專利名稱：一種從魔芋飛粉中制備神經(jīng)酰胺的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從魔芋飛粉中制備神經(jīng)酰胺的方法。
背景技術(shù)：
魔芋(konjac)屬于被子植物門、單子葉植物綱、天南星科，是具有球莖的多年生草本植物。據(jù)統(tǒng)計，我國有魔芋屬植物沈種，其中14種為我國特有，目前魔芋總產(chǎn)量占全世界的三分之一，且每年都在不斷增加。魔芋為喜陰、喜濕、怕熱、不耐寒、怕漬水的作物，生長環(huán)境要求特殊，全世界范圍內(nèi)適宜種植的區(qū)域極為有限。在我國，其主要分布于湖南、四川、 湖北、云南、貴州、臺灣等地。湖北省恩施州夏無酷暑、冬少嚴寒、土壤微酸性且富含硒元素， 自然條件得天獨厚，是種植魔芋的理想地之一。全州總種植規(guī)模達到60萬畝，其中商品基地45萬畝，種芋基地15萬畝，年實現(xiàn)種植產(chǎn)值25億元，魔芋精(微、純)粉以及飲料、食品涂料、可溶可食薄膜總加工產(chǎn)值達75億元，年銷售各類魔芋產(chǎn)品在25，000噸以上。目前， 我國的魔芋精粉加工方法大體上可分為干法和濕法，魔芋飛粉是魔芋精粉生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的副產(chǎn)物，占加工前魔芋粉質(zhì)量的35% 45%。由于魔芋飛粉含有異味以及抗營養(yǎng)因子， 且葡甘聚糖的含量低，制約了其在食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域的應(yīng)用，僅湖北省每年就有約85%的魔芋飛粉未被利用。然而，魔芋飛粉中含有大量的有效成分，大約含有50%的總糖、20%的蛋白質(zhì)、 0. 5%的脂肪、2. 5%的纖維素、7%的礦物質(zhì)以及0. 15% 0. 20%的神經(jīng)酰胺。神經(jīng)酰胺， 即N-脂酰神經(jīng)鞘胺醇，是鞘磷脂的重要組成單位，是生物體內(nèi)一類重要的功能物質(zhì)，也是生物體內(nèi)重要的脂質(zhì)第二信使。神經(jīng)酰胺具有抗腫瘤、誘導(dǎo)人結(jié)腸癌細胞凋亡、誘導(dǎo)人鼻咽癌細胞凋亡、抗肝毒性、降血脂、降血糖等藥理作用，以及減肥、對皮膚有保濕、抗衰老、美白等作用，廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、保健品以及日用品中。神經(jīng)酰胺制品有天然和化學(xué)合成兩類，在醫(yī)藥領(lǐng)域主用是天然的神經(jīng)酰胺。以前， 一些發(fā)達國家主要從牛腦中提取豐富的神經(jīng)酰胺，但是自1986年“瘋牛病”發(fā)生以來，動物性神經(jīng)酰胺的安全性廣受質(zhì)疑，動物來源的神經(jīng)酰胺制品已被植物性神經(jīng)酰胺制品所取代。天然神經(jīng)酰胺主要從大豆、大米、小麥、酵母、魔芋等植物中提取，但是米糠和小麥中的神經(jīng)酰胺含量僅0. 01 % 0. 02 %，魔芋精粉中的含量約為0. 026 %，而魔芋飛粉中的神經(jīng)酰胺的含量為0. 15% 0. 