專利名稱：用于遞送活性劑的生物可降解脂質(zhì)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物可降解脂質(zhì)及其用于遞送活性劑如核酸的用途。
背景技術(shù)：
治療性核酸包括(例如)小干擾RNA(siRNA)、微RNA(miRNA)、反義寡核苷酸、核酶、質(zhì)粒、免疫刺激性核酸、反義核苷酸、拮抗劑(antagomir)、antimir、微RNA模擬物、supermir、Ul適配子和適配體。這些核酸通過多種機(jī)制起作用。在siRNA或miRNA的情況下，這些核酸可通過稱為RNA干擾(RNAi)的過程下調(diào)細(xì)胞內(nèi)特定蛋白的水平。siRNA或miRNA引入細(xì)胞質(zhì)后，這些雙 鏈RNA構(gòu)建體可與稱為RISC的蛋白質(zhì)結(jié)合。siRNA或miRNA的有義鏈離開RISC復(fù)合物，在RISC內(nèi)提供了可識(shí)別并結(jié)合具有與結(jié)合的siRNA或miRNA的序列互補(bǔ)的序列的mRNA的模板。結(jié)合互補(bǔ)mRNA，RISC復(fù)合物裂解所述mRNA并釋放裂解的鏈。RNAi可通過革巴向特定破壞編碼蛋白質(zhì)合成的相應(yīng)mRNA提供對(duì)特定蛋白質(zhì)的下調(diào)。RNAi的治療應(yīng)用極其廣泛，因?yàn)榭捎冕槍?duì)靶蛋白的任何核苷酸序列合成siRNA和miRNA構(gòu)建體。到目前為止，siRNA構(gòu)建體已經(jīng)在體外和體內(nèi)模型中顯示出特異性下調(diào)靶蛋白的能力。另外，siRNA構(gòu)建體目前正在臨床研究中進(jìn)行評(píng)估。然而，siRNA或miRNA構(gòu)建體目前面臨兩個(gè)問題，第一，它們?cè)谘獫{中易受核酸酶消化影響，第二，當(dāng)作為游離siRNA或miRNA全身施用時(shí)，它們進(jìn)入可結(jié)合RISC的細(xì)胞內(nèi)隔室的能力有限?？赏ㄟ^在分子內(nèi)并入經(jīng)化學(xué)修飾的核苷酸連接子，例如硫代磷酸酯基團(tuán)，穩(wěn)定這些雙鏈構(gòu)建體。然而，這些化學(xué)修飾僅對(duì)核酸酶消化提供了有限防護(hù)并且可降低所述構(gòu)建體的活性?？赏ㄟ^使用載體系統(tǒng)例如聚合物、陽離子脂質(zhì)體或通過化學(xué)修飾所述構(gòu)建體，例如通過共價(jià)連接膽固醇分子促進(jìn)siRNA或miRNA的細(xì)胞內(nèi)遞送。然而，需要經(jīng)改進(jìn)的遞送系統(tǒng)以增強(qiáng)siRNA和miRNA分子的效能并減少或消除對(duì)化學(xué)修飾的需要。反義寡核苷酸和核酶也可抑制mRNA翻譯成為蛋白質(zhì)。在反義構(gòu)建體的情況下，這些單鏈脫氧核酸具有與靶蛋白mRNA的序列互補(bǔ)的序列并且可通過沃森-克里克(Watson-Crick)堿基配對(duì)與所述mRNA結(jié)合。這種結(jié)合防止祀mRNA翻譯和/或觸發(fā)mRNA轉(zhuǎn)錄物的RNA酶H降解。因此，反義寡核苷酸具有特異性作用的巨大潛力(即，下調(diào)特定的疾病相關(guān)蛋白)。到目前為止，這些化合物在若干體外和體內(nèi)模型，包括炎性疾病、癌癥和HIV 的模型中顯不出希望(查閱 Agrawal, Trends in Biotech.14:376-387 (1996))。反義構(gòu)建體也可通過與染色體DNA特異性雜交影響細(xì)胞活性。目前正在進(jìn)行若干反義藥物的高級(jí)人體臨床評(píng)估。這些藥物的靶標(biāo)包括bcl2和載脂蛋白B基因和mRNA產(chǎn)物。免疫刺激性核酸包括脫氧核糖核酸和核糖核酸。在脫氧核糖核酸的情況下，已經(jīng)證實(shí)某些序列或基序在哺乳動(dòng)物體內(nèi)引起免疫刺激。這些序列或基序包括CpG基序、嘧啶富集序列和回文序列。