專利名稱：一種制備高純度梔子苷的方法
技術領域：
本發(fā)明屬于一種從植物中提取有效成份的技術領域。具體是一種制備高純度桅子苷的方法。
背景技術：
桅子是茜草科植物桅子的干燥成熟果實，其形狀呈尖長橢圓形，外表皮有棱。桅子分為山桅子和水桅子，我國桅子主要產地是浙江、江西、福建、安徽、湖南、臺灣等地。桅子具有瀉火除煩、清熱利濕、涼血解毒等作用，在臨床中用于治療高血壓病、扭挫傷、糖尿病、高熱黃疸、小便短赤等癥。桅子化學成分主要是環(huán)烯醚萜、三萜、黃酮、藏紅花素、有機酸及揮發(fā)油等。桅子苷是桅子中環(huán)烯醚萜類物質一種，具多種藥理活性，例如，抗炎活性、抗腫瘤活性，已廣泛用于食品藥品中。桅子苷經不同條件的發(fā)酵，可以制成天然食用色素桅子藍和桅子紅，也是用于治療心腦血管、肝膽等疾病及糖尿病的原料藥物。因此，桅子苷的分離、純化、結晶和含量測定成為對桅子深度開發(fā)的關鍵技術。桅子中桅子苷分離方法主要包括硅膠柱層析法、大孔樹脂吸附法、雙水相萃、堿性條件下萃取、超濾膜法分離、超臨界(X)2流體萃取、高速逆流色譜法等，這些方法均存在一定缺點并且不利于工業(yè)化生產。其主要問題在于工藝復雜、物耗過大、得率低，而且大量使用有毒有害的試劑，如乙醚、氯仿、甲醇、丙酮等；加大量鹽和堿萃取桅子苷，在堿性條件下桅子苷有可能會水解，并且其他酸性物質變質后不利于分離。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供一種制備高純度桅子苷的方法。本發(fā)明解決上述技術問題的技術方案如下1. 一種制備高純度桅子苷的方法之一，該方法以桅子果為原料，將桅子果粉碎然后在超聲波條件下用乙醇水溶液提取得到初提液，提取液經初步除雜、富集和重結晶得到高純度的桅子苷；具體操作步驟如下1)醇提取法制備桅子果粗提物將桅子干果粉碎，以5 10倍桅子果重量的質量濃度為75%乙醇水溶液浸泡，在 30 60°C條件下超聲波提取4次，每次1小時，過濾后將濾液減壓濃縮得到質量濃度20%浸膏。2)桅子苷粗提取物的初步除雜將步驟1)所得浸膏用同等體積的乙酸乙酯萃取4次，匯集萃取的下相水溶液；保留待用。3)固定相為羧甲基纖維素鈉或聚丙烯酰胺初步富集桅子苷將羧甲基纖維素鈉或聚丙烯酰胺溶解在步驟2、所得匯集的萃取下相水溶液中， 配制成含羧甲基纖維素鈉或聚丙烯酰胺質量濃度為0. 3 3. 0%混合液，然后用混合液同等體積的正丁醇乙酸乙酯體積比為1 1混合溶劑萃取3 6次，合并上相萃取液，用活性碳脫色萃取液，減壓濃縮脫色后的萃取液得桅子苷粗品。4)桅子苷的純化將步驟幻所得的桅子苷粗品用質量濃度為80%乙醇水溶液在室溫條件下重結晶得到高純度的桅子苷。2. 一種制備高純度桅子苷的方法之二，該方法以桅子果為原料，將桅子果粉碎然后在超聲波條件下用水提取得到初提液，提取液經初步除雜、富集和重結晶得到高純度的桅子苷；具體操作步驟如下1)水提取法制備桅子果粗提物將桅子干果粉碎，以5 10倍桅子果重量的蒸餾水浸泡，在30 60°C條件下超聲波提取4次，每次1小時，提取液經過膜過濾，反滲透膜濃縮至質量濃度10%浸膏。2)桅子苷粗提取物的初步除雜將步驟1)所得浸膏用同等體積的乙酸乙酯萃取4次，匯集萃取的下相水溶液；保留待用。3)固定相為聚乙二醇初步富集桅子苷將分子量為2000、4000、6000、8000、10000、20000聚乙二醇溶解在步驟幻所得匯
