抗c-Met抗體的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及特異性地與人c-Met受體蛋白結(jié)合并且充當(dāng)肝細(xì)胞生長因子(HGF)介導(dǎo)的c-Met受體活化的嚴(yán)格拮抗劑以及也抑制非HGF依賴性人c-Met蛋白活化的抗體。
【專利說明】抗c-Met抗體
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及特異性地與人c-Met受體蛋白結(jié)合并且充當(dāng)肝細(xì)胞生長因子(hepatocyte growth factor, HGF)介導(dǎo)的c_Met受體活化的嚴(yán)格拮抗劑和/或抑制非HGF依賴性c-Met受體活化的抗體。
【背景技術(shù)】[0002]受體酪氨酸激酶c-Met及其配體肝細(xì)胞生長因子(HGF)已成為靶向癌癥治療的主要候選。
[0003]c-Met是肝細(xì)胞生長因子(HGF)的細(xì)胞表面受體，也稱為分散因子。c_Met受體是由胞外α鏈和β鏈組成的以二硫鍵連接的異二聚體。α鏈異二聚到β鏈的氨基末端部分，形成胞外結(jié)構(gòu)域中主要的配體結(jié)合位點(diǎn)。HGF結(jié)合誘導(dǎo)c-Met受體同二聚作用和催化位點(diǎn)中兩個(gè)酪氨酸殘基(Υ1234和Υ1235)磷酸化，調(diào)節(jié)激酶活性。
[0004]HGF介導(dǎo)c-Met活化導(dǎo)致稱為“侵襲性生長”的復(fù)雜遺傳程序，該程序由在正常生理?xiàng)l件下的胚胎發(fā)育過程中以及病理地腫瘤發(fā)生過程中發(fā)生的一系列生理過程(包括增殖、侵襲和血管生成)組成。經(jīng)c-Met的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通過多種下游效應(yīng)子促進(jìn)增殖和細(xì)胞存活。
[0005]在腫瘤細(xì)胞中，c-Met活化引起多個(gè)系列的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)級聯(lián)的引發(fā)，導(dǎo)致細(xì)胞生長、增殖、侵襲和免受細(xì)胞凋亡。c-Met致瘤性的基本生物學(xué)機(jī)制通常以3種不同方式得到:(a)HGF/c-Met自分泌環(huán)的建立；(b)通過c-Met或HGF過表達(dá)；和(c) c-Met受體編碼序列中激酶活化突變的存在。已在大多數(shù)實(shí)體腫瘤的腫瘤活檢中觀察到HGF和c-Met表達(dá)，并且c-Met信號轉(zhuǎn)導(dǎo)記載于廣泛范圍的人惡性腫瘤中，包括膀胱癌、乳腺癌、子宮頸癌、結(jié)直腸癌、胃癌、頭頸癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、腎癌和甲狀腺癌。
[0006]c-Met被其配體HGF的活化可以旁分泌或自分泌方式發(fā)生。在異常HGF產(chǎn)生的存在下，旁分泌活化可變?yōu)椴±硇?。在腫瘤細(xì)胞異常表達(dá)HGF及其受體二者時(shí)發(fā)生自分泌活化。另外，c-Met活化可以非HGF依賴性方式發(fā)生，由c-Met同二聚作用介導(dǎo)。
[0007]廣泛范圍的人惡性腫瘤表現(xiàn)出持續(xù)C-Met刺激、過表達(dá)或突變，包括乳腺癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、腎癌和甲狀腺癌。在有特定遺傳類型的乳頭狀腎癌的患者中鑒定出了陽性的c-Met活化突變,直接表明c-Met參與腫瘤發(fā)生。由c_Met受體的調(diào)節(jié)異?；蚱渑潴wHGF的過表達(dá)引起的c-Met信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的異常信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與侵襲性的表型相關(guān)。c_Met信號轉(zhuǎn)導(dǎo)參與若干癌癥的進(jìn)展和擴(kuò)散的大量證據(jù)和對其在疾病中的作用的加深理解使得對c-Met和HGF在癌癥藥物開發(fā)中作為主要祀標(biāo)產(chǎn)生了相當(dāng)大的興趣(Eder等,Clin CancerResearch ； 15 (7) ;2009)。
[0008]具有潛在臨床應(yīng)用的許多c-Met通路拮抗劑目前在進(jìn)行臨床研究。潛在c-Met拮抗劑包括阻斷c-Met與其配體HGF相互作用的單克隆抗體。最深入描述的是由Genentech (W096/38557)產(chǎn)生的抗_c_Met5D5抗體。當(dāng)單獨(dú)添加時(shí)，5D5在多種模型中單獨(dú)添加時(shí)起有效激動(dòng)劑的作用，而當(dāng)用作Fab片段或單臂抗體(MetMab)時(shí)起拮抗劑的作用。[0009]W02009/007427描述了 c_Met的小鼠單克隆抗體和嵌合變體，在所述嵌合變體中小鼠單克隆抗體的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域或其人源化變體與人IgGl的恒定區(qū)偶聯(lián)。但是，雖然最初小鼠單克隆抗體224G11表現(xiàn)出拮抗劑活性而沒有顯著的內(nèi)在激動(dòng)劑活性，但是224G11的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域與人IgGl的偶聯(lián)產(chǎn)生了嵌合形式的224G11，其表現(xiàn)出與降低的拮抗劑效力相關(guān)的一 些激動(dòng)劑活性。可以通過在人IgGl的重鏈鉸鏈結(jié)構(gòu)域中進(jìn)行工程點(diǎn)突變來回復(fù)(reverse)嵌合形式的224G11所表現(xiàn)出的激動(dòng)劑活性。在該改造變體中，鉸鏈區(qū)中的若干人源氨基殘基被發(fā)生在鼠IgGl序列中對應(yīng)位置處的鼠殘基所替代。所得改造變體的c-Met受體拮抗劑活性恢復(fù)，但與人抗體的總體結(jié)構(gòu)同源性和序列同源性因鉸鏈區(qū)所需的突變而降低。此外，224G11中的至少一個(gè)高變環(huán)采用未見于人抗體庫的典型結(jié)構(gòu)。
[0010]W02007/126799描述了 c_Met的全人單克隆抗體。這些抗體起到與HGF相互作用的拮抗劑的作用，但未示出關(guān)于這些抗體的內(nèi)在激動(dòng)劑活性或其抑制c-Met 二聚作用的能力的數(shù)據(jù)。
[0011]W02010/059654也描述了單克隆c_Met抗體。這些抗體的特征在于與人c_Met的α鏈結(jié)合并且誘導(dǎo)細(xì)胞表面人c-Met的內(nèi)化。
[0012]發(fā)明描述
[0013]本文提供了分離的抗體，或其抗原結(jié)合片段，其特異性地與人C-Met蛋白結(jié)合，其中所述抗體表現(xiàn)出下述特性中的至少兩個(gè)或全部三個(gè):
[0014](a)是HGF介導(dǎo)人c_Met蛋白活化的嚴(yán)格拮抗劑，
[0015](b)抑制非HGF依賴性人c-Met蛋白活化，和
[0016](c)不誘導(dǎo)細(xì)胞表面人C-Met蛋白的顯著下調(diào)。
[0017]在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其特異性地與人c-Met蛋白結(jié)合，其中所述抗體表現(xiàn)出下述特性:
[0018](a)是HGF介導(dǎo)人c_Met蛋白活化的嚴(yán)格拮抗劑，
[0019](b)抑制非HGF依賴性人c-Met蛋白活化。
[0020]在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其特異性電極與人c-Met蛋白結(jié)合,其中所述抗體表現(xiàn)出下述特性:
[0021](a)是HGF介導(dǎo)人c_Met蛋白活化的嚴(yán)格拮抗劑，和
[0022](c)不誘導(dǎo)細(xì)胞表面人C-Met蛋白的顯著下調(diào)。
[0023]在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其特異性地與人C-Met蛋白結(jié)合，其中所述抗體表現(xiàn)出下述特性:
[0024](b)抑制非HGF依賴性的人c-Met蛋白活化，和
[0025](C)不誘導(dǎo)細(xì)胞表面人C-Met蛋白的顯著下調(diào)。
[0026]在另一實(shí)施方案中，提供了分離的抗體，或其抗原結(jié)合片段，其特異性地與人c-Met蛋白結(jié)合,其中所述抗體表現(xiàn)出全部下述特性:
[0027](a)是HGF介導(dǎo)人c_Met蛋白活化的嚴(yán)格拮抗劑，
[0028](b)抑制非HGF依賴性的人c-Met蛋白活化，和
[0029](c)不誘導(dǎo)細(xì)胞表面人C-Met蛋白的顯著下調(diào)。
[0030]在一個(gè)特定實(shí)施方案中，所述抗體或抗原結(jié)合片段可以與人c-Met蛋白的IPT區(qū)中的表位、特別是人c-Met蛋白的IPT結(jié)構(gòu)域1-2、2-3或3_4中的表位結(jié)合，或者與人c-Met蛋白的PS1-1PTl區(qū)中的表位結(jié)合。
[0031]在另一實(shí)施方案中，所述抗體或抗原結(jié)合片段可以與所述人c-Met蛋白的PS1-1PTl 區(qū)中的氨基酸序列 523-rseeclsgtwtqqiclpaiykvfpnsapleggtrlticgwdfgfrrnnkfdlkktrvllgnesctltlsestmntlkctvgpamnkhfnmsiiisnghgttqystfsyvdp-633 (seq id NO:
136)中的表位結(jié)合。
[0032]在又一實(shí)施方案中，所述抗體或抗原結(jié)合片段可以阻斷HGF與人C-Met蛋白的高親和力HGF結(jié)合位點(diǎn)的結(jié)合。
[0033]在又一實(shí)施方案中，提供了這樣的抗體或其抗原結(jié)合片段:
[0034](a)與人c-Met蛋白的SEMA結(jié)構(gòu)域中的表位結(jié)合，
[0035](b)不誘導(dǎo)細(xì)胞表面人C-Met蛋白的顯著下調(diào)。
[0036]在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，該抗體或其抗原結(jié)合片段與人c-Met的SEMA結(jié)構(gòu)域中的肽 98-VDTYYDDQLISCGSVNRGTCQRHVFPHNHTADIQSEVHCIFSPQIEEPSQCPDCVVSALGAKVLSSVKDRFINFFVGNTINSSYFPDHPLHSISVRRLKETK-199 (SEQ ID NO:181)中的表位相結(jié)合。
[0037]該抗體或抗原結(jié)合片段可以阻斷HGF與人c-Met蛋白的低親和力HGF結(jié)合位點(diǎn)的
結(jié)合 ?