人們認(rèn)為，脫氧核糖核酸中的CpG基序被內(nèi)體受體，toll樣受體9(TLR-9)特異性識(shí)別，然后觸發(fā)先天性和獲得性免疫刺激途徑。還報(bào)道了某些免疫刺激性核糖核酸序列。人們認(rèn)為，這些RNA序列通過與toll樣受體6和7 (TLR-6和TLR-7)結(jié)合觸發(fā)免疫激活。另外，還報(bào)道了雙鏈RNA為免疫刺激性并且認(rèn)為是通過與TLR-3結(jié)合激活。使用治療性核酸的一個(gè)眾所周知的問題涉及磷酸二酯核苷酸間連接鍵的穩(wěn)定性和該連接子對(duì)核酸酶的敏感性。血清中核酸外切酶和核酸內(nèi)切酶的存在引起具有磷酸二酯連接子的核酸迅速消化并且，因此，在血清存在下或在細(xì)胞內(nèi)治療性核酸可具有很短的半衰期。(Zelphati, 0.等，Antisense.Res.Dev.3:323-338 (1993);和 Thierry, A.R.等，Gene Regulation:Biology of Antisense RNA and DNA 中第 147-161 頁(Erickson, RP 和Izant，JG編輯；Raven Press,NY(1992)) 0由于這些和其它已知的問題，目前正在研發(fā)的治療性核酸并未采用天然核酸中存在的基本磷酸二酯化學(xué)結(jié)構(gòu)。這個(gè)問題已經(jīng)通過降低血清或細(xì)胞內(nèi)降解的化學(xué)修飾得到部分克服。已經(jīng)在核苷酸間磷酸二酯橋(例如，使用硫代磷酸酯、甲基磷酸酯或氨基磷酸酯連接鍵)，在核苷酸堿基(例如，5-丙炔基-嘧啶)，或在糖(例如，2'-修飾糖)處試驗(yàn)了修飾(UhlmannE.等，Antisense:Chemical Modifications.Encyclopedia of Cancer,第 X 卷，第 64-81頁Academic Press Inc.(1997))。其它人已試圖使用2' -5'糖連接鍵提高穩(wěn)定性(見，例如，美國專利N0.5，532，130。還嘗試了其它改變。然而，經(jīng)證明這些解決方案都不完全令人滿意，并且體內(nèi)游離治療性核酸仍然僅僅具有有限的功效。另外，正如上面所提到的，關(guān)于siRNA和miRNA，問題仍在于治療性核酸跨過細(xì)胞膜的能力有限(見，Vlassov 等，Biochim.Biophys.Acta 1197:95-1082(1994))和與全身毒性相關(guān)的問題，例如補(bǔ)體介導(dǎo)的過敏反應(yīng)、凝結(jié)性質(zhì)改變和血細(xì)胞減少(Galbraith等，Antisense Nucl.Acid Drug Des.4:201-206 (1994))。為視圖提高功效，調(diào)研人員還采用了基于脂質(zhì)的載體系統(tǒng)來遞送經(jīng)化學(xué)修飾或未修飾的治療性核酸。在 Zelphati，0和 Szoka，F(xiàn).C.，J.Contr.Rel.41:99-119(1996)中，作者提到陰離子(常規(guī))脂質(zhì)體、PH敏感脂質(zhì)體、免疫脂質(zhì)體、融合脂質(zhì)體和陽離子脂質(zhì)/反義聚集物。類似地，已經(jīng)在陽離子脂質(zhì)體中系統(tǒng)性施用了 siRNA，并且已經(jīng)報(bào)道這些核酸-脂質(zhì)顆粒在哺乳動(dòng)物，包括非人靈長類動(dòng)物中提供了對(duì)祀蛋白的更好下調(diào)(Zimmermann等，Nature 441:111-114(2006))。盡管有這種進(jìn)展，但是在本領(lǐng)域中仍需要適合一般治療使用的改良脂質(zhì)-治療性核酸組合物。優(yōu)選地，這些組合物將以高效率封裝核酸，具有高藥物:脂質(zhì)比，防止封裝的核酸從血清中降解和清除，適合全身遞送，并且提供了對(duì)封裝核酸的細(xì)胞內(nèi)遞送。另外，這些脂質(zhì)-核酸顆粒應(yīng)耐受良好并且提供足夠的治療指數(shù)，以致在核酸的有效劑量下患者治療不會(huì)伴有對(duì)患者的顯著毒性和/或風(fēng)險(xiǎn)。