20%，是神經(jīng)酰胺提取的重要原料，具有很高的開發(fā)前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的問題是提供一種從魔芋飛粉中制備神經(jīng)酰胺的方法。本發(fā)明一種從魔芋飛粉中制備神經(jīng)酰胺的方法，其特征在于包括如下操作步驟(a)神經(jīng)酰胺的粗提以魔芋飛粉為原料，用乙醇溶液提取，提取完畢后過濾，濃縮，回收乙醇，然后將濃縮液用石油醚萃取2次，合并石油醚相，回收石油醚得棕色的神經(jīng)酰胺浸膏，即神經(jīng)酰胺樣品I;(b)硅膠柱層析純化將硅膠濕法裝柱，并用初始洗脫劑平衡層析柱；神經(jīng)酰胺樣品I用初始洗脫劑溶解，濕法上樣；用石油醚-乙酸乙酯為洗脫劑進行梯度洗脫，分步收集流出液，用TLC檢測流出液，合并具有相同成份的流出液，回收溶劑，干燥得神經(jīng)酰胺樣品 II ；(c)中壓C18鍵合硅膠ODS柱層析純化將C18鍵合硅膠濕法裝柱，用加壓裝置進行壓縮，并用初始洗脫劑平衡層析柱；將上述的神經(jīng)酰胺樣品II用初始洗脫劑進行溶解，濕法上樣；用乙醇-水為洗脫劑進行梯度洗脫，分步收集流出液，用TLC檢測流出液，合并具有相同成份的流出液，回收溶劑，干燥得神經(jīng)酰胺樣品III ；經(jīng)HPLC-ELSD檢測，神經(jīng)酰胺樣品 III的純度可以到達95%以上。本發(fā)明一種從魔芋飛粉中制備神經(jīng)酰胺的方法，其特征在于包括如下操作步驟(a)神經(jīng)酰胺的粗提以魔芋飛粉為原料，用濃度為75% 95%乙醇溶液提取，料液比為固液比魔芋飛粉乙醇溶液1 3 5，提取的溫度為60 80°C，提取時間為1 2h ；提取完畢后過濾，濃縮，回收乙醇，然后將濃縮液用60 90°C餾分石油醚萃取2次，攪拌時間為0.5 1.5h，靜置時間為0.5h，料液比為體積比濃縮液石油醚1 2 4，合并石油醚相，回收石油醚得棕色的神經(jīng)酰胺浸膏，即神經(jīng)酰胺樣品I ；(b)硅膠柱層析純化將300 400目硅膠活化，活化溫度為105 110°C，活化時間為1 ai ；硅膠濕法裝柱后，用初始洗脫劑平衡層析柱；神經(jīng)酰胺樣品I用初始洗脫劑溶解，濕法上樣；上樣量為1 5g粗品/IOOg硅膠；，然后用石油醚-乙酸乙酯為洗脫劑進行梯度洗脫，洗脫劑石油醚-乙酸乙酯的體積比分別為95 5、85 15,75 25,60 40、 40 60，其中95 5和85 15兩種洗脫劑使用量各為1BV，后三種洗脫劑的使用量各為 2BV,分步收集流出液，洗脫速度為2 4BV/h，用TLC檢測流出液，合并具有相同成份的流出液，回收溶劑，干燥得神經(jīng)酰胺樣品II ；(c)中壓Cw鍵合硅膠ODS柱層析純化稱取適量的Cw鍵合硅膠用初始流動相進行浸泡，并且攪拌，待硅膠中沒有氣泡時，濕法裝入中壓色譜柱中；然后用加壓裝置進行壓縮， 使壓縮后的C18鍵合硅膠柱在正常流速下的工作壓力為5 20bar，并用初始洗脫劑平衡層析柱；將上述的神經(jīng)酰胺樣品II用初始洗脫劑進行溶解，濕法上樣，上樣量為0. 1 0. 5g 樣品/IOOgCw鍵合硅膠；用乙醇-水為洗脫劑進行梯度洗脫，洗脫劑乙醇-水的體積比分別 ^ 90%,75%,60%,每種洗脫劑的量為2 2. 5BV,洗脫速度為1 1. 5BV/h,用TLC檢測流出液，分步收集流出液，合并具有相同成份的流出液，回收溶劑，干燥得神經(jīng)酰胺樣品III ； 經(jīng)HPLC-ELSD檢測，神經(jīng)酰胺樣品III的純度可以到達95%以上。