[0038]在任意前述實(shí)施方案中，所述抗體或抗原結(jié)合片段可以包含具有全人序列的鉸鏈區(qū)。如本文所限定的，所述抗體或抗原結(jié)合片段還可以具有如本文所限定的高人同源性。
[0039]在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了特異性地與人c-Met受體蛋白結(jié)合并且拮抗HGF介導(dǎo)c-Met受體活化的具有高人同源性的抗體。
[0040]在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了特異性地與人C-Met受體蛋白結(jié)合的具有高人同源性的分離的抗體，其中所述抗體是HGF介導(dǎo)c-Met受體活化的嚴(yán)格拮抗劑，并且包含具有全人序列的鉸鏈區(qū)，其中人鉸鏈區(qū)的存在并不對抗體的拮抗劑活性造成不利影響。
[0041]在另一實(shí)施方案中，提供了具有高人同源性的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其特異性地與人c-Met蛋白結(jié)合，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段阻斷HGF與所述人c_Met蛋白的高親和力HGF結(jié)合位點(diǎn)的結(jié)合，并且是HGF介導(dǎo)c-Met受體活化的嚴(yán)格拮抗劑。
[0042]在又一實(shí)施方案中，提供了具有高人同源性的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其特異性地與人c-Met蛋白結(jié)合，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段與所述人c-Met蛋白的IPT區(qū)或PS1-1PTl區(qū)中的表位結(jié)合，并且是HGF介導(dǎo)c-Met受體活化的嚴(yán)格拮抗劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段與人c-Met蛋白的IPT結(jié)構(gòu)域1-2、2-3或3-4中的表位結(jié)合。
[0043]在又一實(shí)施方案中，提供了分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其特異性地與人C-Met蛋白結(jié)合，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段與人c-Met蛋白的PS1-1PTl區(qū)中的肽523-RSEECLSGTWTQQICLPAIYKVFPNSAPLEGGTRLTICGWDFGFRRNNKFDLKKTRVLLGNESCTLTLSESTMNTLKCTVGPAMNKHFNMSIIISNGHGTTQYSTFSYVDP-633 (SEQ ID NO:136)中的表位結(jié)合。
[0044]在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，該抗體或其抗原結(jié)合片段可以是HGF介導(dǎo)人c-Met蛋白活化的嚴(yán)格拮抗劑，并且還可以抑制非HGF依賴性的人c-Met蛋白活化，并且優(yōu)選地不誘導(dǎo)細(xì)胞表面人c-Met蛋白的顯著下調(diào)。
[0045]在另一實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合構(gòu)象表位，所述構(gòu)象表位包含IPT結(jié)構(gòu)域的一部分和C-Met另一結(jié)構(gòu)域(例如SEMA結(jié)構(gòu)域)的一部分。[0046]在各前述實(shí)施方案中，所述抗體可以是單克隆抗體、全人單克隆抗體或人源化單克隆抗體中的任意一者，其均可表現(xiàn)出與人c-Met蛋白的二價(jià)結(jié)合。
[0047]在一個(gè)特定實(shí)施方案中，具有高人同源性的抗體或其抗原結(jié)合片段可包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)，其中所述VH和VL結(jié)構(gòu)域或其一種或更多種CDR是駱駝科動(dòng)物來源的。
[0048]在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其與人C-Met蛋白特異性結(jié)合并且是HGF介導(dǎo)c-Met受體活化的嚴(yán)格拮抗劑，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)，其中所述VH和VL結(jié)構(gòu)域或其一種或更多種CDR是駱駝科動(dòng)物來源的。在一個(gè)特定實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段可包含大羊駝VH和VL結(jié)構(gòu)域或人源化大羊駝VH和VL結(jié)構(gòu)域。所述抗體或抗原結(jié)合片段還可表現(xiàn)出如本文所限定的“高人同源性”。
[0049]在一些非限制性實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了通過參照特定結(jié)構(gòu)特征即⑶R(SEQ ID勵(lì):1至21、71至73或83至85(重鏈0?)或 SEQ ID NO:22 至 42、74 至 76、86、87 或 137至148 (輕鏈CDR)中的一種或更多種)或整個(gè)可變結(jié)構(gòu)域(SEQ ID NO:45至58、77、78、88、89,92至121或149至164中的一種或更多種)的特定氨基酸序列而限定的下述抗體或其抗原結(jié)合片段。所有這些抗體特異性地與人c-Met蛋白結(jié)合，并且是HGF介導(dǎo)c-Met受體活化的嚴(yán)格拮抗劑。在一些特定實(shí)施方案中，由下述結(jié)構(gòu)特征限定的抗體還可表現(xiàn)出如本文所限定的高人同源性。所述抗體可以是通過重組方法產(chǎn)生的單克隆抗體。下述c-Met抗體的CDR可以是駱駝科動(dòng)物來源的，即來自通過用c-Met抗原免疫駱駝科動(dòng)物(特別是大羊駝(llama))而產(chǎn)生的常規(guī)抗體。本發(fā)明還提供如本文所限定的人源化或人種系化變體、親和變體和包含保守氨基酸替換的變體。特別提供的是與人抗體(特別是人IgGl、IgG2、IgG3或IgG4)的恒定結(jié)構(gòu)域融合的包含駱駝科動(dòng)物來源的VH和VL結(jié)構(gòu)域或其人源化或種系化變體的嵌合抗體。這些嵌合抗體可包含如本文所限定的具有全人序列的鉸鏈區(qū)。
[0050]現(xiàn)在通過參照結(jié)構(gòu)特征來進(jìn)一步描述c-Met抗體的示例性實(shí)施方案。
[0051]在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合人c-Met蛋白，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含含有可變重鏈CDR3的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述可變重鏈CDR3包含選自以下的序列:
[0052]SEQ ID NO:21 [DVRVIATGWATANALDA]，或其序列變體；
[0053]SEQ ID NO:15 [VDDYYLGYDY]，或其序列變體；
[0054]SEQ ID NO:3 [RRDNYYGTSGEYDY]，或其序列變體；
[0055]SEQ ID NO:6 [DTVVSGNGY]，或其序列變體；
[0056]SEQ ID NO:9 [DLIGSHDY]，或其序列變體；
[0057]SEQ ID NO:12 [GPGWYSGSRNDY]，或其序列變體；
[0058]SEQ ID NO: 18 [LEDYELAYDY]，或其序列變體；以及
[0059]SEQ ID NO:73 [SGYGSSLGDFGS]或其序列變體，
[0060]其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)。
[0061]所述抗體 的重鏈可變結(jié)構(gòu)域還可包含含有選自以下之序列的可變重鏈⑶R2:
[0062](a) SEQ ID NO:XXI「XXXXXXXXTYYAESMKl 或其序列變體，[0063]其中
[0064]Xl是任意氨基酸，優(yōu)選為T或A ;
[0065]X2是任意氨基酸，優(yōu)選為I ;
[0066]X3是任意氨基酸，優(yōu)選為S或N ;
[0067]X4是任意氨基酸，優(yōu)選為W ；
[0068]X5是任意氨基酸，優(yōu)選為N ；
[0069]X6是任意氨基酸，優(yōu)選為D或G ;
[0070]X7是任意氨基酸，優(yōu)選為1、G或S ;以及
[0071]X8是任意氨基酸，優(yōu)選為N或S ;
[0072](b) SEQ ID NO:XX2「VIAYDGSTX,YSPSLKSl或其序列變體，其中Xl是任意氨基酸，優(yōu)選為Y或D ;和
[0073](c)SEQ ID NO:XX3「RIDPEX,GGTKYAQKFQGl,或其序列奪體，其中
[0074]Xl是任意氨基酸，優(yōu)選為D、N或E ;并且
[0075]其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)。
[0076]所述抗體的重鏈可變結(jié)構(gòu)域還可包含含有選自以下之序列的可變重鏈⑶Rl:`[0077](a) SEQ ID NO:XX4 [X1DYX2MX3]，或其序列變體，其中
[0078]X1是任意氨基酸，優(yōu)選為D或S ;
[0079]X2是任意氨基酸，優(yōu)選為A或V ;以及
[0080]X3是任意氨基酸，優(yōu)選為T、N或S，
[0081](b) SEQ ID NO:XX5 [X1NYYX2WS]，或其序列變體，其中
[0082]Xl是任意氨基酸，優(yōu)選為G或T ;以及
[0083]X2是任意氨基酸，優(yōu)選為A或Y，
[0084](c) SEQ ID NO:XX6 [X1X2X3ID]，或其序列變體，其中
[0085]Xl是任意氨基酸，優(yōu)選為M或N ;
[0086]X2是任意氨基酸，優(yōu)選為N或Y ;以及
[0087]X3是任意氨基酸，優(yōu)選為S或V，并且
[0088]其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)。
[0089]所述抗體或抗原結(jié)合片段還可包含含有可變輕鏈CDR3的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述可變輕鏈CDR3包含選自以下的氨基酸序列:
[0090](a) SEQ ID NO:YY1 [QQGX1SFPX2X3]，或其序列變體，其中
[0091]X1是任意氨基酸，優(yōu)選為Y或W ;
[0092]X2是任意氨基酸，優(yōu)選為Y或L ;
[0093]X3是任意氨基酸，優(yōu)選為T或S ;
[0094](b) SEQ ID NO:YY2 [ASYRX1X2X3X4X5X6V]，或其序列變體，其中
[0095]Xl是任意氨基酸，優(yōu)選為S、1、R或T ;
[0096]X2是任意氨基酸，優(yōu)選為A、S、T或R ;
[0097]X3是任意氨基酸，優(yōu)選為N或T ;[0098]X4是任意氨基酸，優(yōu)選為N、D、R或K;
[0099]X5是任意氨基酸，優(yōu)選為A、V、Y、N或H;
[0100]X6是任意氨基酸，優(yōu)選為V、A、S或G，
[0101]其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)。
[0102]所述抗體或抗原結(jié)合片段還可包含含有選自以下之序列的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域CDR2:
[0103](a) SEQ ID NO:YY3 iffASX.RESl，或其序列變體，其中
[0104]Xl是任意氨基酸，優(yōu)選為I或T ;
[0105](b) SEQ ID NO:YY4 [X1VX2X3RX4S]，或其序列變體，其中
[0106]Xl是任意氨基酸，優(yōu)選為D、A或E ;
[0107]X2是任意氨基酸，優(yōu)選為N或S ;
[0108]X3是任意氨基酸，優(yōu)選為R、Y或K ;
[0109]X4是任意氨基酸，優(yōu)選為A或P，
[0110]其中所述序列變體在所示序 列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)。
[0111]所述抗體或抗原結(jié)合片段還可包含含有選自以下之序列的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域CDRl:
[0112](a) SEQ ID NO:YY5「KSSQSVLXXX,NX,KXJLAl，或其序列變體，其中
[0113]Xl是任意氨基酸，優(yōu)選為W、L或F ;
[0114]X2是任意氨基酸，優(yōu)選為R或S ;
[0115]X3是任意氨基酸，優(yōu)選為S或P ;
[0116]X4是任意氨基酸，優(yōu)選為Q或H;
[0117]X5是任意氨基酸，優(yōu)選為N或S，
[0118](b) SEQ ID NO:YY6 [X1GX2X3X4X5X6GX7X8X9YX10S]，或其序列變體，其中
[0119]Xl是任意氨基酸，優(yōu)選為A或T ;
[0120]Χ2是任意氨基酸，優(yōu)選為T或S ;
[0121]Χ3是任意氨基酸，優(yōu)選為S或N;
[0122]Χ4是任意氨基酸，優(yōu)選為S或T ;
[0123]Χ5是任意氨基酸，優(yōu)選為D或N ;
[0124]Χ6是任意氨基酸，優(yōu)選為V或I ;
[0125]Χ7是任意氨基酸，優(yōu)選為Y、G、D或N;
[0126]X8是任意氨基酸，優(yōu)選為G或Y ;
[0127]X9是任意氨基酸，優(yōu)選為N或Y ;
[0128]XlO是任意氨基酸，優(yōu)選為V或L，
[0129]其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)。
[0130]36C4、20F1 及其奪體
[0131]在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其特異性地結(jié)合人c-Met蛋白，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含其中可變重鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:12 or SEQID NO:21或其序列變體的重鏈可變結(jié)構(gòu)，其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)
或三個(gè)氨基酸替換。
[0132]在所述抗體或其抗原結(jié)合片段的一個(gè)實(shí)施方案中，
[0133]可變重鏈CDR3序列是SEQ ID NO:21或SEQ ID NO:12或其序列變體；
[0134]可變重鏈CDR2序列是SEQ ID NO:XX2或其序列變體；以及
[0135]可變重鏈CDRl序列是SEQ ID NO:XX5或其序列變體，并且
[0136]其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)。
[0137]在所述抗體或其抗原結(jié)合片段的一個(gè)實(shí)施方案中，
[0138]可變重鏈CDR3序列是SEQ ID NO:21或其序列變體；
[0139]可變重鏈CDR2序 列是SEQ ID NO:20或其序列變體或者SEQ ID NO:83或其序列變體；以及
[0140]可變重鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:19或其序列變體，并且，
[0141]其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)。
[0142]在所述抗體或其抗原結(jié)合片段的一個(gè)實(shí)施方案中，
[0143]可變重鏈CDR3序列是SEQ ID NO:12或其序列變體；
[0144]可變重鏈⑶R2序列是SEQ ID NO: 11或其序列變體；以及
[0145]可變重鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:10或其序列變體，并且，
[0146]其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)。
[0147]在所述抗體或其抗原結(jié)合片段的一個(gè)實(shí)施方案中，
