專利名稱：一種分離純化積雪草三萜酸單葡萄糖苷的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬天然藥物領(lǐng)域，涉及一種以積雪草三萜酸單葡萄糖苷粗品為原料分離純化多種積雪草三萜酸單葡萄糖苷的方法。
背景技術(shù)：
積雪草(Centella asiatica(L. )Urb)又稱落得打、崩大碗、半邊錢，為傘形科積雪草屬植物，其始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為中品。其性寒，味苦、辛，具有清熱利濕、解毒消腫之功效，主要用于濕熱黃疸，中暑腹瀉，砂淋血淋，癰腫瘡毒，跌打損傷。積雪草是民間廣東地區(qū)常用中草藥，利用積雪草外用及內(nèi)服治病在我國(guó)已有兩千多年歷史?，F(xiàn)代研究表明， 積雪草具有抗菌消炎、抗抑郁、抗腫瘤、促進(jìn)創(chuàng)傷愈合和治療增生性瘢痕的作用，積雪草提取物對(duì)硬皮病及燒傷瘢痕等纖維化疾病有明顯的療效，能有效地促進(jìn)傷口愈合。積雪草通過(guò)增加角質(zhì)化細(xì)胞中MCP-I的表達(dá)從而促進(jìn)VEGF的生成，同時(shí)促進(jìn)MCP-I巨噬細(xì)胞生成 IL-I β，提高燒傷處血管的生成而達(dá)到治療燒傷的目的。積雪草主要含積雪草苷(asiaticoside)、羥基積雪草苷(madecassoside)、積雪草苷B(asiaticoside B)、積雪草二糖苷(asiaticodiglycoside)、羥基積雪草二糖苷 (centeIlasaponin B) >scheffoleoside A>centeIlasaponin B、禾只雪草酸(asiatic acid) 和羥基積雪草酸(brahmic acid)等化學(xué)成分。中國(guó)發(fā)明專利201110234306. X公開了一種使用葡萄糖苷酶或能產(chǎn)生葡萄糖苷酶的微生物轉(zhuǎn)化積雪草提取物中的三糖苷和二糖苷生成單糖苷組合物的方法及其轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的含量測(cè)定方法，該積雪草三萜酸單葡萄糖苷組合物主要包含積雪草酸單葡萄糖苷(asiatic acid-28-0-^-D glucopyranoside)、切布苷l(shuí)Kchebuloside II)和羥基積雪草酸單葡萄糖苷(centelloside C)。β -葡萄糖苷酶以及能產(chǎn)生β -葡萄糖苷酶的微生物還能水解積雪草苷、羥基積雪草苷、積雪草二糖苷、羥基積雪草二糖苷、scheffoleoside和Acentellasaponin B生成積雪草酸單葡萄糖苷、切布苷II和羥基積雪草酸單葡萄糖苷等積雪草三萜酸單葡萄糖苷粗品。至今為止，還未見有從積雪草三萜酸單葡萄糖苷粗品中分離純化積雪草酸單葡萄糖苷、切布苷II和羥基積雪草酸單葡萄糖苷等積雪草三萜酸單葡萄糖苷的研究報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在提供一種積雪草三萜酸單葡萄糖苷的制備方法，即以積雪草三萜酸單葡萄糖苷粗品為原料，經(jīng)柱層析得到切布苷II、羥基積雪草酸單葡萄糖苷和積雪草酸單葡萄糖苷。積雪草三萜酸單葡萄糖苷粗品包括積雪草三萜酸單葡萄糖苷組合物以及含有切布苷II、羥基積雪草酸單葡萄糖苷和積雪草酸單葡萄糖苷中一種或一種以上成分的混合物，取所述積雪草三萜酸單葡萄糖苷粗品進(jìn)行柱層析，用含有β -環(huán)糊精的流動(dòng)相洗脫，分別收集流份，濃縮干燥，即得積雪草酸單葡萄糖苷、切布苷II和羥基積雪草酸單葡萄糖苷。本發(fā)明的方法包括ODS Cw柱層析和硅膠與ODS Cw組合柱層析兩種，具體步驟如