本發(fā)明提供了一種從魔芋飛粉中制備高純度神經(jīng)酰胺的方法，是利用魔芋飛粉為原料，通過硅膠柱層析技術(shù)聯(lián)合中壓C18鍵合硅膠柱層析技術(shù)制備高純度的神經(jīng)酰胺。1、神經(jīng)酰胺的粗提以魔芋飛粉為原料，用75% 95% (ν/ν)乙醇于60 80°C攪拌提取1 2h，料液比為1 3 1 5，提取完畢后過濾，收集濾液，濾液轉(zhuǎn)入酒精回收裝置，回收酒精至濃縮液中的酒精度為0 20%，然后往濃縮液中加入2 4倍體積的60 90°C石油醚進行萃取，攪拌0. 5 1. 5h后靜置分層，收集醚相，萃取2次，合并醚相，將醚相濃縮至浸膏狀， 得棕色的神經(jīng)酰胺樣品I ；2、硅膠柱層析純化神經(jīng)酰胺2.1硅膠的活化
稱取300 400目的硅膠于105 110°C活化1 2h。2. 2濕法裝柱將活化好的硅膠放入容器中，并加入適量的石油醚，順著固定方向攪拌，待硅膠中沒有氣泡時，濕法裝入中壓色譜柱中。并用初始洗脫劑平衡層析柱。2. 3濕法上樣和洗脫將上述的神經(jīng)酰胺粗品I用初始流動相溶解后濕法上樣，上樣量為1 5g粗品 /IOOg 硅膠。然后用石油醚-乙酸乙酯(95 5，85 15，75 25，60 40,40 60, ν/ν) 為洗脫劑進行梯度洗脫，95 5和85 15兩種洗脫劑使用量各為1BV，后三種洗脫劑的使用量各為2BV，分步收集流出液，洗脫速度為2 4BV/h，用TLC檢測流出液，合并具有相同成份的流出液，回收溶劑，干燥得神經(jīng)酰胺樣品II。硅膠層析柱經(jīng)甲醇再生后可重復(fù)使用。3、中壓C18鍵合硅膠(0此)柱層析純化神經(jīng)酰胺3. 1濕法裝柱稱取適量的C18鍵合硅膠用初始流動相進行浸泡，并且攪拌，待硅膠中沒有氣泡時，濕法裝入中壓色譜柱中。然后用加壓裝置進行壓縮，使壓縮后的C18鍵合硅膠柱在正常流速下的工作壓力為5 20bar，并用初始洗脫劑平衡層析柱。3. 2濕法上樣和洗脫將上述的神經(jīng)酰胺樣品II用初始洗脫劑溶解，濕法上樣，上樣量為0. 1 0. 5g樣品/IOOg Cw鍵合硅膠。以乙醇-水(90^,75^,60^,^0為洗脫劑進行梯度洗脫，每種洗脫劑的量為2 2. 5BV，分步收集流出液，洗脫速度為1 1. 5BV/h，用TLC檢測流出液， 合并具有相同成份的流出液，回收溶劑，干燥得神經(jīng)酰胺樣品III。經(jīng)HPLC-ELSD檢測，神經(jīng)酰胺樣品III的純度可以到達95%以上。其它低含量的神經(jīng)酰胺樣品重新上柱進行回收利用。中壓Cw鍵合硅膠層析柱經(jīng)甲醇再生后可重復(fù)使用。4、檢測本發(fā)明中主要使用TLC法定性和HPLC-ELSD法定量分析檢測神經(jīng)酰胺。TLC定性方法硅膠板的活化110°C，30min ；展開劑氯仿甲醇醋酸=19 0. 9 0. 1 (ν/ν/ ν)；顯色劑I :0. 茜素(取0. Ig茜素，用少量乙醇溶解后，定容至IOOmL備用)；顯色方式噴霧顯色；顯色劑10%硫酸銅磷酸溶液(取IOg無水硫酸銅，用10%的磷酸溶液溶解后定容至IOOmL備用)；顯色方式浸泡:3min后在140°C下烘30min，觀察顏色的變化。HPLC 定量法儀器和色譜條件=Waters 2695分離單元+Alltech ELSD3300蒸發(fā)光散射檢測器； Masslynx 4. 