[0148]可變輕鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:YY2或其序列變體；
[0149]可變輕鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:ΥΥ4或其序列變體；以及
[0150]可變輕鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:ΥΥ6或其序列變體，并且，
[0151]其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換。
[0152]在所述抗體或其抗原結(jié)合片段的一個(gè)實(shí)施方案中，
[0153]可變輕鏈CDR3序列選自SEQ ID NO:33或其序列變體、SEQ ID NO:145或其序列變體、SEQ ID NO:146或其序列變體、SEQ ID NO:147或其序列變體和SEQ ID NO:148或其序列變體；
[0154]可變輕鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:32或其序列變體；以及
[0155]可變輕鏈CDRl序列是SEQ ID NO:31或其序列變體或者SEQ ID NO:144或其序列變體，并且，
[0156]其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)。
[0157]在所述抗體或其抗原結(jié)合片段的一個(gè)實(shí)施方案中，
[0158]可變輕鏈CDR3序列是SEQ ID NO:30或其序列變體；
[0159]可變輕鏈CDR2序列是SEQ ID NO:29或其序列變體；以及[0160]可變輕鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:28或其序列變體，并且，
[0161]其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)。
[0162]在另一實(shí)施方案中，提供了分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合人c-Met蛋白，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，其中:
[0163]可變重鏈CDR3序列是SEQ ID NO:21或其序列變體；
[0164]可變重鏈CDR2 序列選自 SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:83 和 SEQ ID NO:84 或其序列變體；以及
[0165] 可變重鏈CDRl序列是SEQ ID NO:19或其序列變體；
[0166]輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含選自以下的⑶R的組合:
[0167]⑴可變輕鏈CDR3序列是SEQ ID NO:33或其序列變體；
[0168]可變輕鏈CDR2序列是SEQ ID NO:32或其序列變體；
[0169]可變輕鏈CDRl序列是SEQ ID NO:31或其序列變體，
[0170]其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)；或者
[0171](ii)可變輕鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:145或其序列變體；
[0172]可變輕鏈CDR2序列是SEQ ID NO:32或其序列變體；
[0173]可變輕鏈CDRl序列是SEQ ID NO:144或其序列變體，
[0174]其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)；或者
[0175](iii)可變輕鏈CDR3序列是SEQ ID NO:146或其序列變體；
[0176]可變輕鏈CDR2序列是SEQ ID NO:32或其序列變體；
[0177]可變輕鏈CDRl序列是SEQ ID NO:31或其序列變體，
[0178]其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)；或者
[0179](iv)可變輕鏈CDR3序列是SEQ ID NO:147或其序列變體；
[0180]可變輕鏈CDR2序列是SEQ ID NO:32或其序列變體；
[0181]可變輕鏈CDRl序列是SEQ ID NO:144或其序列變體，
[0182]其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)；或者
[0183](V)可變輕鏈CDR3序列是SEQ ID NO:148或其序列變體；
[0184]可變輕鏈CDR2序列是SEQ ID NO:32或其序列變體；
[0185]可變輕鏈CDRl序列是SEQ ID NO:144或其序列變體，
[0186]其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)。
[0187]在一些示例性實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段與人c-Met的SEMA結(jié)構(gòu)域中的肽 98-VDTYYDDQLISCGSVNRGTCQRHVFPHNHTADIQSEVHCIFSPQIEEPSQCPDCVVSALGAKVLSSVKDRFINFFVGNTINSSYFPDHPLHSI SVRRLKETK-199 (SEQ ID NO:181)中的表位結(jié)合。[0188]在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，該抗體或其抗原結(jié)合片段可以是HGF介導(dǎo)人c-Met蛋白活化的嚴(yán)格拮抗劑并且還可以抑制非HGF依賴性的人c-Met蛋白活化，并且優(yōu)選地不誘導(dǎo)細(xì)胞表面人c-Met蛋白的顯著下調(diào)。
[0189]在一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體可以包含人抗體(特別是人IgGl、IgG2、IgG3或IgG4)的CHl結(jié)構(gòu)域、鉸鏈區(qū)、CH2結(jié)構(gòu)域和CH3結(jié)構(gòu)域。
[0190]在另一實(shí)施方案中，提供了分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合人c-Met蛋白，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，其中:
[0191]可變重鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:12或其序列變體； [0192]可變重鏈⑶R2序列是SEQ ID NO: 11或其序列變體；以及
[0193]可變重鏈CDRl序列是SEQ ID NO:10或其序列變體，
[0194]可變輕鏈CDR3序列是SEQ ID NO:30或其序列變體；
[0195]可變輕鏈CDR2序列是SEQ ID NO:29或其序列變體；以及
[0196]可變輕鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:28或其序列變體，并且
[0197]其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)。
[0198]在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，該抗體或其抗原結(jié)合片段可以是HGF介導(dǎo)人c-Met蛋白活化的嚴(yán)格拮抗劑并且還可以抑制非HGF依賴性的人c-Met蛋白活化，并且優(yōu)選地不誘導(dǎo)細(xì)胞表面人c-Met蛋白的顯著下調(diào)。
[0199]在一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體可包含人抗體(特別是人IgGl、IgG2、IgG3或IgG4)的CHl結(jié)構(gòu)域、鉸鏈區(qū)、CH2結(jié)構(gòu)域和CH3結(jié)構(gòu)域。
[0200]在另一實(shí)施方案中，提供了分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合人c-Met蛋白，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含與選自SEQ ID NO:51、88、92、94、96和98的序列具有至少85%序列同一性、或至少90%序列同一性、或至少95%序列同一性或至少97%、98%或99%序列同一性的VH序列。
[0201]在又一實(shí)施方案中，提供了分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合人c-Met蛋白，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含選自SEQ ID N0:51、88、92、94、96和98的VH氨基酸序列。
[0202]在又一實(shí)施方案中，提供了分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合人c-Met蛋白，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含與選自SEQ ID NO:55、93、95、97、99、158、
159、160、161、162、163和164的氨基酸序列具有至少80%序列同一性、或至少85%序列同一性、或至少90 %序列同一性、或至少95 %序列同一性、或至少97 %、98 %或99 %序列同一性的V λ序列。
[0203]在又一實(shí)施方案中，提供了分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合人c-Met蛋白，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含選自SEQ ID NO:55、93、95、97、99、158、159、160、161、162、163和164的V λ氨基酸序列。
[0204]在又一實(shí)施方案中，提供了分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其特異性地與人C-Met蛋白結(jié)合并且優(yōu)選為HGF介導(dǎo)c-Met受體活化的嚴(yán)格拮抗劑，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，其中所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含與選自SEQ ID NO:
51、88、92、94、96和98的序列具有至少85%序列同一性、或至少90%序列同一性、或至少95%序列同一性、或至少97%、98%或99%序列同一性的VH序列，并且所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含與選自 SEQ ID NO:55、93、95、97、99、158、159、160、161、162、163 和 164 的氨基酸序列具有至少80%序列同一性、或至少85%序列同一性、或至少90%序列同一性、或至少95%序列同一性、或至少97%、98%或99%序列同一性的VA序列。
[0205]在一些示例性實(shí)施方案中，該抗體與人c-Met的SEMA結(jié)構(gòu)域中的肽98-VDTYYDDQLISCGSVNRGTCQRHVFPHNHTADIQSEVHCIFSPQIEEPSQCPDCVVSALGAKVLSSVKDRFINFFVGNTINSSYFPDHPLHSI SVRRLKETK-199 (SEQ ID NO:181)中的表位結(jié)合。
[0206]在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，該抗體或其抗原結(jié)合片段可以是HGF介導(dǎo)人c-Met蛋白活化的嚴(yán)格拮抗劑并且還可以抑制非HGF依賴性的人c-Met蛋白活化，并且優(yōu)選地不誘導(dǎo)細(xì)胞表面人c-Met蛋白的顯著下調(diào)。
[0207]在一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體可包含人抗體(特別是人IgGl、IgG2、IgG3或IgG4)的CHl結(jié)構(gòu)域、鉸鏈區(qū)、CH2結(jié)構(gòu)域和CH3結(jié)構(gòu)域。
[0208]在另一實(shí)施方案中，提供了分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其特異性地與人C-Met蛋白結(jié)合并且優(yōu)選為HGF介導(dǎo)c-Met受體活化的嚴(yán)格拮抗劑，所述抗體包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)，其中所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)包含如SEQ ID NO:51或SEQ ID NO:88所示的氨基酸序列或其人源化變體或親和變體，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)包含如SEQ ID NO:55所示的氨基酸序列，`或其人源化變體或親和變體。
[0209]在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，該抗體或其抗原結(jié)合片段可以是HGF介導(dǎo)人c-Met蛋白活化的嚴(yán)格拮抗劑并且還可以抑制非HGF依賴性的人c-Met蛋白活化，并且優(yōu)選地不誘導(dǎo)細(xì)胞表面人c-Met蛋白的顯著下調(diào)。
[0210]在一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體可包含人抗體(特別是人IgGl、IgG2、IgG3或IgG4)的CHl結(jié)構(gòu)域、鉸鏈區(qū)、CH2結(jié)構(gòu)域和CH3結(jié)構(gòu)域。
[0211]在另一實(shí)施方案中，提供了分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其特異性地與人c-Met蛋白結(jié)合，并且優(yōu)選為HGF介導(dǎo)c-Met受體活化的嚴(yán)格拮抗劑，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，其中所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含與如SEQ ID N0:51或SEQ ID NO:88所示的氨基酸序列具有至少85%序列同一性、或至少90%序列同一性、或至少95%序列同一性、或至少97%、98%或99%序列同一性的VH序列，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含與如SEQ ID NO:55所示的氨基酸序列或其人源化變體或親和變體具有至少80%序列同一性、或至少85%序列同一性、或至少90%序列同一性、或至少95%序列同一性、或至少
97、98或99序列問一性的V λ序列。
[0212]該抗體或抗原結(jié)合區(qū)可包含與SEQ ID NO:51的CDR1、CDR2和CDR3或SEQ ID NO:88 的 CDR1、CDR2 和 CDR3 一致的重鏈 CDR 和與 SEQ ID NO:55 的 CDR1、CDR2 和 CDR3 一致的輕鏈CDR，同時(shí)在框架區(qū)中表現(xiàn)出氨基酸序列變化。
[0213]在一些示例性實(shí)施方案中，該抗體或抗原結(jié)合片段與人c-Met的SEMA結(jié)構(gòu)域中肽98-VDTYYDDQLISCGSVNRGTCQRHVFPHNHTADIQSEVHCIFSPQIEEPSQCPDCVVSALGAKVLSSVKDRFINFFVGNT INSSYFPDHPLHS I SVRRLKETK-199 (SEQ ID NO:181)中的表位結(jié)合。
[0214]在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，該抗體或其抗原結(jié)合片段可以是HGF介導(dǎo)人c-Met蛋白活化的嚴(yán)格拮抗劑并且還可以抑制非HGF依賴性的人c-Met蛋白活化，并且優(yōu)選地不誘導(dǎo)細(xì)胞表面人c-Met蛋白的顯著下調(diào)。
