專利名稱：一種制備高純度積雪草苷的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是一種從天然植物中提取有效成份的技術(shù)領(lǐng)域。具體是一種制備高純度積雪草苷的方法。
背景技術(shù)：
積雪草為傘形科植物積雪草(Centella asiatica (L) Urban)的干燥全草或帶根全草，又稱雷公根、馬蹄草、落得打，常年可采，資源豐富，生長在東南亞、澳大利亞、南非和中非熱帶地區(qū)，在很多國家的醫(yī)藥領(lǐng)域中應(yīng)用已有悠久歷史。積雪草性寒，味苦，具有清熱利濕、解毒消腫之功效，主要用于濕熱黃疸、中暑腹瀉、癰腫瘡毒、跌打損傷等癥。積雪草中化學成分主要包括積雪草苷、羥基積雪草苷、參枯尼苷、積雪草酸、積雪草糖、山柰酚、槲皮素等。近年研究發(fā)現(xiàn)，積雪草提取物可有效促進皮膚損傷、局部膠原合成代謝，并在皮膚損傷后的組織修復(fù)方面有重要作用。近年來研究還發(fā)現(xiàn)，積雪草具有抗氧化、抗抑郁、保肝、抑制腫瘤細胞增生等作用。積雪草中積雪草苷分離方法主要包括硅膠柱層析法、大孔樹脂吸附法、雙水相萃、 超濾膜法分離、超臨界(X)2流體萃取、高速逆流色譜法等，這些方法均存在一定缺點并且不利于工業(yè)化生產(chǎn)。其主要問題在于工藝復(fù)雜、物耗過大、得率低，處理量不大。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種制備高純度積雪草苷的方法。本發(fā)明解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案如下1. 一種制備高純度積雪草苷的方法之一，該方法是以積雪草為原料，用乙醇水溶液在超聲波條件下制備初提液，初提液經(jīng)初步除雜、富集和重結(jié)晶得到高純度的積雪草苷； 具體操作步驟如下1)制備積雪草粗提物將積雪草粉碎，以5 15倍積雪草重量的質(zhì)量濃度為75%乙醇水溶液浸泡，在 50°C條件下超聲波提取4次，每次1小時，匯集4次提取液、過濾后將濾液減壓濃縮得到浸膏。2)積雪草粗提取物的初步除雜將步驟1)制得的浸膏溶于水，用浸膏水溶液等體積的石油醚萃取3次，匯集3次萃取液下相水溶液、再用下相水溶液等體積的乙酸乙酯萃取4次，匯集4次萃取液分相后下相水溶液，保留待用。3)粗積雪草總苷制備用與步驟2)得到的下相水溶液同等體積的正丁醇與乙酸乙酯體積比為1 1的混合溶劑萃取3 6次，合并上相萃取液，用活性碳脫色萃取液，減壓濃縮脫色后的萃取液得粗積雪草總苷。4)粗積雪草苷的純化
將步驟幻所得的粗積雪草總苷溶于甲醇，過濾，濾液濃縮后，再用質(zhì)量濃度為 90%乙醇水溶液溶解，在室溫條件下重結(jié)晶得到高純度的積雪草苷。2. 一種制備高純度積雪草苷的方法之二，該方法以積雪草為原料，用水溶液在超聲波條件下制備初提液，提取液經(jīng)初步除雜、富集和重結(jié)晶得到高純度的積雪草苷；具體操作步驟如下1)制備積雪草粗提物將積雪草粉碎，以5 15倍積雪草重量的水浸泡，在50°C條件下超聲波提取4次， 每次1小時，匯集4次提取液、過濾，將濾液減壓濃縮得到浸膏。2)除去多糖、葉綠素等將步驟1)制得的浸膏用10倍浸膏重量的水溶解，再加入10 15倍浸膏重量的無水乙醇，產(chǎn)生沉淀，將產(chǎn)生沉淀過濾，濾液濃縮得浸膏。3)除去溶于石油、乙酸乙酯的小極性物質(zhì)將步驟2、制得的浸膏溶于水，用浸膏水溶液等體積的石油醚萃取3次，匯集3次萃取液下相水溶液再用等體積的乙酸乙酯萃取4次，匯集4次萃取液分相后下相水溶液，保留待用。