專利名稱：Wnt拮抗劑和治療與篩選方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供用于治療癌癥和其它與Wnt相關(guān)的疾病或病癥的新型組合物和方法，以及用于鑒別其它新型治療劑的新型篩選方法。具體來(lái)說(shuō)，本發(fā)明提供包含用于治療實(shí)體瘤和其它與Wnt相關(guān)的疾病和病況的可溶性受體蛋白質(zhì)的Wnt拮抗劑。發(fā)明背景·癌癥為發(fā)達(dá)國(guó)家中的一個(gè)主要死亡原因，僅在美國(guó)每年就有超過(guò)百萬(wàn)人被診斷罹患癌癥且造成50萬(wàn)人死亡?？傮w而言，據(jù)估計(jì)每3人中超過(guò)I人在其一生中會(huì)患上出某種形式的癌癥。癌癥有超過(guò)200種不同的類型，其中四種乳癌、肺癌、大腸直腸癌和前列腺癌占了新病例的一半以上(Jemal 等，2009，Cancer J. Clin.，58:225-249)。Wnt信號(hào)傳遞途徑已被鑒別為癌癥療法的潛在標(biāo)靶。Wnt信號(hào)傳遞途徑是胚胎模式形成、胚胎后期組織維護(hù)和干細(xì)胞生物學(xué)的數(shù)種關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子之一。更具體來(lái)說(shuō)，Wnt信號(hào)傳遞在產(chǎn)生細(xì)胞極性和細(xì)胞命運(yùn)特化(包括干細(xì)胞群的自我更新)上扮演重要角色。Wnt途徑的不受控管地活化與許多人類癌癥有關(guān)，癌癥中腫瘤細(xì)胞的命運(yùn)發(fā)展可被改變以維持其未分化和增生狀態(tài)。因此，癌變可通過(guò)奪取控制正常發(fā)展的恒定機(jī)制和由干細(xì)胞進(jìn)行的組織修復(fù)來(lái)進(jìn)行(綜述在Reya & Clevers, 2005, Nature, 434:843-50; Beachy等，2004，Nature, 432:324-31 中)。Wnt信號(hào)傳遞途徑首先是在發(fā)展突變體無(wú)翅(wg)果蠅和小鼠原癌基因int-Ι (現(xiàn)在稱為 Wntl)中闡明(Nusse & Varmus, 1982, Cell, 31:99-109 ；Van Ooyen& Nusse, 1984, Cel1,39:233-40 ；Cabrera 等,1987, Cel1,50:659-63 ；Rijsewijk等，1987，Cell, 50:649-57)。Wnt基因編碼分泌型脂質(zhì)修飾的糖蛋白，其中19種已在哺乳動(dòng)物中鑒別出。這些分泌型配體活化由Frizzled(FZD)受體家族成員和低密度脂蛋白(LDL)受體相關(guān)蛋白5或6(LRPS/6)所組成的受體復(fù)治物。所述FZD受體為G-蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)超家族的七次跨膜結(jié)構(gòu)域蛋白并且含有一個(gè)大胞外N端配體結(jié)合域，此結(jié)合域具有10個(gè)經(jīng)過(guò)保留的半胱氨酸，稱為富含半胱氨酸的結(jié)構(gòu)域(CRD)或Fri結(jié)構(gòu)域。有十種人FZD受體，F(xiàn)ZD1、FZD2、FZD3、FZD4、FZD5、FZD6、FZD7、FZD8、FZD9 和 FZDlO。不同 FZD CRD 對(duì)特殊 Wnt 具有不同的結(jié)合親和力(Wu & Nusse 2002，J. Biol. Chem.，277:41762-9)，并且 FZD受體已被分類成下述活化典型β_連鎖蛋白(β-catenin)途徑的受體和活化非典型途徑的受體(Miller等，1999，Oncogene, 18:7860-72)。為了形成與FZD配體結(jié)合的受體復(fù)合物，F(xiàn)ZD 受體與 LRP5/6,單次跨膜蛋白(single-pass transmembrane protein)(具有四個(gè)胞外EGF樣結(jié)構(gòu)域，由6個(gè)YWTD氨基酸重復(fù)子分隔)交互作用(Johnson等，2004, J. BoneMineral Res.，19:1749)。
受體結(jié)合時(shí)典型Wnt信號(hào)傳遞途徑被活化是通過(guò)胞衆(zhòng)蛋白Dishevelled(Dsh)直接與FZD受體交互作用介導(dǎo)，此可使細(xì)胞質(zhì)穩(wěn)定和β-連鎖蛋白積累。無(wú)Wnt信號(hào)時(shí)，β-連鎖蛋白是局部位于包含腫瘤抑制蛋白腺瘤結(jié)腸息肉(APC)和Axin的細(xì)胞質(zhì)破壞復(fù)合物中。這些蛋白質(zhì)作為關(guān)鍵支架以允許糖原合成酶激酶3 β (GSK3i3)結(jié)合β-連鎖蛋白并將其磷酸化，且將其標(biāo)記以經(jīng)由泛素/蛋白酶體途徑降解。Dsh活化造成GSK3 0磷酸化以及所述破壞復(fù)合物的分解。然后，累積的細(xì)胞質(zhì)β -連鎖蛋白被轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞核，在此處與TGF/LEF族的DNA結(jié)合蛋白交互作用來(lái)活化轉(zhuǎn)錄作用。
除了典型的信號(hào)傳遞途徑外，Wnt配體還活化β -連鎖蛋白依賴性途徑(Veeman等，2003，Dev. Cell，5:367-77)。非典型的Wnt信號(hào)傳遞涉及多種過(guò)程，但最令人信服的為經(jīng)由類似于果蠅平面細(xì)胞極性(PCP)途徑的機(jī)制牽涉原腸運(yùn)動(dòng)。其它潛在的非典型的fct信號(hào)傳遞機(jī)制包括鈣流、JNK以及小G蛋白和異三聚體G蛋白兩者。拮抗性通?？稍诘湫秃头堑湫屯緩街g觀察到，而且有證據(jù)指出非典型的信號(hào)傳遞可遏制癌細(xì)胞形成(Olson& Gibo, 1998 Exp. Cell Res.，241:134; Topol 等，2003. J. Cell Biol. , 162:899-908) 因此，在某些情況下，F(xiàn)ZD受體是作為典型的Wnt信號(hào)傳遞途徑的負(fù)向調(diào)節(jié)子。例如，當(dāng)與FZDl共同表達(dá)時(shí)，F(xiàn)ZD6經(jīng)由TAKl-NLK途徑壓制經(jīng)過(guò)Wnt3a誘導(dǎo)的典型信號(hào)傳遞(Golan等，2004, JBC279:14879-88)。類似地，F(xiàn)ZD2 顯示出在 Wnt5a 的存在下經(jīng)由 TAKl-NLK MAPK級(jí)聯(lián)反應(yīng)拮抗典型的 Wnt 信號(hào)傳遞(Ishitani 等，2003，Mol. Cell. Biol.，23:131-39)。典型的Wnt信號(hào)傳遞途徑也在維持小腸和大腸干細(xì)胞群中扮演核心角色，所述途徑的不適當(dāng)活化在大腸直腸癌中扮演重要角色(Reya & Clevers, 2005，Nature, 434:843)。小腸的吸收上皮細(xì)胞是排列成絨毛和腺窩。干細(xì)胞存在于腺窩中，慢慢地分裂以產(chǎn)生快速增殖細(xì)胞，使遷出腺窩的所有分化的細(xì)胞群占據(jù)小腸絨毛。fct信號(hào)傳遞的級(jí)聯(lián)反應(yīng)在控制沿著腺窩-絨毛軸的細(xì)胞命運(yùn)中具有主導(dǎo)作用，對(duì)維持干細(xì)胞群是必要的。經(jīng)由同源重組遺傳性喪失TCF7/2(Korinek 等，1998, Nat. Genet.，19:379)或過(guò)度表達(dá)Dickkopf-I (Dkkl)(一種強(qiáng)力的分泌型 Wnt 拮抗劑)(Pinto 等,2003, Genes Dev. , 17:1709-13; Kuhnert等，2004，PNAS, 101:266-71)來(lái)破壞Wnt信號(hào)傳遞會(huì)造成小腸干細(xì)胞群體竭盡。Wnt信號(hào)傳遞在癌癥中的角色首先是由確定Wntl(原先為inti)為乳腺腫瘤中的致癌基因而被揭露，所述乳腺腫瘤是經(jīng)由在附近插入小鼠病毒轉(zhuǎn)化而成(Nusse&Varmus, 1982, Cell 31:99-109)。至今已累積更多Wnt信號(hào)傳遞在乳癌中的角色的證據(jù)。例如連鎖蛋白轉(zhuǎn)殖基因在乳腺中過(guò)度表達(dá)造成過(guò)度增生及腺癌(Imbert等，2001，J.Cell Biol. 153:555-68;Michaelson & Leder, 2001, Oncogene, 20:5093-9),然而喪失 Wnt信號(hào)傳遞會(huì)擾亂正常的乳腺發(fā)育(T印era等，2003, J. Cell Sci.，116:1137-49;Hatsell等，2003, J. Mammary Gland Biol. Neoplasia 8:145-58)。最近，乳腺干細(xì)胞已被證明是由Wnt信號(hào)傳遞活化(Liu等，2004，PNAS, 101:4158-4163)。在人類乳癌中，β-連鎖蛋白的積累涉及超過(guò)50%的癌癥中的Wnt信號(hào)傳遞活化，雖然并未鑒別出特定的基因突變，但觀察到 Frizzled 受體表達(dá)上調(diào)(Brennan & Brown, 2004, J. Mammary GlandNeoplasia, 9:119-31;Malovanovic 等,2004, Int. J. Oncol, 25:1337-42)。結(jié)腸直腸癌最常經(jīng)由活化Wnt信號(hào)傳遞級(jí)聯(lián)反應(yīng)中的突變起動(dòng)。全部結(jié)腸直腸癌中約有5-10%為遺傳性，主要形式之一為家族性腺瘤性息肉病(FAP)，此為一種體染色體顯性遺傳疾病，其中約80%受影響的受試者中的腺瘤樣息肉(APC)基因含有胚系突變。其它fct途徑組分(包括Axin和β-連鎖蛋白)中也被鑒別出突變。個(gè)別腺瘤為含有第二個(gè)去活化的等位基因的上皮細(xì)胞無(wú)性繁殖瘤，而大量FAP腺瘤透過(guò)致癌基因和/或腫瘤抑制基因的額外突變不可避免地造成腺癌發(fā)展。再者，fct信號(hào)傳遞途徑活化(包括APC和β -連鎖蛋白中的功能獲得突變(gain-of-function mutation))可在小鼠模型中誘導(dǎo)增生發(fā)展和腫瘤生長(zhǎng)(Oshima 等，1997，Cancer Res, 57:1644-9; Harada 等，1999，EMBO J.，18:5931-42)。發(fā)明概述本發(fā)明提供多種結(jié)合一種或多種人Wnt蛋白的藥劑(包括但不限于可溶性FZD受體和其它包含F(xiàn)ri結(jié)構(gòu)域的藥劑)，以及使用那些藥劑的新方法。本發(fā)明進(jìn)一步提供通過(guò)向有需要的受試者施用所述藥劑的使用所述藥劑來(lái)治療癌癥的方法。在一些實(shí)施方案中，所述方法包括抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)。在某些實(shí)施方案中，所述fct結(jié)合劑為一種Wnt拮抗劑。本發(fā)明也提供篩選這類fct結(jié)合劑的新方法。同樣地，本發(fā)明提供編碼所述藥劑的多核苷酸、 制造所述藥劑的方法，以及各種包含所述藥劑的組合物。因此，在一個(gè)方面中，本發(fā)明提供一種抑制腫瘤生長(zhǎng)的方法。在某些實(shí)施方案中，所述方法包含將腫瘤與有效量的結(jié)合一種或多種Wnt蛋白(例如，人Wnt蛋白)的藥劑接觸。所述方法可在體內(nèi)或體外進(jìn)行。在某些實(shí)施方案中，所述腫瘤是在受試者中，而腫瘤與藥劑的接觸包含向受試者施用治療有效量的Wnt結(jié)合劑。在另一方面中，本發(fā)明提供降低包含癌干細(xì)胞的腫瘤中的癌干細(xì)胞發(fā)生頻率的方法。因此，本發(fā)明也提供降低腫瘤的致瘤性的方法。在一些實(shí)施方案中，所述方法包括將腫瘤與有效量的結(jié)合一種或多種Wnt蛋白(例如，人Wnt蛋白)的藥劑接觸。所述方法可在活體內(nèi)或體外進(jìn)行。例如所述接觸可包含向具有腫瘤的人類施用有效量的fct結(jié)合劑。在另一方面中，本發(fā)明提供誘導(dǎo)腫瘤中的細(xì)胞分化，或誘導(dǎo)腫瘤中的分化標(biāo)記表達(dá)的方法。在某些實(shí)施方案中，所述方法包括將腫瘤與有效量的結(jié)合一種或多種fct蛋白(例如，人fct蛋白)的藥劑接觸。所述方法可在體內(nèi)或體外進(jìn)行。再在另一方面中，本發(fā)明提供治療受試者中的癌癥的方法，其包含向受試者施用治療有效量的Wnt結(jié)合劑。在另一方面中，本發(fā)明提供治療受試者內(nèi)的疾病的方法，其中所述疾病與Wnt信號(hào)傳遞活化相關(guān)，所述方法包括向受試者施用治療有效量的fct結(jié)合劑。在另一方面中，本發(fā)明提供治療受試者中的病癥的方法，其中所述病癥的特征為干細(xì)胞和/或祖細(xì)胞的水平提高，所述方法包括向受試者施用治療有效量的Wnt結(jié)合劑。在本文提供的上述方面以及其它方面中每一方面的某些實(shí)施方案中，所述Wnt結(jié)合劑為一種多肽。在某些實(shí)施方案中，所述藥劑為一種可溶性受體。在本文提供的上述方面以及其它方面中每一方面的某些實(shí)施方案中，所述藥劑包含結(jié)合一種或多種Wnt蛋白的FZD受體的Fri結(jié)構(gòu)域，或FZD Fri結(jié)構(gòu)域的片段。在某些實(shí)施方案中，所述FZD受體為人FZD受體。例如，所述Fri結(jié)構(gòu)域可能來(lái)自一人FZD4或人FZD5。在某些替代實(shí)施方案中，所述藥劑為可包含結(jié)合一種或多種Wnt蛋白的人FZD8受體的Fri結(jié)構(gòu)域或所述Fri結(jié)構(gòu)域的片段。在某些實(shí)施方案中，所述Wnt結(jié)合劑為一種可溶性FZD受體。在替代實(shí)施方案中，所述Wnt結(jié)合劑不包含F(xiàn)ZD受體的Fri結(jié)構(gòu)域。在本文提供的上述方面以及其它方面中每一方面的某些實(shí)施方案中，所述藥劑包含結(jié)合一種或多Wnt蛋白的可溶性Frizzled相關(guān)蛋白(SFRP)的結(jié)構(gòu)域,或SFRP Fri結(jié)構(gòu)域的片段。在某些實(shí)施方案中，所述SFRP為人SFRP。在本文提供的上述方面以及其它方面中每一方面的某些實(shí)施方案中，所述藥劑包含結(jié)合一種或多種Wnt蛋白的Ror蛋白的Fri結(jié)構(gòu)域,或Ror Fri結(jié)構(gòu)域的片段。在某些實(shí)施方案中，所述Ror蛋白為人Ror蛋白。在本文提供的上述方面以及其它方面中每一方面的某些實(shí)施方案中，所述藥劑進(jìn)一步包含人Fe區(qū)。在某些實(shí)施方案中，所述Wnt結(jié)合劑為一種融合蛋白。在某些實(shí)施方案中，所述fct結(jié)合劑包含SEQ ID NO: I。在某些實(shí)施方案中，所述Wnt結(jié)合劑包含SEQ IDNO: 46。