[0215]在一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體可包含人抗體(特別是人IgGl、IgG2、IgG3或IgG4)的CHl結(jié)構(gòu)域、鉸鏈區(qū)、CH2結(jié)構(gòu)域和CH3結(jié)構(gòu)域。 [0216]在另一實(shí)施方案中，提供了特異性地與人c-Met蛋白結(jié)合并且優(yōu)選為HGF介導(dǎo)c-Met受體活化的嚴(yán)格拮抗劑的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體是抗體36C4的人種系化變體，所述種系化變體抗體包含:
[0217](a)包含如SEQ ID NO:92所示的氨基酸序列的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，和包含如SEQ ID NO:93所示的氨基酸序列的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL);或者
[0218](b)包含如SEQ ID NO:94所示的氨基酸序列的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，和包含如SEQ ID NO:95所示的氨基酸序列的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL);或者
[0219](C)包含如SEQ ID NO:96所示的氨基酸序列的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，和包含如SEQ ID NO:97所示的氨基酸序列的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL);或者
[0220](d)包含如SEQ ID NO:98所示的氨基酸序列的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，和包含如SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL);或者
[0221](e)包含如SEQ ID NO:88所示的氨基酸序列的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，和包含選自SEQ ID NO:156,SEQ ID NO: 157、SEQ ID NO: 158,SEQ ID NO: 159、SEQ ID NO: 160,SEQ IDNO: 161、SEQ ID NO: 162、SEQ ID NO:163和SEQ ID NO:164的氨基酸序列的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)。
[0222]這些變體36C4抗體或抗原結(jié)合區(qū)被鑒定為包含通過參照特定氨基酸序列而限定的VH結(jié)構(gòu)域與同樣通過參照特定氨基酸序列限定的VL結(jié)構(gòu)域(Vk)的組合。就所列舉各特定VH/VL組合而言，該定義應(yīng)視為包含由與所述VH氨基酸序列具有至少85 %、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%序列同一性的VH結(jié)構(gòu)域和與所述VL氨基酸序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%序列同一性的VL結(jié)構(gòu)域的組合形成的抗體或抗原結(jié)合區(qū)。在每種情況下，由與所述VH和VL氨基酸序列的序列同一性％限定的VH和VL結(jié)構(gòu)域可保留與存在于所述VH和VL氨基酸序列中的CDR序列一致的CDR序列，同時(shí)在框架區(qū)中表現(xiàn)出氨基酸序列變化。
[0223]在一些示例性實(shí)施方案中，該抗體或抗原結(jié)合片段與人c-Met的SEMA結(jié)構(gòu)域中肽98-VDTYYDDQLISCGSVNRGTCQRHVFPHNHTADIQSEVHCIFSPQIEEPSQCPDCVVSALGAKVLSSVKDRFINFFVGNT INSSYFPDHPLHS I SVRRLKETK-199 (SEQ ID NO:181)中的表位結(jié)合。
[0224]在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，該抗體或其抗原結(jié)合片段可以是HGF介導(dǎo)人c-Met蛋白活化的嚴(yán)格拮抗劑并且還可以抑制非HGF依賴性的人c-Met蛋白活化，并且優(yōu)選地不誘導(dǎo)細(xì)胞表面人c-Met蛋白的顯著下調(diào)。
[0225]在一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體可包含人抗體(特別是人IgGl、IgG2、IgG3或IgG4)的CHl結(jié)構(gòu)域、鉸鏈區(qū)、CH2結(jié)構(gòu)域和CH3結(jié)構(gòu)域。
[0226]在又一實(shí)施方案中，提供了分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其特異性地與人C-Met蛋白結(jié)合并且優(yōu)選為HGF介導(dǎo)c-Met受體活化的嚴(yán)格拮抗劑，所述抗體是36C4Q的親和變體，所述親和變體包含:包含如SEQ ID NO:88所示的氨基酸序列的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，和包含選自 ID NO:156,SEQ ID NO: 157,SEQ ID NO: 158,SEQ ID NO:159、SEQ ID NO SEQ:
160、SEQ ID NO:16U SEQ ID NO:162, SEQ ID NO:163 和 SEQ ID NO:164 的氨基酸序列的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)。
[0227]在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，該抗體或其抗原結(jié)合片段可以是HGF介導(dǎo)人c-Met蛋白活化的嚴(yán)格拮抗劑并且還可以抑制非HGF依賴性的人c-Met蛋白活化，并且優(yōu)選地不誘導(dǎo)細(xì)胞表面人c-Met蛋白的顯著下調(diào)。
[0228]在一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體可包含人抗體(特別是人IgGl、IgG2、IgG3或IgG4)的CHl結(jié)構(gòu)域、鉸鏈區(qū)、CH2結(jié)構(gòu)域和CH3結(jié)構(gòu)域。
[0229]在另一實(shí)施方案中，提供了分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合人c-Met蛋白，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含與如SEQ ID NO:48所示的序列具有至少85%序列同一性、或至少90%序列同一性、或至少95%序列同一性、或至少97%、98%或99 %序列同一性的VH序列。
[0230]在又一實(shí)施方案中，提供了分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合人c-Met蛋白，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含如SEQ ID NO:48所示的VH氨基酸序列。
[0231]在又一實(shí)施方案中，提供了分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合人c-Met蛋白，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含與如SEQ ID NO:54所示的序列具有至少80%序列同一性、或至少85%序`列同一性、或至少90%序列同一性、或至少95%序列同一性、或至少97%、98%或99%序列同一性的νλ序列。
[0232]在又一實(shí)施方案中，提供了分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合人c-Met蛋白，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含如SEQ ID Ν0:48所示的νλ氨基酸序列。
[0233]在又一實(shí)施方案中，提供了分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其與人C-Met蛋白特異性結(jié)合并且優(yōu)選為HGF介導(dǎo)c-Met受體活化的嚴(yán)格拮抗劑，所述抗體包含:包含如SEQID NO:48所示的氨基酸序列或其人源化變體或親和變體的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，和包含如SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列或其人源化變體或親和變體的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)。
[0234]在一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體可包含人抗體(特別是人IgGl、IgG2、IgG3或IgG4)的CHl結(jié)構(gòu)域、鉸鏈區(qū)、CH2結(jié)構(gòu)域和CH3結(jié)構(gòu)域。
[0235]48A2、38H10、40B8 及其奪體
[0236]在另一實(shí)施方案中，提供了分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其特異性地結(jié)合人c-Met蛋白，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含其中可變重鏈⑶R3序列是SEQ ID N0:15或SEQID NO:18或其序列變體的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)。
[0237]在所述抗體或其抗原結(jié)合片段的一個(gè)實(shí)施方案中，
[0238]可變重鏈CDR3序列是SEQ ID NO: 15或SEQ ID NO:18或其序列變體；[0239]可變重鏈CDR2序列是SEQ ID NO:XX3或其序列變體；以及
[0240]可變重鏈CDRl序列是SEQ ID NO:XX6或其序列變體，并且
[0241]其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)。
[0242]在所述抗體或其抗原結(jié)合片段的一個(gè)實(shí)施方案中，
[0243]可變重鏈CDR3序列是SEQ ID NO:15或其序列變體；
[0244]可變重鏈CDR2序列是SEQ ID NO:14或其序列變體或者SEQ ID NO:85或其序列變體；以及[0245]可變重鏈CDRl序列是SEQ ID NO:13或其序列變體，并且
[0246]其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)。
[0247]在所述抗體或其抗原結(jié)合片段的一個(gè)實(shí)施方案中，
[0248]可變重鏈CDR3序列是SEQ ID NO: 18或其序列變體；
[0249]可變重鏈CDR2序列是SEQ ID NO:17或其序列變體；以及
[0250]可變重鏈CDRl序列是SEQ ID NO:16或其序列變體，并且
[0251]其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)。
[0252]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段還包含輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，其中
[0253]可變輕鏈⑶R3序列是SEQ ID NO =YYl或其序列變體；
[0254]可變輕鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:YY3或其序列變體；以及
[0255]可變輕鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:ΥΥ5或其序列變體，并且
[0256]其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)。
[0257]在所述抗體或其抗原結(jié)合片段的一個(gè)實(shí)施方案中，
[0258]可變輕鏈CDR3序列選自SEQ ID NO:87或其序列變體、SEQ ID NO:139或其序列變體和SEQ ID NO:141或其序列變體；
[0259]可變輕鏈CDR2序列是SEQ ID NO:23或其序列變體或者SEQ ID NO:26或其序列變體；以及
[0260]可變輕鏈CDRl序列選自SEQ ID NO:86或其序列變體、SEQ ID NO:137或其序列變體、SEQ ID NO:138或其序列變體、SEQ ID NO:140或其序列變體、SEQ ID NO:142或其序列變體和SEQ ID NO:143或其序列變體，并且
[0261]其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)。
[0262]在所述抗體或其抗原結(jié)合片段的一個(gè)實(shí)施方案中，
[0263]可變輕鏈CDR3序列是SEQ ID NO:24或其序列變體；
[0264]可變輕鏈CDR2序列是SEQ ID NO:23或其序列變體；以及
[0265]可變輕鏈CDRl序列是SEQ ID NO:22或其序列變體，并且
[0266]其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)。[0267]在所述抗體或其抗原結(jié)合片段的一個(gè)實(shí)施方案中，
[0268]可變輕鏈CDR3序列是SEQ ID NO:27或其序列變體；
[0269]可變輕鏈CDR2序列是SEQ ID NO:26或其序列變體；以及
[0270]可變輕鏈CDRl序列是SEQ ID NO:25或其序列變體，并且
[0271]其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)。
[0272]在又一實(shí)施方案中，提供了分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合人c-Met蛋白，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，其中:
[0273]可變重鏈CDR3序列是SEQ ID NO:15或其序列變體；
[0274]可變重鏈⑶R2序列是SEQ ID NO: 14或其序列變體；以及
[0275]可變重鏈CDRl序列是SEQ ID NO:13或其序列變體，
[0276]可變輕鏈CDR3序列是SEQ ID NO:87或其序列變體；
[0277]可變輕鏈CDR2序列是SEQ ID NO:23或其序列變體；以及
[0278]可變輕鏈CDRl序列是SEQ ID NO:86或其序列變體，并且
[0279]其中所述序列變體在所 示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)。
[0280]在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，該抗體或其抗原結(jié)合片段與人c-Met蛋白的PS1-1PTl區(qū)中肽 523-rseeclsgtwtqqiclpaiykvfpnsapleggtrlticgwdfgfrrnnkfdlkktrvllgnesctltlSESTMNTLKCTVGPAMNKHFNMSIIISNGHGTTQYSTFSYVDP-633 (SEQ ID NO:136)中的表位結(jié)合。
[0281]在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，該抗體或其抗原結(jié)合片段可以是HGF介導(dǎo)人c-Met蛋白活化的嚴(yán)格拮抗劑并且還可以抑制非HGF依賴性的人c-Met蛋白活化，并且優(yōu)選地不誘導(dǎo)細(xì)胞表面人c-Met蛋白的顯著下調(diào)。
[0282]在一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體可包含人抗體(特別是人IgGl、IgG2、IgG3或IgG4)的CHl結(jié)構(gòu)域、鉸鏈區(qū)、CH2結(jié)構(gòu)域和CH3結(jié)構(gòu)域。