4)粗積雪草總苷制備用與步驟3)得到的下相水溶液同等體積的正丁醇與乙酸乙酯體積比為1 1混合溶劑萃取3 6次，合并上相萃取液，用活性碳脫色萃取液，減壓濃縮脫色后的萃取液得粗積雪草總苷。5)粗積雪草苷的純化將步驟4)所得的粗積雪草總苷溶于甲醇，過濾，濾液濃縮，再用質(zhì)量濃度為90% 乙醇水溶液溶解后，在室溫條件下重結(jié)晶得到高純度的積雪草苷。上述的一種制備高純度積雪草昔的方法之一中，步驟1)中，將積雪草粉碎，以10 倍積雪草重量的質(zhì)量濃度為75%乙醇水溶液浸泡，在50°C條件下超聲波提取4次，每次1 小時。上述的一種制備高純度積雪草苷的方法之二中，步驟1)中，將積雪草粉碎，以10 倍積雪草重量的水浸泡，在50°C條件下超聲波提取4次，每次1小時。上述的一種制備高純度積雪草苷的方法之一中，步驟幻中，用與步驟幻得到的下相水溶液同等體積的正丁醇與乙酸乙酯體積比為11混合溶劑萃取4次。上述的一種制備高純度積雪草苷的方法之二中，步驟幻中，將步驟1)制得的浸膏用10倍浸膏重量水溶解，再加入10倍浸膏重量無水乙醇，將產(chǎn)生沉淀，除去多糖、葉綠素寸。本發(fā)明具有以下優(yōu)勢1.本發(fā)明以超聲波為輔助，在一定溫度下用質(zhì)量濃度75%乙醇水溶液或純水溶液對積雪草進行提取，該提取方法具有快速、徹底、效率高的優(yōu)點，在生產(chǎn)過程中能縮短生產(chǎn)周期和提高積雪草苷的產(chǎn)率，乙醇可回收循環(huán)使用。2.本發(fā)明使用溶劑萃取的方法分離得到積雪草苷，未使用柱層析法或大孔樹脂吸附法，處理量大，操作簡單，易于放大及工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步詳細描述。實施例1稱取500g粉碎積雪草粉末，以2500ml質(zhì)量濃度為75%乙醇水溶液浸泡，在50°C 條件下超聲波提取4次，每次1小時，過濾，將濾液合并減壓濃縮得到浸膏20. 5g ；用200ml 水溶解浸膏，用浸膏水溶液等體積的石油醚萃取3次，下相水溶液再用等體積的乙酸乙酯萃取4次，匯集下相水溶液。用匯集下相水溶液同等體積的正丁醇與乙酸乙酯體積比為 1 1混合溶劑萃取3次，合并上相萃取液，用活性碳脫色萃取液，減壓濃縮脫色后的萃取液得積雪草總苷7. 3g;加入10倍量甲醇溶解積雪草總苷，過濾，濾液濃縮后，再用質(zhì)量濃度為90%乙醇水溶液在室溫條件下重結(jié)晶得到高純度的積雪草苷3. 3g，純度為90%，得率 0. 66%。實施例2稱取500g粉碎積雪草粉末，以5000ml質(zhì)量濃度為75 %乙醇水溶液浸泡，在50°C 條件下超聲波提取4次，每次1小時，過濾，將濾液合并減壓濃縮得到浸膏25. Ig ；用250ml 水溶解浸膏，用浸膏水溶液等體積的石油醚萃取3次，下相水溶液再用等體積的乙酸乙酯萃取4次，匯集下相水溶液。用匯集下相水溶液同等體積的正丁醇與乙酸乙酯體積比為 1 1混合溶劑萃取6次，合并上相萃取液，用活性碳脫色萃取液，減壓濃縮脫色后的萃取液得積雪草總苷9. 3g;加入10倍量甲醇溶解積雪草總苷，過濾，濾液濃縮后，再用質(zhì)量濃度為90%乙醇水溶液在室溫條件下重結(jié)晶得到高純度的積雪草苷3. 8g，純度為92%，得率 0. 76%。實施例3稱取500g粉碎積雪草粉末，以7500ml質(zhì)量濃度為75%乙醇水溶液浸泡，在50°C 條件下超聲波提取4次，每次1小時，過濾，將濾液合并減壓濃縮得到浸膏28. 7g ；用290ml 水溶解浸膏，用浸膏水溶液等體積的石油醚萃取3次，下相水溶液再用等體積的乙酸乙酯萃取4次，匯集下相水溶液。