提供了化合物、制備化合物的方法和使用所述化合物將核酸引入細(xì)胞的方法，包括治療疾病的方法。發(fā)明概沭本發(fā)明涉及一種陽離子 脂質(zhì)，其具有位于所述陽離子脂質(zhì)的脂質(zhì)部分(例如，疏水鏈)的中間或遠(yuǎn)端部分的一個(gè)或多個(gè)生物可降解基團(tuán)。這些陽離子脂質(zhì)可并入脂質(zhì)顆粒中用于遞送活性劑，如核酸(例如，siRNA)。生物可降解基團(tuán)并入陽離子脂質(zhì)中引起在將活性劑遞送至靶標(biāo)區(qū)域后陽離子脂質(zhì)從體內(nèi)更快代謝和去除。因此，這些陽離子脂質(zhì)的毒性大大低于沒有生物可降解基團(tuán)的相似陽離子脂質(zhì)。
在一個(gè)實(shí)施方案中，所述陽離子脂質(zhì)為下式的化合物:
權(quán)利要求
1.種式⑴的化合物:
2.據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中M1和M2各自獨(dú)立地為:-0C(0)-、-C(O)O-、-SC(O)-、-C(O) S-, -OC(S)-, -C(S)O-、-S-S-、-C(R5) = N-、-N = C(R5)-、-C(R5)=N-O-、-O-N = C(R5)-、-C(O) (NR5)-、-N(R5)C(O)-' -C(S) (NR5)-、-N(R5)C(O)-' -N(R5)C(O)N (R5) -、-OC (0) 0-、-OSi (R5) 20_、-C (0) (CR3R4) C (0) 0-或-OC (0) (CR3R4) C (0) _。
3.據(jù)權(quán)利要求2所述的化合物，其中M1和M2各自獨(dú)立地為:-C(O)-O-、-OC(O)-、-C(R5) = N-, -C(R5) = N_0_、-0-C(O)0_、-C(O)N(R5)-、-C(O)S-、-C (S) O-、-OSi (R5) 20_、-C (O) (CR3R4) C (O) O-或-OC (O) (CR3R4) C (O) _。
4.據(jù)權(quán)利要求2和3中任一項(xiàng)所述的化合物，其中M1和M2各自為-C(O) O-。
5.據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的化合物，其中R1和R2各自為烷基。
6.據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物，其中R1和R2各自為甲基。
7.據(jù)權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的化合物，其中Q為不存在、-C(O)O-、-OC (O) -、-C (O) N (R4) -、-N (R5) C(O)-, -S-S-、-OC (O) 0_、-C (R5) = N-O-, -OC (O)N (R5) -、-N (R5) C (O) N (R5) -、-N (R5) C (O) O-、-C (O) S-、-C (S) O-或-C (R5) = N-O-C (O) _。
8.據(jù)權(quán)利要求1-7所述的化合物，其中Q不存在。
9.據(jù)權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的化合物，其中R的每個(gè)實(shí)例獨(dú)立地為 _CH2-、-C (CH3) 2_ 或 _CH (iPr)-。
10.據(jù)權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)所述的化合物，其中Q1和Q2各自獨(dú)立地為不存在或-O-。
11.據(jù)權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)所述的化合物，其中a為2、3或4并且b為O。
12.據(jù)權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)所述的化合物，其中與生物可降解基團(tuán)連接的碳原子α或β經(jīng)一個(gè)或兩個(gè)烷基或一個(gè)螺環(huán)基團(tuán)取代。