[0283]在另一實(shí)施方案中，提供了分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合人c-Met蛋白，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，其中:
[0284]可變重鏈CDR3序列是SEQ ID NO:15或其序列變體；
[0285]可變重鏈⑶R2序列是SEQ ID NO: 14或其序列變體；以及
[0286]可變重鏈CDRl序列是SEQ ID NO:13或其序列變體；
[0287]所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含選自以下的⑶R的組合:
[0288]⑴可變輕鏈CDR3序列是SEQ ID NO:24或其序列變體；
[0289]可變輕鏈CDR2序列是SEQ ID NO:23或其序列變體；以及
[0290]可變輕鏈CDRl序列是SEQ ID NO:22或其序列變體，并且
[0291]其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)。
[0292](ii)可變輕鏈CDR3序列是SEQ ID NO:87或其序列變體；
[0293]可變輕鏈CDR2序列是SEQ ID NO:26或其序列變體；以及[0294]可變輕鏈CDRl序列是SEQ ID NO:137或其序列變體，并且
[0295]其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)。
[0296](iii)可變輕鏈CDR3序列是SEQ ID NO:139或其序列變體；
[0297]可變輕鏈CDR2序列是SEQ ID NO:26或其序列變體；以及
[0298]可變輕鏈CDRl序列是SEQ ID NO:138或其序列變體，并且
[0299]其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)。
[0300](iv)可變輕鏈CDR3序列是SEQ ID NO:141或其序列變體；
[0301]可變輕鏈CDR2序列是SEQ ID NO:26或其序列變體；以及
[0302]可變輕鏈CDRl序列是SEQ ID NO:140或其序列變體，并且
[0303]其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)。
[0304](V)可變輕鏈CDR3序列是SEQ ID NO:141或其序列變體；
[0305]可變輕鏈CDR2序列是SEQ ID NO:26或其序列變體；以及
[0306]可變輕鏈CDRl序列是SEQ ID NO:142或其序列變體，并且
[0307]其中所述序列變體在所`示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)。
[0308](vi)可變輕鏈CDR3序列是SEQ ID NO:87或其序列變體；
[0309]可變輕鏈CDR2序列是SEQ ID NO:26或其序列變體；以及
[0310]可變輕鏈CDRl序列是SEQ ID NO:86或其序列變體，并且
[0311]其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)。
[0312](vii)可變輕鏈CDR3序列是SEQ ID NO:87或其序列變體；
[0313]可變輕鏈CDR2序列是SEQ ID NO:26或其序列變體；以及
[0314]可變輕鏈CDRl序列是SEQ ID NO:143或其序列變體，并且
[0315]其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)。
[0316]在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，該抗體或其抗原結(jié)合片段與人c-Met蛋白的PS1-1PTl
區(qū)中肽 523-rseeclsgtwtqqiclpaiykvfpnsapleggtrlticgwdfgfrrnnkfdlkktrvllgnesctltlSESTMNTLKCTVGPAMNKHFNMSI 11SNGHGTTQYSTFSYVDP-633 (SEQ ID NO:136)中的表位結(jié)合。
[0317]在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，該抗體或其抗原結(jié)合片段可以是HGF介導(dǎo)人c-Met蛋白活化的嚴(yán)格拮抗劑并且還可以抑制非HGF依賴性的人c-Met蛋白活化，并且優(yōu)選地不誘導(dǎo)細(xì)胞表面人c-Met蛋白的顯著下調(diào)。
[0318]在一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體可包含人抗體(特別是人IgGl、IgG2、IgG3或IgG4)的CHl結(jié)構(gòu)域、鉸鏈區(qū)、CH2結(jié)構(gòu)域和CH3結(jié)構(gòu)域。
[0319]在另一實(shí)施方案中，提供了分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合人c-Met蛋白，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域:[0320]可變重鏈CDR3序列是SEQ ID NO: 18或其序列變體；
[0321]可變重鏈CDR2序列是SEQ ID NO:17或其序列變體；以及
[0322]可變重鏈CDRl序列是SEQ ID NO:16或其序列變體，
[0323]可變輕鏈CDR3序列是SEQ ID NO:27或其序列變體；
[0324]可變輕鏈CDR2序列是SEQ ID NO:26或其序列變體；以及
[0325]可變輕鏈CDRl序列是SEQ ID NO:25或其序列變體，并且
[0326]其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)。
[0327]在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，該抗體或其抗原結(jié)合片段與人c-Met蛋白的PS1-1PT1
區(qū)中肽 523-rseeclsgtwtqqiclpaiykvfpnsapleggtrlticgwdfgfrrnnkfdlkktrvllgnesctltlSESTMNTLKCTVGPAMNKHFNMSI 11SNGHGTTQYSTFSYVDP-633 (SEQ ID NO:136)中的表位結(jié)合。
[0328]在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，該抗體或其抗原結(jié)合片段可以是HGF介導(dǎo)人c-Met蛋白活化的嚴(yán)格拮抗劑并且還可以抑制非HGF依賴性的人c-Met蛋白活化，并且優(yōu)選地不誘導(dǎo)細(xì)胞表面人c-Met蛋白的顯著下調(diào)。
[0329]在一個(gè)實(shí)施 方案中，該抗體可包含人抗體(特別是人IgGl、IgG2、IgG3或IgG4)的CHl結(jié)構(gòu)域、鉸鏈區(qū)、CH2結(jié)構(gòu)域和CH3結(jié)構(gòu)域。
[0330]在另一實(shí)施方案中，提供了分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合人c-Met蛋白，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含與選自SEQ ID NO:49、108、110、112、114、116、118和120的氨基酸序列具有至少85%序列同一性、或至少90%序列同一性、或至少95%序列同一性、或至少97%、98%或99%序列同一性的VH序列。
[0331]在又一實(shí)施方案中，提供了分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗原或抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合人c-Met蛋白，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含選自SEQ ID NO:49、108、110、112、114、116、118和120的VH氨基酸序列。
[0332]在又一實(shí)施方案中，提供了分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合人c-Met蛋白，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含與選自SEQ ID NO:52、89、109、111、113、115、117、119、121、149、150、151、152、153、154、155、156 和 157 的氨基酸序列具有至少 75%序列同一性、或至少80%序列同一性、或至少85%序列同一性、或至少90%序列同一性、或至少95%序列同一性、或至少97%、98%或99%序列同一性的Vk序列。
[0333]在又一實(shí)施方案中，提供了分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合人c-Met蛋白，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含選自SEQ ID NO:52、89、109、111、113、115、117、119、121、149、150、151、152、153、154、155、156 和 157 的 VL 氨基酸序列。
[0334]在又一實(shí)施方案中，提供了分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合人c-Met蛋白，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含與選自SEQ ID NO:49、108、110、112、114、116,118和120的氨基酸序列具有至少85%序列同一性、或至少90%序列同一性、或至少95 %序列同一性、或至少97 %、98 %或99 %序列同一性的VH序列，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含與選自 SEQ ID NO:52、89、109、111、113、115、117、119、121、149、150、151、152、153、154、155,156和157的氨基酸序列具有至少75%序列同一性、或至少80%序列同一性、或至少85%序列同一性、或至少90%序列同一性、或至少95%序列同一性、或至少97%、98%或99%序列同一性的Vk序列。
[0335]在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段與人C-Met蛋白的PS1-1PTl 區(qū)中肽 523-rseeclsgtwtqqiclpaiykvfpnsapleggtrlticgwdfgfrrnnkfdlkktrvllgNESCTLTLSESTMNTLKCTVGPAMNKHFNMSI11SNGHGTTQYSTFSYVDP-633 (SEQ ID NO:136)中的表位結(jié)合。
[0336]在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，該抗體或其抗原結(jié)合片段可以是HGF介導(dǎo)人c-Met蛋白活化的嚴(yán)格拮抗劑并且還可以抑制非HGF依賴性的人c-Met蛋白活化，并且優(yōu)選地不誘導(dǎo)細(xì)胞表面人c-Met蛋白的顯著下調(diào)。
[0337]在一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體可包含人抗體(特別是人IgGl、IgG2、IgG3或IgG4)的CHl結(jié)構(gòu)域、鉸鏈區(qū)、CH2結(jié)構(gòu)域和CH3結(jié)構(gòu)域。
[0338]在另一實(shí)施方案中，提供了分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合人c-Met蛋白，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含與SEQ ID NO:49具有至少85%序列同一性、或至少90 %序列同一性、或至少95 %序列同一性、或至少97 %、98 %或99 %序列同一性的VH序列，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)包含與如SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列或如SEQ ID NO:89所示的氨基酸序列具有至少75%序列同一性、或至少80%序列同一性、或至少85 %序列同一性、或至少90 %序列同一性、或至少95 %序列同一性、或至少97 %、98 %或99%序列同一性的Vk序列。
[0339]所述抗體或抗原結(jié)合區(qū)可包含與SEQ ID NO:49的CDR1、CDR2和CDR3相同的重鏈CDR和與 SEQ ID NO:89 的 CDR1、CDR2 和 CDR3 或 SEQ ID NO:52 的 CDR1、CDR2 和 CDR3 相同的輕鏈CDR，同時(shí)在框架區(qū)表現(xiàn)出氨基酸序列變化。
[0340]在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，該抗體或其抗原結(jié)合片段與人c-Met蛋白的PS1-1PTl區(qū)中肽 523-RSEECLSGTWTQQICLPAIYKVFPNSAPLEGGTRLTICGWDFGFRRNNKFDLKKTRVLLGNESCTLTLSESTMNTLKCTVGPAMNKHFNMSIIISNGHGTTQYSTFSYVDP-633 (SEQ IDNO:136)中的表位結(jié)合。
[0341]在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，該抗體或其抗原結(jié)合片段可以是HGF介導(dǎo)人c-Met蛋白活化的嚴(yán)格拮抗劑并且還可以抑制非HGF依賴性的人c-Met蛋白活化，并且優(yōu)選地不誘導(dǎo)細(xì)胞表面人c-Met蛋白的顯著下調(diào)。
[0342]在一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體可包含人抗體(特別是人IgGl、IgG2、IgG3或IgG4)的CHl結(jié)構(gòu)域、鉸鏈區(qū)、CH2結(jié)構(gòu)域和CH3結(jié)構(gòu)域。
[0343]在另一實(shí)施方案中，提供了分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其特異性地與人C-Met蛋白結(jié)合并且優(yōu)選為HGF介導(dǎo)c-Met受體活化的嚴(yán)格拮抗劑，所述抗體包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)包含如SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列或其人源化變體或親和變體，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)包含如SEQ ID N0:52所示的氨基酸序列或如SEQ ID NO:89所示的氨基酸序列或其人源化變體或親和變體。
[0344]在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，該抗體或其抗原結(jié)合片段與人c-Met蛋白的PS1-1PTl區(qū)中肽 523-rseeclsgtwtqqiclpaiykvfpnsapleggtrlticgwdfgfrrnnkfdlkktrvllgnesctltlSESTMNTLKCTVGPAMNKHFNMSI 11SNGHGTTQYSTFSYVDP-633 (SEQ ID NO:136)中的表位結(jié)合。
[0345]在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，該抗體或其抗原結(jié)合片段可以是HGF介導(dǎo)人c-Met蛋白活化的嚴(yán)格拮抗劑并且還可以抑制非HGF依賴性的人c-Met蛋白活化，并且優(yōu)選地不誘導(dǎo)細(xì)胞表面人c-Met蛋白的顯著下調(diào)。
[0346]在一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體可包含人抗體(特別是人IgGl、IgG2、IgG3或IgG4)的CHl結(jié)構(gòu)域、鉸鏈區(qū)、CH2結(jié)構(gòu)域和CH3結(jié)構(gòu)域。