用匯集下相水溶液同等體積的正丁醇與乙酸乙酯體積比為 1 1混合溶劑萃取6次，合并上相萃取液，用活性碳脫色萃取液，減壓濃縮脫色后的萃取液得積雪草總苷10. Ig ；加入10倍量甲醇溶解積雪草總苷，過濾，濾液濃縮后，再用質(zhì)量濃度為90%乙醇水溶液在室溫條件下重結(jié)晶得到高純度的積雪草苷4. 8g，純度為90%，得率 0. 96%。實施例4稱取500g粉碎積雪草粉末，以2500ml水溶液浸泡，在50°C條件下超聲波提取4 次，每次1小時，過濾，將濾液合并減壓濃縮得到浸膏35. 0g，用350ml水溶解浸膏，再加入 525ml無水乙醇，將產(chǎn)生沉淀過濾，濾液濃縮得27. 8g浸膏。用300ml水溶解浸膏后，用浸膏水溶液等體積的石油醚萃取3次，下相水溶液再用等體積的乙酸乙酯萃取4次，匯集下相水溶液。用匯集下相水溶液同等體積的正丁醇與乙酸乙酯體積比為1 1混合溶劑萃取4 次，合并上相萃取液，用活性碳脫色萃取液，減壓濃縮脫色后的萃取液得積雪草總苷10. 7g ； 加入10倍量甲醇溶解積雪草總苷，過濾，濾液濃縮后，再用質(zhì)量濃度為90%乙醇水溶液在室溫條件下重結(jié)晶得到高純度的積雪草苷4. 7g，純度為89%，得率為0. 94%。實施例5
稱取500g粉碎積雪草粉末，以7500ml水溶液浸泡，在50°C條件下超聲波提取4 次，每次1小時，過濾，將濾液合并減壓濃縮得到浸膏39. 7g，用400ml水溶解浸膏，再加入 400ml無水乙醇，將產(chǎn)生沉淀過濾，濾液濃縮得30. 5g浸膏。用400ml水溶解浸膏后，用浸膏水溶液等體積的石油醚萃取3次，下相水溶液再用等體積的乙酸乙酯萃取4次，保留下相水溶液。用匯集下相水溶液同等體積的正丁醇與乙酸乙酯體積比為1 1混合溶劑萃取6 次，合并上相萃取液，用活性碳脫色萃取液，減壓濃縮脫色后的萃取液得積雪草總苷11. 9g ； 加入10倍量甲醇溶解積雪草總苷，過濾，濾液濃縮后，再用質(zhì)量濃度為90%乙醇水溶液在室溫條件下重結(jié)晶得到高純度的積雪草苷5. 2g，純度為93%，得率為1. 04%。實施例6稱取500g粉碎積雪草粉末，以5000ml水溶液浸泡，在50°C條件下超聲波提取4 次，每次1小時，過濾，將濾液合并減壓濃縮得到浸膏37. 8g，用400ml水溶解浸膏，再加入 570ml無水乙醇，將產(chǎn)生沉淀過濾，濾液濃縮得29. Ig浸膏。用300ml水溶解浸膏后，用浸膏水溶液等體積的石油醚萃取3次，下相水溶液再用等體積的乙酸乙酯萃取4次，保留下相水溶液。用匯集下相水溶液同等體積的正丁醇與乙酸乙酯體積比為1 1混合溶劑萃取3 次，合并上相萃取液，用活性碳脫色萃取液，減壓濃縮脫色后的萃取液得積雪草總苷10. 2g ； 加入10倍量甲醇溶解積雪草總苷，過濾，濾液濃縮后，再用質(zhì)量濃度為90%乙醇水溶液在室溫條件下重結(jié)晶得到高純度的積雪草苷4. 2g，純度為93%，得率為0. 84%。
權(quán)利要求
1.一種制備高純度積雪草苷的方法，其特征在于，以積雪草為原料，用乙醇水溶液在超聲波條件下制備初提液，初提液經(jīng)初步除雜、富集和重結(jié)晶得到高純度的積雪草苷；具體操作步驟如下1)制備積雪草粗提物將積雪草粉碎，以5 15倍積雪草重量的質(zhì)量濃度為75%乙醇水溶液浸泡，在50°C條件下超聲波提取4次，每次1小時，匯集4次提取液、過濾后將濾液減壓濃縮得到浸膏；2)積雪草粗提取物的初步除雜將步驟1)制得的浸膏溶于水，用浸膏水溶液等體積的石油醚萃取3次，匯集3次萃取液下相水溶液、再用下相水溶液等體積的乙酸乙酯萃取4次，匯集4次萃取液分相后下相水溶液，保留待用；3)粗積雪草總苷制備用與步驟2)得到的下相水溶液同等體積的正丁醇與乙酸乙酯體積比為1 1的混合溶劑萃取3 6次，合并上相萃取液，用活性碳脫色萃取液，減壓濃縮脫色后的萃取液得粗積雪草總苷；4)粗積雪草苷的純化將步驟幻所得的粗積雪草總苷溶于甲醇后，過濾，濾液濃縮后，再用質(zhì)量濃度為90% 乙醇水溶液溶解，在室溫條件下重結(jié)晶得到高純度的積雪草苷。
