專利名稱：四環(huán)素半抗原及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種半抗原及其制備方法和應(yīng)用，具體涉及四環(huán)素半抗原及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
四環(huán)素類藥物(TCs)具有廣譜高效的殺菌抗生功效，可以與大多數(shù)藥物或飼料添加劑混用，已被廣泛應(yīng)用于畜禽生產(chǎn)中。但過量使用不可避免的造成了嚴(yán)重的藥物殘留，成為嚴(yán)重危害人類健康的食品安全隱患之一。為此世界各國(guó)對(duì)TCs殘留的檢測(cè)十分關(guān)注。歐盟第675/92號(hào)令中初步規(guī)定在肌肉及牛奶中的四環(huán)素族化合物的總量不得超過100μg/kg,在腎臟、肝臟及雞蛋中分別不得超過600 μ g/kg>300 μ g/kg及200 μ g/kg。日本肯定列表制度規(guī)定奶和雞蛋中四環(huán)素類化合物的總量分別不得超過100ng/mL和400ng/mg。已報(bào)道的四環(huán)素類藥物殘留的檢測(cè)方法有微生物法、薄層色譜法、高效液相測(cè)定法、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、毛細(xì)管電泳、電化學(xué)分析、化學(xué)發(fā)光、酶聯(lián)免疫法等，儀器檢測(cè)方法對(duì)待測(cè)樣品的前處理要求高，操作繁瑣，需要精密儀器設(shè)備。免疫學(xué)方法具有快速、靈敏、特異性高等特點(diǎn)，是藥品殘留檢測(cè)的有效方法之一。目前常采用酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒對(duì)大量樣品進(jìn)行四環(huán)素類藥物殘留的初篩，篩選陽(yáng)性樣品再用儀器方法進(jìn)行進(jìn)一步確證。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種四環(huán)素半抗原及其制備方法。本發(fā)明提供的四環(huán)素半抗原分子結(jié)構(gòu)式為:
O' C
權(quán)利要求
1.一種四環(huán)素半抗原，其特征在于分子結(jié)構(gòu)式為:
2.一種制備權(quán)利要求1所述四環(huán)素半抗原的方法，其特征在于四環(huán)素半抗原是通過四環(huán)素與4-哌啶甲酸利用曼尼希反應(yīng)，在四環(huán)素的酰胺的胺基上引入了 N-甲基-4-哌啶甲酸基團(tuán)所得到的衍生物。
3.一種四環(huán)素類藥物抗原，其是由權(quán)利要求1所述的四環(huán)素半抗原與載體蛋白偶聯(lián)得至IJ，其特征在于分子結(jié)構(gòu)式為:
4.如權(quán)利要求3所述的四環(huán)素類藥物抗原，其制備方法包括如下步驟: 取四環(huán)素半抗原用二甲基甲酰胺(DMF)溶解，冷卻至10°C，加入氯甲酸異丁酯，10°C攪拌反應(yīng)30min，得到溶液A ;取偶聯(lián)的載體蛋白用50mmol/L Na2CO3溶解，與溶液A混合，10°C反應(yīng)4h，然后4°C過夜，得到溶液B ;溶液B用0.01mol/L磷酸鹽緩沖溶液(PBS) 4°C透析3天，每天換3次透析液，以除去未反應(yīng)的小分子物質(zhì)，得到免疫原，分裝，于-20°C保存?zhèn)溆谩?br> 取四環(huán)素半抗原溶解于DMF中；取碳化二亞胺(EDC)用0.2ml水充分溶解后加入上述溶液中，室溫下攪拌24h，即可得到反應(yīng)液A ;稱取偶聯(lián)的載體蛋白使之充分溶解在PBS (pH7.2)中，將反應(yīng)液A逐滴緩慢滴加到蛋白溶液中，并于室溫下攪拌24h，得到反應(yīng)液B ;反應(yīng)液B用0.01mol/L PBS 4°C透析3天,每天換3次透析液，以除去未反應(yīng)的小分子物質(zhì),得到包被原，分裝，于-20°C保存?zhèn)溆谩?br> 5.一種四環(huán)素類藥物抗體，其是由四環(huán)素類藥物免疫原免疫動(dòng)物制備得到。
6.如權(quán)利要求5所述的抗體，其特征在于所述抗體為四環(huán)素類藥物單克隆抗體。
7.一種由權(quán)利要求5-6任一項(xiàng)所述的抗體制備的四環(huán)素類藥物酶聯(lián)免疫試劑盒。
8.如權(quán)利要求7所述的四環(huán)素類藥物酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于:四環(huán)素類藥物為四環(huán)素、金霉素、土霉素、強(qiáng)力霉素、米諾環(huán)素、去甲金霉素、吡甲四環(huán)素。
9.一種四環(huán)素類藥物酶聯(lián)免疫試劑盒檢測(cè)動(dòng)物源性食品中四環(huán)素類藥物殘留的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種四環(huán)素半抗原及其制備方法和應(yīng)用，具體涉及一種四環(huán)素半抗原，四環(huán)素半抗原是通過四環(huán)素與4-哌啶甲酸利用曼尼希反應(yīng)，在四環(huán)素的酰胺的胺基上引入了N-甲基-4-哌啶甲酸基團(tuán)所得到的衍生物。本發(fā)明還公開了所述半抗原的制備方法及其應(yīng)用?；谒沫h(huán)素半抗原建立的試劑盒快速檢測(cè)產(chǎn)品，能夠同時(shí)快速檢測(cè)動(dòng)物源性食品中多種四環(huán)素類藥物，使用方便、檢測(cè)成本低、檢測(cè)方法高效、準(zhǔn)確、快速、可同時(shí)檢測(cè)大批量的樣本，適于動(dòng)物源性食品中四環(huán)素類藥物殘留的現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)控和大量樣本的篩查。
文檔編號(hào)C07K14/765GK103102300SQ20111035649
公開日2013年5月15日 申請(qǐng)日期2011年11月11日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月11日
發(fā)明者何方洋, 馮才偉, 孫震, 吳鵬, 趙正苗, 陳煒玲, 劉琳 申請(qǐng)人:北京勤邦生物技術(shù)有限公司