[0347]在另一實(shí)施方案中，提供了與人C-Met蛋白特異性結(jié)合的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)包含如SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列或其人源化變體或親和變體，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)包含如SEQ ID NO:89所示的氨基酸序列或其人源化變體或親和變體。
[0348]在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，該抗體或其抗原結(jié)合片段與人c-Met蛋白的PS1-1PTl
區(qū)中肽 523-rseeclsgtwtqqiclpaiykvfpnsapleggtrlticgwdfgfrrnnkfdlkktrvllgnesctltlSESTMNTLKCTVGPAMNKHFNMSI 11SNGHGTTQYSTFSYVDP-633 (SEQ ID NO:136)中的表位結(jié)合。
[0349]在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，該抗體或其抗原結(jié)合片段可以是HGF介導(dǎo)人c-Met蛋白活化的嚴(yán)格拮抗劑并且還可以抑制非HGF依賴性的人c-Met蛋白活化，并且優(yōu)選地不誘導(dǎo)細(xì)胞表面人c-Met蛋白的顯著下調(diào)。
[0350]在一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體可包含人抗體(特別是人IgGl、IgG2、IgG3或IgG4)的CHl結(jié)構(gòu)域、鉸鏈區(qū)、CH2結(jié)構(gòu)域和CH3結(jié)構(gòu)域。
`[0351]在又一實(shí)施方案中，提供了分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其特異性地與人C-Met蛋白結(jié)合并且優(yōu)選為HGF介導(dǎo)c-Met受體活化的嚴(yán)格拮抗劑，所述抗體是抗體48A2的人種系化變體，所述種系化變體抗體包含:
[0352](a)包含如SEQ ID NO:108所示的氨基酸序列的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，和包含如SEQ ID NO:109所示的氨基酸序列的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL);或者
[0353](b)包含如SEQ ID NO:110所示的氨基酸序列的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，和包含如SEQ ID NO:111所示的氨基酸序列的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL);或者
[0354](c)包含如SEQ ID NO:112所示的氨基酸序列的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，和包含如SEQ ID NO:113所示的氨基酸序列的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL);或者
[0355](d)包含如SEQ ID NO:114所示的氨基酸序列的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，和包含如SEQ ID NO:115所示的氨基酸序列的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL);或者
[0356](e)包含如SEQ ID NO:116所示的氨基酸序列的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，和包含如SEQ ID NO:117所示的氨基酸序列的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL);或者
[0357](f)包含如SEQ ID NO:118所示的氨基酸序列的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，和包含如SEQ ID NO:119所示的氨基酸序列的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL);或者
[0358](g)包含如SEQ ID NO:120所示的氨基酸序列的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，和包含如SEQ ID NO:121所示的氨基酸序列的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL);或者
[0359](h)包含如SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，和包含選自SEQ ID NO:149,SEQ ID NO: 150、SEQ ID NO: 151,SEQ ID NO: 152、SEQ ID NO: 153,SEQ IDNO:154,SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:156和SEQ ID NO:157氨基酸序列的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)。
[0360]這些變體48A2抗體或抗原結(jié)合區(qū)被鑒定為包含通過參照特定氨基酸序列而限定的VH結(jié)構(gòu)域與同樣通過參照特定氨基酸序列而限定的VL結(jié)構(gòu)域(Vk)的組合。對于所列舉的各特定VH/VL組合，該定義應(yīng)視為包含由與所述VH氨基酸序列具有至少85%、至少90 %、至少95 %、至少97 %或至少99 %序列同一性的VH結(jié)構(gòu)域和與所述VL氨基酸序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%序列同一性的VL結(jié)構(gòu)域的組合形成的抗體或抗原結(jié)合區(qū)。在每種情況下，由與所述VH和VL氨基酸序列的序列同一性％限定的VH和VL結(jié)構(gòu)域可保留與存在于所述VH和VL氨基酸序列中的CDR序列一致的CDR序列，同時(shí)在框架區(qū)中表現(xiàn)出氨基酸序列變化。
[0361]在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，該抗體或其抗原結(jié)合片段與人c-Met蛋白的PS1-1PTl
區(qū)中肽 523-rseeclsgtwtqqiclpaiykvfpnsapleggtrlticgwdfgfrrnnkfdlkktrvllgnesctltlSESTMNTLKCTVGPAMNKHFNMSI 11SNGHGTTQYSTFSYVDP-633 (SEQ ID NO:136)中的表位結(jié)合。
[0362]在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，該抗體或其抗原結(jié)合片段可以是HGF介導(dǎo)人c-Met蛋白活化的嚴(yán)格拮抗劑并且還可以抑制非HGF依賴性的人c-Met蛋白活化，并且優(yōu)選地不誘導(dǎo)細(xì)胞表面人c-Met蛋白的顯著下調(diào)。
[0363]在一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體可包含人抗體(特別是人IgGl、IgG2、IgG3或IgG4)的CHl結(jié)構(gòu)域、鉸鏈區(qū)、CH2結(jié)構(gòu)域和CH3結(jié)構(gòu)域。
[0364]在另一實(shí)施方案中，提供了分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其特異性地與人C-Met蛋白結(jié)合并且優(yōu)選為HGF介導(dǎo)c-Met受體活化的嚴(yán)格拮抗劑，所述抗體是參照抗體48A2的親和變體，所述親和變體抗體包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)，其中所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)包含如SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)包含選自 SEQ ID NO:149, SEQ ID NO:150、SEQ ID NO:151、SEQ ID NO:152、SEQ ID NO:153、SEQ ID NO: 154、SEQ ID NO: 155、SEQ ID NO:156 和 SEQ ID NO: 157 的氨基酸序列。
[0365]在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，該抗體或其抗原結(jié)合片段可以是HGF介導(dǎo)人c-Met蛋白活化的嚴(yán)格拮抗劑并且還可以抑制非HGF依賴性的人c-Met蛋白活化，并且優(yōu)選地不誘導(dǎo)細(xì)胞表面人c-Met蛋白的顯著下調(diào)。
[0366]在一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體可包含人抗體(特別是人IgGl、IgG2、IgG3或IgG4)的CHl結(jié)構(gòu)域、鉸鏈區(qū)、CH2結(jié)構(gòu)域和CH3結(jié)構(gòu)域。
[0367]在另一實(shí)施方案中，提供了分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其特異性地與人C-Met蛋白結(jié)合并且優(yōu)選為HGF介導(dǎo)c-Met受體活化的嚴(yán)格拮抗劑，所述變體抗體包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)，其中所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)包含如SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列或其人源化變體或親和變體，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)包含如SEQ IDNO:53所示的氨基酸序列或其人源化變體或親和變體。
[0368]在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，該抗體或其抗原結(jié)合片段可以是HGF介導(dǎo)人c-Met蛋白活化的嚴(yán)格拮抗劑并且還可以抑制非HGF依賴性的人c-Met蛋白活化，并且優(yōu)選地不誘導(dǎo)細(xì)胞表面人c-Met蛋白的顯著下調(diào)。
[0369]在一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體可包含人抗體(特別是人IgGl、IgG2、IgG3或IgG4)的CHl結(jié)構(gòu)域、鉸鏈區(qū)、CH2結(jié)構(gòu)域和CH3結(jié)構(gòu)域。[0370]20A11、13E6、12G4
[0371]在另一實(shí)施方案中，提供了特異性地與人C-Met蛋白結(jié)合的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含其中可變重鏈CDR3序列選自SEQ ID NO:3、SEQ IDNO:6或SEQ ID NO:9或其序列變體的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)。
[0372]在所述抗體或其抗原結(jié)合片段的一個(gè)實(shí)施方案中，
[0373]可變重鏈CDR3序列選自SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:9或其序列變體；
[0374]可變重鏈CDR2序列是SEQ ID NO =XXl或其序列變體；以及
[0375]可變重鏈CDRl序列是SEQ ID NO:XX4或其序列變體，并且
[0376]其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)。
[0377]在所述抗體或其抗原結(jié)合片段的一個(gè)實(shí)施方案中，
[0378]可變重鏈CDR3序列是SEQ ID NO:3或其序列變體；
[0379]可變重鏈CDR2序列是SEQ ID NO:2或其序列變體；以及
[0380]可變重鏈CDRl序列是SEQ ID NO:1或其序列變體，并且
[0381]其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)。`
[0382]在所述抗體或其抗原結(jié)合片段的一個(gè)實(shí)施方案中，
[0383]可變重鏈CDR3序列是SEQ ID NO:6或其序列變體；
[0384]可變重鏈CDR2序列是SEQ ID NO:5或其序列變體；以及
[0385]可變重鏈CDRl序列是SEQ ID NO:4或其序列變體，并且
[0386]其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)。
[0387]在所述抗體或其抗原結(jié)合片段的一個(gè)實(shí)施方案中，
[0388]可變重鏈CDR3序列是SEQ ID NO:9或其序列變體；
[0389]可變重鏈CDR2序列是SEQ ID NO:8或其序列變體；以及
[0390]可變重鏈CDRl序列是SEQ ID NO:7或其序列變體，并且
[0391]其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)。
[0392]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段還包含輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，其中:
[0393]可變輕鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:YY2或其序列變體；
[0394]可變輕鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:ΥΥ4或其序列變體；以及
[0395]可變輕鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:ΥΥ6或其序列變體，并且
[0396]其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)。
[0397]在所述抗體或其抗原結(jié)合片段的一個(gè)實(shí)施方案中，
[0398]可變輕鏈CDR3序列是SEQ ID NO:36或其序列變體；
[0399]可變輕鏈CDR2序列是SEQ ID NO:35或其序列變體；以及[0400]可變輕鏈CDRl序列是SEQ ID NO:34或其序列變體，并且
[0401]其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)。
[0402]在所述抗體或其抗原結(jié)合片段的一個(gè)實(shí)施方案中，
[0403]可變輕鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:39或其序列變體； [0404]可變輕鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:38或其序列變體；以及
[0405]可變輕鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:37或其序列變體，并且
[0406]其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)。
[0407]在所述抗體或其抗原結(jié)合片段的一個(gè)實(shí)施方案中，
[0408]可變輕鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:42或其序列變體；
[0409]可變輕鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:41或其序列變體；以及
[0410]可變輕鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:40或其序列變體，并且
[0411]其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)。
[0412]在另一實(shí)施方案中，提供了分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合人c-Met蛋白，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，其中:
[0413]可變重鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:9或其序列變體；
[0414]可變重鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:8或其序列變體；以及
[0415]可變重鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:7或其序列變體，
[0416]可變輕鏈CDR3序列是SEQ ID NO:42或其序列變體；
[0417]可變輕鏈CDR2序列是SEQ ID NO:41或其序列變體；以及
[0418]可變輕鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:40或其序列變體，并且
[0419]其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)。
[0420]在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，該抗體或其抗原結(jié)合抗體可以是HGF介導(dǎo)人c-Met蛋白活化的嚴(yán)格拮抗劑并且還可以抑制非HGF依賴性的人c-Met蛋白活化，并且優(yōu)選地不誘導(dǎo)細(xì)胞表面人c-Met蛋白的顯著下調(diào)。
[0421]在一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體可包含人抗體(特別是人IgGl、IgG2、IgG3或IgG4)的CHl結(jié)構(gòu)域、鉸鏈區(qū)、CH2結(jié)構(gòu)域和CH3結(jié)構(gòu)域。
[0422]在另一實(shí)施方案中，提供了分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合人c-Met蛋白，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，其中:
[0423]可變重鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:6或其序列變體；
[0424]可變重鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:5或其序列變體；以及
[0425]可變重鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:4或其序列變體，
[0426]可變輕鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:39或其序列變體；
[0427]可變輕鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:38或其序列變體；以及[0428]可變輕鏈CDRl序列是SEQ ID NO:37或其序列變體，并且
[0429]其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)。
[0430]在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，該抗體或其抗原結(jié)合抗體可以是HGF介導(dǎo)人c-Met蛋白活化的嚴(yán)格拮抗劑并且還可以抑制非HGF依賴性的人c-Met蛋白活化，并且優(yōu)選地不誘導(dǎo)細(xì)胞表面人c-Met蛋白的顯著下調(diào)。
[0431]在一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體可包含人抗體(特別是人IgGl、IgG2、IgG3或IgG4)的CHl結(jié)構(gòu)域、鉸鏈區(qū)、CH2結(jié)構(gòu)域和CH3結(jié)構(gòu)域。
[0432]在另一實(shí)施方案中，提供了分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合人c-Met蛋白，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，其中:
[0433]可變重鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:3或其序列變體；
[0434]可變重鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:2或其序列變體；以及
[0435]可變重鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:1或其序列變體，
[0436]可變輕鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:36或其序列變體；
[0437]可變輕鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:35或其序列變體；以及
[0438]可變輕鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:34或其序列變體，并且
[0439]其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)。
[0440]在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，該抗體或其抗原結(jié)合抗體可以是HGF介導(dǎo)人c-Met蛋白活化的嚴(yán)格拮抗劑并且還可以抑制非HGF依賴性的人c-Met蛋白活化，并且優(yōu)選地不誘導(dǎo)細(xì)胞表面人c-Met蛋白的顯著下調(diào)。
[0441]在一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體可包含人抗體(特別是人IgGl、IgG2、IgG3或IgG4)的CHl結(jié)構(gòu)域、鉸鏈區(qū)、CH2結(jié)構(gòu)域和CH3結(jié)構(gòu)域。
[0442]在另一實(shí)施方案中，提供了分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合人c-Met蛋白，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含與選自SEQ ID NO:45,46和47的氨基酸序列具有至少85%序列同一性、或至少90%序列同一性、或至少95%序列同一性、或至少97 %、98%或99%序列同一性的VH序列。
[0443]在又一實(shí)施方案中，提供了分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合人c-Met蛋白，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含選自SEQ ID N0:45、46和47的VH氨基酸序列。
[0444]在又一實(shí)施方案中，提供了分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合人c-Met蛋白，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈 可變結(jié)構(gòu)域，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含與選自SEQ ID NO:56,57和58的氨基酸序列具有至少80%序列同一性、或至少85%序列同一性、或至少90%序列同一性、或至少95%序列同一性、或至少97%、98%或99%序列同一性的V λ序列。
[0445]在又一實(shí)施方案中，提供了分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合人c-Met蛋白，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含選自SEQ ID NO:56,57和58的V λ氨基酸序列。
[0446]在又一實(shí)施方案中，提供了分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其特異性地與人C-Met蛋白結(jié)合并且優(yōu)選為HGF介導(dǎo)c-Met受體活化的嚴(yán)格拮抗劑，所述抗體包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)，其中所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)包含如SEQ ID NO:45所示的氨基酸序列或其人源化變體或親和變體，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)包含如SEQ ID NO:56所示的氨基酸序列或其人源化變體或親和變體。
[0447]在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，該抗體或其抗原結(jié)合抗體可以是HGF介導(dǎo)人c-Met蛋白活化的嚴(yán)格拮抗劑并且還可以抑制非HGF依賴性的人c-Met蛋白活化，并且優(yōu)選地不誘導(dǎo)細(xì)胞表面人c-Met蛋白的顯著下調(diào)。
[0448]在一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體可包含人抗體(特別是人IgGl、IgG2、IgG3或IgG4)的CHl結(jié)構(gòu)域、鉸鏈區(qū)、CH2結(jié)構(gòu)域和CH3結(jié)構(gòu)域。
[0449]在另一實(shí)施方案中，提供了分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其特異性地與人C-Met蛋白結(jié)合并且優(yōu)選為HGF介導(dǎo)c-Met受體活化的嚴(yán)格拮抗劑，所述抗體包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)，其中所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)包含如SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列或其人源化變體或親和變體，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)包含如SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列或其人源化變體或親和變體。
[0450]在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，該抗體或其抗原結(jié)合片段可以是HGF介導(dǎo)人c-Met蛋白活化的嚴(yán)格拮抗劑并且還可以抑制非HGF依賴性的人c-Met蛋白活化，并且優(yōu)選地不誘導(dǎo)細(xì)胞表面人c-Met蛋白的顯著下調(diào)。
[0451]在一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體可包含人抗體(特別是人IgGl、IgG2、IgG3或IgG4)的CHl結(jié)構(gòu)域、鉸鏈區(qū)、CH2結(jié)構(gòu)`域和CH3結(jié)構(gòu)域。
[0452]在另一實(shí)施方案中，提供了分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其特異性地與人C-Met蛋白結(jié)合并且是HGF介導(dǎo)c-Met受體活化的嚴(yán)格拮抗劑，所述抗體包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)，其中所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)包含如SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列或其人源化變體或親和變體，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)包含如SEQ ID NO:58所示的氨基酸序列或其人源化變體或親和變體。
[0453]在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，該抗體或其抗原結(jié)合片段可以是HGF介導(dǎo)人c-Met蛋白活化的嚴(yán)格拮抗劑并且還可以抑制非HGF依賴性的人c-Met蛋白活化，并且優(yōu)選地不誘導(dǎo)細(xì)胞表面人c-Met蛋白的顯著下調(diào)。
[0454]在一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體可包含人抗體(特別是人IgGl、IgG2、IgG3或IgG4)的CHl結(jié)構(gòu)域、鉸鏈區(qū)、CH2結(jié)構(gòu)域和CH3結(jié)構(gòu)域。
[0455]34H7
[0456]在另一實(shí)施方案中，提供了特異性地結(jié)合人C-Met蛋白的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含其中可變重鏈CDR3序列是SEQ ID NO:73或其序列變體的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)。
[0457]在所述抗體或抗原結(jié)合片段的一個(gè)實(shí)施方案中，
[0458]可變重鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:73或其序列變體；[0459]可變重鏈CDR2序列是SEQ ID NO:72或其序列變體；以及
[0460]可變重鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:71或其序列變體，并且
[0461]其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)。
[0462]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體或抗原結(jié)合片段還包含輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，其中
[0463]可變輕鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:76或其序列變體；
[0464]可變輕鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:75或其序列變體；以及
[0465]可變輕鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:74或其序列變體，并且
[0466]其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換(例如，保守替換、人源化替換或親和變體)。
[0467]在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，該抗體或其抗原結(jié)合片段(包括所有6個(gè)列舉的重鏈和輕鏈CDR)可以是HGF介導(dǎo)人c-Met蛋白活化的嚴(yán)格拮抗劑并且還可以抑制非HGF依賴性的人c-Met蛋白活化，并且優(yōu)選地不誘導(dǎo)細(xì)胞表面人c-Met蛋白的顯著下調(diào)。
[0468]在一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體可包含人抗體(特別是人IgGl、IgG2、IgG3或IgG)的CHl結(jié)構(gòu)域、鉸鏈區(qū)、CH2結(jié)構(gòu)域和CH3結(jié)構(gòu)域。
[0469]在另一實(shí)施方案中，提供了分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合人c-Met蛋白，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含與如SEQ ID NO:77所示的氨基酸序列具有至少85 %序列同一性、或至少90 %序列同一性、或至少95 %序列同一性、或至少97 %、98 %或99 %序列同一性的VH序列。
[0470]在又一實(shí)施方案中，提供了分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合人c-Met蛋白，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含如SEQ ID NO: 77所示的VH氨基酸序列。
