專利名稱：原位化學(xué)發(fā)光底物和測定的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明一般地涉及診斷測定，且更具體地涉及化學(xué)發(fā)光底物。公開了可用于產(chǎn)生原位化學(xué)發(fā)光底物的方法和將它們用于診斷測定中的方法。
背景技術(shù)：
臨床診斷測定現(xiàn)在使用化學(xué)發(fā)光作為優(yōu)選的技術(shù)發(fā)展水平的檢測技術(shù)。含有化學(xué)發(fā)光讀出的測定具有最靈敏的檢測限和最寬的分析物定量動態(tài)范圍。日益需要設(shè)計簡化的、小型化的、自主式的和/或穩(wěn)健的診斷平臺，用于這樣的場合或發(fā)展中國家:其中標(biāo)準(zhǔn)的實驗室設(shè)備、受控的 環(huán)境和技術(shù)支持較少。目前商購可得的二氧雜環(huán)丁烷底物沒有取得良好進(jìn)展，其中受控的儲存條件不可容易地得到。因而，需要使用具有更好熱穩(wěn)定性的前體制備原位二氧雜環(huán)丁烷底物的方法。發(fā)明概述
在第一個方面，本發(fā)明提供了產(chǎn)生光的方法，所述方法包括下述步驟:(a)提供氧化劑；(b)提供具有下述結(jié)構(gòu)的烯醇醚:
權(quán)利要求
1.一種用于產(chǎn)生光的方法，所述方法包括下述步驟: (a)提供氧化劑； (b)提供具有下述結(jié)構(gòu)的烯醇醚:
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述氧化劑選自:過氧化氫、鑰酸鈉、過氧化氫和鑰酸鈉、次氯酸鹽、次氯酸鹽和過氧化氫、芳基內(nèi)過氧化物、過氧化鈣過氧水合物以及它們的組合。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述氧化劑是過氧化氫、和過氧化氫和鑰酸鈉。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中A或B中的至少一個是
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中A和B—起是
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中R1是含有1-2個碳原子的烷基或含有1-2個碳原子的三氟烷基。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中T是
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中OR2是磷酸酯、乙酸酯、1-磷酸_2，3-二?；视王ァ⑷姿嵯佘?、二磷酸腺苷、單磷酸腺苷、腺苷、a -D-半乳糖苷、β -D-半乳糖苷、a -D-葡萄糖苷、β -D-葡萄糖苷、a -D-甘露糖苷、β -D-甘露糖苷、β -呋喃果糖苷、β -D-葡糖苷 酸或
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中R2是
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中R2是E-L-NuC-Z，其中E是包含親電子原子的基團(tuán)，所述原子在Z基團(tuán)的酶切割以后被Nuc基團(tuán)的電子對攻擊，并通過鄰助作用釋放出1，2-二氧雜環(huán)丁烷酶底物陰離子；L是連接基團(tuán)；Nuc是親核原子；且2是酶可切割的基團(tuán)；其中 E是羧基、羰基、被離去基團(tuán)取代的亞甲基、磷酸鹽、碳酸鹽、黃原酸鹽、亞硫酸鹽、磺酸鹽、亞硫酸氫鹽或二硫化物； L選自:含有1-4個碳原子的 亞甲基或聚亞甲基、-(CH2)m-O-(CH2)n、-(CH2)m-S-(CH2)n-、或-(CH2) J1-NR6- (CH2) n-，其中 m 和 η 是 0_3,且 m+n 是 2 或 3,其中 R6是含有1-10個碳原子的烷基，且所述連接基團(tuán)可以被含有1-24個碳原子的烷基、含有2-24個碳原子的烯基、含有1-24個碳原子的烷基取代，和被含有1-24個碳原子的酰氧基、含有2-24個碳原子的烯基單取代或二取代，和被含有1-24個碳原子的酰氧基、含有6-10個碳的芳基、含有1-24個碳原子的烷基單取代或二取代，和被苯基、羥苯基、吲哚基、巰基、含有1-4個碳原子的烷硫基、羥基、羧基、氨基、胍基、咪唑或氨基甲?；蚝?-24個碳原子的烯基取代，和被苯基、羥苯基、吲哚基、巰基、含有1-4個碳原子的烷硫基、羥基、羧基、氨基、胍基、咪唑或氨基甲酰基取代； Nuc是氧原子或硫原子；且 Z是磷?；⒁阴；?、1-磷酸_2，3- 二?；视王；?、腺苷三磷酰基、腺苷二磷?；?、腺苷單磷酰基、腺苷基、a-D-半乳糖基、β-D-半乳糖基、a-D-葡萄糖基、β _D_葡萄糖基、a-D-甘露糖基、β-D-甘露糖基、呋喃果糖基、β-D-glucosiduransyl或