在某些實(shí)施方案中，所述Wnt結(jié)合劑包含SEQ ID NO: 48。在某些實(shí)施方案中，所述Wnt結(jié)合劑包含SEQ ID NO: 50。在某些實(shí)施方案中，所述Wnt結(jié)合劑包含SEQ ID NO: 53。在一些實(shí)施方案中，所述fct結(jié)合劑(信號(hào)序列裂解前)包含SEQ ID NO: 50和選自以下組成的組的信號(hào)序列SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ IDNO: 71、SEQ ID NO: 72、SEQ ID NO: 73 和 SEQ ID NO: 74。在一些實(shí)施方案中，所述 Wnt 結(jié)合齊U(信號(hào)序列裂解前)包含SEQID NO:50和選自以下組成的組的信號(hào)序列SEQ ID NO:70,SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:73 和 SEQ ID NO:74。在一些實(shí)施方案中，所述Wnt結(jié)合劑(信號(hào)序列裂解前)包含SEQ ID N0:50和SEQ ID N0:71。在一些實(shí)施方案中，所述fct結(jié)合劑(信號(hào)序列裂解前)包含SEQ ID NO: 53和選自以下組成的組的信號(hào)序列SEQ ID NO:67,SEQ ID NO:68,SEQ ID NO:69,SEQ ID NO:70,SEQ ID N0:7USEQ ID NO:72,SEQ ID N0:73和SEQ ID N0:74。在一些實(shí)施方案中，所述Wnt結(jié)合劑(信號(hào)序列裂解前)包含SEQ ID NO: 53和選自以下組成的組的信號(hào)序列SEQ ID NO: 70、SEQ ID NO: 71、SEQ IDNO:72, SEQ ID N0:73和SEQ ID N0:74。在一些實(shí)施方案中，所述Wnt結(jié)合劑(信號(hào)序列裂解前)包含 SEQ ID NO:53 和 SEQ ID NO:71。在本文提供的上述方面以及其它方面中每一方面的某些實(shí)施方案中，所述Wnt結(jié)·合劑結(jié)合一種或多種、兩或更多種、三種或更多種、或四種或更多種選自由以下組成的組的人Wnt 蛋白Wntl、Wnt2、Wnt2b、Wnt3、Wnt3a、Wnt7a、Wnt7b、Wnt8a、Wnt8b、Wntl0a和 WntlOb。在某些實(shí)施方案中，所述藥劑結(jié)合fctl、Wnt2、Wnt3、Wnt3a和Wnt7b。在本文提供的上述方面以及其它方面中每一方面的某些實(shí)施方案中，所述藥劑為fct拮抗劑。在某些實(shí)施方案中，所述藥劑抑制Wnt信號(hào)傳遞。在某些實(shí)施方案中，所述藥劑抑制Wnt典型的Wnt信號(hào)傳遞。在本文提供的上述方面以及其它方面中每一方面的某些實(shí)施方案中，所述腫瘤或癌癥為選自由以下組成的組的腫瘤/癌癥結(jié)腸直腸腫瘤/癌癥、胰臟腫瘤/癌癥、肺腫瘤/癌癥、卵巢腫瘤/癌癥、肝腫瘤/癌癥、乳房腫瘤/癌癥、腎臟腫瘤/癌癥、前列腺腫瘤/癌癥、胃腸瘤/癌癥、黑素瘤、子宮頸腫瘤/癌癥、膀胱腫瘤/癌癥、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤和頭頸部腫
瘤/癌癥。在本文提供的上述方面以及其它方面中每一方面的某些實(shí)施方案中，所述方法進(jìn)一步包括將腫瘤與第二治療劑接觸，或向受試者施用第二治療劑。在某些實(shí)施方案中，所述第二治療劑為一種化學(xué)治療劑。在某些實(shí)施方案中，所述第二化學(xué)治療劑為一種抗代謝物(例如，吉西他濱(gemcitabine))或抗有絲分裂劑(例如,紫杉燒,諸如太平洋紫杉醇)。在另一方面中，本發(fā)明提供包含選自由以下組成的組的序列的多肽SEQ IDNO:I、SEQ ID NO:45, SEQ ID NO:46,SEQ ID NO:47,SEQ ID NO:48, SEQ ID NO:49,SEQ IDNO:50, SEQ ID NO:51, SEQ ID NO:53,SEQ ID NO:54, SEQ ID NO:55,SEQ ID NO:65 和 SEQID NO:66，以及制造多肽的細(xì)胞和包含所述多肽的組合物。還提供包含所述多肽和藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。此外，本發(fā)明還提供包含編碼以下的多肽的多核苷酸的多核苷酸SEQ ID NO: I、SEQ ID NO:45、SEQ ID N0:46、SEQ ID NO:47、SEQ ID N0:48、SEQ IDNO:49,SEQ ID NO:50,SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:53,SEQ ID NO:54,SEQ ID NO:55,SEQ IDNO:65和SEQ ID NO:66，或具有SEQ ID NO:2的序列的多肽。本發(fā)明同樣提供包含所述多核苷酸的載體和細(xì)胞。在另一方面，本發(fā)明提供篩選藥劑的抗腫瘤活性和/或抗癌干細(xì)胞之活性的方法。在某些實(shí)施方案中，所述方法包括將已暴露于一種藥劑的第一實(shí)體腫瘤(例如，一種包含癌干細(xì)胞的實(shí)體腫瘤)中的一種或多種分化標(biāo)記和/或一種或多種干細(xì)胞性標(biāo)記的水平與尚未暴露于所述藥劑的第二實(shí)體腫瘤中的一種或多種分化標(biāo)記的水平相比較。在一些實(shí)施方案中，所述方法包括(a)使第一實(shí)體腫瘤暴露于所述藥劑，但第二實(shí)體腫瘤則不暴露；(b)評(píng)估在第一和第二實(shí)體腫瘤中的一種或多種分化標(biāo)記和/或一種或多種干細(xì)胞性標(biāo)記的水平 '及(C)將第一實(shí)體腫瘤中的一種或多種分化標(biāo)記的水平與第二實(shí)體腫瘤中的一種或多種分化標(biāo)記的水平相比較。在某些實(shí)施方案中，(a)所述第一實(shí)體腫瘤中的一種或多種分化標(biāo)記相對(duì)于所述第二實(shí)體腫瘤所增加的水平表示所述藥劑的抗腫瘤或抗癌干細(xì)胞活性；和/或(b)所述一種或多種干細(xì)胞標(biāo)記相對(duì)于所述第二實(shí)體腫瘤所降低的水平表示所述藥劑的抗腫瘤或抗癌干細(xì)胞活性。在某些實(shí)施方案中，所述藥劑結(jié)合一種或多種fct蛋白。在某些實(shí)施方案中，所述藥劑為可溶性FZD受體。在某些替代實(shí)施方案中，所述藥劑為一種抗體，諸如抗FZD或抗Wnt杭體。在某些替代實(shí)施方案中，所述藥劑為小分子。根據(jù)馬庫(kù)西(Markush)組或其它替代分組法描述本發(fā)明的觀點(diǎn)或?qū)嵤┓桨笗r(shí)，本發(fā)明不僅包含作為一個(gè)整體的上列全部組，還單獨(dú)地包含所述組的各成員以及所述主要組的所有可能的子組，還有缺少一個(gè)或多個(gè)組成員的主要組。本發(fā)明也設(shè)想明確排除一個(gè)或多個(gè)本發(fā)明要求保護(hù)的任何組的成員。附圖簡(jiǎn)述圖I.大鼠中的FZD8-Fc(54R)3)的藥物動(dòng)力學(xué)。施用單劑量(10mg/kg)的FZD8_Fc后評(píng)估FZDS-Fc的藥物動(dòng)力學(xué)性質(zhì)。在施用后1、24、48、72、96、168、240和336小時(shí)測(cè)定FZD8-FC的血清濃度。圖2.通過(guò)FZD8-FC (54F03)治療來(lái)抑制PM胰臟腫瘤增長(zhǎng)。將PM胰臟腫瘤細(xì)胞皮下注射到N0D/SCID小鼠中。用FZD8-FC (- ▲ _)、吉西他濱(_■_)、FZD8_Fc與吉西他濱的組合(-▲_)或?qū)φ湛贵w(-·_)治療小鼠。顯示的數(shù)據(jù)為治療后幾天的腫瘤體積(mm3) ο圖3.用FZD8-FC (54F03)治療后PM腫瘤中的CD44hi細(xì)胞群體減少。將用對(duì)照抗體、FZD8-FC、吉西他濱或FZD8-FC與吉西他濱的組合治療的腫瘤細(xì)胞表面染色來(lái)檢測(cè)ESA和⑶44。對(duì)每一治療組來(lái)說(shuō)，在染色前匯集來(lái)自五個(gè)腫瘤的單一細(xì)胞混懸液。圖4.經(jīng)過(guò)FZD8-FC (54F03)治療的PM胰臟腫瘤的體內(nèi)限數(shù)稀釋分析。圖5.用FZD8-FC (54R)3)治療的PM胰臟腫瘤中細(xì)胞分化增加。用阿爾新藍(lán)(alcian blue)將經(jīng)過(guò)對(duì)照抗體、FZD8_Fc、吉西他濱或FZD8_Fc與吉西他濱的組合治療的PM腫瘤的石蠟切片染色以便檢測(cè)表達(dá)粘蛋白的細(xì)胞。
圖6.用FZD8-Fc (54F03)治療的PN8胰臟腫瘤中細(xì)胞分化增加。用阿爾新藍(lán)將經(jīng)過(guò)對(duì)照抗體、FZD8-FC、吉西他濱或FZD8-FC與吉西他濱的組合治療的PN8腫瘤的石蠟切片染色以便檢測(cè)表達(dá)粘蛋白的細(xì)胞。圖7.用FZD8-Fc (54R)3)治療后PN13胰臟腫瘤中細(xì)胞分化增加而增殖減少。用阿爾新藍(lán)將經(jīng)過(guò)對(duì)照抗體或FZD8-FC治療的PN13腫瘤的石蠟切片染色以便檢測(cè)表達(dá)粘蛋白的細(xì)胞。此外，將切片染色以檢測(cè)Ki67( —種活躍地增殖細(xì)胞的標(biāo)記)。圖8.用FZD8-Fc (54F03)治療后PN13胰臟腫瘤中Muc 16染色增加。將經(jīng)過(guò)對(duì)照抗體或FZD8-FC治療的PN13腫瘤的石蠟切片染色以便檢測(cè)Mucl6蛋白。圖9.用FZD8-FC (54F03)治療后PN13胰臟腫瘤中CK20染色增加。將經(jīng)過(guò)對(duì)照抗體或FZD8-FC治療的PN13腫瘤的石蠟切片染色以便檢測(cè)CK20蛋白。

圖10.以用FZD8-FC (54R)3)與太平洋紫杉醇的組合治療后PE13乳房腫瘤生 長(zhǎng)受抑制。將PE13乳房腫瘤細(xì)胞皮下注射到N0D/SCID小鼠中。用對(duì)照抗體(_籲_)、FZD8-FC (- ·-)、太平洋紫杉醇(-▲_)* FZD8-FC與太平洋紫杉醇的組合(_ O _)治療小鼠。數(shù)據(jù)顯示治療后幾天的腫瘤體積(mm3)。圖11. FZD8-Fc (54F03)以劑量依賴方式抑制C28結(jié)腸腫瘤生長(zhǎng)。將C28結(jié)腸腫瘤細(xì)胞皮下注射到N0D/SCID小鼠中。用FZD8-Fc I. 5mg/kg,每周兩次(-▲ -)，5mg/kg，每周一次(-▼-)，5mg/kg,每周兩次(-〇_), 15mg/kg,每周一次(_ □ _)或15mg/kg,每周兩次(-Δ -)或?qū)φ湛贵w(_ ■-)治療小鼠。數(shù)據(jù)顯示治療后數(shù)天的腫瘤體積(_3)(圖11A)。用FZD8-Fc與伊立替康(irinotecan)的組合抑制結(jié)腸腫瘤生長(zhǎng)。用FZD8_Fc (-▲-)、依立替康(-▼-)..FZDS-Fc與依立替康的組合(_ ·-)或?qū)φ湛贵w(_ ■-)治療小鼠。數(shù)據(jù)顯示治療后數(shù)天的腫瘤體積(mm3)(圖I IB)。圖12用FZD8-Fc (54F03)治療后C28腫瘤中CK20染色增加。將經(jīng)過(guò)對(duì)照抗體或FZD8-FC治療的C28腫瘤的石蠟切片染色以便檢測(cè)CK20蛋白。圖13.用FZD8-FC (54F03)治療后PN21胰臟腫瘤生長(zhǎng)受抑制并且癌干細(xì)胞發(fā)生頻率降低。將PN21胰臟腫瘤細(xì)胞皮下注射到N0D/SCID小鼠中。用FZD8_Fc (-▼-)、吉西他濱(-▲ -)、FZDS-Fc與吉西他濱的組合(_ ■-)或?qū)φ湛贵w(_ ·-)治療小鼠。數(shù)據(jù)顯示治療后數(shù)天的腫瘤體積(mm3)(圖13A)。經(jīng)過(guò)FZD8_Fc治療的PN21胰臟腫瘤的體內(nèi)限數(shù)稀釋分析(圖13B)。圖14.用FZD8-FC (54F03)治療后PN21胰臟腫瘤中細(xì)胞分化增加。用阿爾新藍(lán)將經(jīng)過(guò)對(duì)照抗體或FZD8-FC治療的PN21腫瘤的石蠟切片染色以便檢測(cè)粘蛋白。圖15.用FZD8-Fc (54F03)治療后PN21胰臟腫瘤中細(xì)胞分化增加而增殖減少。用阿爾新藍(lán)將經(jīng)過(guò)對(duì)照抗體、FZD8-FC、吉西他濱或FZD8-FC與吉西他濱的組合治療的PN21腫瘤的石蠟切片染色以便檢測(cè)粘蛋白。此外，將切片染色以檢測(cè)Ki67 (—種活躍地增殖細(xì)胞的標(biāo)記)。圖16.猴體內(nèi)FZD8-FC變異體的藥物動(dòng)力學(xué)。施用單一劑量(30mg/kg)的FZD8_Fc變異體54F15和54F16后評(píng)估變異體的藥物動(dòng)力學(xué)性質(zhì)。在施用后的1、6、12、24、48、72、96,168,240 和 336 小時(shí)測(cè)定 54F15(- O -)和 54F16 (- -)的血清濃度。圖17.用FZD8-FC變異體治療后C28結(jié)腸腫瘤生長(zhǎng)的抑制情形。將C28結(jié)腸腫瘤細(xì)胞皮下注射到N0D/SCID小鼠中。用對(duì)照抗體(-X-)、54F03(-□ -)、54F09 (-▲-)、54F12 {-▼-)、54F13 (- -)、54F15 (-〇-)或54F16(_A_)治療小鼠。顯示的數(shù)據(jù)為治療后數(shù)天的腫瘤體積(mm3)。圖18.用FZD8-FC變異體治療后PM胰臟腫瘤生長(zhǎng)受抑制。將PM胰臟腫瘤細(xì)胞皮下注射到 N0D/SCID 小鼠中。用對(duì)照抗體(-· -)、54F03 (- ■ -)、54F09卜▼-)、54F12 (-〇-)、54F13(-▲-)、54F15(-□-)或54F16 (- -)治療小鼠。顯示的數(shù)據(jù)為治療后數(shù)天的腫瘤體積(mm3) ο圖19.用 FZD8-Fc 變異體 54F03 和 54F16 治療后 PM 腫瘤中 CD44hi 和 CD44+CD201+細(xì)胞減少。將用對(duì)照抗體、FZD8-FC變異體54F03或變異體54F16治療的腫瘤細(xì)胞表面染色以便檢測(cè)ESA、⑶44和⑶201并通過(guò)FACS分析。圖20. FZD8-FC蛋白的N端特征。通過(guò)質(zhì)譜儀分析FZD8-FC變異體并顯示54F16 (圖20A)、54F26 (圖 20B)、54F28 (圖 20C)、54F30 (圖 20D)以及 54F32 (圖 20E)的結(jié)果。