13.據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中以下的一項(xiàng)或多項(xiàng)適用: (i)Q1和Q2不存在；(ii)M1和 M2 均為-C(O)O-； (iii)g和h均為I ;(iv)g和h均為O ;(V) c和e總計(jì)為7 ；(vi)d和f總計(jì)為7 ；(vii)c、e和i總計(jì)為7 ；(viii)d、f和j總計(jì)為7 ；(ix)i和j各自為7;(X) k和I均為I ;(xi)m和η均為O;(xii)m和q總計(jì)為I或m和q總計(jì)為2 ；(xiii)m和I總計(jì)為6；(xiv)r和η總計(jì)為6 ；(XV) P和ο均為O ;(xvi)η和r總計(jì)為2或η和r總計(jì)為I ;并且 (xvii)Q3為 H。
14.據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其選自:
15.種式IA-1的化合物
16.據(jù)權(quán)利要求15所述的化合物，其中q不存在并且R’R1R2N-(R)a-Q-(R)b-基團(tuán)為(CH3)2N-(CH2)3-C (O) O-、(CH3)2N-(CH2)2-NH-C (O) O-、(CH3)2N-(CH2)2-OC(O)-NH-或(CH3)2N-(CH2)3-C(CH3) = N-0-。
17.種式IA-2的化合物
18.據(jù)權(quán)利要求17所述的化合物，其中R’為不存在或烷基。
19.據(jù)權(quán)利要求17或18所述的化合物，其中R1和R2各自獨(dú)立地為C1-C4烷基。
20.據(jù)權(quán)利要求17-19中任一項(xiàng)所述的化合物，其中每次出現(xiàn)的R獨(dú)立地為-CH2-或-CH (CH3) ~o
21.據(jù)權(quán)利要求17-20中任一項(xiàng)所述的化合物，其中Q3和Q4各自獨(dú)立地為H、芳基或膽固醇部分。
22.據(jù)權(quán)利要求17-21中任一項(xiàng)所述的化合物，其中M1和M2各自為-C(0)_0_。
23.據(jù)權(quán)利要求17-22中任一項(xiàng)所述的化合物，其中e+3g+i+m+3o+q的總和為約8至約20。
24.據(jù)權(quán)利要求17-22中任一項(xiàng)所述的化合物，其中d+3h+j+n+3p+r的總和為約8至約20。
25.種式IB的化合物
26.據(jù)權(quán)利要求25所述的化合物，其中R9和Rw各自獨(dú)立地為C4-C12亞烷基或C4-C12亞烯基，M1和M2為-C (O) O-,并且R11和R12為C4-C12亞烷基或C4-C12亞烯基。
27.據(jù)權(quán)利要求25或26所述的化合物，其中R9J1和R11總長度為12-24個(gè)碳原子。
28.據(jù)權(quán)利要求25或26所述的化合物，其中R1(1、M2和R12總長度為12-24個(gè)碳原子。
29.據(jù)權(quán)利要求25-28中任一項(xiàng)所述的化合物，其中所述R’R1R2N-(R)a-Q-(R)b-基團(tuán)為(CH3)2N-(CH2)3-C (O) O-、(CH3)2N-(CH2)2-NH-C (O) O-、(CH3)2N-(CH2)2-OC(O)-NH-或(CH3)2N-(CH2)3-C(CH3) = N-0-。
30.種式IC的化合物
31.據(jù)權(quán)利要求30所述的化合物，其中每個(gè)生物可降解基團(tuán)為-C00R13，其中每個(gè)R13獨(dú)立地為燒基。
32.據(jù)權(quán)利要求30或31所述的化合物，其中所述R’R1R2N- (R) a_Q_ (R) b_基團(tuán)為(CH3)2N-(CH2)3-C (O) O-、(CH3)2N-(CH2)2-NH-C (O) O-、(CH3)2N-(CH2)2-OC(O)-NH-或(CH3)2N-(CH2)3-C(CH3) = N-0-。