0色譜工作站；色譜柱Kromasil C18柱(25(toimX 4. 6讓，5 μ m)；流動相甲醇/ 水(v/v)，梯度洗脫；柱溫30°C ；流速lmL/min;進樣量20yL;蒸發(fā)光散射檢測器漂移管的溫度40°C，氮氣流速1. 5L/min，檢測靈敏度2。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)比較，是利用魔芋飛粉為原料，通過硅膠柱層析技術(shù)聯(lián)合中壓 C18鍵合硅膠柱層析技術(shù)制備高純度的神經(jīng)酰胺。該工藝生產(chǎn)成本低，適合工業(yè)化生產(chǎn)。


附圖為魔芋飛粉神經(jīng)酰胺制備工藝流程圖。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步詳細的描述，但發(fā)明的實施方式不限于此。實施例1(1)神經(jīng)酰胺的粗提取魔芋飛粉IOOg于三口平底燒瓶中，加入300mL 75%乙醇溶液，連接好冷凝管， 磁力攪拌提取lh，同時用電接點溫度計控制溫度為50士 1°C，提取完畢，過濾，將神經(jīng)酰胺的乙醇提取液轉(zhuǎn)移至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中進行濃縮至乙醇濃度為10%，將濃縮液轉(zhuǎn)移至干凈的三口平底燒瓶中，按濃縮液體積加入2倍量的60 90°C石油醚，攪拌0.證，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中靜置0. 5h，分層后收集上層的醚相，萃取2次。合并醚相，回收石油醚濃縮至浸膏，得棕色的神經(jīng)酰胺樣品I，重量為1. 31g ；(2)硅膠柱層析純化按上樣量為1 5g粗品/IOOg硅膠，稱取300 400目硅膠IOOg于105 110°C 活化lh，然后將活化好的硅膠放入容器中，并加入適量的石油醚，順著固定方向攪拌，待硅膠中沒有氣泡時，濕法裝入硅膠色譜柱中，硅膠柱為40*190mm，柱體積約為250mL。然后用初始洗脫劑500mL以8mL/min的流速平衡層析柱。將上述的神經(jīng)酰胺粗品I用初始流動相溶解后濕法上樣，分別用石油醚-乙酸乙酯(ν/ν)95 5、85 15,75 25,60 40,40 60 為洗脫劑進行梯度洗脫，95 5 和 85 15兩種洗脫劑使用量各為1BV，后三種洗脫劑的使用量各為2BV，分步收集流出液，洗脫速度為2BV/h，用TLC檢測流出液，合并具有相同成份的流出液，回收溶劑，干燥得神經(jīng)酰胺樣品II，重量為0. 22g。硅膠層析柱經(jīng)甲醇再生后可重復(fù)使用；(3)中壓C18鍵合硅膠柱層析純化神經(jīng)酰胺按上樣量為0. 1 0. 5g樣品/IOOg C18鍵合硅膠，稱取C18鍵合硅膠100g，用初始流動相進行浸泡，并且攪拌，待硅膠中沒有氣泡時，濕法裝入中壓色譜柱中。然后用加壓裝置進行壓縮，使壓縮后的C18鍵合硅膠柱在正常流速下的工作壓力為lobar，并用初始洗脫劑平衡層析柱。將上述的神經(jīng)酰胺樣品II用初始洗脫劑溶解，濕法上樣，以乙醇-水(V/V)90%、 75%、60%，為洗脫劑進行梯度洗脫，每種洗脫劑的量為500mL，分步收集流出液，洗脫速度為4mL/min，用TLC檢測流出液，合并具有相同成份的流出液，回收溶劑，干燥得神經(jīng)酰胺樣品III。