圖21.用FZD8-FC變異體治療后C28結(jié)腸腫瘤生長(zhǎng)的抑制情形。將C28結(jié)腸腫瘤細(xì)胞皮下注射到N0D/SCID小鼠中。用對(duì)照抗體(-■ -)、54F03(- Δ -)、54F23 (-▼-)*54F26 (- O -)治療小鼠。顯示的數(shù)據(jù)為治療后數(shù)天的腫瘤體積(mm3)。發(fā)明詳述本發(fā)明提供新型藥劑，包括但不限于結(jié)合一種或多種人Wnts的包含人Frizzled(FZD)受體的Fri結(jié)構(gòu)域、人分泌型Frizzled相關(guān)蛋白(SFRPs),或Ror蛋白質(zhì)的多肽。本發(fā)明還提供包含所述fct結(jié)合劑的相關(guān)多肽和多核苷酸、組合物以及制備Wnt結(jié)合劑的方法。本發(fā)明進(jìn)一步提供使用fct結(jié)合劑的方法，諸如抑制腫瘤生長(zhǎng)、治療癌癥、誘導(dǎo)分化以及減少致瘤性的方法。本發(fā)明也提供篩選用于鑒別具有抗腫瘤活性和/或抗癌干細(xì)胞的活性的新型Wnt結(jié)合劑藥劑的方法。制造包含人FZD8的Fri結(jié)構(gòu)域及Fe結(jié)構(gòu)域的Wnt結(jié)合劑，本文中稱為FZD8-FC或FZD8-FC (54R)3)(實(shí)施例I)。產(chǎn)生多種FZD8-FC蛋白的變異體(實(shí)施例10)。制造顯示出N端具有約95%或更高的同源性的FZD8-FC蛋白(實(shí)施例16)。使用數(shù)種FZD8-FC變異體在顯示出FZD8-FC變異體的半衰期至少為100小時(shí)的大鼠中進(jìn)行藥物動(dòng)力學(xué)研究(實(shí)施例2和實(shí)施例12 ;圖I和表4)。以FZD8-FC變異體54F15及54F16在猴子體內(nèi)進(jìn)行藥物動(dòng)力學(xué)研究，其證明這些蛋白質(zhì)具有至少100個(gè)小時(shí)的半衰期(實(shí)施例13和表5)。以單獨(dú)的FZD8-Fc (54F03)或FZD8_Fc與化學(xué)治療劑的組合治療時(shí)顯示出可減少胰臟腫瘤、乳房腫瘤和結(jié)腸腫瘤的生長(zhǎng)(實(shí)施例3、5、6和8和圖2、10、11B和13A)。此外，治療顯示出可減少胰臟模型中的CD44+細(xì)胞的百分比并降低癌干細(xì)胞的發(fā)生頻率(實(shí)施例3和實(shí)施例8以及圖3、4和13B)。以單獨(dú)的FZD8-Fc(54R)3)或FZD8-FC與化學(xué)治療劑的組合治療時(shí)顯示出可增加胰臟腫瘤細(xì)胞及結(jié)腸腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞分化(實(shí)施例4、7和9及圖5-9、12、14和15)。以FZD8-FC變異體治療時(shí)顯示出可抑制結(jié)腸及胰臟腫瘤生長(zhǎng)，抑制程度是取決在該變異體(實(shí)施例14、15和17及圖17、18和21)。以FZD8-FC變異體54F03和變異體54F16治療時(shí)顯示出可減少胰臟腫瘤中的⑶44hi細(xì)胞以及⑶44+CD202+細(xì)胞的百分比(實(shí)施例15及圖19)。I.定義如本文所用的術(shù)語(yǔ)“拮抗劑”包括任何部分或完全阻斷、抑制或中和蛋白質(zhì)(例如癌干細(xì)胞標(biāo)記)的表達(dá)或生物活性的分子。阻斷、抑制或中和生物活性包括但不限于抑制腫瘤生長(zhǎng)。術(shù)語(yǔ)“拮抗劑”包括任何部分或完全阻斷、抑制或中和fct途徑的生物活性的分子。合適的拮抗劑分子包括但不限于天然FZD受體蛋白(包括可溶性FZD受體以及SFRPs的衍生物和Ror蛋白質(zhì)的衍生物)的片段和/或氨基酸序列變異體?！敖?jīng)過(guò)分離”的多肽、抗體、多核苷酸、載體、細(xì)胞或組合物為處于自然界中不存在的形式中的多肽、抗體、多核苷酸、載體、細(xì)胞或組合物。經(jīng)過(guò)分離的多肽、抗體、多核苷酸、載體、細(xì)胞或組合物包括那些已被純化到一定程度使其不再為可在自然界中發(fā)現(xiàn)的形式。在一些實(shí)施方案中，經(jīng)過(guò)分離的抗體、多核苷酸、載體、細(xì)胞或組合物為實(shí)質(zhì)上純的。如本文所用的術(shù)語(yǔ)“實(shí)質(zhì)上純的”是指一種物質(zhì)，其至少為50%純的(B卩，不含污染物)，優(yōu)選至少為90%純的，更優(yōu)選至少為95%純的，更優(yōu)選至少為98%純的，再更優(yōu)選至少為99%純的。如本文所用的術(shù)語(yǔ)“可溶性受體”是指在所述受體的第一跨膜結(jié)構(gòu)域前的受體蛋白的N端胞外片段，其可以可溶性形式從細(xì)胞分泌出。在一些實(shí)施方案中，所述受體蛋白為一種FZD受體。在一些實(shí)施方案中，所述受體蛋白為一種Ror受體?！?br> 如本文所用的術(shù)語(yǔ)“FZD可溶性受體”是指在所述受體的第一跨膜結(jié)構(gòu)域前的人FZD受體蛋白的N端胞外片段，其可以可溶性形式從細(xì)胞分泌出。包含整個(gè)N端胞外結(jié)構(gòu)域伍⑶)(此處稱為“FZD E⑶”)以及較小片段的兩種FZD可溶性受體均在設(shè)想范圍內(nèi)。此處還公開包含F(xiàn)ri結(jié)構(gòu)域的FZD可溶性受體(本文稱為“FZD Fri ”)。與包含整個(gè)FZD E⑶的可溶性受體相比較，F(xiàn)ZD Fri可溶性受體可顯示改變的生物活性(例如蛋白質(zhì)半衰期增加)。蛋白質(zhì)半衰期可經(jīng)由以聚乙二醇(PEG)或聚氧化乙烯(PEO)共價(jià)修飾來(lái)進(jìn)一步增加。FZD可溶性受體包括FZD E⑶或Fri結(jié)構(gòu)域，其在框構(gòu)內(nèi)連接其它功能和結(jié)構(gòu)蛋白，包括但不限于人Fe區(qū)(例如來(lái)自免疫球蛋白IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl、IgA2、IgD、IgE的或IgM的人Fe);蛋白標(biāo)簽(例如myc、FLAG、GST);其它內(nèi)源性蛋白或蛋白片段；或任何其它有用的蛋白質(zhì)序列，包括介于FZD ECD或Fri結(jié)構(gòu)域與連接的蛋白質(zhì)之間的任何連接子區(qū)。在某些實(shí)施方案中，F(xiàn)ZD受體的Fri結(jié)構(gòu)域是直接連接人Fe區(qū)。在某些實(shí)施方案中，所述FZD受體的Fri結(jié)構(gòu)域是連接人IgGlFc (本文稱為“FZD Fri. Fe")。在一些實(shí)施方案中，F(xiàn)ZD受體的Fri結(jié)構(gòu)域是以肽連接子連接人Fe區(qū)。FZD可溶性受體也包括含有氨基酸插入、缺失、取代和/或保存性取代的變異體蛋白。如本文所用的術(shù)語(yǔ)“連接子”或“連接子區(qū)”是指插入第一多肽(例如FZD組分)與第二多肽(例如Fe區(qū))之間的連接子。在一些實(shí)施方案中，所述連接子為肽連接子。連接子不應(yīng)對(duì)多肽的表達(dá)、分泌或生物活性有不利影響。優(yōu)選地，連接子不具抗原性并且不引發(fā)免疫反應(yīng)。如本文所用的術(shù)語(yǔ)“癌癥”和“癌性”是指或描述哺乳動(dòng)物的生理病狀，其中細(xì)胞群體的特點(diǎn)為細(xì)胞生長(zhǎng)不受管控。據(jù)了解，術(shù)語(yǔ)癌癥包含fct依賴性癌癥。癌癥的實(shí)例包括但不限在癌瘤、淋巴瘤、母細(xì)胞瘤、肉瘤和白血病。這類癌癥更特別的實(shí)例包括鱗狀細(xì)胞癌、小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、肺腺癌、肺鱗癌、腹膜癌、肝細(xì)胞癌、胃腸癌、胰臟癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、子宮頸癌、卵巢癌、肝臟癌癥、膀胱癌、肝癌、乳癌、大腸癌、結(jié)腸直腸癌、皮膚癌、黑素瘤、子宮內(nèi)膜或子宮癌、唾液腺癌、腎臟癌、肝癌、前列腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、肝細(xì)胞癌癥和各類頭頸部癌。術(shù)語(yǔ)“增生癥”和“增生性疾病”是指與異常細(xì)胞增殖相關(guān)的疾病，諸如癌癥。如本文所用的術(shù)語(yǔ)“腫瘤”和“贅瘤”是指由過(guò)度細(xì)胞生長(zhǎng)或增殖(無(wú)論是良性(非癌性)或惡性(癌性)，包括癌前病變)產(chǎn)生的任何組織團(tuán)塊。在某些實(shí)施方案中，所述腫瘤為一種上皮細(xì)胞腫瘤。在某些實(shí)施方案中，所述腫瘤為一種fct依賴性腫瘤。如本文所用的術(shù)語(yǔ)“受試者”是指任何動(dòng)物(例如，哺乳動(dòng)物)，包括但不限于人、非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物、犬、貓、嚙齒動(dòng)物等為特定治療的接受者。通常，術(shù)語(yǔ)“受試者”和“患者”在指人類受試者時(shí)可在本文中互換使用。如本文所用的術(shù)語(yǔ)“癌干細(xì)胞”和“CSC”和“腫瘤干細(xì)胞”以及“實(shí)體腫瘤干細(xì)胞”可互換使用并且是指來(lái)自以下的實(shí)體腫瘤的細(xì)胞群體(I)具有廣大的增殖能力；(2)具有不對(duì)稱細(xì)胞分裂的能力以產(chǎn)生一種或多種具有降低的細(xì)胞增殖或發(fā)展?jié)摿Φ囊逊只蟠?；以?3)具有自我更新或自我維護(hù)的對(duì)稱細(xì)胞分裂的能力。與大多數(shù)無(wú)法形成腫瘤的腫瘤細(xì)胞相比較，這些“癌干細(xì)胞”、“CSCs”、“腫瘤干細(xì)胞”或“實(shí)體腫瘤干細(xì)胞”的性質(zhì)賦予那些癌干細(xì)胞在系列移植入免疫功能低下的宿主(例如小鼠)中時(shí)形成可觸知的腫瘤的能力。相對(duì)在以雜亂無(wú)章的方式分化，癌干細(xì)胞進(jìn)行自我更新以當(dāng)突變發(fā)生時(shí)形成具有可隨時(shí)間改變的異常細(xì)胞類型的腫瘤。
“癌癥細(xì)胞”和“腫瘤細(xì)胞”以及語(yǔ)法等義詞是指源自腫瘤的總細(xì)胞群體，包括其中包含大量腫瘤細(xì)胞群體的非致瘤細(xì)胞和致瘤干細(xì)胞(本文也稱為癌干細(xì)胞)。術(shù)語(yǔ)“致瘤的”是指實(shí)體腫瘤干細(xì)胞的功能特性，包括自我更新(產(chǎn)生額外的致瘤性癌干細(xì)胞)和增殖以產(chǎn)生所有其它可使實(shí)體腫瘤干細(xì)胞形成腫瘤的腫瘤細(xì)胞(引起分化，因而為非致瘤腫瘤細(xì)胞)等性質(zhì)。與非致瘤性腫瘤細(xì)胞相比較(其在系列移植時(shí)無(wú)法形成腫瘤)，這些自我更新和增殖以生成所有其它腫瘤細(xì)胞的性質(zhì)賦予癌干細(xì)胞在系列移植到免疫功能低下的宿主(例如小鼠)時(shí)形成可觸知的腫瘤的能力。據(jù)觀察，自實(shí)體腫瘤取得腫瘤細(xì)胞后，非致瘤性腫瘤細(xì)胞可在初次移植入免疫功能低下的宿主(例如，小鼠)時(shí)形成腫瘤，但那些非致瘤性腫瘤在系列移植時(shí)不會(huì)產(chǎn)生腫瘤。如本文所用的術(shù)語(yǔ)“可接受的藥學(xué)載體”或“藥學(xué)上可接受的載體”是指當(dāng)與藥物組合物的活性成分，諸如治療性多肽結(jié)合時(shí)允許所述治療性多肽(例如)保留其生物活性的任何物質(zhì)。此外，“可接受的藥學(xué)載體”不會(huì)引發(fā)接受的受試者的免疫反應(yīng)。在一些實(shí)施方案中，“藥學(xué)載劑”可與“藥學(xué)載體”互換使用。實(shí)例包括但不限于任何標(biāo)準(zhǔn)的藥學(xué)載體，諸如磷酸鹽緩沖的鹽溶液、水和各種油/水乳劑。用在氣溶膠或胃腸道外施用的稀釋劑的實(shí)例為磷酸鹽緩沖的生理鹽水或生理(0.9%)鹽水。術(shù)語(yǔ)“治療有效量”是指可有效“治療”受試者或哺乳動(dòng)物中的疾病或病癥的藥劑(例如，可溶性受體或其它藥物)的量。在癌癥的情況中，所述藥劑(例如可溶性受體)的治療有效量可減少癌癥細(xì)胞的數(shù)量；降低腫瘤的大?。唤档桶└杉?xì)胞的發(fā)生頻率；抑制和/或停止癌癥細(xì)胞浸潤(rùn)到周圍器官；抑制和/或停止腫瘤轉(zhuǎn)移；抑制和/或停止腫瘤生長(zhǎng)；和/或緩解一種或多種與癌癥相關(guān)的癥狀至一定程度。所述藥劑(例如，可溶性受體)防止現(xiàn)存癌細(xì)胞生長(zhǎng)和/或殺死現(xiàn)存癌細(xì)胞的程度可稱為抑制細(xì)胞生長(zhǎng)和/或細(xì)胞毒性。如本文所用的術(shù)語(yǔ)“抑制腫瘤生長(zhǎng)”是指任何可抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的機(jī)制。在某些實(shí)施方案中，腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)是經(jīng)由減緩腫瘤細(xì)胞增殖而受抑制。在某些實(shí)施方案中，腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)是經(jīng)由停止腫瘤細(xì)胞增殖而受抑制。在某些實(shí)施方案中，腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)是經(jīng)由殺死腫瘤細(xì)胞而受抑制。在某些實(shí)施方案中，腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)是經(jīng)由誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡而受到抑制。在某些實(shí)施方案中，腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)是經(jīng)由誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化而受抑制。在某些實(shí)施方案中，腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)是經(jīng)由剝奪腫瘤細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)而受抑制。在某些實(shí)施方案中，腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)是經(jīng)由防止腫瘤細(xì)胞遷移而受抑制。在某些實(shí)施方案中，腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)是經(jīng)由防止腫瘤細(xì)胞入侵而受抑制。諸如“治療(treating/treatmet/totreat)” 和“緩解(alleviating/toalleviate) ”的術(shù)語(yǔ)是指下列兩個(gè)意思1)治愈、減緩、減輕診斷的病理學(xué)病狀或病癥的癥狀和/或停止診斷的病理學(xué)病狀或病癥進(jìn)展的治療措施，和2)預(yù)防或減緩針對(duì)的病理學(xué)病狀或病癥的發(fā)展的預(yù)防或防止措施。因此，需要治療的患者包括那些已患有所述病癥的患者；那些容易患有所述病癥的患者；以及那些希望預(yù)防所述病癥的患者。在某些實(shí)施方案中，如果所述患者顯示出一種或多種下列情況，那么所述受試者的癌癥被成功地根據(jù)本發(fā)明的方法“治療”:癌癥或腫瘤細(xì)胞的數(shù)量減少，或完全不存在；腫瘤尺寸減?。灰种苹蛭闯霈F(xiàn)癌癥或腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)到周邊器官，包括例如癌癥擴(kuò)散到軟組織和骨頭；抑制或未出現(xiàn)腫瘤轉(zhuǎn)移；抑制或未出現(xiàn)腫瘤或癌癥生長(zhǎng)；與特定癌癥相關(guān)的一種或多種癥狀減輕；發(fā)病率和死亡率降低；生活品質(zhì)改善；致瘤性、致瘤性發(fā)生頻率或腫瘤的致瘤能力減少；腫瘤中癌干細(xì)胞的數(shù)量或發(fā)生頻率減少；致瘤性細(xì)胞分化成非致瘤性狀態(tài)；或這些效果的一些組