33.種式ID的化合物
34.種化合物，其選自式I1-XXIII的化合物:
35.種化合物，其具有: (i)中心碳原子， ( )含有與所述中心原子結(jié)合的頭基的氮，和(iii)2個(gè)與所述中心碳原子直接結(jié)合的疏水尾，每個(gè)疏水尾包含與所述中心碳原子連接的C8或更大的脂族基，其中所述脂族基(a)被生物可降解基團(tuán)中斷，以致在所述生物可降解基團(tuán)和所述中心碳原子之間有一條至少4個(gè)碳原子的鏈，或(b)包括在所述疏水尾末端的生物可降解基團(tuán)。
36.據(jù)權(quán)利要求35所述的化合物，其中所述生物可降解基團(tuán)選自-0C(0)-、-C(O)O-、-SC(O)-、-C(O) S-, -OC(S)-, -C(S)O-、-S-S-、-C(R5) = N-、-N = C(R5)-、-C(R5)=N-O-、-O-N = C(R5)-、-C(O) (NR5)-、-N(R5)C(O)-' -C(S) (NR5)-、-N(R5)C(O)-' -N(R5)C(O)N (R5) -、-OC (0) 0-、-OSi (R5) 20_、-C (0) (CR3R4) C (0) 0-和-OC (0) (CR3R4) C (0) _。
37.據(jù)權(quán)利要求35和36所述的化合物，其中在所述陽離子脂質(zhì)的其中一個(gè)或兩個(gè)疏水尾中的所述脂族基包括至少一個(gè)碳-碳雙鍵。
38.據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的化合物，其中所述化合物呈藥學(xué)上可接受的鹽的形式。
39.據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的化合物，其中所述化合物呈陽離子脂質(zhì)的形式。
40.種脂質(zhì)顆粒，其包含中性脂質(zhì)、能夠減少聚集的脂質(zhì)和權(quán)利要求39所述的陽離子脂質(zhì)。
41.據(jù)權(quán)利要求20所述的脂質(zhì)顆粒，其中所述中性脂質(zhì)選自DSPC、DPPC、POPC、DOPE或SM ;所述能夠減少聚集的脂質(zhì)為PEG脂質(zhì)；并且所述脂質(zhì)顆粒進(jìn)一步包含固醇。
42.據(jù)權(quán)利要求40和41中任一項(xiàng)所述的脂質(zhì)顆粒，其中所述陽離子脂質(zhì)以約20%和約60%的摩爾百分比存在；所述中性脂質(zhì)以約5%至約25%的摩爾百分比存在；所述固醇以約25%至約55%的摩爾百分比存在；并且所述PEG脂質(zhì)為PEG-DMA、PEG-DMG或其組合，并且以約0.5%至約15%的摩爾百分比存在。
43.據(jù)權(quán)利要求40-42中任一項(xiàng)所述的脂質(zhì)顆粒，其進(jìn)一步包含活性劑。
44.據(jù)權(quán)利要求43所述的脂質(zhì)顆粒，其中所述活性劑為選自質(zhì)粒、免疫刺激性寡核苷酸、siRNA、反義寡核苷酸、微RNA、拮抗劑(antagomir)、適配體和核酶的核酸。
45.據(jù)權(quán)利要求40-44中任一項(xiàng)所述的脂質(zhì)顆粒，其中所述脂質(zhì)顆粒的體內(nèi)半衰期(t1/2)小于約3小時(shí)。
46.據(jù)權(quán)利要求40-44中任一項(xiàng)所述的脂質(zhì)顆粒，其中所述脂質(zhì)顆粒的體內(nèi)半衰期(tl/2)比含有相同陽離子而不含生物可降解基團(tuán)的脂質(zhì)的體內(nèi)半衰期小約10%。
47.種藥物組合物，其包含權(quán)利要求40-46中任一項(xiàng)所述的脂質(zhì)顆粒和藥學(xué)上可接受的載體。
48.種調(diào)節(jié)靶基因在細(xì)胞中的表達(dá)的方法，所述方法包括為所述細(xì)胞提供權(quán)利要求40-46中任一項(xiàng)所述的脂質(zhì)顆粒。