4下(1)將積雪草酸單葡萄糖苷粗品溶解或混懸于溶劑中，溶劑與積雪草酸單葡萄糖苷粗品的用量比為0. 5_5mL/g，溶劑為甲醇、乙醇或甲醇與乙醇的混合溶液；(2)上樣于粗品重量30-300倍的ODS Cw層析柱的上端，用質(zhì)量百分濃度為 0. 05% -2% β -環(huán)糊精溶液洗脫；所述β -環(huán)糊精溶液以水和有機(jī)溶劑混合物為溶劑；所述有機(jī)溶劑與水體積比為1 1 1 10;有機(jī)溶劑為甲醇、乙醇、乙腈中的至少一種；(3)分別收集切布苷II、羥基積雪草酸單葡萄糖苷和積雪草酸單葡萄糖苷的流份，40-7(TC減壓濃縮至干即得切布苷II、羥基積雪草酸單葡萄糖苷和積雪草酸單葡萄糖苷。取所得切布苷II、羥基積雪草酸單葡萄糖苷和積雪草酸單葡萄糖苷分別用體積含量40% 100%的醇溶液重結(jié)晶1 3次，并干燥，即得切布苷II、羥基積雪草酸單葡萄糖苷和積雪草酸單葡萄糖苷純品；所述的醇為甲醇、乙醇或甲醇與乙醇的混合物?；?，硅膠與ODS C18組合柱層析法，包括以下步驟(1)硅膠柱層析將積雪草酸單葡萄糖苷粗品溶解或混懸于溶劑，溶劑與積雪草酸單葡萄糖苷粗品的用量比為0. 5-5mL/g，溶劑為甲醇、乙醇或甲醇與乙醇的混合溶液；加入粗品重量0. 5-2倍量硅膠，攪拌均勻，揮干溶劑，碾碎成均勻細(xì)顆粒，上樣于該粗品重量50-200倍量硅膠柱的上端，用氯仿甲醇或乙醇體積比為10 1-10 5的洗脫液洗脫，收集積雪草酸單葡萄糖苷流份；再用氯仿甲醇或乙醇水的體積比為10 (1 5) (0. 05 0. 5)的洗脫液洗脫，收集羥基積雪草酸單葡萄糖苷和切布苷II混合物流份；兩個(gè)流份分別于40-70°C減壓濃縮至干，即得積雪草酸單葡萄糖苷以及羥基積雪草酸單葡萄糖苷和切布苷II混合物；(2)ODS C18柱層析將羥基積雪草酸單葡萄糖苷和切布苷II混合物溶解于溶劑， 溶劑與羥基積雪草酸單葡萄糖苷和切布苷II混合物的用量比為0. 5-5mL/g，溶劑為甲醇、 乙醇或甲醇與乙醇的混合溶液，上樣于粗品重量30-300倍的ODS C18層析柱的上端，用質(zhì)量百分濃度為0. 05% -2% β -環(huán)糊精溶液洗脫；所述β -環(huán)糊精溶液以有機(jī)溶劑和水的混合物為溶劑；所述有機(jī)溶劑與水體積比為1 1 1 10;有機(jī)溶劑為甲醇、乙醇、乙腈中的至少一種；分別收集切布苷II和羥基積雪草酸單葡萄糖苷的流份，40-70°C減壓濃縮至干， 即得切布苷II和羥基積雪草酸單葡萄糖苷。所得切布苷II、羥基積雪草酸單葡萄糖苷和積雪草酸單葡萄糖苷還可進(jìn)行一步結(jié)晶純化步驟取步驟(1)和( 所得積雪草酸單葡萄糖苷、切布苷II和羥基積雪草酸單葡萄糖苷，分別用體積含量40% 100%醇溶液重結(jié)晶1 3次并干燥即得切布苷II、羥基積雪草酸單葡萄糖苷和積雪草酸單葡萄糖苷純品；所述的醇為甲醇、乙醇或甲醇與乙醇的混合物。以上積雪草三萜酸單葡萄糖苷的制備方法，其硅膠柱層析和ODS C18柱層析均包括半制備型和制備型液相色譜層析系統(tǒng)。采用本發(fā)明的上述技術(shù)方案，可以從積雪草三萜酸單葡萄糖苷粗品中分離出積雪草三萜酸單葡萄糖苷純品，其純度超過(guò)95% ；而且本發(fā)明的方法操作簡(jiǎn)單，成本較低，適于大規(guī)模生產(chǎn)應(yīng)用。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。