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中Z是
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述酶部分包含水解酶。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中所述水解酶是堿性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、β -葡萄糖苷酶、β -葡糖苷酸酶或神經(jīng)氨酸酶。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中所述酶部分是酶。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其另外包括下述步驟:在加入所述1，2-二氧雜環(huán)丁烷酶底物的水性溶液以后，檢測從所述反應(yīng)混合物發(fā)射出的光，其中光的發(fā)射指示所述酶的存在，并且發(fā)射的光的量可以與樣品中存在的所述酶的量相關(guān)聯(lián)。
16.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中所述酶部分是酶連接的抗體，所述酶連接的抗體包含能夠與抗原結(jié)合的第一抗體和酶，所述酶能夠切割所述1，2- 二氧雜環(huán)丁烷酶底物，使得所述底物分解并產(chǎn)生光。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中所述第一抗體與所述酶共價地或非共價地連接。
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中所述第一抗體與標(biāo)記共價地連接，且所述酶與這樣的分子共價地連接:所述分子能夠非共價地結(jié)合所述標(biāo)記。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述標(biāo)記是生物素或生物素衍生物，且所述分子是抗生物素蛋白或抗生蛋白鏈菌素。
20.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述標(biāo)記是半抗原，且所述分子是能夠結(jié)合所述半抗原的抗體。
21.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其另外包括下述步驟: (a)提供疑似包含抗原的樣品； (b)提供包含第二抗體的固相，所述第二抗體能夠結(jié)合所述抗原； (c)使所述樣品和酶連接的抗體與所述固相接觸，以形成所述酶復(fù)合物；和， (d)在加入所述1，2-二氧雜環(huán)丁烷酶底物的水性溶液以后，檢測從所述反應(yīng)混合物發(fā)射出的光，其中光的發(fā)射指示所述抗原的存在，并且發(fā)射的光的量可以與所述樣品中存在的所述抗原的量相關(guān)聯(lián)。
22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其另外包括下述步驟:從所述酶復(fù)合物除去任何未結(jié)合的酶連接的抗體 。
23.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中所述酶部分是包含抗原和酶的酶連接的抗原，所述酶能夠切割所述1，2- 二氧雜環(huán)丁烷酶底物，使得所述底物分解并產(chǎn)生光。
24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中所述抗原與所述酶共價地或非共價地連接。
25.根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，其中抗原與標(biāo)記共價地連接，且所述酶與這樣的分子共價地連接:所述分子能夠非共價地結(jié)合所述標(biāo)記。
26.根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中所述標(biāo)記是生物素或生物素衍生物，且所述分子是抗生物素蛋白或抗生蛋白鏈菌素。
27.根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中所述標(biāo)記是半抗原，且所述分子是能夠結(jié)合所述半抗原的抗體。