經(jīng)HPLC-ELSD檢測，神經(jīng)酰胺樣品III的純度可以到達95. 0%，重量為0. 061g。其它低含量的神經(jīng)酰胺樣品重新上柱進行回收利用。中壓C18鍵合硅膠層析柱經(jīng)甲醇再生后可重復(fù)使用。實施例2(1)神經(jīng)酰胺的粗提取魔芋飛粉IOOg于三口平底燒瓶中，加入400mL 85%乙醇溶液，連接好冷凝管， 磁力攪拌提取1. 5h，同時用電接點溫度計控制溫度為60士 1°C，提取完畢，過濾，將神經(jīng)酰胺的乙醇提取液轉(zhuǎn)移至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中進行濃縮至乙醇濃度為10%，將濃縮液轉(zhuǎn)移至干凈的三口平底燒瓶中，按濃縮液體積加入3倍量的60 90°C石油醚，攪拌1. 0h，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中靜置0. 5h，分層后收集上層的醚相，萃取2次。合并醚相，回收石油醚濃縮至浸膏，得棕色的神經(jīng)酰胺樣品I，重量為1. 29g ；(2)硅膠柱層析純化按上樣量為1 5g粗品/IOOg硅膠，稱取300 400目硅膠于105 110°C活化 1.5h，然后將活化好的硅膠放入容器中，并加入適量的石油醚，順著固定方向攪拌，待硅膠中沒有氣泡時，濕法裝入中壓色譜柱中，硅膠柱為40*190mm，柱體積約為250mL。然后用初始洗脫劑500mL以lOmL/min的流速平衡層析柱。將上述的神經(jīng)酰胺粗品I用初始流動相溶解后濕法上樣，分別用石油醚-乙酸乙酯(ν/ν)95 5、85 15,75 25,60 40,40 60 為洗脫劑進行梯度洗脫，95 5 和 85 15兩種洗脫劑使用量各為1BV，后三種洗脫劑的使用量各為2BV，分步收集流出液，洗脫速度為3BV/h，用TLC檢測流出液，合并具有相同成份的流出液，回收溶劑，干燥得神經(jīng)酰胺樣品II，重量為0. 19g。硅膠層析柱經(jīng)甲醇再生后可重復(fù)使用；(3)中壓C18鍵合硅膠柱層析純化神經(jīng)酰胺按上樣量為0. 1 0. 5g樣品/IOOg C18鍵合硅膠，稱取C18鍵合硅膠100g，用初始流動相進行浸泡，并且攪拌，待硅膠中沒有氣泡時，濕法裝入中壓色譜柱中。然后用加壓裝置進行壓縮，使壓縮后的C18鍵合硅膠柱在正常流速下的工作壓力為12bar，并用初始洗脫劑平衡層析柱。將上述的神經(jīng)酰胺樣品II用初始洗脫劑溶解，濕法上樣，以乙醇-水(v/v)90%、 75%、60%，為洗脫劑進行梯度洗脫，每種洗脫劑的量為550mL，分步收集流出液，洗脫速度為5mL/min，用TLC檢測流出液，合并具有相同成份的流出液，回收溶劑，干燥得神經(jīng)酰胺樣品III。經(jīng)HPLC-ELSD檢測，神經(jīng)酰胺樣品III的純度可以到達95. 7%，重量為0. 072g。其它低含量的神經(jīng)酰胺樣品重新上柱進行回收利用。中壓C18鍵合硅膠層析柱經(jīng)甲醇再生后可重復(fù)使用。實施例3(1)神經(jīng)酰胺的粗提取魔芋飛粉IOOg于三口平底燒瓶中，加入500mL 90%乙醇溶液，連接好冷凝管， 磁力攪拌提取1. 