專利名稱：用于胚胎干細(xì)胞探測的查耳酮結(jié)構(gòu)熒光染料的制作方法
用于胚胎干細(xì)胞探測的查耳酮結(jié)構(gòu)熒光染料相關(guān)申請本申請要求于2010年8月27日提交的美國臨時申請N0.61/377，570的權(quán)益。上述申請的全部教導(dǎo)通過引用并入本文。
背景技術(shù)：
就多種生物現(xiàn)象的分析而言，熒光檢測是一項必不可少的技術(shù)。在過去的幾十年中，開發(fā)了許多小分子熒光化學(xué)傳感器以用于生物分析中，它們通常經(jīng)過精心設(shè)計以選擇性地檢測IE物質(zhì)或現(xiàn)象。(參見(a)Geddes,C.D.；Lakowicz, J.R.,Topicsin FluorescenceSpectroscopy,第 9 卷；Springer:New York, 2005.(b) Geddes, C.D.；Lakowicz, J.R.Topicsin Fluorescence Spectroscopy,第 10卷；Springer:New York,2005,二者的教導(dǎo)通過引用并入本文)。胚胎干細(xì)胞(ESC)來自囊胚階段胚胎的內(nèi)細(xì)胞團(ICM)，并且能夠無限地自我更新。ESC是多能的，因為它們能夠產(chǎn)生代表全部三種胚層的分化子代，以及支持發(fā)育的胚外組織。在哺乳動物中，多能特性限于卵母細(xì)胞、合子、早期胚胎細(xì)胞、原生殖細(xì)胞和來自多能細(xì)胞的腫瘤干細(xì)胞(胚胎癌)。ESC可具有以下特征:P0U轉(zhuǎn)錄因子的成員0ct-3/4 (也稱為0ct-3或Oct-4)和Nanog的高水平表達(dá)。需要關(guān)鍵量的Oct-3/4和Nanog表達(dá)以維持干細(xì)胞多能性。當(dāng)誘導(dǎo)ES細(xì)胞分化時，0ct-3/4和Nanog下調(diào)，已證實這對于正常和多樣的發(fā)育程序而言是必要的?？梢酝ㄟ^免疫細(xì)胞化學(xué)方法來監(jiān)測ESC分化的各個階段。用于探測小鼠胚胎干細(xì)胞的方法一般通過細(xì)胞表面抗體(如Nanog、0ct4或GFP熒光蛋白)來診斷。但是，這些方案受到限制，主要是對于干細(xì)胞分化和選擇的晚期來說。因此，需要可以監(jiān)測 分化過程的手段，其可以減少或排除一個或更多個上述問題。發(fā)明概述本發(fā)明基于顯示取決于溶劑極性和pH之熒光發(fā)射敏感性的查耳酮結(jié)構(gòu)新熒光染料的合成。查耳酮衍生物具有中央酮基團，其具有可使這些化合物適于用作熒光發(fā)射染料的接受電子特性。本發(fā)明的一個實施方案是由以下結(jié)構(gòu)式表示的化合物或其鹽，
權(quán)利要求
1.以下結(jié)構(gòu)式表示的化合物或其鹽，
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，或其鹽，其中R是(C1-C16)烷基。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的化合物，或其鹽，其中R是(C1-C11)烷基，其被獨立地選自以下的一個、兩個或三個基團任選取代:氯、溴、甲基、乙基、甲氧基、-cooch3、-ococh3、環(huán)戊基、苯基和苯氧基，其中所述苯基或苯氧基被獨立地選自氟、氯和甲氧基的一個、兩個、三個、四個或五個基團任選且獨立地取代。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，或其鹽，其中所述化合物由以下結(jié)構(gòu)式表示:
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，或其鹽，其中R是(C2-C16)烯基。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物，或其鹽，其中R是-CH= CH2^-CH2CH2C = CH2, (CH2) 8C=CH2，其被選自甲基和苯基的一個或更多個取代基任選取代，其中所述苯基被氯任選取代。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的化合物，或其鹽，其中所述化合物由以下結(jié)構(gòu)式或其鹽表示:
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，或其鹽，其中R是碳環(huán)基。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的化合物，或其鹽，其中R是任選取代的芳基。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的化合物，或其鹽，其中R是任選取代的苯基。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的化合物，或其鹽，其中R是苯基，其被獨立地選自以下的一個、兩個、三個、四個或五個基團任選取代:鹵素、NOy-NHCO(C1-C6)烷基、-OCO (C1-C6)烷基、(C1-C10)烷基、鹵代(C1-C4)烷基、(C1-C10)烷氧基和苯基。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的化合物，或其鹽，其中R是苯基，其被獨立地選自以下的一個、兩個、三個、四個或五個基團任選取代:氟、氯、溴、碘、-NO2，、-NHCOCH3、-OCOCH3、甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、戊基、己基、庚基、壬基、癸基、-CF3、-CH2C1、甲氧基、乙氧基、丁氧基、己氧基、庚氧基和苯基。
13.根據(jù)權(quán)利要求9所述的化合物，或其鹽，其中R是萘基，其被獨立地選自以下的一個、兩個、三個、四個或五個基團任選取代:鹵素、NOy-NHCO(C1-C6)烷基、-OCO (C1-C6)烷基、(C1-C10)烷基、鹵代(C1-C4)烷基、(C1-C10)烷氧基和苯基。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的化合物，或其鹽，其中R是萘基，被乙氧基任選取代。
15.根據(jù)權(quán)利要求8所述的化合物，或其鹽，其中R是(C3-C9)環(huán)烷基，其被獨立地選自以下的一個或兩個基團任選取代:鹵素、N02、-NHC0 (C1-C6)烷基、-0C0 (C1-C6)烷基、(C1-C10)烷基、鹵代(C1-C4)烷基、(C1-C10)烷氧基和苯基。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的化合物，或其鹽，其中R是環(huán)己基、環(huán)戊基、環(huán)丁基或環(huán)丙基。
17.根據(jù)權(quán)利要求8所述的化合物，或其鹽，其中R是(C3-C9)環(huán)烯基，其被獨立地選自以下的一個或兩個基團任選取代:鹵素、N02、-NHC0 (C1-C6)烷基、-0C0 (C1-C6)烷基、(C1-C10)烷基、鹵代(C1-C4)烷基、(C1-C10)烷氧基和苯基。
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的化合物，或其鹽，其中R是環(huán)己烯基。
19.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，或其鹽，其中R是雜環(huán)基。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的化合物，或其鹽，其中R是
21.根據(jù)權(quán)利要求19所述的化合物，或其鹽，其中R是任選取代的雜芳基。
22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的化 合物，或其鹽，其中R是任選取代的雜芳基，其選自:苯并[b]噻吩、呋喃基、吡咯、異噁唑、噻吩、吡啶和嘧啶。
23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的化合物，或其鹽，其中R選自:
24.離胚胎干細(xì)胞的方法，其包括用權(quán)利要求1所述的化合物對所述細(xì)胞進行染色的步驟。
全文摘要
本發(fā)明包括由以下結(jié)構(gòu)式表示的化合物其中R描述于本發(fā)明中。本發(fā)明的化合物可用于對胚胎干細(xì)胞進行染色。
文檔編號C07D213/82GK103097339SQ201180041465
公開日2013年5月8日 申請日期2011年8月26日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月27日
發(fā)明者張龍?zhí)? 李松燦, 姜男永 申請人:新加坡國立大學(xué), 新加坡科技研究局