49.據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其中所述活性劑為選自質(zhì)粒、免疫刺激性寡核苷酸、siRNA、反義寡核苷酸、微RNA、拮抗劑(antagomir)、適配體和核酶的核酸。
50.種治療受試者中特征在于多肽過表達(dá)的疾病或病癥的方法，所述方法包括為所述受試者提供權(quán)利要求47所述的藥物組合物，其中所述活性劑為選自siRNA、微RNA和反義寡核苷酸的核酸,并且其中所述siRNA、微RNA或反義寡核苷酸包括與編碼所述多肽的多核苷酸特異性結(jié)合的多核苷酸或其補(bǔ)體。
51.種治療受試者中特征在于多肽表達(dá)不足的疾病或病癥的方法，所述方法包括為所述受試者提供權(quán)利要求47所述的藥物組合物，其中所述活性劑為編碼所述多肽或其功能變異體或片段的質(zhì)粒。
52.種誘導(dǎo)受試者免疫反應(yīng)的方法，所述方法包括為所述受試者提供權(quán)利要求47所述的藥物組合物，其中所述活性劑為免疫刺激性寡核苷酸。
53.據(jù)權(quán)利要求52所述的方法，其中所述靶基因選自因子VI1、Eg5、PCSK9、TPX2、apoB、SAA, TTR、RSV, PDGFP 基因、Erb-B 基因、Src 基因、CRK 基因、GRB2 基因、RAS 基因、MEKK基因、JNK基因、RAF基因、Erkl/2基因、PCNA (p21)基因、MYB基因、JUN基因、FOS基因、BCL-2基因、細(xì)胞周期蛋白D基因、VEGF基因、EGFR基因、細(xì)胞周期蛋白A基因、細(xì)胞周期蛋白E基因、WNT-1基因、β-連環(huán)蛋白基因、c-MET基因、PKC基因、NFKB基因、STAT3基因、存活蛋白基因、Her2/Neu基因、SORTl基因、XBPl基因、拓?fù)洚悩?gòu)酶I基因、拓?fù)洚悩?gòu)酶II α 基因、ρ73 基因、p21(WAFl/CIPl)基因、p27 (KIPl)基因、PPMlD 基因、RAS 基因、小窩蛋白I基因、MIB I基因、MTAI基因、Μ68基因、腫瘤抑制基因和ρ53腫瘤抑制基因。
54.據(jù)權(quán)利要求53所述的方法，其中所述靶基因含有一個(gè)或多個(gè)突變。
55.種遞送核酸分子的方法，所述方法包括施用包含所述核酸分子和陽離子脂質(zhì)的核酸脂質(zhì)顆粒，所述陽離子脂質(zhì)具有 (i)中心碳原子， ( )含有與所述中心原子結(jié)合的頭基的氮，和 (iii)2個(gè)與所述中心碳原子直接結(jié)合的疏水尾，每個(gè)疏水尾包含與所述中心碳原子連接的C14或更大的脂族基，其中所述脂族基(a)被生物可降解基團(tuán)中斷，以致在所述生物可降解基團(tuán)和所述中心碳原子之間有一條至少4個(gè)碳原子的鏈，或(b)包括在所述疏水尾末端的生物可降解基團(tuán)，以致所述疏水尾在體內(nèi)發(fā)生裂解后，所述陽離子脂質(zhì)保持完整直到遞送所述核酸分子為止。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種陽離子脂質(zhì)，其具有位于所述陽離子脂質(zhì)的脂質(zhì)部分(例如，疏水鏈)的中間或遠(yuǎn)端部分的一個(gè)或多個(gè)生物可降解基團(tuán)。這些陽離子脂質(zhì)可并入脂質(zhì)顆粒中用于遞送活性劑，例如核酸。本發(fā)明還涉及脂質(zhì)顆粒，其包含中性脂質(zhì)、能夠減少聚集的脂質(zhì)、本發(fā)明的陽離子脂質(zhì)和(任選地)固醇。所述脂質(zhì)顆粒可進(jìn)一步包括治療劑，如核酸。
文檔編號(hào)C07C211/63GK103096875SQ201180037927
公開日2013年5月8日 申請(qǐng)日期2011年6月3日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月3日
發(fā)明者姆夏·馬諾哈蘭, 馬丁·邁爾, 穆圖薩米·賈亞拉曼, 松田茂夫, 納拉亞南奈爾·K·賈亞普拉卡什, 卡蘭托塔特·G·拉杰夫, 埃金·埃金科, 托馬斯·A·貝利 申請(qǐng)人:阿爾尼拉姆醫(yī)藥品有限公司