5h，同時用電接點溫度計控制溫度為70士 1°C，提取完畢，過濾，將神經(jīng)酰胺的乙醇提取液轉(zhuǎn)移至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中進行濃縮至乙醇濃度為5%，將濃縮液轉(zhuǎn)移至干凈的三口平底燒瓶中，按濃縮液體積加入4倍量的60 90°C石油醚，攪拌1. 0h，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中靜置0. 5h，分層后收集上層的醚相，萃取2次。合并醚相，回收石油醚濃縮至浸膏，得棕色的神經(jīng)酰胺樣品I，重量為1. 35g ；(2)硅膠柱層析純化按上樣量為1 5g粗品/IOOg硅膠，稱取300 400目硅膠于105 110°C活化 1.5h，然后將活化好的硅膠放入容器中，并加入適量的石油醚，順著固定方向攪拌，待硅膠中沒有氣泡時，濕法裝入中壓色譜柱中，硅膠柱為40*190mm，柱體積約為250mL。然后用初始洗脫劑500mL以9mL/min的流速平衡層析柱。將上述的神經(jīng)酰胺粗品I用初始流動相溶解后濕法上樣，分別用石油醚-乙酸乙酯(ν/ν)95 5、85 15,75 25,60 40,40 60 為洗脫劑進行梯度洗脫，95 5 和85 15兩種洗脫劑使用量各為1BV，后三種洗脫劑的使用量各為2BV，分步收集流出液，洗脫速度為4BV/h，用TLC檢測流出液，合并具有相同成份的流出液，回收溶劑，干燥得神經(jīng)酰胺樣品II，重量為0. 20g。硅膠層析柱經(jīng)甲醇再生后可重復(fù)使用；(3)中壓C18鍵合硅膠柱層析純化神經(jīng)酰胺按上樣量為0. 1 0. 5g樣品/IOOg C18鍵合硅膠，稱取C18鍵合硅膠100g，用初始流動相進行浸泡，并且攪拌，待硅膠中沒有氣泡時，濕法裝入中壓色譜柱中。然后用加壓裝置進行壓縮，使壓縮后的C18鍵合硅膠柱在正常流速下的工作壓力為16bar，并用初始洗脫劑平衡層析柱。將上述的神經(jīng)酰胺樣品II用初始洗脫劑溶解，濕法上樣，以乙醇-水(V/V)90%、 75%、60%，為洗脫劑進行梯度洗脫，每種洗脫劑的量為600mL，分步收集流出液，洗脫速度為5mL/min，用TLC檢測流出液，合并具有相同成份的流出液，回收溶劑，干燥得神經(jīng)酰胺樣品III。經(jīng)HPLC-ELSD檢測，神經(jīng)酰胺樣品III的純度可以到達95. 2%，重量為0. 064g。其它低含量的神經(jīng)酰胺樣品重新上柱進行回收利用。中壓C18鍵合硅膠層析柱經(jīng)甲醇再生后可重復(fù)使用。實施例4(1)神經(jīng)酰胺的粗提取魔芋飛粉IOOg于三口平底燒瓶中，加入400mL 95%乙醇溶液，連接好冷凝管， 磁力攪拌提取1. 5h，同時用電接點溫度計控制溫度為80士 1°C，提取完畢，過濾，將神經(jīng)酰胺的乙醇提取液轉(zhuǎn)移至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中進行濃縮至乙醇濃度為20%，將濃縮液轉(zhuǎn)移至干凈的三口平底燒瓶中，按濃縮液體積加入4倍量的60 90°C石油醚，攪拌1. 0h，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中靜置0. 5h，分層后收集上層的醚相，萃取2次。