專利名稱：一種從苦玄參葉中制備苦玄參苷ia的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及從苦玄參葉中制備苦玄參苷IA的方法。
背景技術(shù)：
苦玄參苷IA (Picfeltarraenin IA)是一種三萜類皂苷，為苦玄參苷元I的 3-0-a-L-鼠李吡喃糖基-(1，2)-β-D-木吡喃糖苷，分子式C41H62013，分子量762. 9，其苷元結(jié)構(gòu)式
苦玄參為雙子葉植物藥玄參科植物苦玄參，又叫魚(yú)膽草、四環(huán)素草，具有清熱解毒、消腫止痛、開(kāi)胃消食，用于感冒風(fēng)熱、咽喉腫痛、痢疾、毒蛇咬傷、跌打損傷、胃痛、消化不良?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，苦玄參中含有大量三萜皂苷，其中苦玄參苷IA具有抗補(bǔ)體、抗炎作用和抗腫瘤作用。 通過(guò)文獻(xiàn)檢索，制備苦玄參苷IA方法多為固體色譜柱分離。如文獻(xiàn)“從苦玄參中制備苦玄參苷IA的實(shí)驗(yàn)研究”，該文獻(xiàn)采用的方法是萃取、硅膠柱和制備液相結(jié)合分離得到高純度苦玄參苷IA。再如文獻(xiàn)“苦玄參的化學(xué)成分研究及應(yīng)用”，該文獻(xiàn)采用的方法是乙醇回流提取，大孔樹(shù)脂分富集，硅膠柱反復(fù)分離。如上所述，這些傳統(tǒng)制備方法多存在溶劑用量大、收率低、制備量小、周期長(zhǎng)等諸多缺陷。本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷和不足，提供一種從苦玄參葉中制備苦玄參苷IA的快速、簡(jiǎn)便的方法。本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的一種從苦玄參葉中制備苦玄參苷 IA的方法，其特征在于以下步驟
i取苦玄參葉粉碎，加入4-10BV50-80%乙醇微波提取2_3次，每次30-60分鐘，提取液回收乙醇，濃縮液加入陰離子樹(shù)脂除雜，去離子水洗脫，收集下柱液和水洗液，減縮干燥得
干浸膏；
上述干浸膏用依無(wú)水丙酮超聲洗滌30-60分鐘，再用氯仿溶解，濾出不溶物，回收氯仿，得粗提物；
iii上述粗提物采用高速逆流色譜分離，紫外檢測(cè)器在線檢測(cè)，收集目標(biāo)成分，減壓干燥得苦玄參苷IA
發(fā)明內(nèi)容
步驟i中所述的陰離子樹(shù)脂為弱堿性陰離子樹(shù)脂，型號(hào)可選D941、330或D310中的一種。步驟iii中所述的高速逆流色譜分離的溶劑系統(tǒng)可選三元溶劑體系，優(yōu)選乙酸乙酯、正丁醇、水，比例為3-10:1-3:5-10，下相為流動(dòng)相，上相為固定相。步驟iii中所述的高速逆流色譜分離的溶劑系統(tǒng)可選四元溶劑體系，優(yōu)選乙酸乙酯、丁醇、甲醇、水，比例為5-10:3-7:1-3:7-15，下相為流動(dòng)相，上相為固定相。在高速逆流色譜分離時(shí)主機(jī)轉(zhuǎn)速可為700-1000rpm，流動(dòng)相流速為Uml/min，采用流動(dòng)相溶解分離物。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是采用了高速逆流色譜法制備，它是一種液液分配色譜，分離速度快、周期短，樣品無(wú)損失，溶劑可以循環(huán)使用，不產(chǎn)生廢棄物，解決了固體填充柱分離的缺陷，是一種高效、快速方法，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實(shí)施例方式
下面將結(jié)合具體實(shí)施方式
進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明。實(shí)施例1
苦玄參葉粉碎，取2kg加8倍80%乙醇微波提取2次，每次30分鐘，合并提取液濃縮至無(wú)醇，加入D941陰離子樹(shù)脂柱中，去離子水洗脫，合并下柱液和水洗液，減壓濃縮干燥得到 67g浸膏。浸膏粉碎加入200ml丙酮溶液超聲40分鐘，抽濾，固體物再用氯仿溶解，過(guò)濾，濾液回收試劑，得粗提物9g。取乙酸乙酯、正丁醇、水按3:1:5混合，混合后充分分層后，取上相注滿高速逆流色譜柱，同時(shí)開(kāi)轉(zhuǎn)主機(jī)SOOrpm，泵入下相，待系統(tǒng)平衡后，流速調(diào)節(jié)為2ml/min，同時(shí)用流動(dòng)相溶解粗提物，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測(cè)器在線檢測(cè)，收集目標(biāo)流分，連續(xù)制備，濃縮干燥得類白色苦玄參苷IA3. IgJSHPLC檢測(cè)，純度98. 1%。實(shí)施例2:
苦玄參葉粉碎，取2kg加6倍50%乙醇微波提取3次，每次30分鐘，合并提取液濃縮至無(wú)醇，加入330陰離子樹(shù)脂柱中，去離子水洗脫，合并下柱液和水洗液，減壓濃縮干燥得到 75g浸膏。浸膏粉碎加入300ml丙酮溶液超聲60分鐘，抽濾，固體物再用氯仿溶解，過(guò)濾，濾液回收試劑，得粗提物Hg。取乙酸乙酯、丁醇、甲醇、水按5:3:1:7，混合后充分分層后，取上相注滿高速逆流色譜柱，同時(shí)開(kāi)轉(zhuǎn)主機(jī)900rpm，泵入下相，待系統(tǒng)平衡后，流速調(diào)節(jié)為3ml/min，同時(shí)用流動(dòng)相溶解粗提物，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測(cè)器在線檢測(cè)，收集目標(biāo)流分，連續(xù)制備，濃縮干燥得類白色苦玄參苷IA3. 6g，經(jīng)HPLC檢測(cè)，純度96. 7%。實(shí)施例3:
苦玄參葉粉碎，取2kg加8倍70%乙醇微波提取2次，每次30分鐘，合并提取液濃縮至無(wú)醇，加入D310陰離子樹(shù)脂柱中，去離子水洗脫，合并下柱液和水洗液，減壓濃縮干燥得到 72g浸膏。浸膏粉碎加入200ml丙酮溶液超聲30分鐘，抽濾，固體物再用氯仿溶解，過(guò)濾，濾液回收試劑，得粗提物10g。取乙酸乙酯、丁醇、甲醇、水按6:3:2:10，混合后充分分層后，取上相注滿高速逆流色譜柱，同時(shí)開(kāi)轉(zhuǎn)主機(jī)lOOOrpm，泵入下相，待系統(tǒng)平衡后，流速調(diào)節(jié)為lml/min，同時(shí)用流動(dòng)相溶解粗提物，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測(cè)器在線檢測(cè)，收集目標(biāo)流分，連續(xù)制備，濃縮干燥得類白色苦玄參苷IA2. 9g，經(jīng)HPLC檢測(cè)，純度98. 5%。
權(quán)利要求
1.一種從苦玄參葉中制備苦玄參苷IA的方法，其特征在于以下步驟i取苦玄參葉粉碎，加入4-10BV50-80%乙醇微波提取2_3次，每次30-60分鐘，提取液回收乙醇，濃縮液加入陰離子樹(shù)脂除雜，去離子水洗脫，收集下柱液和水洗液，減縮干燥得干浸膏； 上述干浸膏用依無(wú)水丙酮超聲洗滌30-60分鐘，再用氯仿溶解，濾出不溶物，回收氯仿，得粗提物；i i i上述粗提物采用高速逆流色譜分離，紫外檢測(cè)器在線檢測(cè)，收集目標(biāo)成分，減壓干燥得苦玄參苷IA。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從苦玄參葉中制備苦玄參苷IA的方法，其特征在于步驟i中所述的陰離子樹(shù)脂為弱堿性陰離子樹(shù)脂，型號(hào)可選D941、330或D310中的一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從苦玄參葉中制備苦玄參苷IA的方法，其特征在于步驟iii 中所述的高速逆流色譜分離的溶劑系統(tǒng)可選三元溶劑體系，優(yōu)選乙酸乙酯、正丁醇、水，比例為3-10:1-3:5-10，下相為流動(dòng)相，上相為固定相。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從苦玄參葉中制備苦玄參苷IA的方法，其特征在于步驟iii 中所述的高速逆流色譜分離的溶劑系統(tǒng)可選四元溶劑體系，優(yōu)選乙酸乙酯、丁醇、甲醇、水， 比例為5-10 3-7 1-3 7-15，下相為流動(dòng)相，上相為固定相。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種從苦玄參葉中制備苦玄參苷IA的方法。方法步驟如下i取苦玄參葉粉碎，加入4-10BV50-80%乙醇微波提取2-3次，每次30分鐘，提取液回收乙醇，濃縮液加入陰離子樹(shù)脂除雜，去離子水洗脫，收集下柱液和水洗液，減縮干燥得干浸膏；ii上述干浸膏用依無(wú)水丙酮超聲洗滌30-60分鐘，再用氯仿溶解，濾出不溶物，回收氯仿，得粗提物；iii上述粗提物采用高速逆流色譜分離，紫外檢測(cè)器在線檢測(cè)，收集目標(biāo)成分，減壓干燥得苦玄參苷IA。本發(fā)明具有操作簡(jiǎn)便、效率高、周期短、制備量大等優(yōu)點(diǎn)，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C07J17/00GK102391344SQ20111030361
公開(kāi)日2012年3月28日 申請(qǐng)日期2011年10月10日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月10日
發(fā)明者劉東鋒, 楊成東 申請(qǐng)人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司