口 ο如本文所用的術(shù)語(yǔ)“多核苷酸”和“核酸”是指由數(shù)個(gè)經(jīng)由磷酸二酯鍵鏈接的核苷酸單位(核糖核苷酸或脫氧核糖核苷酸或相關(guān)的結(jié)構(gòu)變異體)所組成的聚合物，包括但不限于DNA或RNA。這個(gè)術(shù)語(yǔ)涵蓋包含任何具有已知的DNA和RNA堿基類似物的序列，包括但不限于4_乙酰胞嘧啶、8-羥基-N6-甲基腺苷、氮丙啶胞嘧啶、假異胞嘧啶、5-(羧羥基-甲基)尿嘧啶、5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-羧甲基胺甲基-2-硫尿嘧啶、5-羧甲基-胺甲基尿嘧啶、二氫尿嘧啶、肌苷、N6-異戊烯基腺嘌呤、I-甲基腺嘌呤、I-甲基假尿嘧啶、I-甲基鳥嘌呤、I-甲基肌苷、2，2-二甲基鳥嘌呤、2-甲基腺嘌呤、2-甲基鳥嘌呤、3-甲基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、N6-甲基腺嘌呤、7-甲基鳥嘌呤、5-甲氨基甲基尿嘧啶、5-甲氧基-氨基-甲基-2-硫尿嘧啶、β D-甘露糖基Q核苷(que0Sine)、5’-甲氧羰基甲基尿嘧啶、5-甲氧基尿嘧啶、2-甲硫基-N6-異戊烯基腺嘌呤、尿嘧啶-5-氧基醋酸甲酯、尿嘧啶-5-氧基醋酸、氧基丁氧核苷(butoxosine)、假尿喃唳、Q核苷、2_硫胞喃唳、5-甲基_2_硫尿喃唳、2-硫尿喃啶、4-硫尿嘧啶、5-甲基尿嘧啶、N-尿嘧啶-5-氧基醋酸甲酯、尿嘧啶-5-氧基醋酸、假尿嘧啶、Q核苷、2-硫胞嘧啶及2，6-二氨基嘌呤。所述核苷酸的序列可由非核苷酸組分打斷。 多核苷酸可在聚合化后被進(jìn)一步修飾，諸如與標(biāo)簽組分共軛結(jié)合。其它類型的修改包括例如“封端以類似物取代一種或多種天然產(chǎn)生的核苷酸；核苷酸間修改，諸如不帶電荷的鍵聯(lián)(例如膦酸甲酯、磷酸三酯、磷酸酰胺化物、氨基甲酸酯等)和帶電鍵聯(lián)(例如，硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等)；懸掛部分，諸如蛋白質(zhì)(例如，核酸酶、毒素、抗體、信號(hào)肽、聚-L-賴氨酸等);嵌入物(例如吖啶、補(bǔ)骨脂內(nèi)酯等);螯合物(例如金屬、放射活性金屬、硼、氧化金屬等)；烷化劑；修飾的鍵聯(lián)(例如，α異位性核酸等);以及未經(jīng)過(guò)修飾的多核苷酸形式。此外，任何通常存在于糖中的羥基均可由例如膦酸基、磷酸基所取代，用標(biāo)準(zhǔn)的保護(hù)基保護(hù)，或經(jīng)過(guò)活化來(lái)制備對(duì)額外核苷酸的額外鍵聯(lián)，或可共軛結(jié)合固相支撐物。5’和3’端OH可被磷酸化或由胺或具有I至20個(gè)碳的有機(jī)封端基團(tuán)部分所取代。其它羥基也可衍生成標(biāo)準(zhǔn)保護(hù)基。多核苷酸還可含有本領(lǐng)域中眾所周知的類似形式的核糖或脫氧核糖，包括(例如)2’ -O-甲基_、2’ -O-烯丙基、2’ -氟或2，-疊氮基-核糖、碳環(huán)糖類似物、α -異位糖、差向異構(gòu)糖類，諸如阿拉伯糖、木糖或來(lái)蘇糖(Iyxoses)、批喃糖、呋喃糖、庚酮糖(heptuloses)、無(wú)環(huán)類似物和無(wú)堿基核苷類似物，諸如甲基核糖苷。一個(gè)或多個(gè)磷酸二酯鍵聯(lián)可由替代鍵聯(lián)基團(tuán)來(lái)取代。這些替代鍵聯(lián)基團(tuán)包括但不限于其中磷酸化物由P(O)S (“硫代酸酯”)、P (S) S (“二硫代酸酯”)、(0)NR2 (“酰胺化物”)、？(0)1 、？(0)( ’、0)或012 (“甲縮醛”)所取代的實(shí)施方案，其中各個(gè)R或R’是獨(dú)立地由H、或取代或未取代的烷基(1-20C)，其可選擇地含有醚(-0-)鍵聯(lián)、芳基、烯基、環(huán)烷基、環(huán)烯基或芳烷基。并非需要所有在多核苷酸中的鍵聯(lián)均相同。如本文所用的術(shù)語(yǔ)“載體”是指將DNA段從一個(gè)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至另一個(gè)細(xì)胞的核酸分子。術(shù)語(yǔ)“載體”是指一種構(gòu)建物，其可遞送并優(yōu)選表達(dá)一種或多種對(duì)宿主細(xì)胞重要的基因或序列。載體的實(shí)例包括但不限于病毒載體、裸DNA或RNA表達(dá)載體、質(zhì)粒、噬菌質(zhì)粒、粘性質(zhì)?；蚴删w載體、與陽(yáng)離子性冷凝劑相關(guān)的DNA或RNA表達(dá)載體，以及囊封在脂質(zhì)體中的DNA或RNA表達(dá)載體。如本文所用的術(shù)語(yǔ)“多肽”和“肽”以及“蛋白質(zhì)”和“蛋白質(zhì)片段”等可互換使用以指任何長(zhǎng)度的氨基酸殘基的聚合物。這些術(shù)語(yǔ)適用于其中所述聚合物中的一個(gè)或多個(gè)氨·基酸殘基為對(duì)應(yīng)的天然氨基酸的人造化學(xué)模擬物的氨基酸聚合物，并且術(shù)語(yǔ)還適用于天然氨基酸聚合物和非天然氨基酸聚合物。所述聚合物可為直鏈型或分支型，其可包含經(jīng)過(guò)修飾的氨基酸，并且其可由非氨基酸中斷。這些術(shù)語(yǔ)也包含已經(jīng)過(guò)天然或介入方式修飾的氨基酸聚合物；這些修飾方式，為例如形成二硫鍵、糖基化、脂質(zhì)化、乙?；⒘姿峄?，或任何其它操作或修飾，諸如與標(biāo)記組分共軛結(jié)合。定義還包括(例如)含有一種或多種氨基酸類似物(包括，例如非天然氨基酸，等)以及本領(lǐng)域已知的其它修飾的多肽。據(jù)了解，由于本發(fā)明的多肽是以抗體為基礎(chǔ)(至少部分)，在某些實(shí)施方案中，所述多肽可能以單鏈或聯(lián)結(jié)鏈的形式出現(xiàn)。“氨基酸” 一詞是指天然和合成氨基酸，以及功能類似在天然氨基酸的氨基酸類似物和氨基酸模擬物。天然氨基酸為由遺傳密碼編碼，以及那些稍后被修飾的氨基酸，例如，羥基脯氨酸、Y-羧基谷氨酸酯和鄰磷酸絲氨酸。氨基酸類似物是指具有與天然氨基酸相同的基礎(chǔ)化學(xué)結(jié)構(gòu)(例如，結(jié)合氫的α碳、羧基、氨基和R基的化合物)，例如，絲氨酸、正白氨酸、甲硫氨酸亞砜、甲硫氨酸甲基锍。這類的類似物可具有經(jīng)過(guò)修飾的R基(例如正白氨酸)或經(jīng)過(guò)修改的肽骨架，但保留與天然氨基酸相同的基本化學(xué)結(jié)構(gòu)。氨基酸模擬物是指具有與氨基酸的一般化學(xué)結(jié)構(gòu)不同的結(jié)構(gòu)，但功能類似于天然氨基酸的化學(xué)化合物。多肽或其它藥劑“特異結(jié)合”一種蛋白質(zhì)是指與替代物質(zhì)(包括不相關(guān)的蛋白質(zhì))相比較，所述多肽或其它藥劑更頻繁地、更迅速地、持續(xù)更久地、親和力更強(qiáng)地，或以上述各項(xiàng)的一些組合的方式與所述蛋白質(zhì)反應(yīng)或結(jié)合。在某些實(shí)施方案中，“特異結(jié)合”是指(例如)一種藥劑以約O. ImM或更小，但更常為小于約I μΜ的KD結(jié)合一種蛋白質(zhì)。在某些實(shí)施方案中，“特異結(jié)合”是指一種藥劑通常以至少約O. 01 μ M或更小，至少約O. 01 μ M或更小，并且其它時(shí)間以至少約InM或更小的KD結(jié)合一種蛋白質(zhì)。由在不同物種中的同源蛋白間的序列一致性，特異結(jié)合可包括能辨識(shí)超過(guò)一種物種中的特定蛋白質(zhì)(諸如fct蛋白)的藥齊U。同樣地，由在不同fct蛋白在Wnts序列的某些區(qū)中的同源性，特異結(jié)合可包括能辨識(shí)超過(guò)一種Wnt蛋白的多肽(或其它藥劑)。據(jù)了解，特異結(jié)合第一個(gè)標(biāo)靶的藥劑可能會(huì)或可能不會(huì)特異結(jié)合第二個(gè)標(biāo)靶。因此，“特異結(jié)合”并不一定需要(雖然可包括)唯一結(jié)合，即，結(jié)合單一標(biāo)靶。因此，在某些實(shí)施方案中，藥劑可能特異結(jié)合超過(guò)一個(gè)目標(biāo)(例如多種不同的人Wnts)。一般而言，但不一定，提及的結(jié)合意指特異性結(jié)合。在兩種或更多種核酸或多肽的情形下，“一致”或“一致性百分比”是指當(dāng)比較和對(duì)準(zhǔn)(如果必要時(shí)，引進(jìn)溝隙)最大一致性時(shí)，在不考慮任何保存性氨基酸替代為序列一致性的一部分下，兩個(gè)或更多個(gè)序列或子序列彼此相同或具有特定百分比的核苷酸或氨基酸殘基彼此相同。一致性百分比可使用序列比較軟件或演算法或通過(guò)目視檢查測(cè)量?？捎糜趯?duì)準(zhǔn)氨基酸或核苷酸序列的各種演算法和軟件是本領(lǐng)域已知的。一種這類序列對(duì)準(zhǔn)演算法的非限制性實(shí)例為描述于Karlin等，1990, Proc. Natl. Acad. Sci.，87:2264-2268中的演算法，在Karlin等，1993，PNAS 90; 5873-5877中有所修改并被并入NBLAST和XBLAST程序中(Altschul 等 1991，Nucleic Acids Res.，25:3389-3402)。其它可用于對(duì)準(zhǔn)序列的可公開取得的軟件程序包括但不限于Gapped BLAST、BLAST-2、WU-BLAST-2 (Altschul等，1991, Methods in Enzymology, 266:460-480)、ALIGN、ALIGN-2 (加州南舊金山，Genentech 公司)、Megalign(DNASTAR)及Bestfit程序(威斯康辛序列分析包，Unix第8版，遺傳學(xué)電腦集團(tuán)(Genetics Computer Group),威斯康辛州，麥迪邏市，University ResearchPark, 575Science Drive, Madison, WI 53711)。在一些實(shí)施方案中，當(dāng)使用序列比較演算法或通過(guò)目視檢查來(lái)測(cè)量時(shí)，本發(fā)明的兩個(gè)核酸或多肽實(shí)質(zhì)上相同，意思是其具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%并且在一些實(shí)施方案中，具有至少95%、96%、97%、98%、99%的核苷酸或氨基酸殘基一致性。在一些實(shí)施方案中，一致性出現(xiàn)在長(zhǎng)度為至少約10、至少約20、至少約40-60、至少約60-80或介于其間的整數(shù)的殘基的序列區(qū)中。在某些實(shí)施方案中，一致性是出現(xiàn)在超過(guò)60-80個(gè)殘基長(zhǎng)的較長(zhǎng)區(qū)域(諸如至少約90-100殘基)中。在一些實(shí)施方案中，在相比較的序列的全長(zhǎng)(諸如核苷酸序列的編碼區(qū))中，所述序列實(shí)質(zhì)上一致。“保存性氨基酸取代”為其中一個(gè)氨基酸殘基由另一個(gè)具有類似側(cè)鏈的氨基酸殘基替換。具有類似側(cè)鏈的氨基酸殘基族群已在本領(lǐng)域中鑒別出，包括堿性側(cè)鏈(例如，賴氨酸、精氨酸、組氨酸)、酸性側(cè)鏈(例如，天門冬氨酸、谷氨酸)、不帶電荷的極性側(cè)鏈(例如，甘氨酸、天門冬酰胺、谷酰胺、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非極性側(cè)鏈(例如，丙氨酸、纈氨酸、白氨酸、異白氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、β -支鏈型側(cè)鏈(例如，蘇氨酸、纈氨酸、異白氨酸)和芳香族側(cè)鏈(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、組氨酸)。例如苯丙氨酸取代酪氨酸為一種保存性取代。優(yōu)選地，多肽序列中的保存性取代和本發(fā)明的其它藥劑不會(huì)終止含有所述氨基酸序列的多肽結(jié)合標(biāo)靶(即，所述多肽或其它藥劑結(jié)合的一種或多種Wnts)。鑒別不排除標(biāo)靶結(jié)合的核苷酸和氨基酸保存性取代的方法為本領(lǐng)域所眾所周知的(參見(jiàn)，例如 Brummell 等,1993, Biochem. , 32:1180-87 ；Kobayashi 等,1999, ProteinEng. 12:879-84 ;和 Burks 等，1997 PNAS,94:412-17)。如本文所用的術(shù)語(yǔ)“約”是指所指明的數(shù)字加或減10%。例如，“約10%”指明9%至11%的范圍。除非另有明確規(guī)定，本公開內(nèi)容和權(quán)利要求書中所使用的單數(shù)形式“一 (a/an) ”和“所述(the)”包括復(fù)數(shù)形式。要了解，凡是本文中以措辭“包含”描述的實(shí)施方案也提供以“由...組成”和/或“主要由..·組成”等術(shù)語(yǔ)描述的類似實(shí)施方案。