2.一種制備高純度積雪草苷的方法，其特征在于，以積雪草為原料，用水溶液在超聲波條件下制備初提液，提取液經(jīng)初步除雜、富集和重結(jié)晶得到高純度的積雪草苷；具體操作步驟如下1)制備積雪草粗提物將積雪草粉碎，以5 15倍積雪草重量的水浸泡，在50°C條件下超聲波提取4次，每次 1小時，匯集4次提取液、過濾，將濾液減壓濃縮得到浸膏；2)除去多糖、葉綠素等將步驟1)制得的浸膏用10倍浸膏重量的水溶解，再加入10 15倍浸膏重量的無水乙醇，產(chǎn)生沉淀，將產(chǎn)生沉淀過濾，濾液濃縮得浸膏。3)除去溶于石油、乙酸乙酯的小極性物質(zhì)將步驟2、制得的浸膏溶于水，用浸膏水溶液等體積的石油醚萃取3次，匯集3次萃取液下相水溶液再用等體積的乙酸乙酯萃取4次，匯集4次萃取液分相后下相水溶液，保留待用；4)粗積雪草總苷制備用與步驟幻得到的下相水溶液同等體積的正丁醇與乙酸乙酯體積比為1 1混合溶劑萃取3 6次，合并上相萃取液，用活性碳脫色萃取液，減壓濃縮脫色后的萃取液得粗積雪草總苷；5)粗積雪草苷的純化將步驟4)所得的粗積雪草總苷溶于甲醇后，過濾，濾液濃縮后，再用質(zhì)量濃度為90% 乙醇水溶液溶解，在室溫條件下重結(jié)晶得到高純度的積雪草苷。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種制備高純度積雪草苷的方法，其特征在于，所述步驟1) 中，將積雪草粉碎，以10倍積雪草重量的質(zhì)量濃度為75%乙醇水溶液浸泡，在50°C條件下超聲波提取4次，每次1小時。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種制備高純度積雪草苷的方法，其特征在于，所述步驟1) 中，將積雪草粉碎，以10倍積雪草重量的水浸泡，在50°C條件下超聲波提取4次，每次1小時。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種制備高純度積雪草苷的方法，其特征在于，所述步驟3) 中，用與步驟幻得到的下相水溶液同等體積的正丁醇與乙酸乙酯體積比為1 1混合溶劑萃取4次。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種制備高純度積雪草苷的方法，其特征在于，所述步驟2) 中，將步驟1)制得的浸膏用10倍重量水溶解，再加入10倍浸膏重量無水乙醇，將產(chǎn)生沉淀，除去多糖、葉綠素等。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種制備高純度積雪草苷的方法。該方法主要包括用乙醇水溶液在超聲波條件下制備積雪草提取液，將提取液濃縮得到浸膏。浸膏溶液分別用石油醚、乙酸乙酯萃取后的水溶液，再用正丁醇、乙酸乙酯混合溶劑萃取，合并上相有機溶液，活性碳脫色，減壓濃縮并真空干燥即得到積雪草總苷，總苷再重結(jié)晶可得到高純度的積雪草苷。本工藝操作方法簡單，操作工藝不經(jīng)過層析柱分離，生產(chǎn)周期短，處理量大，產(chǎn)品純度高，適合工業(yè)化大量生產(chǎn)。
文檔編號C07J63/00GK102532244SQ20111045799
公開日2012年7月4日 申請日期2011年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月31日
發(fā)明者凌秀榮, 周敏, 唐新宗, 韋萬興 申請人:廣西大學