這些實(shí)施例應(yīng)理解為僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。在閱讀了本發(fā)明記載的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等效變化和修飾同樣落入本發(fā)明權(quán)利要求所限定的范圍。實(shí)施例1將積雪草酸單葡萄糖苷組合物Ig溶解或混懸于0. 5mL甲醇，采用配置有30g ODS C18柱的半制備型液相色譜儀進(jìn)行層析，用含有質(zhì)量百分比為0.05% 環(huán)糊精的甲醇水溶液洗脫，其中甲醇水體積比為1 2，分別收集切布苷II、羥基積雪草酸單葡萄糖苷和積雪草酸單葡萄糖苷的流份，40°C減壓濃縮至干，加入50%甲醇水溶液，加熱溶解成飽和溶液，冷卻結(jié)晶，重結(jié)晶1次，即得切布苷II、羥基積雪草酸單葡萄糖苷和積雪草酸單葡萄糖苷。HPLC測(cè)定含量，結(jié)果切布苷II、羥基積雪草酸單葡萄糖苷和積雪草酸單葡萄糖苷的質(zhì)量百分含量分別為97. 6%、96. 3%和94. 1%。實(shí)施例2將積雪草酸單葡萄糖苷組合物IOg溶解或混懸于50mL甲醇，采用配置有2kg ODS C18柱的制備型液相色譜儀進(jìn)行層析，用含有質(zhì)量百分比為0. 4%的β -環(huán)糊精的甲醇水溶液洗脫，其中甲醇水體積比為1 4，分別收集切布苷II、羥基積雪草酸單葡萄糖苷和積雪草酸單葡萄糖苷的流份，40°C減壓濃縮至干，加入50%甲醇水溶液，加熱溶解成飽和溶液，冷卻結(jié)晶，重結(jié)晶2次，即得切布苷II、羥基積雪草酸單葡萄糖苷和積雪草酸單葡萄糖苷。HPLC測(cè)定含量，結(jié)果切布苷II、羥基積雪草酸單葡萄糖苷和積雪草酸單葡萄糖苷的質(zhì)量百分含量分別為98. 6%、98. 3%和98. 1%。實(shí)施例3將積雪草酸單葡萄糖苷組合物IOg溶解或混懸于30mL甲醇，采用配置有3kg ODS C18柱的制備型液相色譜儀進(jìn)行層析，用含有質(zhì)量百分比為0. 4%的β -環(huán)糊精的乙醇水溶液洗脫，其中乙醇水體積比為1 4，分別收集切布苷II、羥基積雪草酸單葡萄糖苷和積雪草酸單葡萄糖苷的流份，60°C減壓濃縮至干，加入50 %乙醇水溶液，加熱溶解成飽和溶液，冷卻結(jié)晶，重結(jié)晶3次，即得切布苷II、羥基積雪草酸單葡萄糖苷和積雪草酸單葡萄糖苷。HPLC測(cè)定含量，結(jié)果積雪草酸單葡萄糖苷、羥基積雪草酸單葡萄糖苷和切布苷II 的質(zhì)量百分含量分別為98. 3%,97. 3%和99. 1%0實(shí)施例4稱取積雪草三萜酸單葡萄糖苷粗品100g，置坩堝中，加入50mL甲醇，攪拌溶解，加入50g薄層層析硅膠，攪拌均勻，室溫?fù)]干甲醇，攪拌碾碎使硅膠顆粒分散均勻，加入到一個(gè)預(yù)先裝好2. 5kg硅膠Q00-300目)的半制備型玻璃層析柱上端，用氯仿甲醇體積比為