合并醚相，回收石油醚濃縮至浸膏，得棕色的神經(jīng)酰胺樣品I，重量為1. 28g ；(2)硅膠柱層析純化按上樣量為1 5g粗品/IOOg硅膠，稱取300 400目硅膠于105 110°C活化 1.5h，然后將活化好的硅膠放入容器中，并加入適量的石油醚，順著固定方向攪拌，待硅膠中沒有氣泡時，濕法裝入中壓色譜柱中，硅膠柱為40*190mm，柱體積約為250mL。然后用初始洗脫劑500mL以SmL/min的流速平衡層析柱。將上述的神經(jīng)酰胺粗品I用初始流動相溶解后濕法上樣，分別用石油醚-乙酸乙酯(ν/ν)95 5、85 15,75 25,60 40,40 60 為洗脫劑進行梯度洗脫，95 5 和 85 15兩種洗脫劑使用量各為1BV，后三種洗脫劑的使用量各為2BV，分步收集流出液，洗脫速度為4BV/h，用TLC檢測流出液，合并具有相同成份的流出液，回收溶劑，干燥得神經(jīng)酰胺樣品II，重量為0. 21g。硅膠層析柱經(jīng)甲醇再生后可重復(fù)使用；(3)中壓C18鍵合硅膠柱層析純化神經(jīng)酰胺按上樣量為0. 1 0. 5g樣品/IOOg C18鍵合硅膠，稱取C18鍵合硅膠100g，用初始流動相進行浸泡，并且攪拌，待硅膠中沒有氣泡時，濕法裝入中壓色譜柱中。然后用加壓裝置進行壓縮，使壓縮后的C18鍵合硅膠柱在正常流速下的工作壓力為20bar，并用初始洗脫劑平衡層析柱。將上述的神經(jīng)酰胺樣品II用初始洗脫劑溶解，濕法上樣，以乙醇-水(v/v)90%、 75%、60%，為洗脫劑進行梯度洗脫，每種洗脫劑的量為600mL，分步收集流出液，洗脫速度為6mL/min，用TLC檢測流出液，合并具有相同成份的流出液，回收溶劑，干燥得神經(jīng)酰胺樣品III。經(jīng)HPLC-ELSD檢測，神經(jīng)酰胺樣品III的純度可以到達95. 1%，重量為0. 076g。其它低含量的神經(jīng)酰胺樣品重新上柱進行回收利用。中壓C18鍵合硅膠層析柱經(jīng)甲醇再生后可重復(fù)使用。
權(quán)利要求
1.一種從魔芋飛粉中制備神經(jīng)酰胺的方法，其特征在于包括如下操作步驟(a)神經(jīng)酰胺的粗提以魔芋飛粉為原料，用乙醇溶液提取，提取完畢后過濾，濃縮，回收乙醇，然后將濃縮液用石油醚萃取2次，合并石油醚相，回收石油醚得棕色的神經(jīng)酰胺浸膏，即神經(jīng)酰胺樣品I ；(b)硅膠柱層析純化將硅膠濕法裝柱，并用初始洗脫劑平衡層析柱；神經(jīng)酰胺樣品I 用初始洗脫劑溶解，濕法上樣；用石油醚-乙酸乙酯為洗脫劑進行梯度洗脫，分步收集流出液，用TLC檢測流出液，合并具有相同成份的流出液，回收溶劑，干燥得神經(jīng)酰胺樣品II (c)中壓C18鍵合硅膠ODS柱層析純化將C18鍵合硅膠濕法裝柱，用加壓裝置進行壓縮，并用初始洗脫劑平衡層析柱；將上述的神經(jīng)酰胺樣品II用初始洗脫劑進行溶解，濕法上樣；用乙醇-水為洗脫劑進行梯度洗脫，分步收集流出液，用TLC檢測流出液，合并具有相同成份的流出液，回收溶劑，干燥得神經(jīng)酰胺樣品III ；經(jīng)HPLC-ELSD檢測，神經(jīng)酰胺樣品 III的純度可以到達95%以上。