28.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其另外包括下述步驟: (a)提供疑似包含抗原的樣品； (b)提供固相，所述固相包含能夠結(jié)合所述抗原的抗體； (c)使所述樣品和酶連接的抗原與所述固相接觸，以形成所述酶復(fù)合物；和， (d)在加入所述1，2-二氧雜環(huán)丁烷酶底物的水性溶液以后，檢測從所述反應(yīng)混合物發(fā)射出的光，其中發(fā)射的光的量可以與所述樣品中存在的所述抗原的量相關(guān)聯(lián)。
29.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其另外包括下述步驟:從所述酶復(fù)合物除去任何未結(jié)合的酶連接的抗原。
30.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中所述酶部分是酶連接的寡核苷酸，所述酶連接的寡核苷酸包含能夠與核酸雜交的寡核苷酸和酶，所述酶能夠切割所述1，2- 二氧雜環(huán)丁烷酶底物，使得所述底物分解并產(chǎn)生光。
31.根據(jù)權(quán)利要求30所述的方法，其中所述寡核苷酸與所述酶共價地或非共價地連接。
32.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中寡核苷酸與標(biāo)記共價地連接，且所述酶與這樣的分子共價地連接:所述分子能夠非共價地結(jié)合所述標(biāo)記。
33.根據(jù)權(quán)利要求32所述的方法，其中所述標(biāo)記是生物素或生物素衍生物，且所述分子是抗生物素蛋白或抗生蛋白鏈菌素。
34.根據(jù)權(quán)利要求32所述的方法，其中所述標(biāo)記是半抗原，且所述分子是能夠結(jié)合所述半抗原的抗體。
35.根據(jù)權(quán)利要求30所述的方法，其另外包括下述步驟: (a)提供疑似包含核酸的樣品； (b)將所述核酸固定化在固相上， (C)使所述固定化的核酸和所述酶連接的寡核苷酸接觸，以形成酶復(fù)合物；和， (d)在加入所述1，2-二氧雜環(huán)丁烷酶底物的水性溶液以后，檢測從所述反應(yīng)混合物發(fā)射出的光，其中光的發(fā)射指示所述核酸的存在，并且發(fā)射的光的量可以與所述樣品中存在的所述核酸的量相關(guān)聯(lián)。
36.根據(jù)權(quán)利要求35所述的方法，其另外包括下述步驟:從所述酶復(fù)合物除去任何未結(jié)合的酶連接的寡核苷酸。
37.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述反應(yīng)混合物另外包含促進(jìn)劑。
38.根據(jù)權(quán)利要求37所述的方法，其中所述促進(jìn)劑包括聚合物型的季銨鹽、聚合物型的季鱗鹽或它們的組合。
39.根據(jù)權(quán)利要求38所述的方法，其中所述促進(jìn)劑另外包含受體染料。
40.根據(jù)權(quán)利要求39所述的方法，其中所述受體染料是熒光素。
41.根據(jù)權(quán)利要求38所述的方法，其中所述聚合物型的季銨鹽是聚(乙烯基芐基三甲基氯化銨)，聚[乙烯基芐基(芐基二甲基氯化銨)]、聚[乙烯基(芐基三丁基氯化銨)]、聚[乙烯基(芐基三戊基氯化銨)]或它們的組合。
42.根據(jù)權(quán)利要求 38所述的方法，其中所述聚合物型的季鱗鹽是聚(乙烯基芐基三甲基氯化鱗)、聚(乙烯基芐基三丁基氯化鱗)、聚(乙烯基芐基三辛基氯化鱗)、包含聚(乙烯基芐基三丁基氯化鱗)和聚(乙烯基芐基三辛基氯化鱗)的共聚物或它們的組合。
43.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述烯醇醚是
44.一種用于確定樣品中酶的存在或量的測定方法，所述方法包括下述步驟: (a)提供氧化劑； (b)提供具有下述結(jié)構(gòu)的烯醇醚:
45.一種用于確定樣品中抗原的存在或量的測定方法，所述方法包括下述步驟: (a)提供氧化劑； (b)提供具有下述結(jié)構(gòu)的烯醇醚:
46.一種用于確定樣品中抗原的存在或量的測定方法，所述方法包括下述步驟: (a)提供氧化劑； (b)提供具有下述結(jié)構(gòu)的烯醇醚:
47.一種用于確定樣品中核酸的存在和/或量的測定方法，所述方法包括下述步驟: (a)提供氧化劑； (b)提供具有下述結(jié)構(gòu)的烯醇醚:
48.一種用于檢測樣品中分析物的存在或量的試劑盒，所述試劑盒包括: (a)氧化劑,和 (b)具有下述結(jié)構(gòu)的烯醇醚:
49.根據(jù)權(quán)利要求48所述的試劑盒，其中所述氧化劑選自:過氧化氫、鑰酸鈉、過氧化氫和鑰酸鈉、次氯酸鹽、次氯酸鹽和過氧化氫、芳基內(nèi)過氧化物、過氧化鈣過氧水合物以及它們的組合。