集的萃取下相水溶液中，配制成含聚乙二醇質量濃度為1 10%混合液，用混合液同等體積的正丁醇乙酸乙酯體積比為1 1混合溶劑萃取3 6次，合并上相萃取液，用活性碳脫色萃取液，減壓濃縮脫色后的萃取液得桅子苷粗品。4)桅子苷的純化將步驟幻所得的桅子苷粗品用質量濃度為80%乙醇水溶液在室溫條件下重結晶得到高純度的桅子苷。上述方法之一的步驟1)中，將桅子干果粉碎，以10倍桅子果重量的質量濃度為 75%乙醇水溶液浸泡，在50°C條件下超聲波提取4次，每次1小時。上述方法之二的述步驟1)中，將桅子干果粉碎，以10倍桅子果重量的蒸餾水浸泡，在50°C條件下超聲波提取4次，每次1小時。上述方法之一的步驟幻中，將羧甲基纖維素鈉或聚丙烯酰胺溶解在步驟2)所得匯集的萃取下相水溶液中，配制成含羧甲基纖維素鈉或聚丙烯酰胺質量濃度為0. 3 3. 0%混合液；用混合液同等體積的正丁醇乙酸乙酯體積比為1 1混合溶劑萃取4次。上述方法之二的步驟幻中，將分子量為2000、4000、6000、8000、10000、20000聚乙二醇溶解在步驟幻所得匯集的萃取下相水溶液中，配制成含聚乙二醇質量濃度為1 10% 混合液，用混合液等體積的正丁醇乙酸乙酯體積比為1 1混合溶劑萃取4次。本發(fā)明是將桅子果用75%乙醇或水提取后減壓濃縮成浸膏，目的是使后面萃取時所用溶劑少，減少分相次數(shù)；使用羧甲基纖維素鈉、聚丙烯酰胺、聚乙二醇等聚合物組成的固定相目的是選擇性吸附雜質，改善桅子苷分離效果；然后用適當有機混合溶劑萃取，對桅子苷進行初步的富集，使用混合溶劑目的是便于梯度萃取。最后將桅子苷粗品重結晶得到高純度桅子苷。本發(fā)明具有以下優(yōu)勢1.本發(fā)明以超聲波為輔助，在一定溫度下用質量濃度75%乙醇水溶液對桅子干果進行提取，該提取法可以減少浸提液中多糖量，易于后續(xù)步驟處理。
2.桅子干果水提取液用膜過濾濃縮，該提取法桅子果中色素被浸提出相對較少， 并且經膜過濾后大分子物質被截留，便于萃取時分相，降低乳化。3.將富集桅子苷浸膏溶于可溶性羧甲基纖維素鈉、聚丙烯酰胺、聚乙二醇等聚合物與水溶液組成固定相中，固定相與被分離組分相互作用，用正丁醇、乙酸乙酯混合溶劑能選擇性萃取桅子苷，而其他組分大部分被固定相吸附，提高桅子苷純度，生產周期短，產品得率高，適合工業(yè)化大量生產。
具體實施例方式下面結合實施例對本發(fā)明作進一步詳細描述。實施例1稱取桅子果粗粉500g，加入2500ml質量濃度75%乙醇水溶液，在30°C條件下超聲波提取4次，每次提取1小時，合并4次提取液減壓濃縮得質量濃度20%浸膏，用等體積乙酸乙酯連續(xù)萃取4次，匯集得到的下相水溶液，取200. Og下相水溶液再加入0. 75g羧甲基纖維素鈉充分溶解后，再用混合溶液等體積的正丁醇乙酸乙酯體積比為1 1混合溶劑萃取3次，合并3次萃取的上相溶液，活性碳脫色，減壓濃縮得到桅子苷粗品8. Og,粗品用質量濃度為80%乙醇水溶液在室溫條件下重結晶即可得到桅子苷晶體5. 6g，純度為91. 0%, 桅子苷得率為56.0%。實施例2稱取桅子果粗粉500g，加入2500ml水溶液，在50°C條件下超聲波提取4次，每次1 小時，提取液經過膜過濾，反滲透膜濃縮得到質量濃度10%浸膏，用等體積的乙酸乙酯連續(xù)萃取4次后，匯集得到的下相水溶液，取200. Og下相水溶液，加入2. 5g分子量為2000聚乙二醇充分溶解后，再用混合溶液等體積的正丁醇乙酸乙酯體積比為1 1混合溶劑萃取 3次，合并3次萃取的上相溶液，活性碳脫色，減壓濃縮得到桅子苷粗品3. 9g，粗品用質量濃度為80%乙醇水溶液在室溫條件下重結晶即可得到桅子苷晶體3. lg，純度為98. 0%，桅子苷得率為62.0%。實施例3稱取桅子果粗粉500g，加入3500ml質量濃度75%乙醇水溶液，在40°C條件下超聲波提取4次，每次提取1小時，合并4次提取液減壓濃縮得質量濃度20%浸膏，用等體積乙酸乙酯連續(xù)萃取浸膏4次，取M5. Og下相水溶液，將2. 