2.按照權(quán)利要求1所述的一種從魔芋飛粉中制備神經(jīng)酰胺的方法，其特征在于所述的步驟(a)中(a)神經(jīng)酰胺的粗提以魔芋飛粉為原料，用濃度為75% 95%乙醇溶液提取，料液比為固液比魔芋飛粉乙醇溶液1 3 5，提取的溫度為60 80°C，提取時間為1 2h; 提取完畢后過濾，濃縮，回收乙醇，然后將濃縮液用60 90°C餾分石油醚萃取2次，攪拌時間為0.5 1.5h，靜置時間為0.5h，料液比為體積比濃縮液石油醚1 2 4，合并石油醚相，回收石油醚得棕色的神經(jīng)酰胺浸膏，即神經(jīng)酰胺樣品I。
3.按照權(quán)利要求1所述的一種從魔芋飛粉中制備神經(jīng)酰胺的方法，其特征在于所述的步驟(b)中(b)硅膠柱層析純化將300 400目硅膠活化，活化溫度為105 110°C，活化時間為1 池；硅膠濕法裝柱后，用初始洗脫劑平衡層析柱；神經(jīng)酰胺樣品I用初始洗脫劑溶解，濕法上樣；上樣量為1 5g粗品/IOOg硅膠；，然后用石油醚-乙酸乙酯為洗脫劑進行梯度洗脫，洗脫劑石油醚-乙酸乙酯的體積比分別為95 5、85 15,75 25,60 40、 40 60，其中95 5和85 15兩種洗脫劑使用量各為1BV，后三種洗脫劑的使用量各為 2BV，分步收集流出液，洗脫速度為2 4BV/h，用TLC檢測流出液，合并具有相同成份的流出液，回收溶劑，干燥得神經(jīng)酰胺樣品II。
4.按照權(quán)利要求1所述的一種從魔芋飛粉中制備神經(jīng)酰胺的方法，其特征在于所述的步驟(c)中(c)中壓C18鍵合硅膠ODS柱層析純化稱取適量的C18鍵合硅膠用初始流動相進行浸泡，并且攪拌，待硅膠中沒有氣泡時，濕法裝入中壓色譜柱中；然后用加壓裝置進行壓縮，使壓縮后的C18鍵合硅膠柱在正常流速下的工作壓力為5 20bar，并用初始洗脫劑平衡層析柱；將上述的神經(jīng)酰胺樣品II用初始洗脫劑進行溶解，濕法上樣，上樣量為0. 1 0. 5g樣品/IOOg C18鍵合硅膠；用乙醇-水為洗脫劑進行梯度洗脫，洗脫劑乙醇-水的體積比分別 ^ 90%,75%,60%,每種洗脫劑的量為2 2. 5BV,洗脫速度為1 1. 5BV/h,用TLC檢測流出液，分步收集流出液，合并具有相同成份的流出液，回收溶劑，干燥得神經(jīng)酰胺樣品III ； 經(jīng)HPLC-ELSD檢測，神經(jīng)酰胺樣品III的純度可以到達95%以上。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從魔芋飛粉中制備神經(jīng)酰胺的方法，其特征在于包括如下操作步驟a)神經(jīng)酰胺的粗提以魔芋飛粉為原料，用乙醇溶液提取，然后用石油醚萃?。籦)硅膠柱層析純化將硅膠濕法裝柱，濕法上樣，用石油醚-乙酸乙酯為洗脫劑進行梯度洗脫；c)中壓C18鍵合硅膠ODS柱層析純化濕法裝柱，濕法上樣；用乙醇-水為洗脫劑進行梯度洗脫，干燥得純度95％以上神經(jīng)酰胺。該工藝生產(chǎn)成本低，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號C07C231/24GK102351730SQ20111032796
公開日2012年2月15日 申請日期2011年10月22日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月22日
發(fā)明者向極釬, 吳昊, 張亮, 李亞杰, 楊永康, 殷紅清, 程新華, 郭光耀, 龍瀾 申請人:恩施清江生物工程有限公司