如短語(yǔ)中使用的“和/或”，諸如“A和/或B”中，意指同時(shí)包括A和B ;A或B ;A(單獨(dú))和B (單獨(dú))。同樣地，如短語(yǔ)中使用的“和/或”，諸如“A、B和/或C”，是意圖涵蓋以下每一實(shí)施方案A、B和C ;A、B或C ;A或C ;A或B ;B或C ;A和C ；A和B ;B和C ；A (單獨(dú))；B (單獨(dú))和C (單獨(dú))。II. Wnt 結(jié)合劑本發(fā)明提供結(jié)合(例如特異結(jié)合)一種或多種人Wnt蛋白(Wnts)的藥劑。這些藥劑在本文中稱為“fct結(jié)合劑”。在某些實(shí)施方案中，所述藥劑特異結(jié)合一個(gè)、二個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)、六個(gè)、七個(gè)、八個(gè)、九個(gè)、十個(gè)或更多個(gè)fct蛋白。以非限制性實(shí)例說(shuō)明，所述Wnt結(jié)合劑可能結(jié)合 fctl、Wnt2> Wnt2b> Wnt3> Wnt3a> Wnt7a> Wnt7b> Wnt8a> Wnt8b> WntlOa 和 /或WntlOb。在某些實(shí)施方案中，所述fct結(jié)合劑結(jié)合Wntl、Wnt2、Wnt3、Wnt3a和Wnt7b。在某些實(shí)施方案中，所述Wnt結(jié)合劑為一種Wnt拮抗劑。在某些實(shí)施方案中，所述藥劑抑制Wnt信號(hào)傳遞。在一些實(shí)施方案中，所述藥劑抑制典型的fct信號(hào)傳遞。 在某些實(shí)施方案中，所述Wnt結(jié)合劑為一種多肽。在某些實(shí)施方案中，所述Wnt結(jié)合劑為一種可溶性受體。在某些實(shí)施方案中，所述Wnt結(jié)合劑包含F(xiàn)ZD受體的胞外結(jié)構(gòu)域。在一些實(shí)施方案中，所述fct結(jié)合劑包含F(xiàn)ZD受體的Fri結(jié)構(gòu)域。在某些實(shí)施方案中，所述FZD受體為一種人FZD受體。在某些實(shí)施方案中，所述人FZD受體為FZD1、FZD2、FZD3、FZD4、FZD5、FZD6、FZD7、FZD8、FZD9或FZD10。在一些替代實(shí)施方案中，所述Wnt結(jié)合劑包含一部分SFRP。在一些實(shí)施方案中，所述fct結(jié)合劑包含SFRP的Fri結(jié)構(gòu)域。在某些實(shí)施方案中，所述SFRP為人SFRP。在一些實(shí)施方案中，所述人SFRP為SFRP1、SFRP2、SFRP3、SFRP4或SFRP5。在其它替代實(shí)施方案中，所述Wnt結(jié)合劑包含Ror蛋白的胞外結(jié)構(gòu)域。在一些實(shí)施方案中，所述Wnt結(jié)合劑包含Ror蛋白的Fri結(jié)構(gòu)域。在某些實(shí)施方案中，所述Ror為人Ror。在一些實(shí)施方案中，所述人Ror為Rorl或Ror2。在某些實(shí)施方案中，所述Wnt結(jié)合劑為一種可溶性受體。在一些實(shí)施方案中，所述Wnt結(jié)合劑為一種可溶性蛋白。在某些實(shí)施方案中，所述fct結(jié)合劑為一種可溶性FZD受體?？扇苄訤ZD受體的非限制性實(shí)例可在美國(guó)專利第7，723，477號(hào)中找到，其全部?jī)?nèi)容以引用的方式并入本文。在某些實(shí)施方案中，所述fct結(jié)合劑為可溶性SFRP或可溶性Ror受體。FZD I的Fri結(jié)構(gòu)域包括SEQ ID NO:27的約氨基酸87-237。FZD2的Fri結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID NO:28的約氨基酸24-159。FZD3的Fri結(jié)構(gòu)域包括SEQ ID N0:29的約氨基酸23-143。FZD4的Fri結(jié)構(gòu)域包括SEQ ID NO: 22的約氨基酸40-170。FZD5的Fri結(jié)構(gòu)域包括SEQ ID NO:23的約氨基酸27-157。FZD6的Fri結(jié)構(gòu)域包括SEQ ID NO:24的約氨基酸19-146。FZD7的Fri結(jié)構(gòu)域包括SEQ ID NO:25的約氨基酸33-170。FZD8的Fri結(jié)構(gòu)域包括SEQ ID NO:30的約氨基酸28-158。FZD9的Fri結(jié)構(gòu)域包括SEQ ID N0:31的約氨基酸23-159。FZDlO的Fri結(jié)構(gòu)域包括SEQ ID NO: 26的約氨基酸21-154。每一人FZD受體的相對(duì)應(yīng)、預(yù)測(cè)的Fri結(jié)構(gòu)域序列是以SEQ ID N0:32_41提供。每一人FZD受體(FZDl-IO)的最小、核心Fri結(jié)構(gòu)域序列是以SEQ ID N0:3_12提供。每一人SFRPs (SFRP1-5)的最小、核心Fri結(jié)構(gòu)域序列是以SEQ ID NO: 13-17提供。人Rorl和Ror2的最小、核心Fri結(jié)構(gòu)域序列是以SEQ ID N0:58和SEQ ID N0:59提供。本領(lǐng)域技術(shù)人員對(duì)與每一個(gè)Fri結(jié)構(gòu)域?qū)?yīng)的確切氨基酸可能會(huì)有不同的理解。因此，以上和此處概述的結(jié)構(gòu)域的N端或C端可延長(zhǎng)或縮短1、2、3、4、5、6、7、8、9或甚至10個(gè)氨基酸。在某些實(shí)施方案中，所述Wnt結(jié)合劑包含結(jié)合一種或多種人Wnt蛋白的人FZD受體的Fri結(jié)構(gòu)域或所述Fri結(jié)構(gòu)域的片段或變異體。在某些實(shí)施方案中，所述人FZD受體為 FZD1、FZD2、FZD3、FZD4、FZD5、FZD6、FZD7、FZD8、FZD9*FZD10。在某些實(shí)施方案中，所述人FZD受體為FZD4。在某些替代實(shí)施方案中，所述人FZD受體為FZD5。在某些其它替代實(shí)施方案中，所述人FZD受體為FZD8。在某些實(shí)施方案中，所述FZD為FZD4并且所述Wnt結(jié)合劑包含SEQ ID NO: 6或包含SEQ ID NO: 19的約氨基酸40至170。在某些實(shí)施方案中，所述FZD為FZD5并且所述Wnt結(jié)合劑包含SEQ ID NO: 7或包含SEQ ID NO: 20的約氨基酸27-157。在某些實(shí)施方案中，所述FZD為FZD7并且所述Wnt結(jié)合劑包含SEQ ID NO: 9或包含SEQ ID NO: 25的約氨基酸33至170。在某些實(shí)施方案中，所述FZD為FZD8并且所述Wnt結(jié)合劑包含SEQ ID NO: 10或包含SEQ ID NO:21的約氨基酸28-158。在某些實(shí)施方案中，所述FZD為FZDlO并且所述Wnt結(jié)合劑包含SEQ ID NO: 12或包含SEQ ID N0:26的約氨基酸 21-154。 在某些實(shí)施方案中，所述Wnt結(jié)合劑包含選自由SEQ ID NO: 3_12組成的組的最小Fri結(jié)構(gòu)域序列。在某些實(shí)施方案中，所述Wnt結(jié)合劑包含選自由SEQ ID N0:13_17組成的組的最小Fri結(jié)構(gòu)域序列。在某些實(shí)施方案中，所述fct結(jié)合劑包含選自由SEQ IDNO: 58和SEQ IDNO: 59組成的組的最小Fri結(jié)構(gòu)域序列。在某些實(shí)施方案中，所述Wnt結(jié)合劑包含任一前述FZD Fri結(jié)構(gòu)域序列的變異體，所述變異體含有一個(gè)或多個(gè)(例如一個(gè)、二個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)、六個(gè)、七個(gè)、八個(gè)、九個(gè)、十個(gè)等)保存性取代并且能夠結(jié)合fct。在某些替代實(shí)施方案中，所述Wnt結(jié)合劑包含人SFRP的Fri結(jié)構(gòu)域，或結(jié)合一種或多種人Wnt蛋白的這類Fri結(jié)構(gòu)域的片段或變異體。例如，在某些實(shí)施方案中，所述藥劑包含選自由SEQ ID NO: 13-17組成的組的最小SFRP Fri結(jié)構(gòu)域序列。在某些實(shí)施方案中，所述fct結(jié)合劑包含任一前述SFRP Fri結(jié)構(gòu)域序列的變異體，所述變異體含有一個(gè)或多個(gè)(例如一個(gè)、二個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)、六個(gè)、七個(gè)、八個(gè)、九個(gè)、十個(gè)等)保存性取代并且保持結(jié)合fct的能力。在某些替代實(shí)施方案中，所述Wnt結(jié)合劑包含人Ror蛋白的Fri結(jié)構(gòu)域,或結(jié)合一種或多種人fct蛋白的Fri結(jié)構(gòu)域的片段或變異體。例如，在某些實(shí)施方案中，所述藥劑包含選自由SEQ ID NO: 58和SEQ ID NO: 59組成的組的最小Ror Fri結(jié)構(gòu)域序列。在某些實(shí)施方案中，所述Wnt結(jié)合劑包含任一前述Ror Fri結(jié)構(gòu)域序列的變異體,所述變異體含有一個(gè)或多個(gè)(例如一個(gè)、二個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)、六個(gè)、七個(gè)、八個(gè)、九個(gè)、十個(gè)等)保存性取代并且保持結(jié)合Wnt的能力。在某些實(shí)施方案中，所述Wnt結(jié)合劑(諸如包含人FZD受體或其它可溶性FZD受體的藥劑的最小Fri結(jié)構(gòu)域)進(jìn)一步包含人Fe區(qū)(例如人IgGl Fe區(qū))。所述Fe區(qū)可從任何類別的免疫球蛋白，IgG、IgA、IgM、IgD和IgE取得。在一些實(shí)施方案中，所述Fe區(qū)為野生型Fe區(qū)。在一些實(shí)施方案中，所述Fe區(qū)為突變的Fe區(qū)。在一些實(shí)施方案中，所述Fe區(qū)是在N端由1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個(gè)氨基酸(例如，在絞鏈區(qū))截?cái)?。在一些?shí)施方案中，絞鏈區(qū)中的一個(gè)氨基酸被改變以阻擋形成不良的二硫鍵。在一些實(shí)施方案中，半胱氨酸由絲氨酸取代以阻擋形成不良的二硫鍵。在某些實(shí)施方案中，所述Fe區(qū)包含SEQ ID NO: 18,SEQ ID NO: 42 或 SEQ ID NO: 43，或是由 SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 42 或 SEQ ID NO: 43 組成。在某些實(shí)施方案中，Wnt結(jié)合劑為包含至少一種FZD受體、SFRP或Ror蛋白和Fe區(qū)的最小Fri結(jié)構(gòu)域的融合蛋白。如本文所用的“融合蛋白”為一種由核酸分子表達(dá)的雜交蛋白，所述核酸分子包含具有至少兩個(gè)基因的核苷酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述第一多肽的C末端是連接所述免疫球蛋白Fe區(qū)的N端。在一些實(shí)施方案中，所述第一多肽(例如，F(xiàn)ZD Fri結(jié)構(gòu)域)是直接連接Fe區(qū)(即，無(wú)插入的肽連接子)。在一些實(shí)施方案中，所述第一多肽是經(jīng)由肽連接子連接Fe區(qū)。如本文所用的術(shù)語(yǔ)“連接子”是指插入第一多肽(例如，F(xiàn)ZD組分)和第二多肽(例如，F(xiàn)e區(qū))之間的連接子。在一些實(shí)施方案中，所述連接子為肽連接子。連接子不應(yīng)對(duì)多肽的表達(dá)、分泌或生物活性有不利的影響。連接子不應(yīng)有抗原性并且不應(yīng)該引起免疫反應(yīng)。本領(lǐng)域技術(shù)人員已知合適的連接子，其通常包括甘氨酸和絲氨酸殘基的混合物，并且通常包括立體上未被遮蔽的氨基酸?？杀患{入有用的連接子中的其它氨基酸包括蘇氨酸和丙氨·酸殘基。連接子的長(zhǎng)度可在(例如)1-50個(gè)氨基酸、1-22個(gè)氨基酸、1-10個(gè)氨基酸、1-5個(gè)氨基酸或1-3個(gè)氨基酸的范圍內(nèi)。連接子可包括但不限于SerGly、GGSG、GSGS、GGGS、S(GGS)η (其中 η 為 1-7)、GRA、聚(Gly)、聚(Ala)、ESGGGGVT(SEQ ID NO:60)、LESGGGGVT(SEQ IDNO :61)、GRAQVT(SEQ ID NO:62)、WRAQVT(SEQ ID NO:63)和 ARGRAQVT(SEQ ID NO:64) 如本文所用的連接子為一種不包括來(lái)自第一多肽(例如，F(xiàn)ZD Fri結(jié)構(gòu)域)的C端或第二多肽(例如Fe區(qū))的N端的氨基酸殘基的插入肽序列。FZD受:體、SFRPs和Ror蛋白含有指導(dǎo)蛋白質(zhì)運(yùn)送的/[目號(hào)序列。/[目號(hào)序列(又稱為信號(hào)肽或前導(dǎo)序列)是位于新生多肽的N端。信號(hào)序列將多肽靶向內(nèi)質(zhì)網(wǎng)并將蛋白質(zhì)歸類到其目標(biāo)位置，例如到達(dá)細(xì)胞器的內(nèi)部空間、到內(nèi)膜、到細(xì)胞外膜，或經(jīng)由分泌到達(dá)細(xì)胞外。大多數(shù)信號(hào)序列是在蛋白質(zhì)被運(yùn)送到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)后通過(guò)信號(hào)肽酶從蛋白質(zhì)分裂出來(lái)。信號(hào)序列從多肽裂解通常是發(fā)生在氨基酸序列中的特定部位并且是取決于信號(hào)序列中的氨基酸殘基。雖然通常具有一個(gè)特定裂解位點(diǎn)，信號(hào)肽酶可能辨識(shí)和/或使用超過(guò)一個(gè)裂解位點(diǎn)，而產(chǎn)生異源多肽N端。例如，使用信號(hào)序列內(nèi)的不同裂解位點(diǎn)可能產(chǎn)生具有不同N端氨基酸的多肽。因此，在一些實(shí)施方案中，本文所述的多肽可能包含具有不同N端的多肽的混合物。在一些實(shí)施方案中，所述N端的長(zhǎng)度相差1、2、3、4或5個(gè)氨基酸。在一些實(shí)施方案中,所述多肽實(shí)質(zhì)上同質(zhì)，即，所述多肽具有相同的N端。在一些實(shí)施方案中，所述多肽的信號(hào)序列包含一個(gè)或多個(gè)(例如一個(gè)、二個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)、六個(gè)、七個(gè)、八個(gè)、九個(gè)、十個(gè)等)氨基酸取代和/或缺失。在一些實(shí)施方案中，所述多肽的信號(hào)序列包含的氨基酸取代和/或缺失可容許一個(gè)裂解位點(diǎn)占主導(dǎo)地位，從而產(chǎn)生具有一個(gè)N端的實(shí)質(zhì)上同源的多肽。在一些實(shí)施方案中，所述信號(hào)序列為SEQ ID NO:67 (SEQ ID NO 30的氨基酸1_27)。在一些實(shí)施方案中，SEQ ID N0:67的氨基酸25和/或26由不同氨基酸所取代。在一些實(shí)施方案中，SEQID N0:67的氨基酸17、18、19、23、24、25和/或26由不同氨基酸所取代。在一些實(shí)施方案中，SEQ ID N0:67的氨基酸17、23、24、25和26由不同氨基酸所取代。在一些實(shí)施方案中，SEQ ID N0:67的氨基酸17由苯丙氨酸或白氨酸所取代。在一些實(shí)施方案中，SEQ ID NO:67的氨基酸23由脯氨酸所取代。在一些實(shí)施方案中，SEQ ID NO: 67的氨基酸24由異白氨酸和苯丙氨酸所取代。在一些實(shí)施方案中，SEQ ID N0:67的氨基酸25由纈氨酸、異白氨酸或丙氨酸所取代。在一些實(shí)施方案中，SEQ ID N0:67的氨基酸26由組氨酸、酪氨酸或組氨酸所取代。在一些實(shí)施方案中，SEQ ID NO:67的氨基酸25由纈氨酸所取代。在一些實(shí)施方案中，SEQ ID NO:67的氨基酸26由白氨酸所取代。在一些實(shí)施方案中，所述多肽的信號(hào)序列包含選自表I中所列的組的序列或由表I中所列的組所組成。表I