5g聚丙烯酰胺加入下相水溶液中充分溶解后，再用混合溶液等體積的正丁醇乙酸乙酯體積比為1 1混合溶劑萃取4次， 合并4次萃取的上相溶液，活性碳脫色，減壓濃縮得到桅子苷粗品8. 2g，粗品用質量濃度為 80%乙醇水溶液在室溫條件下重結晶即可得到桅子苷晶體6. 4g，純度為96.0%的桅子苷晶體，桅子苷得率為64.0%。實施例4稱取桅子果粗粉500. 0g，加入5000ml質量濃度75%乙醇水溶液，在40°C條件下超聲波提取4次，每次提取1小時，合并4次提取液，減壓濃縮得質量濃度20%浸膏，用等體積乙酸乙酯連續(xù)萃取4次，取200. Og下相水溶液，將6. Og聚丙烯酰胺加入下相水溶液中充分溶解后得到混合溶液，再用混合溶液體積的正丁醇乙酸乙酯體積比為1 1混合溶劑萃取4次，合并4次萃取的上相溶液，活性碳脫色，減壓濃縮得到桅子苷粗品6. 3g，粗品用質量濃度為80%乙醇水溶液在室溫條件下重結晶即可得到桅子苷晶體5. 2g，純度為98. 0%，桅子苷得率為52.0%。實施例5稱取桅子果粗粉500g，加入5000ml水溶液，在50°C條件下超聲波提取4次，每次 1小時，提取液經過膜過濾，反滲透膜濃縮得到質量濃度10%浸膏，用等體積乙酸乙酯連續(xù)萃取4次后，得到503. Og下相水溶液，加入25. Og分子量為6000聚乙二醇充分溶解后，再用混合溶液體積的正丁醇乙酸乙酯體積比為1 1混合溶劑萃取4次，合并4次萃取的上相溶液，活性炭脫色，減壓濃縮得到桅子苷粗品9. lg，粗品用質量濃度為80%乙醇水溶液在室溫條件下重結晶即可得到桅子苷晶體7. 7g，純度為93. 0%，桅子苷得率為77. 0%。實施例6稱取桅子果粗粉500g，加入5000ml質量濃度75%乙醇水溶液，在40°C條件下超聲波提取4次，每次提取1小時，合并4次提取液減壓濃縮得質量濃度20%浸膏，用等體積乙酸乙酯連續(xù)萃取4次，得到493. Og下相水溶液，加入5. Og羧甲基纖維素鈉在下相水溶液分溶解后，再用再用混合溶液體積的正丁醇乙酸乙酯體積比為1 1混合溶劑萃取4 次，合并4次萃取液，活性炭脫色，減壓濃縮得到桅子苷粗品11. 5g，粗品用質量濃度為80% 乙醇水溶液在室溫條件下重結晶即可得到桅子苷晶體8. 7g，純度為91.0%，桅子苷得率為 87. 0%。實施例7稱取桅子果粗粉500g，加入5000ml水溶液，在50°C條件下超聲波提取4次，每次1 小時，提取液經過膜過濾，反滲透膜濃縮得到500ml浸膏，用500ml乙酸乙酯連續(xù)萃取4次后，得到503. Og下相水溶液，將51g分子量20000聚乙二醇加入下相水溶液充分溶解后，再用混合溶液體積的正丁醇乙酸乙酯體積比為1 1混合溶劑萃取4次，合并4次萃取液， 活性炭脫色，減壓濃縮得到桅子苷粗品8. 5g，粗品用質量濃度為80%乙醇水溶液在室溫條件下重結晶即可得到桅子苷晶體7. 3g，純度為91 %，桅子苷得率為73. 0%。
權利要求
1.一種制備高純度桅子苷的方法，其特征在于，以桅子果為原料，將桅子果粉碎后在超聲波條件下用乙醇提取得到初提取液，初提取液經初步除雜、富集和重結晶得到高純度的桅子苷，具體操作步驟如下1)醇提取法制備桅子果粗提物將桅子干果粉碎，以5 10倍桅子果重量的質量濃度為75%乙醇水溶液浸泡，在30 60°C條件下超聲波提取4次，每次1小時，過濾后將濾液減壓濃縮得到質量濃度20%浸膏；2)桅子苷粗提取物的初步除雜將步驟1)所得浸膏用同等體積的乙酸乙酯萃取4次，匯集萃取的下相水溶液；保留待用；3)固定相為羧甲基纖維素鈉或聚丙烯酰胺初步富集桅子苷將羧甲基纖維素鈉或聚丙烯酰胺溶解在步驟2、所得匯集的萃取下相水溶液中，配制成了含羧甲基纖維素鈉或聚丙烯酰胺質量濃度為0. 3 3. 0%混合液，然后用與混合液同等體積的正丁醇乙酸乙酯體積比為1 1混合溶劑萃取3 6次，合并上相萃取液，用活性碳脫色萃取液，減壓濃縮脫色后的萃取液得桅子苷粗品；4)桅子苷的純化將步驟幻所得的桅子苷粗品用質量濃度為80%乙醇水溶液在室溫條件下重結晶得到高純度的桅子苷。