610 1的洗脫液常壓洗脫，收集積雪草酸單葡萄糖苷流份；再用氯仿甲醇水的體積比為10 1 0.05的洗脫液洗脫，收集羥基積雪草酸單葡萄糖苷和切布苷II混合物流份， 40°C減壓濃縮、干燥，粉碎，即得切布苷II和羥基積雪草酸單葡萄糖苷混合物。將切布苷II和羥基積雪草酸單葡萄糖苷混合物溶解或混懸于30mL甲醇，上樣于 3kg的ODS Cw層析柱的上端，用含有質(zhì)量百分比為0.05% β-環(huán)糊精的甲醇水溶液常壓洗脫，其中甲醇水體積比為1 1，分別收集切布苷II和羥基積雪草酸單葡萄糖苷的流份。分別將切布苷II、羥基積雪草酸單葡萄糖苷和積雪草酸單葡萄糖苷的流份于 40°C減壓濃縮至干，加入甲醇加熱溶解成飽和溶液，冷卻結(jié)晶，重結(jié)晶1次，干燥，粉碎，即得切布苷II、羥基積雪草酸單葡萄糖苷和積雪草酸單葡萄糖苷。HPLC測(cè)定含量，結(jié)果切布苷II、羥基積雪草酸單葡萄糖苷和積雪草酸單葡萄糖苷的質(zhì)量百分含量分別為97. 2%,96. 7%和95. 9%。實(shí)施例5稱取積雪草三萜酸單葡萄糖苷粗品100g，置坩堝中，加入200mL甲醇，攪拌溶解， 加入IOOg薄層層析硅膠，攪拌均勻，室溫?fù)]干甲醇，攪拌碾碎使硅膠顆粒分散均勻，加入到一個(gè)預(yù)先裝好5kg硅膠Q00-300目)的半制備型不銹鋼層析柱上端，用氯仿甲醇體積比為10 3的洗脫液洗脫，收集積雪草酸單葡萄糖苷流份；再用氯仿甲醇水的體積比為 10 3 0.2的洗脫液洗脫，收集羥基積雪草酸單葡萄糖苷和切布苷II混合物流份，50°C 減壓濃縮、干燥，粉碎，即得切布苷II和羥基積雪草酸單葡萄糖苷混合物。將羥基積雪草酸單葡萄糖苷和切布苷II混合物溶解或混懸于120mL甲醇，上樣于 IOkg的ODS C18層析柱的上端，用含有質(zhì)量百分比為0.4% β-環(huán)糊精的甲醇水溶液洗脫， 其中甲醇水體積比為1 3，分別收集切布苷II和羥基積雪草酸單葡萄糖苷的流份。分別將積雪草酸單葡萄糖苷、切布苷II和羥基積雪草酸單葡萄糖苷的流份于 50°C減壓濃縮至干，加入甲醇加熱溶解成飽和溶液，冷卻結(jié)晶，重結(jié)晶2次，干燥，粉碎，即得切布苷II、羥基積雪草酸單葡萄糖苷和積雪草酸單葡萄糖苷。HPLC測(cè)定含量，結(jié)果積雪草酸單葡萄糖苷、羥基積雪草酸單葡萄糖苷和切布苷II 的質(zhì)量百分含量分別為98. 2%、98. 7%和98. 9%。實(shí)施例6稱取積雪草三萜酸單葡萄糖苷粗品100g，置坩堝中，加入500mL乙醇，攪拌溶解， 加入200g薄層層析硅膠，攪拌均勻，室溫?fù)]干甲醇，攪拌碾碎使硅膠顆粒分散均勻，加入到一個(gè)預(yù)先裝好20kg硅膠Q00-300目)的制備型玻璃層析柱上端，用氯仿乙醇體積比為10 5的洗脫液洗脫，收集積雪草酸單葡萄糖苷流份；再用氯仿乙醇水的體積比為 10 5 0.5的洗脫液洗脫，收集羥基積雪草酸單葡萄糖苷和切布苷II羥基積雪草酸單葡萄糖苷混合物流份，60°C減壓濃縮、干燥，粉碎，即得羥基積雪草酸單葡萄糖苷和切布苷II 混合物。將羥基積雪草酸單葡萄糖苷和切布苷II混合物溶解或混懸于300mL乙醇，上樣于 30kg的ODS C18層析柱的上端，用含有質(zhì)量百分比為2% β-環(huán)糊精的甲醇水溶液洗脫，其中甲醇水體積比為1 6，分別收集切布苷II和羥基積雪草酸單葡萄糖苷的流份。分別將積雪草酸單葡萄糖苷、切布苷II和羥基積雪草酸單葡萄糖苷的流份于 60°C減壓濃縮至干，加入乙醇加熱溶解成飽和溶液，冷卻結(jié)晶，重結(jié)晶3次，干燥，粉碎，即得切布苷II、羥基積雪草酸單葡萄糖苷和積雪草酸單葡萄糖苷。HPLC測(cè)定含量，結(jié)果切布苷II、羥基積雪草酸單葡萄糖苷和積雪草酸單葡萄糖苷的質(zhì)量百分含量分別為98. 2%,99. 和98. 2%。實(shí)施例7稱取積雪草酸單葡萄糖苷粗品100g，置坩堝中，加入500mL乙醇，攪拌溶解，加入 200g薄層層析硅膠，攪拌均勻，室溫?fù)]干甲醇，攪拌碾碎使硅膠顆粒分散均勻，加入到一個(gè)預(yù)先裝好20kg硅膠Q00-300目)的制備型玻璃層析柱上端，用氯仿乙醇體積比為10 5 的洗脫液洗脫，收集積雪草酸單葡萄糖苷流份，60°C減壓濃縮、干燥，粉碎，即得積雪草酸單葡萄糖苷。