MEWGYLLEVTSLLAALALLQRSSGAAASEQ ID NO:67
MEWGYLLEVTSLLAALALLQRSSGALASEQ ID NO:68
MEWGYLLEVTSLLAALALLQRSSGVLASEQ ID NO:69
MEWGYLLEVTSLLAALLLLQRSPIVHASEQ ID NO:70
MEWGYLLEVTSLLAALFLLQRSPIVHASEQ ID NO:71
MEWGYLLEVTSLLAALLLLQRSPFVHASEQ ID NO:72
MEWGYLLEVTSLLAALLLLQRSPIIYASEQ ID NO:73
MEWGYLLEVTSLLAALLLLQRSPIAHASEQ ID NO:74表2
第一多肽第二多肽
SEQ ID NO: 30 的氨基酸 25-158SEQ ID NO:43 的氨基酸 I-232
SEQ ID NO: 30 的氨基酸 25-158SEQ ID NO:43 的氨基酸 I-231
SEQ ID NO: 30 的氨基酸 25-158SEQ ID NO:43 的氨基酸 2-232
SEQ ID NO: 30 的氨基酸 25-158SEQ ID NO:43 的氨基酸 2-231
SEQ ID NO: 30 的氨基酸 25-158SEQ ID NO:43 的氨基酸 3-232
SEQ ID NO: 30 的氨基酸 25-158SEQ ID NO:43 的氨基酸 3-231
SEQ ID NO: 30 的氨基酸 25-158SEQ ID NO:43 的氨基酸 4-232
SEQ ID NO: 30 的氨基酸 25-158SEQ ID NO:43 的氨基酸 4-231
SEQ ID NO: 30 的氨基酸 25-158SEQ ID NO:43 的氨基酸 5-232SEQ ID NO: 30 的氨基酸 25-158 ~SEQ ID NO:43 的氨基酸 5-231
SEQ ID NO: 30 的氨基酸 25-158SEQ ID NO:43 的氨基酸 6-232
SEQ ID NO: 30 的氨基酸 25-158SEQ ID NO:43 的氨基酸 6-231
SEQ ID NO: 30 的氨基酸 26-158SEQ ID NO:43 的氨基酸 I-232
SEQ ID NO: 30 的氨基酸 26-158SEQ ID NO:43 的氨基酸 I-231
SEQ ID NO: 30 的氨基酸 26-158SEQ ID NO:43 的氨基酸 2-232
SEQ ID NO: 30 的氨基酸 26-158SEQ ID NO:43 的氨基酸 2-231
SEQ ID NO: 30 的氨基酸 26-158SEQ ID NO:43 的氨基酸 3-232 SEQ ID NO: 30 的氨基酸 26-158SEQ ID NO:43 的氨基酸 3-231
SEQ ID NO: 30 的氨基酸 26-158SEQ ID NO:43 的氨基酸 4-232
SEQ ID NO: 30 的氨基酸 26-158SEQ ID NO:43 的氨基酸 4-231
SEQ ID NO: 30 的氨基酸 26-158SEQ ID NO:43 的氨基酸 5-232
SEQ ID NO: 30 的氨基酸 26-158SEQ ID NO:43 的氨基酸 5-231
SEQ ID NO: 30 的氨基酸 26-158SEQ ID NO:43 的氨基酸 6-232
SEQ ID NO: 30 的氨基酸 26-158SEQ ID NO:43 的氨基酸 6-231
SEQ ID NO: 30 的氨基酸 27-158SEQ ID NO:43 的氨基酸 I-232
SEQ ID NO: 30 的氨基酸 27-158SEQ ID NO:43 的氨基酸 I-231
SEQ ID NO: 30 的氨基酸 27-158SEQ ID NO:43 的氨基酸 2-232
SEQ ID NO: 30 的氨基酸 27-158SEQ ID NO:43 的氨基酸 2-231
SEQ ID NO: 30 的氨基酸 27-158SEQ ID NO:43 的氨基酸 3-232
SEQ ID NO: 30 的氨基酸 27-158SEQ ID NO:43 的氨基酸 3-231
SEQ ID NO: 30 的氨基酸 27-158SEQ ID NO:43 的氨基酸 4-232
SEQ ID NO: 30 的氨基酸 27-158SEQ ID NO:43 的氨基酸 4-231
SEQ ID NO: 30 的氨基酸 27-158SEQ ID NO:43 的氨基酸 5-23權(quán)利要求
1.一種Wnt結(jié)合劑，其包含 (a)第一多肽，其主要由選自由以下組成的組的氨基酸組成SEQID N0:27的Xl至Y1、SEQ ID N0:28 的 X2 至 Y2、SEQ ID NO:29 的 X3 至 Y3、SEQ ID NO:22 的 X4 至 Y4、SEQ IDNO: 23 的 X5 至 Y5、SEQ ID NO: 24 的 X6 至 Y6、SEQ ID NO: 25 的 X7 至 Y7、SEQ ID NO: 30 的X8 至 Y8、SEQ ID NO: 31 的 X9 至 Y9 和 SEQ ID NO: 26 的 XlO 至 YlO ;和 (b)第二多肽，其主要由SEQID NO:43的氨基酸A至B組成； 其中所述第一多肽直接連接所述第二多肽；且 其中 Xl=氨基酸 69、70、71、72、73、74、75 或 76 Yl=氨基酸 236、237、238、239、240、241、242 或 243 X2=氨基酸 22、23、24、25、26、27 或 28Y2=氨基酸 158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171 或 172 X3=氨基酸 18、19、20、21、22、23、24 或 25 Y3=氨基酸 141、142、143、144、145、146、147、148 或 149 X4=氨基酸 38、39、40、41 或 42 Y4=氨基酸 168、169、170、171、172、173、174、175 或 176 X5=氨基酸 25、26、27、28 或 29 Y5=氨基酸 155、156、157、158、159、160、161、162、163 或 164 X6=氨基酸 19、20、21、22、23 或 24 Y6=氨基酸 144、145、146、147、148、149、150、151 或 152 X7=氨基酸 22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33 或 34 Y7=氨基酸 178、179、180、181、182、183、184、185 或 186 X8=氨基酸 25、26、27、28、29、30 或 31 Y8=氨基酸 156、157、158、159、160、161、162、163 或 164 X9=氨基酸 21、22、23 或 24 Y9=氨基酸 137、138、139、140、141、142、143、144、145 或 146 XlO=氨基酸 20、21、22、23、24 或 25 YlO=氨基酸 152、153、154、155、156、157、158、159 或 160 A=氨基酸1、2、3、4、5或6 B=氨基酸231或232。
2.—種Wnt結(jié)合劑，其包含 (a)第一多肽，其主要由SEQID NO: 30的氨基酸X至Y組成；和 (b)第二多肽，其主要由SEQID NO:43的氨基酸A至B組成； 其中所述第一多肽直接連接所述第二多肽；且 其中 X=氨基酸 25、26、27、28、29、30 或 31 Y=氨基酸 156、157、158、159、160、161、162、163 或 164 A=氨基酸1、2、3、4、5或6 B=氨基酸231或232。
3.如權(quán)利要求I或2所述的Wnt結(jié)合劑，其中所述第一多肽的C端連接所述第二多肽的N端。
4.如權(quán)利要求I至3中任一項(xiàng)所述的Wnt結(jié)合劑，其中所述第一多肽主要由SEQIDNO:30的氨基酸25-158組成。
5.如權(quán)利要求I至3中任一項(xiàng)所述的Wnt結(jié)合劑，其中所述第一多肽主要由SEQIDNO:30的氨基酸28-158組成。
6.如權(quán)利要求I至5中任一項(xiàng)所述的Wnt結(jié)合劑，其中所述第二多肽主要由SEQIDNO:43的氨基酸1-232組成。
7.如權(quán)利要求I至5中任一項(xiàng)所述的Wnt結(jié)合劑，其中所述第二多肽主要由SEQIDNO:43的氨基酸3-232組成。
8.如權(quán)利要求I至5中任一項(xiàng)所述的Wnt結(jié)合劑，其中所述第二多肽主要由SEQIDNO:43的氨基酸6-232組成。
9.如權(quán)利要求I至3中任一項(xiàng)所述的Wnt結(jié)合劑，其中所述第一多肽為SEQIDNO: 39 ；和/或所述第二多肽為SEQ ID NO:43。
10.如權(quán)利要求I至3中任一項(xiàng)所述的Wnt結(jié)合劑，其中所述第一多肽為SEQIDNO: 39 ；和/或所述第二多肽為SEQ ID NO:42。
11.一種Wnt結(jié)合劑，其包含選自由以下組成的組的氨基酸序列SEQ ID NO: 53,SEQ IDNO:50,SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49、SEQ IDNO:51和 SEQ ID NO: I。
12.一種Wnt結(jié)合劑，其包含SEQ ID NO: 50。
13.一種Wnt結(jié)合劑，其包含SEQ ID NO: 53。
14.如權(quán)利要求I至13中任一項(xiàng)所述的Wnt結(jié)合劑，其為可溶性受體。
15.如權(quán)利要求I至14中任一項(xiàng)所述的Wnt結(jié)合劑，其為Wnt的拮抗劑。
16.如權(quán)利要求I至15中任一項(xiàng)所述的Wnt結(jié)合劑,其結(jié)合選自由以下組成的組的一種或多種人 Wnt 蛋白Wntl、Wnt2、Wnt2b、Wnt3、Wnt3a、Wnt7a、Wnt7b、Wnt8a、Wnt8b、Wntl0a和 Wnt10b。
17.如權(quán)利要求16所述的Wnt結(jié)合劑，其結(jié)合選自由以下組成的組的兩種或多于兩種人 Wnt 蛋白￥]11:1、￥1^2、￥1^213、￥1^3、￥1^33、￥1^73、￥1^713、￥1^83、￥1^813、￥111:103和 Wnt 10b。
18.如權(quán)利要求17所述的Wnt結(jié)合劑，其結(jié)合1社1、1社2、11^3、11^33和11^713。
19.如權(quán)利要求I至18中任一項(xiàng)所述的Wnt結(jié)合劑，其抑制Wnt信號(hào)傳遞。
20.如權(quán)利要求19所述的Wnt結(jié)合劑，其中所述Wnt信號(hào)傳遞為典型的Wnt信號(hào)傳遞。
21.如權(quán)利要求I至20中任一項(xiàng)所述的Wnt結(jié)合劑，經(jīng)由尾靜脈以約10mg/kg的劑量施用時(shí)，所述fct結(jié)合劑在大鼠中的半衰期為至少約100小時(shí)。
22.如權(quán)利要求I至21中任一項(xiàng)所述的Wnt結(jié)合劑，其抑制腫瘤或腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。
23.如權(quán)利要求I至22中任一項(xiàng)所述的Wnt結(jié)合劑，其誘導(dǎo)腫瘤中的分化標(biāo)記的表達(dá)。
24.如權(quán)利要求I至23中任一項(xiàng)所述的Wnt結(jié)合劑，其誘導(dǎo)細(xì)胞在腫瘤中進(jìn)行分化。
25.如權(quán)利要求I至24中任一項(xiàng)所述的Wnt結(jié)合劑，其降低腫瘤中癌干細(xì)胞的發(fā)生頻率。
26.如權(quán)利要求I至11或14至25中任一項(xiàng)所述的Wnt結(jié)合劑，其中包含SEQIDNO: 46的藥劑抑制腫瘤生長(zhǎng)的程度超過(guò)包含SEQ ID NO: I的藥劑。
27.如權(quán)利要求I至11或14至25中任一項(xiàng)所述的Wnt結(jié)合劑，其中包含SEQIDNO: 48的藥劑抑制腫瘤生長(zhǎng)的程度超過(guò)包含SEQ ID NO: I的藥劑。
28.如權(quán)利要求I至11或14至25中任一項(xiàng)所述的Wnt結(jié)合劑，其中包含SEQIDNO: 50的藥劑抑制腫瘤生長(zhǎng)的程度超過(guò)包含SEQ ID NO: I的藥劑。
29.如權(quán)利要求I至11或14至25中任一項(xiàng)所述的Wnt結(jié)合劑，其中包含SEQIDNO: 53的藥劑抑制腫瘤生長(zhǎng)的程度超過(guò)包含SEQ ID NO: I的藥劑。
30.如權(quán)利要求I至29中任一項(xiàng)所述的Wnt結(jié)合劑，其抑制腫瘤生長(zhǎng)的程度超過(guò)第二Wnt結(jié)合劑,其中所述第二 Wnt結(jié)合劑包含F(xiàn)ZD結(jié)構(gòu)域組分、Fe結(jié)構(gòu)域組分和連接子組分，其中所述連接子組分為插入肽連接子。
31.如權(quán)利要求22至30中任一項(xiàng)所述的Wnt結(jié)合劑，其中所述腫瘤具有Wnt依賴性。
32.如權(quán)利要求22至31中任一項(xiàng)所述的Wnt結(jié)合劑，其中所述腫瘤為選自由以下組成的組的腫瘤結(jié)腸直腸瘤、結(jié)腸瘤、胰臟瘤、肺腫瘤、卵巢瘤、肝臟瘤、乳房腫瘤、腎腫瘤、前列 腺瘤、胃腸瘤、黑素瘤、子宮頸瘤、膀胱瘤、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤以及頭頸部腫瘤。
33.如權(quán)利要求32所述的Wnt結(jié)合劑，其中所述腫瘤為結(jié)腸直腸瘤。
34.如權(quán)利要求32所述的Wnt結(jié)合劑，其中所述腫瘤為乳房腫瘤。
35.如權(quán)利要求32所述的Wnt結(jié)合劑，其中所述腫瘤為胰臟瘤。
36.一種多肽，其包含選自由以下組成的組的氨基酸序列SEQ ID NO:53, SEQ IDNO:50,SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49、SEQ IDNO:51和 SEQ ID NO: I。
37.一種多肽，其包含選自由以下組成的組的氨基酸序列SEQ ID NO:53, SEQ IDNO:50、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:48 和 SEQ ID NO: I。
38.一種多肽，其包含SEQ ID N0:50的氨基酸序列。
39.一種多肽，其包含SEQ ID N0:53的氨基酸序列。
40.一種基本純化的多肽，其包含選自由以下組成的組的氨基酸序列SEQ ID N0:53、SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:48 和 SEQ ID NO: I，其中所述多肽至少 90% 具有ASA的N端序列。