2.一種制備高純度桅子苷的方法，其特征在于，以桅子果為原料，將桅子果粉碎然后在超聲波條件下用蒸餾水提取得到初提液，提取液經初步除雜、富集和重結晶得到高純度的桅子苷；具體操作步驟如下1)水提取法制備桅子果粗提物將桅子干果粉碎，以5 10倍桅子果重量的蒸餾水浸泡，在30 60°C條件下超聲波提取4次，每次1小時，提取液經過膜過濾，反滲透膜濃縮至質量濃度10%浸膏；2)桅子苷粗提取物的初步除雜將步驟1)所得浸膏用同等體積的乙酸乙酯萃取4次，匯集萃取的下相水溶液；保留待用；3)固定相為聚乙二醇初步富集桅子苷將分子量為2000、4000、6000、8000、10000、20000聚乙二醇溶解在步驟2、所得匯集的萃取下相水溶液中，配制成含聚乙二醇質量濃度為1 10%混合液，然后用與混合液同等體積的正丁醇乙酸乙酯體積比為1 1混合溶劑萃取3 6次，合并上相萃取液，用活性碳脫色萃取液，減壓濃縮脫色后的萃取液得桅子苷粗品；4)桅子苷的純化將步驟幻所得的桅子苷粗品用質量濃度為80%乙醇水溶液在室溫條件下重結晶得到高純度的桅子苷。
3.根據(jù)權利要求1所述的一種制備高純度桅子苷的方法，其特征在于，所述步驟1)中， 將桅子干果粉碎，以10倍桅子果重量的質量濃度為75%乙醇水溶液浸泡，在50°C條件下超聲波提取4次，每次1小時。
4.根據(jù)權利要求2所述的一種制備高純度桅子苷的方法，其特征在于，所述步驟1)中， 將桅子干果粉碎，以10倍桅子果重量的蒸餾水浸泡，在50°C條件下超聲波提取4次，每次1小時。
5.根據(jù)權利要求1所述的一種制備高純度桅子苷的方法，其特征在于，所述步驟3)中， 將羧甲基纖維素鈉或聚丙烯酰胺溶解在步驟2、所得匯集的萃取下相水溶液中，配制成含羧甲基纖維素鈉或聚丙烯酰胺質量濃度為0. 3 3. 0%混合液，再用同等體積的正丁醇 乙酸乙酯體積比為11混合溶劑萃取4次。
6.根據(jù)權利要求2所述的一種制備高純度桅子苷的方法，其特征在于，所述步驟3)中， 將分子量為2000、4000、6000、8000、10000、20000聚乙二醇溶解在在步驟2、所得的下相水溶液中配制成含聚乙二醇質量濃度為1 10%混合溶液，再用等體積的正丁醇乙酸乙酯體積比為1 1混合溶劑萃取4次。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種制備高純度梔子苷的方法。該方法包括用質量濃度75％乙醇水溶液或水在超聲波條件下提取梔子果中有效成分，將濃縮后得到的浸膏用乙酸乙酯萃取，在保留的下相水溶液中加入羧甲基纖維素鈉、聚丙烯酰胺、聚乙二醇等聚合物充分溶解后，用正丁醇、乙酸乙酯混合溶劑萃取，合并上相有機溶液，活性碳脫色，減壓濃縮并真空干燥即得到梔子苷粗品，粗品再重結晶可得到高純度的梔子苷。本工藝操作方法簡單，生產周期短，產品得率及純度高，適合工業(yè)化大量生產。
文檔編號C07H1/08GK102399251SQ20111043061
公開日2012年4月4日 申請日期2011年12月20日 優(yōu)先權日2011年12月20日
發(fā)明者凌秀榮, 周敏, 唐新宗, 韋萬興 申請人:廣西大學