硅膠膜，脫氧核糖核酸將與之結(jié)合而其他成分將穿過硅膠膜；第四，結(jié)合在硅膠膜上的脫氧核糖核酸洗滌除去內(nèi)毒素和其它雜質(zhì)后被洗脫。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的使用該一體化緩沖液分離核酸的方法，其特征在于，所述脫氧核糖核酸凝膠回收，主要包括如下步驟第一，脫氧核糖核酸片段從瓊脂糖凝膠中切除，加入3-5倍凝膠體積的一體化緩沖液；第二，50-55度孵育10-30分鐘以完全溶解瓊脂糖凝膠；第三，將所有溶液穿過硅膠膜，脫氧核糖核酸將與之結(jié)合而其他成分將穿過硅膠膜；第四，結(jié)合在硅膠膜上的脫氧核糖核酸洗滌除去其它雜質(zhì)后被洗脫。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的使用該一體化緩沖液分離核酸的方法，其特征在于所述溶液中脫氧核糖核酸的純化，主要包括如下步驟第一，加入3-5倍溶液體積的一體化緩沖液，第二，將所有溶液穿過硅膠膜，脫氧核糖核酸將與之結(jié)合而其他成分將穿過硅膠膜；第三，結(jié)合在硅膠膜上的脫氧核糖核酸洗滌除去其它雜質(zhì)后被洗脫。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種一體化緩沖液，和從各個的來源(包括但不局限于生物樣本，瓊脂糖凝膠，和溶液，等等)來分離與凈化核酸以用于各種目的的一種方法。這個一體化緩沖液包括一個優(yōu)化濃度的硫氰酸胍和非離液序列高的鹽，例如氯化鈉，醋酸鉀，以實現(xiàn)核酸與固相硅膠基質(zhì)的最大結(jié)合力；這個方法適合從細(xì)菌中分離質(zhì)?；?，從瓊脂糖凝膠中提取脫氧核糖核酸(脫氧核糖核酸)片斷，從溶液中回收脫氧核糖核酸片斷，如此，不再需要研究人員購買不同的溶液以用于不同目的核酸分離，簡單便捷。
文檔編號C07H1/06GK102533725SQ201110267880
公開日2012年7月4日 申請日期2011年9月9日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月9日
發(fā)明者周永剛, 譚文斌 申請人:上海佑科生物技術(shù)有限公司