41.一種多肽，其由選自由以下組成的組的氨基酸序列組成SEQ ID NO:53, SEQ IDNO:50、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:48 和 SEQ ID NO: I。
42.一種多肽，其由SEQ ID N0:50組成。
43.一種多肽，其由SEQ ID N0:53組成。
44.一種細(xì)胞,其制造如權(quán)利要求I至43中任一項(xiàng)所述的Wnt結(jié)合劑或多肽。
45.一種組合物,其包含如權(quán)利要求I至43中任一項(xiàng)所述的Wnt結(jié)合劑或多肽。
46.一種包含如權(quán)利要求I至43中任一項(xiàng)所述的Wnt結(jié)合劑或多肽的組合物，其中所述Wnt結(jié)合劑或所述多肽至少80%具有ASA的N端序列。
47.一種藥物組合物，所述藥物組合物包含如權(quán)利要求I至43中任一項(xiàng)所述的Wnt結(jié)合劑或多肽以及藥學(xué)上可接受的載體。
48.一種多核苷酸，其包含編碼如權(quán)利要求I至43中任一項(xiàng)所述的Wnt結(jié)合劑或多肽的多核苷酸。
49.一種包含如權(quán)利要求48所述的多核苷酸的載體。
50.—種分離的細(xì)胞，其包含如權(quán)利要求48所述的多核苷酸或如權(quán)利要求49所述的載體。
51.一種抑制受試者的腫瘤生長(zhǎng)的方法，所述方法包括向所述受試者施用治療有效量的如權(quán)利要求I至43中任一項(xiàng)所述的Wnt結(jié)合劑或多肽。
52.一種誘導(dǎo)受試者的腫瘤細(xì)胞分化的方法，所述方法包括向所述受試者施用治療有效量的如權(quán)利要求I至43中任一項(xiàng)所述的Wnt結(jié)合劑或多肽。
53.一種降低腫瘤中的癌干細(xì)胞的發(fā)生頻率的方法，所述方法包括向所述受試者施用治療有效量的如權(quán)利要求I至43中任一項(xiàng)所述的Wnt結(jié)合劑或多肽。
54.如權(quán)利要求51至53中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述腫瘤為選自由以下組成的組的腫瘤結(jié)腸直腸瘤、胰臟瘤、肺腫瘤、卵巢瘤、肝臟瘤、乳房腫瘤、腎腫瘤、前列腺瘤、胃腸瘤、黑素瘤、子宮頸瘤、膀胱瘤、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤以及頭頸部腫瘤。
55.如權(quán)利要求54所述的方法，其中所述腫瘤為結(jié)腸直腸瘤。
56.如權(quán)利要求54所述的方法，其中所述腫瘤為胰臟瘤。
57.如權(quán)利要求54所述的方法，其中所述腫瘤為乳房腫瘤。
58.一種治療受試者的癌癥的方法，所述方法包括向所述受試者施用治療有效量的如權(quán)利要求I至43中任一項(xiàng)所述的Wnt結(jié)合劑或多肽。
59.一種治療受試者的疾病的方法，其中所述疾病與Wnt信號(hào)傳遞活化有關(guān)，所述方法包括向所述受試者施用治療有效量的如權(quán)利要求I至43中任一項(xiàng)所述的Wnt結(jié)合劑或多肽。
60.一種治療受試者的病癥的方法，其中所述病癥的特征為干細(xì)胞和/或祖細(xì)胞水平提高，所述方法包括向所述受試者施用治療有效量的如權(quán)利要求I至43中任一項(xiàng)所述的Wnt結(jié)合劑或多肽。
61.如權(quán)利要求51至60中任一項(xiàng)所述的方法，其進(jìn)一步包括向所述受試者施用第二治療劑。
62.如權(quán)利要求61所述的方法，其中所述第二治療劑為化學(xué)治療劑。
63.如權(quán)利要求61所述的方法，其中所述第二治療劑為血管生成抑制劑。
64.—種降低包含癌干細(xì)胞的腫瘤中的癌干細(xì)胞的發(fā)生頻率的方法，所述方法包括將所述腫瘤與有效量的結(jié)合一種或多種人fct蛋白的藥劑接觸。
65.一種誘導(dǎo)腫瘤中的細(xì)胞分化的方法，所述方法包括將所述腫瘤與有效量的結(jié)合一種或多種人fct蛋白的藥劑接觸。
66.如權(quán)利要求64或65所述的方法，其中所述藥劑為Wnt的拮抗劑。
67.如權(quán)利要求64或65所述的方法，其中所述藥劑包含人FZD受體的Fri結(jié)構(gòu)域、或所述Fri結(jié)構(gòu)域的結(jié)合一種或多種人Wnt蛋白的片段。
68.如權(quán)利要求67所述的方法，其中所述人FZD受體為FZD4。
69.如權(quán)利要求67所述的方法，其中所述人FZD受體為FZD5。
70.如權(quán)利要求67所述的方法，其中所述人FZD受體為FZD8。
71.如權(quán)利要求64-70中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述藥劑包含選自由以下組成的組的序列SEQ ID NO:3-12。
72.如權(quán)利要求71所述的方法，其中所述藥劑包含序列SEQID NO: 10。
73.如權(quán)利要求64-66中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述藥劑包含SEQID NO:21的氨基酸 28-158。
74.如權(quán)利要求64-66中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述藥劑包含人SFRP的Fri結(jié)構(gòu)域、或所述Fri結(jié)構(gòu)域的結(jié)合一種或多種人Wnt蛋白的片段。
75.如權(quán)利要求74所述的方法，其中所述藥劑包含選自由以下組成的組的序列SEQID NO:13-17。
76.如權(quán)利要求64-75中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述藥劑進(jìn)一步包含人Fe區(qū)。
77.如權(quán)利要求76所述的方法，其中所述Fri結(jié)構(gòu)域直接連接所述Fe區(qū)。
78.如權(quán)利要求76所述的方法，其中所述Fri結(jié)構(gòu)域和所述人Fe區(qū)的接合處的序列不含有插入肽連接子。
79.如權(quán)利要求76-78中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述人Fe區(qū)為人IgGlFc區(qū)。
80.如權(quán)利要求79所述的方法，其中所述Fe區(qū)選自由以下組成的組SEQID NO: 18,SEQ ID NO:42 或 SEQ ID NO:43。
81.如權(quán)利要求64-66中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述藥劑不包含F(xiàn)ZD受體的Fri結(jié)構(gòu)域。
82.如權(quán)利要求64-81中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述藥劑結(jié)合選自由以下組成的組的一種或多種人 fct 蛋白Wntl、Wnt2> Wnt2b> Wnt3> Wnt3a> Wnt7a> Wnt7b> Wnt8a> Wnt8b>WntlOa和 WntlOb。
83.如權(quán)利要求82所述的方法，其中所述藥劑結(jié)合選自由以下組成的組的兩種或多于兩種人 Wnt 蛋白ffntl> Wnt2> Wnt2b> Wnt3> Wnt3a> Wnt7a> Wnt7b> Wnt8a> Wnt8b> WntlOa 和WntlObo
84.如權(quán)利要求82所述的方法，其中所述藥劑結(jié)合1社1、1社2、1社3、1社3&和1社713。
85.如權(quán)利要求64-84中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述藥劑抑制Wnt信號(hào)傳遞。
86.如權(quán)利要求85所述的方法，其中所述Wnt信號(hào)傳遞為典型的Wnt信號(hào)傳遞。
87.如權(quán)利要求64-67、70或76至86中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述藥劑包含選自由以下組成的組的序列SEQ ID NO: I、SEQ ID NO:45, SEQ ID NO:46, SEQ ID NO:47, SEQ IDNO:48、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51和 SEQ ID NO:53。
88.如權(quán)利要求64-67、70或76至86中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述藥劑包含選自由以下組成的組的序列SEQ ID N0:USEQ ID NO:46,SEQ ID NO:48,SEQ ID N0:50和SEQ IDN0:53。
89.如權(quán)利要求64-88中任一項(xiàng)所述的方法，其為一種體內(nèi)方法。
90.如權(quán)利要求89所述的方法，其中所述接觸包括向具有所述腫瘤的人施用有效量的所述藥劑。
91.如權(quán)利要求64-90中任一項(xiàng)所述的方法，其中經(jīng)由尾靜脈以約10mg/kg的劑量施用時(shí)，所述藥劑在大鼠中的半衰期為至少約100小時(shí)。
92.如權(quán)利要求64-88中任一項(xiàng)所述的方法，其為一種體外方法。
93.如權(quán)利要求64-92中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述腫瘤具有Wnt依賴性。
94.如權(quán)利要求64-93中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述腫瘤為選自由以下組成的組的腫瘤結(jié)腸直腸瘤、胰臟瘤、肺腫瘤、卵巢瘤、肝臟瘤、乳房腫瘤、腎腫瘤、前列腺瘤、胃腸瘤、黑素瘤、子宮頸瘤、膀胱瘤、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤以及頭頸部腫瘤。
95.如權(quán)利要求94所述的方法，其中所述腫瘤為結(jié)腸直腸瘤。
96.如權(quán)利要求94所述的方法，其中所述腫瘤為乳房腫瘤。
97.如權(quán)利要求94所述的方法，其中所述腫瘤為胰臟瘤。
98.如權(quán)利要求64-97中任一項(xiàng)所述的方法，其進(jìn)一步包括使所述腫瘤與化學(xué)治療劑接觸。
99.一種抑制受試者的胰臟瘤或結(jié)腸直腸瘤的生長(zhǎng)的方法，所述方法包括向所述受試者施用治療有效量的包含人FZD8受體的Fri結(jié)構(gòu)域的藥劑。
100.一種治療受試者的胰臟癌或結(jié)腸直腸癌的方法，所述方法包括向所述受試者施用治療有效量的包含人FZD8受體的Fri結(jié)構(gòu)域的藥劑。
101.一種抑制受試者的胰臟瘤的生長(zhǎng)或治療受試者的胰臟癌的方法，其包括 向所述受試者施用治療有效量的包含人FZD8受體的Fri結(jié)構(gòu)域的藥劑；和 向所述受試者施用化學(xué)治療劑。
102.如權(quán)利要求101所述的方法，其中所述化學(xué)治療劑為抗代謝劑。
103.如權(quán)利要求101所述的方法，其中所述化學(xué)治療劑為吉西他濱。
104.一種抑制受試者的結(jié)腸瘤的生長(zhǎng)或治療受試者的結(jié)腸癌的方法，所述方法包括 向所述受試者施用治療有效量的包含人FZD8受體的Fri結(jié)構(gòu)域的藥劑；并且向所述受試者施用化學(xué)治療劑。
105.如權(quán)利要求104所述的方法，其中所述化學(xué)治療劑為伊立替康。
106.一種抑制受試者的乳房腫瘤的生長(zhǎng)或治療受試者的乳癌的方法，所述方法包括 向所述受試者施用治療有效量的包含人FZD8受體的Fri結(jié)構(gòu)域的藥劑；和 向所述受試者施用抗有絲分裂劑。
107.如權(quán)利要求106所述的方法，其中所述抗有絲分裂劑為紫衫烷。
108.如權(quán)利要求107所述的方法，其中所述紫衫烷為太平洋紫杉醇。
109.如權(quán)利要求99-108中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述藥劑進(jìn)一步包含人Fe結(jié)構(gòu)域。
110.如權(quán)利要求99-109中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述藥劑包含多肽，所述多肽包含選自由以下組成的組的氨基酸序列SEQ ID NO: I、SEQ ID NO:45、SEQ ID N0:46、SEQ IDNO:47、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51 和 SEQ ID NO:53。
111.一種針對(duì)抗腫瘤活性來(lái)篩選結(jié)合一種或多種fct蛋白的藥劑的方法，其包括 將已暴露于所述藥劑的第一實(shí)體腫瘤中的一種或多種分化標(biāo)記和/或一種或多種干細(xì)胞性標(biāo)記的水平與尚未暴露于所述藥劑的第二實(shí)體腫瘤中的所述一種或多種分化標(biāo)記的水平相比較。
112.—種針對(duì)抗腫瘤活性來(lái)篩選結(jié)合一種或多種Wnt蛋白的藥劑的方法，其包括 (a)使第一實(shí)體腫瘤暴露于所述藥劑，但第二實(shí)體腫瘤則不暴露； (b)評(píng)估在所述第一實(shí)體腫瘤和第二實(shí)體腫瘤中的一種或多種分化標(biāo)記和/或一種或多種干細(xì)胞性標(biāo)記的水平；以及 (C)將所述第一實(shí)體腫瘤中的所述一種或多種分化標(biāo)記的水平與所述第二實(shí)體腫瘤中的所述一種或多種分化標(biāo)記的水平相比較。
113.如權(quán)利要求112所述的方法，其中 (a)所述第一實(shí)體腫瘤中的所述一種或多種分化標(biāo)記相對(duì)于所述第二實(shí)體腫瘤中的所述一種或多種分化標(biāo)記的水平所增加的水平表示所述藥劑的抗腫瘤活性；以及 (b)所述一種或多種干細(xì)胞性標(biāo)記所降低的水平表示所述藥劑的抗腫瘤活性。
114.一種針對(duì)抗癌干細(xì)胞活性來(lái)篩選結(jié)合一種或多種Wnt蛋白的藥劑的方法，其包括 將已暴露于所述藥劑的第一實(shí)體腫瘤中的一種或多種分化標(biāo)記和/或一種或多種干細(xì)胞性標(biāo)記的水平與尚未暴露于所述藥劑的第二實(shí)體腫瘤中的所述一種或多種分化標(biāo)記的水平相比較。
115.一種針對(duì)抗癌干細(xì)胞活性來(lái)篩選結(jié)合一種或多種fct蛋白的藥劑的方法，其包括 (a)使包含癌干細(xì)胞的第一實(shí)體腫瘤暴露于所述藥劑，但包含癌干細(xì)胞的第二實(shí)體腫瘤則不暴露； (b)評(píng)估在所述第一實(shí)體腫瘤和第二實(shí)體腫瘤中的一種或多種分化標(biāo)記和/或一種或多種干細(xì)胞性標(biāo)記的水平；以及 (C)將所述第一實(shí)體腫瘤中的所述一種或多種分化標(biāo)記的水平與所述第二實(shí)體腫瘤中的所述一種或多種分化標(biāo)記的水平相比較。