HPLC測(cè)定含量，結(jié)果積雪草酸單葡萄糖苷的質(zhì)量百分含量分別為97. 1%。實(shí)施例8將羥基積雪草酸單葡萄糖苷粗品IOg溶解或混懸于50mL甲醇，采用配置有300g ODS C18柱的制備型液相色譜儀進(jìn)行層析，用含有質(zhì)量百分比為0.4%的β-環(huán)糊精的甲醇水溶液洗脫，其中甲醇水體積比為1 4，收集羥基積雪草酸單葡萄糖苷流份，40°C減壓濃縮至干，加入適量50%甲醇水溶液，加熱溶解成飽和溶液，冷卻結(jié)晶，重結(jié)晶2次，即得羥基積雪草酸單葡萄糖苷。HPLC測(cè)定含量，結(jié)果羥基積雪草酸單葡萄糖苷的質(zhì)量百分含量分別為96. 8%。實(shí)施例9將切布苷II粗品IOg溶解或混懸于50mL甲醇，采用配置有300g ODS C18柱的制備型液相色譜儀進(jìn)行層析，用含有質(zhì)量百分比為2%的環(huán)糊精的甲醇水溶液洗脫，其中甲醇水體積比為1 4，收集切布苷II流份，40°C減壓濃縮至干，加入50%甲醇水溶液， 加熱溶解成飽和溶液，冷卻結(jié)晶，重結(jié)晶2次，即得切布苷II。HPLC測(cè)定含量，結(jié)果切布苷II的質(zhì)量百分含量分別為96. 8%。實(shí)施例10將切布苷II和羥基積雪草酸單葡萄糖苷混合物IOg溶解或混懸于50mL甲醇， 采用配置有300g ODS Cw柱的制備型液相色譜儀進(jìn)行層析，用含有質(zhì)量百分比為0.4%的 β-環(huán)糊精的甲醇水溶液洗脫，其中甲醇水體積比為1 4，收集切布苷II和羥基積雪草酸單葡萄糖苷流份，40°C減壓濃縮至干，加入50 %甲醇水溶液，加熱溶解成飽和溶液，冷卻結(jié)晶，重結(jié)晶2次，即得切布苷II。HPLC測(cè)定含量，結(jié)果切布苷II和羥基積雪草酸單葡萄糖苷的質(zhì)量百分含量分別為 97. 2%和 95. 9%。
權(quán)利要求
1.一種分離純化積雪草三萜酸單葡萄糖苷的方法，以積雪草三萜酸單葡萄糖苷粗品為原料，所述積雪草三萜酸單葡萄糖苷粗品包括積雪草三萜酸單葡萄糖苷組合物以及含有切布苷II、羥基積雪草酸單葡萄糖苷和積雪草酸單葡萄糖苷中一種或一種以上成分的混合物；其特征在于，步驟包括取所述積雪草三萜酸單葡萄糖苷粗品進(jìn)行柱層析，用含有β-環(huán)糊精的流動(dòng)相洗脫， 分別收集流份，濃縮干燥，重結(jié)晶，即得積雪草酸單葡萄糖苷、切布苷II和羥基積雪草酸單葡萄糖苷。
2.權(quán)利要求1所述的分離純化積雪草三萜酸單葡萄糖苷的方法，其特征在于，采用ODS C18柱層析法制取，包括以下步驟(1)將積雪草酸單葡萄糖苷粗品溶解或混懸于溶劑中，溶劑與積雪草酸單葡萄糖苷粗品的用量比為0. 5-5mL/g，溶劑為甲醇、乙醇或甲醇與乙醇的混合溶液；(2)上樣于粗品重量30-300倍的ODSCw層析柱的上端，用質(zhì)量百分濃度為 0. 05% -2% β -環(huán)糊精溶液洗脫；所述β-環(huán)糊精溶液以水和有機(jī)溶劑混合物為溶劑；所述有機(jī)溶劑與水體積比為1 1 1 10;有機(jī)溶劑為甲醇、乙醇、乙腈中的至少一種；(3)分別收集切布苷II、羥基積雪草酸單葡萄糖苷和積雪草酸單葡萄糖苷的流份， 40-70°C減壓濃縮至干即得切布苷II、羥基積雪草酸單葡萄糖苷和積雪草酸單葡萄糖苷。