50.根據(jù)權(quán)利要求49所述的試劑盒，其中所述氧化劑是過氧化氫、或過氧化氫和鑰酸鈉。
51.根據(jù)權(quán)利要求48所述的試劑盒，其中A或B中的至少一個是
52.根據(jù)權(quán)利要求48所述的試劑盒，其中A和B—起是
53.根據(jù)權(quán)利要求48所述的試劑盒，其中R1是含有1-2個碳原子的烷基或含有1-2個碳原子的三氟烷基。
54.根據(jù)權(quán)利要求48所述的試劑盒，其中T是
55.根據(jù)權(quán)利要求48所述的試劑盒，其中OR2是磷酸酯、乙酸酯、1-磷酸_2，3- 二?；视王?、三磷酸腺苷、二磷酸腺苷、單磷酸腺苷、腺苷、a-D-半乳糖苷、β-D-半乳糖苷、a -D-葡萄糖苷、β -D-葡萄糖苷、a -D-甘露糖苷、β -D-甘露糖苷、β -呋喃果糖苷、β -D-葡糖苷酸或
56.根據(jù)權(quán)利要求55所述的試劑盒，其中R2是
57.根據(jù)權(quán)利要求48所述的試劑盒，其中R2是E-L-NuC-Z，其中E是包含親電子原子的基團(tuán)，所述原子在Z基團(tuán)的酶切割以后被Nuc基團(tuán)的電子對攻擊，并通過鄰助作用釋放出.1，2-二氧雜環(huán)丁烷酶底物陰離子；L是連接基團(tuán)；Nuc是親核原子；且2是酶可切割的基團(tuán)；其中 E是羧基、羰基、被離去基團(tuán)取代的亞甲基、磷酸鹽、碳酸鹽、黃原酸鹽、亞硫酸鹽、磺酸鹽、亞硫酸氫鹽或二硫化物； L選自:含有1-4個碳原子的亞甲基或聚亞甲基、-(CH2)m-O-(CH2)n、-(CH2)m-S-(CH2)n-、或-(CH2) m-NR6- (CH2) n-，其中 m 和 η 是 0_3,且 m+n 是 2 或 3,其中 R6是含有1-10個碳原子的烷基，且所述連接基團(tuán)可以被含有1-24個碳原子的烷基、含有2-24個碳原子的烯基、含有1-24個碳原子的烷基取代，和被含有1-24個碳原子的酰氧基、含有2-24個碳原子的烯基單取代或二取代，和被含有1-24個碳原子的酰氧基、含有6-10個碳的芳基、含有1-24個碳原子的烷基單取代或二取代，和被苯基、羥苯基、吲哚基、巰基、含有1-4個碳原子的烷硫基、羥基、羧基、氨基、胍基、咪唑或氨基甲?；蚝?-24個碳原子的烯基取代，和被苯基、羥苯基、吲哚基、巰基、含有1-4個碳原子的烷硫基、羥基、羧基、氨基、胍基、咪唑或氨基甲?；〈?； Nuc是氧原子或硫原子；且 Z是磷酰基、乙?；?-磷酸_2，3- 二?；视王；?、腺苷三磷?；⑾佘斩柞；?、腺苷單磷?；?、腺苷基、a-D-半乳糖基、β-D-半乳糖基、a-D-葡萄糖基、β _D_葡萄糖基、a-D-甘露糖基、β-D-甘露糖基、β_呋喃果糖基、β-D-glucosiduransyl或
58.根據(jù)權(quán)利要求57所述的試劑盒，其中Z是
59.根據(jù)權(quán)利要求48所述的試劑盒，其另外包括促進(jìn)劑。
60.根據(jù)權(quán)利要求59所述的試劑盒，其中所述促進(jìn)劑包括聚合物型的季銨鹽、聚合物型的季鱗鹽或它們的組合。
61.根據(jù)權(quán)利要求60所述的試劑盒，其中所述促進(jìn)劑另外包含受體染料。
62.根據(jù)權(quán)利要求61所述的試劑盒，其中所述受體染料是熒光素。
63.根據(jù)權(quán)利要求60所述的試劑盒，其中所述聚合物型的季銨鹽是聚(乙烯基芐基三甲基氯化銨)、聚[乙烯基芐基(芐基二甲基氯化銨)]、聚[乙烯基(芐基三丁基氯化銨)]、聚[乙烯基(芐基三戊基氯化銨)]或它們的組合。
64.根據(jù)權(quán)利要求60所述的試劑盒，其中所述聚合物型的季鱗鹽是聚(乙烯基芐基三甲基氯化鱗)、聚(乙烯基芐基三丁基氯化鱗)、聚(乙烯基芐基三辛基氯化鱗)、包含聚(乙烯基芐基三丁基氯化鱗)和聚(乙烯基芐基三辛基氯化鱗)的共聚物；或它們的組合。
65.根據(jù)權(quán)利要求48所述的試劑盒，其中所述烯醇醚是
66.一種用于制備1，2- 二氧雜環(huán)丁烷酶底物的方法，所述方法包括下述步驟: (a)提供氧化劑； (b)提供具有下述結(jié)構(gòu)的烯醇醚:
全文摘要
在水性條件或其它測定條件中原位產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光的酶底物的方法。也公開了使用所述底物產(chǎn)生光、檢測和/或量化酶、抗原和/或核酸的方法。還公開了與這些方法有關(guān)的試劑盒。
文檔編號C07D305/14GK103209970SQ201180043359
公開日2013年7月17日 申請日期2011年7月6日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月8日
發(fā)明者A.斯帕克斯, Z.王, M.吉 申請人:生命科技公司