116.如權(quán)利要求115所述的方法，其中 (a)所述第一實(shí)體腫瘤中的所述一種或多種分化標(biāo)記相對(duì)于所述第二實(shí)體腫瘤中的所述一種或多種分化標(biāo)記的水平所增加的水平表示所述藥劑的抗腫瘤活性；以及 (b)所述一種或多種干細(xì)胞標(biāo)記所降低的水平表示所述藥劑的抗腫瘤活性。
117.如權(quán)利要求111-116中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述實(shí)體腫瘤為胰臟瘤。
118.如權(quán)利要求117所述的方法，其中所述一種或多種分化標(biāo)記包含 (a)一種或多種粘蛋白或(b)嗜鉻粒蛋白A(CHGA)。
119.如權(quán)利要求118所述的方法，其中所述一種或多種分化標(biāo)記包含粘蛋白16(Muc 16)。
120.如權(quán)利要求111-116中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述實(shí)體腫瘤為結(jié)腸腫瘤。
121.如權(quán)利要求120所述的方法，其中所述一種或多種分化標(biāo)記包含細(xì)胞角蛋白7。
122.如權(quán)利要求111-121中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述藥劑為抗體。
123.如權(quán)利要求111-121中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述藥劑不是抗體。
124.如權(quán)利要求111-121中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述藥劑包含人FZD8受體的Fri結(jié)構(gòu)域。
125.如權(quán)利要求111-121中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述藥劑包含多肽，所述多肽包含選自由以下組成的組的氨基酸序列SEQ ID NOiUSEQ ID NO:45,SEQ ID NO:46,SEQ IDNO:47,SEQ ID NO:48,SEQ ID NO:49,SEQ ID NO:50, SEQ ID N0:51 和 SEQ ID N0:53。
126.如權(quán)利要求125所述的方法，其中所述藥劑包含SEQID N0:51。
127.如權(quán)利要求125所述的方法，其中所述藥劑包含SEQID N0:53。
128.如權(quán)利要求I至13中任一項(xiàng)所述的Wnt結(jié)合劑，其進(jìn)一步包含選自由以下組成的組的氨基酸序列SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ IDNO:71、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:73 和 SEQ ID NO:74。
129.如權(quán)利要求I至13中任一項(xiàng)所述的Wnt結(jié)合劑，其進(jìn)一步包含選自由以下組成的組的氨基酸序列SEQ ID NO:70,SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72,SEQ ID NO:73 和 SEQ IDNO:74。
130.如權(quán)利要求36-39中任一項(xiàng)所述的多肽，其進(jìn)一步包含選自由以下組成的組的氨基酸序列SEQ ID NO:67,SEQ ID NO:68,SEQ ID NO:69,SEQ ID NO:70,SEQ ID NO:71、SEQID NO:72、SEQ ID NO:73 和 SEQ ID NO:74。
131.如權(quán)利要求36-39中任一項(xiàng)所述的多肽，其進(jìn)一步包含選自由以下組成的組的氨基酸序列SEQ ID NO: 70、SEQ ID NO: 71、SEQ ID NO: 72、SEQ ID NO: 73 和 SEQ ID NO: 74。
132.—種分離的多核苷酸，其包含編碼如權(quán)利要求128-131中任一項(xiàng)所述的Wnt結(jié)合劑或多肽的多核苷酸。
133.—種分離的多核苷酸，其包含編碼具有SEQ ID NO:75的序列的多肽的多核苷酸。
134.一種分離的多核苷酸,其包含編碼多肽的多核苷酸,所述多肽包含 (a)選自由以下組成的組的信號(hào)序列SEQID NO:71, SEQ ID NO:70, SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:73 和 SEQ ID NO:74 ； (b)人FZD8的Fri結(jié)構(gòu)域；以及 (c)人Fe區(qū)。
135.—種包含如權(quán)利要求132至134中任一項(xiàng)所述的多核苷酸的載體。
136.—種細(xì)胞,其包含如權(quán)利要求132至134中任一項(xiàng)所述的多核苷酸或如權(quán)利要求135所述的載體。
137.—種Wnt結(jié)合劑，其由如權(quán)利要求44或權(quán)利要求136所述的細(xì)胞制造。
138.—種包含可溶性Wnt結(jié)合劑的組合物，所述可溶性Wnt結(jié)合劑包含人FZD8的Fri結(jié)構(gòu)域，其中所述Wnt結(jié)合劑至少約80%具有ASA的N端序列。
139.如權(quán)利要求138所述的組合物，其中所述Wnt結(jié)合劑至少約90%具有ASA的N端序列。
140.如權(quán)利要求138所述的組合物，其中所述Wnt結(jié)合劑至少約95%具有ASA的N端序列。
141.如權(quán)利要求138-140中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述Wnt結(jié)合劑包含人Fe區(qū)。
142.如權(quán)利要求138-141中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述Wnt結(jié)合劑包含選自由以下組成的組的氨基酸序列SEQ ID NO: 53、SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:48 和SEQ ID NO:I。
143.如權(quán)利要求138-141中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述Wnt結(jié)合劑包含SEQIDNO:53。
144.如權(quán)利要求138-141中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述Wnt結(jié)合劑包含SEQIDN0:50。
145.如權(quán)利要求138-141中任一項(xiàng)所述的組合物，其進(jìn)一步包含藥學(xué)上可接受的載體。
146.一種抑制受試者的腫瘤生長(zhǎng)的方法，其包括施用治療有效量的如權(quán)利要求138至145中任一項(xiàng)所述的組合物。
147.—種誘導(dǎo)受試者的腫瘤細(xì)胞分化的方法，其包括施用治療有效量的如權(quán)利要求138至145中任一項(xiàng)所述的組合物。
148.一種降低腫瘤中的癌干細(xì)胞的發(fā)生頻率的方法，其包括施用治療有效量的如權(quán)利要求138至145中任一項(xiàng)所述的組合物。
149.如權(quán)利要求146-148中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述腫瘤為選自由以下組成的組的腫瘤結(jié)腸直腸瘤、胰臟瘤、肺腫瘤、卵巢瘤、肝臟瘤、乳房腫瘤、腎腫瘤、前列腺瘤、胃腸瘤、黑素瘤、子宮頸瘤、膀胱瘤、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤以及頭頸部腫瘤。
150.如權(quán)利要求149所述的方法，其中所述腫瘤為結(jié)腸直腸瘤。
151.如權(quán)利要求149所述的方法，其中所述腫瘤為胰臟瘤。
152.如權(quán)利要求149所述的方法，其中所述腫瘤為乳房腫瘤。
153.—種治療受試者的癌癥的方法，其包括施用治療有效量的如權(quán)利要求138至145中任一項(xiàng)所述的組合物。
154.如權(quán)利要求153所述的方法，其中所述癌癥選自由以下組成的組結(jié)腸直腸癌、胰臟癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、肝癌、腎臟癌、前列腺癌、胃腸癌、黑素瘤、子宮頸癌、膀胱癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤以及頭頸部癌。
155.—種治療受試者的疾病的方法，其中所述疾病與Wnt信號(hào)傳遞活化有關(guān)，其包括施用治療有效量的如權(quán)利要求138至145中任一項(xiàng)所述的組合物。
156.—種治療受試者的病癥的方法，其中所述病癥的特征為干細(xì)胞和/或祖細(xì)胞水平提高，所述方法包括施用治療有效量的如權(quán)利要求138至145中任一項(xiàng)所述的組合物。
157.如權(quán)利要求146-156中任一項(xiàng)所述的方法,其進(jìn)一步包括向所述受試者施用第二治療劑。
158.如權(quán)利要求157所述的方法，其中所述第二治療劑為化學(xué)治療劑。
159.如權(quán)利要求62或158所述的方法，其中所述化學(xué)治療劑為太平洋紫杉醇。
160.如權(quán)利要求62或158所述的方法，其中所述化學(xué)治療劑伊立替康。
161.如權(quán)利要求62或158所述的方法，其中所述化學(xué)治療劑為吉西他濱。
162.如權(quán)利要求157所述的方法，其中所述第二治療劑為血管生成抑制劑。
163.如權(quán)利要求63或162所述的方法，其中所述血管生成抑制劑為抗VEGF抗體。
164.一種制造可溶性Wnt結(jié)合劑的細(xì)胞，所述可溶性Wnt結(jié)合劑包含人FZD8的Fri結(jié)構(gòu)域，其中所述Wnt結(jié)合劑至少約80%具有ASA的N端序列。
165.如權(quán)利要求164所述的細(xì)胞，其中所述Wnt結(jié)合劑至少約90%具有ASA的N端序列。
166.如權(quán)利要求164所述的細(xì)胞，其中所述Wnt結(jié)合劑至少約95%具有ASA的N端序列。
167.如權(quán)利要求164所述的細(xì)胞，其中所述Wnt結(jié)合劑至少約98%具有ASA的N端序列。
168.如權(quán)利要求164-166中任一項(xiàng)所述的細(xì)胞，其為哺乳動(dòng)物細(xì)胞。
169.如權(quán)利要求164-168中任一項(xiàng)所述的細(xì)胞，其中所述Wnt結(jié)合劑包含人Fe區(qū)。
170.如權(quán)利要求164-169中任一項(xiàng)所述的細(xì)胞，其中所述Wnt結(jié)合劑包含選自由以下組成的組的氨基酸序列SEQ ID NO: 53、SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 46、SEQ ID NO: 48和 SEQID NO:I。
171.如權(quán)利要求164-169中任一項(xiàng)所述的細(xì)胞，其中所述Wnt結(jié)合劑包含SEQIDN0:53。
172.如權(quán)利要求164-169中任一項(xiàng)所述的細(xì)胞，其中所述Wnt結(jié)合劑包含SEQIDN0:50。
173.如權(quán)利要求164所述的細(xì)胞，其包含多核苷酸，所述多核苷酸包含編碼具有SEQID N0:75的序列的多肽的多核苷酸。
174.—種制造可溶性Wnt結(jié)合劑的方法，所述可溶性Wnt結(jié)合劑包含細(xì)胞中的人FZD8的Fri結(jié)構(gòu)域，其中所述Wnt結(jié)合劑至少約80%具有ASA的N端序列，所述方法包括使用選自由以下組成的組的信號(hào)序列來(lái)制造所述Wnt結(jié)合劑SEQ ID NO:7U SEQ ID NO:70, SEQID NO:72、SEQ ID NO:73 和 SEQ ID NO:74。
175.如權(quán)利要求174所述的方法，其中所述信號(hào)序列為SEQID NO:71。
176.如權(quán)利要求174或175所述的方法，其中所述Wnt結(jié)合劑至少約90%具有ASA的N端序列。
177.如權(quán)利要求174或175所述的方法，其中所述Wnt結(jié)合劑至少約95%具有ASA的N端序列。
178.如權(quán)利要求174或175所述的方法，其中所述Wnt結(jié)合劑至少約98%具有ASA的N端序列。
179.如權(quán)利要求174-178中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述細(xì)胞為哺乳動(dòng)物細(xì)胞。
180.如權(quán)利要求174-179中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述Wnt結(jié)合劑包含人Fe區(qū)。
181.如權(quán)利要求174-180中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述Wnt結(jié)合劑包含選自由以下組成的組的氨基酸序列SEQ ID NO:53,SEQ ID NO:50,SEQ ID NO:46,SEQ ID N0:48和SEQID NO:I。
182.如權(quán)利要求174-180中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述Wnt結(jié)合劑包含SEQIDNO:53。
183.如權(quán)利要求174-180中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述Wnt結(jié)合劑包含SEQIDN0:50。
184.如權(quán)利要求174所述的方法，其中所述細(xì)胞包含多核苷酸，所述多核苷酸包含編碼具有SEQ ID NO:75的序列的多肽的多核苷酸。
全文摘要
本發(fā)明涉及包含Wnt拮抗劑的組合物和治療與Wnt相關(guān)的疾病和病癥(諸如癌癥)、誘導(dǎo)分化以及減少癌干細(xì)胞的發(fā)生頻率的方法，以及篩選此類Wnt拮抗劑的新型方法。具體來(lái)說(shuō)，本發(fā)明公開可溶性FZD、SFRP和Ror受體及其用途。
文檔編號(hào)C07K1/00GK102917721SQ201180011687
公開日2013年2月6日 申請(qǐng)日期2011年1月12日 優(yōu)先權(quán)日2010年1月12日
發(fā)明者桑吉維·H·薩蒂亞爾, 薩蒂亞吉特·蘇伊特·庫(kù)馬爾·米特拉, 奧斯丁·L·格尼 申請(qǐng)人:昂考梅德藥品有限公司