3.權(quán)利要求2所述的分離純化積雪草三萜酸單葡萄糖苷的方法，其特征在于，包括純化步驟取步驟C3)所得切布苷II、羥基積雪草酸單葡萄糖苷和積雪草酸單葡萄糖苷分別用體積含量40% 100%的醇溶液重結(jié)晶1 3次，并干燥，即得切布苷II、羥基積雪草酸單葡萄糖苷和積雪草酸單葡萄糖苷純品；所述的醇為甲醇、乙醇或甲醇與乙醇的混合溶液。
4.權(quán)利要求1所述的分離純化積雪草三萜酸單葡萄糖苷的方法，其特征在于，采用硅膠和ODS C18組合柱層析法制取，包括以下步驟(1)硅膠柱層析將積雪草酸單葡萄糖苷粗品溶解或混懸于溶劑，溶劑與積雪草酸單葡萄糖苷粗品的用量比為0. 5-5mL/g，溶劑為甲醇、乙醇或甲醇與乙醇的混合溶液；加入粗品重量0. 5-2倍量硅膠，攪拌均勻，揮干溶劑，碾碎成均勻細(xì)顆粒，上樣于該粗品重量50-200倍量硅膠柱的上端，用氯仿甲醇或乙醇體積比為10 1-10 5的洗脫液洗脫，收集積雪草酸單葡萄糖苷流份；再用氯仿甲醇或乙醇水的體積比為10 (1 5) (0.05 0.5)的洗脫液洗脫， 收集羥基積雪草酸單葡萄糖苷和切布苷II混合物流份；兩個(gè)流份分別于40-70°C減壓濃縮至干，即得積雪草酸單葡萄糖苷以及羥基積雪草酸單葡萄糖苷和切布苷II混合物；(2)ODSC18柱層析將羥基積雪草酸單葡萄糖苷和切布苷II混合物溶解于溶劑，溶劑與羥基積雪草酸單葡萄糖苷和切布苷II混合物的用量比為0. 5-5mL/g，溶劑為甲醇、乙醇或甲醇與乙醇的混合溶液，上樣于粗品重量30-300倍的ODS C18層析柱的上端，用質(zhì)量百分濃度為0. 05% -2% β -環(huán)糊精溶液洗脫；所述環(huán)糊精溶液以有機(jī)溶劑和水的混合物為溶劑；所述有機(jī)溶劑與水體積比為 1 1 1 10;有機(jī)溶劑為甲醇、乙醇、乙腈中的至少一種；分別收集切布苷II和羥基積雪草酸單葡萄糖苷的流份，40-70°C減壓濃縮至干，即得切布苷II和羥基積雪草酸單葡萄糖苷。
5.權(quán)利要求4所述的分離純化積雪草三萜酸單葡萄糖苷的方法，其特征在于，還包括結(jié)晶純化步驟取步驟(1)和( 所得積雪草酸單葡萄糖苷、切布苷II和羥基積雪草酸單葡萄糖苷，分別用體積含量40% 100%醇溶液重結(jié)晶1 3次并干燥即得切布苷II、羥基積雪草酸單葡萄糖苷和積雪草酸單葡萄糖苷純品；所述的醇為甲醇、乙醇或甲醇與乙醇的混合溶液。
6.權(quán)利要求2或4所述的積雪草三萜酸單葡萄糖苷的制備方法，其特征在于，ODSC18 柱層析包括半制備型和制備型液相色譜層析。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種以積雪草三萜酸單葡萄糖苷粗品為原料分離純化積雪草三萜酸單葡萄糖苷的方法，即取積雪草三萜酸單葡萄糖苷粗品進(jìn)行柱層析，用含有β-環(huán)糊精的流動(dòng)相洗脫，分別收集流份，濃縮干燥，即得積雪草酸單葡萄糖苷、切布苷II和羥基積雪草酸單葡萄糖苷。采用本發(fā)明的上述技術(shù)方案，可以從積雪草三萜酸單葡萄糖苷粗品中分離出積雪草三萜酸單葡萄糖苷純品，而且本發(fā)明的方法操作簡(jiǎn)單，成本較低，適于大規(guī)模生產(chǎn)應(yīng)用。
文檔編號(hào)C07J63/00GK102367263SQ20111035842
公開日2012年3月7日 申請(qǐng)日期2011年11月11日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月11日
發(fā)明者葉曉平, 司鵬鵬, 吳博, 宋純清, 杜鵬, 茅仁剛, 袁萍 申請(qǐng)人:上海師范大學(xué), 上海新康制藥廠