[0471]在又一實(shí)施方案中，提供了分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合人c-Met蛋白，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含與如SEQ ID NO:78所示的氨基酸序列具有至少80%序列同一性、或至少85%序列同一性、或至少90%序列同一性、或至少95%序列同一性、或至少97%、98%或99%序列同一性的VA序列。
[0472]在又一實(shí)施方案中，提供了分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合人c-Met蛋白，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含如SEQ ID NO:78所示的VL氨基酸序列。
[0473]在又一實(shí)施方案中，提供了分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其特異性地與人C-Met蛋白結(jié)合并且優(yōu)選為HGF介導(dǎo)c-Met受體活化的嚴(yán)格拮抗劑，所述抗體包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)，其中所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)包含如SEQ ID NO:77所示的氨基酸序列或其人源化變體或親和變體，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)包含如SEQ ID NO:78所示的氨基酸序列或其人源化變體或親和變體。
[0474]在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段可以是HGF介導(dǎo)人c-Met蛋白活化的嚴(yán)格拮抗劑并且還可以抑制非HGF依賴性的人c-Met蛋白活化，并且優(yōu)選地不誘導(dǎo)細(xì)胞表面人c-Met蛋白的顯著下調(diào)。[0475]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體可包含人抗體(特別是人IgGl、IgG2、IgG3或IgG4)的CHl結(jié)構(gòu)域、鉸鏈區(qū)、CH2結(jié)構(gòu)域和CH3結(jié)構(gòu)域。
[0476]其中特定抗體或抗原結(jié)合區(qū)鑒定為包含通過參照特定氨基酸序列而限定的VH結(jié)構(gòu)域與同樣通過參照特定氨基酸序列限定的VL結(jié)構(gòu)域(Vk)的組合，于是就所列舉的各特定VH/VL組合而言(另有說明除外)，該定義可視為包含由與所述VH氨基酸序列具有至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%序列同一性的VH結(jié)構(gòu)域和與所述VL氨基酸序列具有至少75 %、至少80 %、至少85 %、至少90 %、至少95 %、至少97 %或至少99 %序列同一性的VL結(jié)構(gòu)域的組合形成的抗體或抗原結(jié)合區(qū)。在每種情況下，由與所述VH和VL氨基酸序列的序 列同一性％限定的VH和VL結(jié)構(gòu)域可保留與存在于所述VH和VL氨基酸序列中的CDR序列一致的CDR序列，同時(shí)在框架區(qū)中表現(xiàn)出氨基酸序列變化。
[0477]在本申請中，除非另有說明，否則兩條氨基酸序列之間的序列同一性％可通過比較以最佳方式比對的這兩條序列來確定，其中就這兩條序列之間的最佳比對而言，與參照序列相比，待比較的氨基酸序列可包含添加或缺失。通過以下來計(jì)算同一性百分比:確定兩條序列之間氨基酸殘基一致的一致位置的數(shù)目，用該一致位置的數(shù)目除以比較窗口中的位置的總數(shù)目，并將所得結(jié)果乘以100以得到這兩條序列之間的同一性百分比。例如，可以使用可得自站點(diǎn) http://www.ncb1.nlm.nih.gov/gorf/bl2.html 的 BLAST 程序，^BLAST-2序列，，(Tatusova 等， "Blast2sequences_a new tool for comparing protein andnucleotide sequences" , FEMS Microbiol Lett.174:247-250),所使用的參數(shù)為默認(rèn)給出的那些(特別是參數(shù)“開放空位罰分”:5，和“擴(kuò)展空位罰分”:2 ;所選擇的矩陣為例如由程序所提出的矩陣“BL0SUM62”)，通過該程序直接計(jì)算待比較的兩條序列之間的同一性百分比。
[0478]本文所提供的C-Met抗體或其抗原結(jié)合片段均可表現(xiàn)出下述特性/特征中的一個(gè)或更多個(gè)，或任意組合:
[0479]所述抗體或抗原結(jié)合片段可充當(dāng)非HGF依賴性c-Met受體活化的抑制劑。
[0480]所述抗體或抗原結(jié)合片段可抑制非HGF依賴性人c-Met蛋白的二聚作用，更具體地為同二聚作用和/或異二聚作用。
[0481]抗體可表現(xiàn)出選自以下的一個(gè)或更多個(gè)效應(yīng)子功能:針對細(xì)胞在細(xì)胞表面表達(dá)人c-Met蛋白的抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)、補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(CDC)和抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的吞噬作用(ADCP)。
[0482]抗體可表現(xiàn)出抗嗜c-Met癌細(xì)胞的ADCC。
[0483]與參照抗體相比，所述抗體可表現(xiàn)出增強(qiáng)的ADCC功能，所述參照抗體是包含天然人Fe結(jié)構(gòu)域的對應(yīng)抗體。在一個(gè)非限制性實(shí)施方案中，與包含天然人Fe結(jié)構(gòu)域的參照抗體相比，ADCC功能可增強(qiáng)至少10倍。此處的“對應(yīng)”可意為具有增強(qiáng)的ADCC功能的抗體顯示出與參照抗體基本一致的抗原結(jié)合特異性和/或共有一致的氨基酸序列，為了增強(qiáng)ADCC而進(jìn)行(相對于天然人Fe)的任何修飾除外。
[0484]所述抗體可包含人IgG(最優(yōu)選人IgGl)的鉸鏈區(qū)、CH2結(jié)構(gòu)域和CH3結(jié)構(gòu)域。
[0485]如在本文中其它地方所解釋的，所述抗體可包含F(xiàn)e區(qū)中的修飾。特別地，抗體可以是非巖藻糖基化IgG。
[0486]在其它方面中，本發(fā)明還提供了編碼在上文中列舉的C-Met抗體及其抗原結(jié)合片段的多核苷酸分子，以及包含所述多核苷酸的表達(dá)載體、包含所述載體的宿主細(xì)胞和C-Met抗體的重組表達(dá)/產(chǎn)生的方法。
[0487]在又一方面中，本發(fā)明提供了包含任一上述C-Met抗體和可藥用載體或賦形劑的藥物組合物。
[0488]本發(fā)明的又一方面涉及使用在上文中列舉的C-Met抗體進(jìn)行醫(yī)療的方法，特別是治療癌癥，包括HGF依賴的癌癥和非HGF依賴性的癌癥二者。
[0489]定義
[0490]“抗體”或“免疫球蛋白”-如本文所使用的，術(shù)語“免疫球蛋白”包括具有兩條重鏈與兩條輕鏈之組合的多肽，無論其是否具有任何相關(guān)特異性免疫反應(yīng)活性?！翱贵w”指對目的抗原(例如，人c-Met)具有顯著已知特異性免疫反應(yīng)活性的集合體。本文所使用的術(shù)語“c-Met抗體”指對人c-Met蛋白表現(xiàn)出免疫學(xué)特異性的抗體。如在本文中其它地方所解釋的，對人c-Met的“特異性”不排除與c-Met的物種同系物的交叉反應(yīng)?？贵w和免疫球蛋白包含輕鏈和重鏈，它們之間有或沒有鏈間共價(jià)鍵。對脊椎動(dòng)物系統(tǒng)中的基本免疫球蛋白結(jié)構(gòu)已有相對深入地認(rèn)識(shí)。
[0491]通用術(shù)語“免疫球蛋白”包括可在生物化學(xué)上區(qū)分的5類不同抗體。所有5類抗體均在本發(fā)明的范圍內(nèi)，下述討論將一般地涉及IgG類的免疫球蛋白分子。就IgG而言，免疫球蛋白包含分子量為約23，000道爾頓的兩條相同的輕多肽鏈和分子量為53，000至70，000的兩條相同的重鏈。四條鏈通過二硫鍵以“Y”構(gòu)型連接，其中輕鏈在“Y”的口處開始支托(bracket)重鏈,并且延續(xù)通過可變區(qū)。
[0492]抗體的輕鏈分為K或λ。各重鏈類別可能與K或λ輕鏈相關(guān)。一般而言，輕鏈和重鏈彼此共價(jià)結(jié)合，并且當(dāng)通過雜交瘤、B細(xì)胞或遺傳改造宿主細(xì)胞產(chǎn)生免疫球蛋白時(shí)，兩條重鏈的“尾巴”部分彼此 通過共價(jià)二硫鍵連接或非共價(jià)連接結(jié)合。在重鏈中，氨基酸序列從Y構(gòu)型叉狀端的N-末端到達(dá)各鏈底部的C-末端。本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解重鏈分為Y、μ、α、δ、ε ,其中有一些亞類(例如，Y I至Y 4)。該鏈的特性分別決定抗體如IgG、IgM、IgA IgG或IgE的“類別”。免疫球蛋白亞類(同種型)例如IgGU IgG2、IgG3、IgG4、IgAl等是良好表征的，并且已知賦予功能特化?？紤]到本公開內(nèi)容，這些類別和同種型中的每一種的經(jīng)修飾變體對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言易于辨別，并且因此在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
[0493]如上所述，抗體的可變區(qū)允許抗體選擇性地識(shí)別并特異性地結(jié)合抗原上的表位。即，抗體的VL結(jié)構(gòu)域與VH結(jié)構(gòu)域組合以形成限定三維抗原結(jié)合位點(diǎn)的可變區(qū)。該四級抗體結(jié)構(gòu)形成存在于Y各臂末端的抗原結(jié)合位點(diǎn)。更特別地，抗原結(jié)合位點(diǎn)由VH和VL鏈中每一者上的三個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)來限定(⑶幻。
[0494]“c-Met蛋白”或“c_Met受體”-如本文所使用的，術(shù)語“c_Met蛋白”或“c_Met受體”或“c-Met”可互換使用，并且指以其野生型形式結(jié)合肝細(xì)胞生長因子(HGF)的受體酪氨酸激酶。術(shù)語“人c-Met蛋白”或“人c-Met受體”或“人可互換使用以指人c_Met，包括天然地表達(dá)于人宿主中和/或人培養(yǎng)細(xì)胞系表面上的天然人c-Met蛋白及其重組形式和片段，以及天然突變體形式、多態(tài)變體和功能性活化突變體形式。人c-Met的特定實(shí)例包括例如，由GenBank Acc N0.NM_000245中提供的核苷酸序列編碼的人多肽或由GenBankAcc.N0.NP_000236中提供的多肽序列編碼的人蛋白，或其胞外結(jié)構(gòu)域。單鏈前體c-Met蛋白在翻譯后切割產(chǎn)生α亞基和β亞基，它們通過二硫鍵連接形成成熟受體。本文所提供的c-Met抗體通常與如在細(xì)胞表面(例如在人胃細(xì)胞系MKN-45上)上表達(dá)的成熟人c-Met蛋白和重組人c-Met蛋白(例如，可獲自R&D系統(tǒng)、358-MT/CF的重組二聚c_Met) 二者結(jié)
入
口 ο
[0495]“結(jié)合位點(diǎn)”-如本文所使用的，術(shù)語“結(jié)合位點(diǎn)”包含負(fù)責(zé)選擇性地結(jié)合靶目的抗原(例如，人c-Met)的多肽區(qū)。結(jié)合結(jié)構(gòu)域或結(jié)合區(qū)包含至少一個(gè)結(jié)合位點(diǎn)。示例性結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括抗體可變結(jié)構(gòu)域。本發(fā)明的抗體分子可包含單抗原結(jié)合位點(diǎn)或多(例如，二、三或四)抗原結(jié)合位點(diǎn)。
[0496]“來源于(derived from) ” -如本文所使用的，術(shù)語“來源于”指定蛋白質(zhì)(例如，c-Met抗體或其抗原結(jié)合片段)表示多肽的來源。在一個(gè)實(shí)施方案中，來源于特定起始多肽的多肽或氨基酸序列是CDR序列或與其相關(guān)序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，來源于特定起始多肽的氨基酸序列是不連續(xù)的。例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)或六個(gè)CDR來自起始抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，來源于特定起始多肽或氨基酸序列的多肽或氨基酸序列具有與起始序列基本一致的氨基酸序列，或者其一部分，其中所述一部分由至少3至5個(gè)氨基酸、5至10個(gè)氨基酸、至少10至20個(gè)氨基、至少20至30個(gè)氨基酸或至少30至50個(gè)氨基酸組成，或者其對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員而言可鑒定為其在起始序列中具有其來源。在一個(gè)實(shí)施方案中，改變來自起始抗體的一個(gè)或更多個(gè)CDR序列以產(chǎn)生變體CDR序列，例如親和變體，其中所述變體CDR序列保持c-Met結(jié)合活性。
[0497]“駱駝科動(dòng)物來源的(Camelid-derived)”-在某些優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的c-Met抗體分子包含通過用c-Met抗原主動(dòng)免疫駱駝科動(dòng)物而產(chǎn)生的來自駱駝科動(dòng)物常規(guī)抗體的框架氨基酸序列和/或CDR氨基酸序列。但是，可以將包含駱駝科動(dòng)物來源的氨基酸序列的c-Met抗體改造為包含來自人氨基酸序列或其它非駱駝科動(dòng)物哺乳動(dòng)物物種的框架和/或恒定區(qū)序列。例如，人 或非人靈長類框架區(qū)、重鏈部分和/或鉸鏈部分可包含于對象c-Met抗體中。在一個(gè)實(shí)施方案中，一個(gè)或更多個(gè)非駱駝科動(dòng)物氨基酸可存在于“駱駝科動(dòng)物來源的” c-Met抗體的框架區(qū)，例如，駱駝科動(dòng)物框架氨基酸序列可包含一個(gè)或更多個(gè)氨基酸突變，其中存在相應(yīng)的人或非人靈長類氨基酸殘基。此外，駱駝科動(dòng)物來源的VH和VL結(jié)構(gòu)域或其人源化變體可與人抗體的恒定結(jié)構(gòu)域連接以產(chǎn)生嵌合分子，如在本文中其它地方深入描述的。
[0498]“保守氨基酸替換“保守氨基酸替換”是其中氨基酸殘基被具有類似側(cè)鏈的氨基酸殘基所替代的替換。已在本領(lǐng)域中限定了具有類似側(cè)鏈的氨基酸殘基家族，包括堿性側(cè)鏈(例如，賴氨酸、精氨酸、組氨酸)、酸性側(cè)鏈(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、不帶電極性側(cè)鏈(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非極性側(cè)鏈(例如，丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、β -支化側(cè)鏈(例如，蘇氨酸、纈氨酸、異亮氨酸)和芳香側(cè)鏈(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、組氨酸)。因此，免疫球蛋白多肽中的非必需氨基酸殘基可以被來自相同側(cè)鏈家族的另一氨基酸殘基替代。在另一實(shí)施方案中，一串氨基酸可以被結(jié)構(gòu)上類似但是順序和/或側(cè)鏈家族成員組成不同的一串所替換。
[0499]“重鏈部分如本文所使用的，術(shù)語“重鏈部分”包含來源于免疫球蛋白重鏈之恒定結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列。含有重鏈部分的多肽包含以下中的至少之一 =CHl結(jié)構(gòu)域、鉸鏈(例如，上、中和/或下鉸鏈區(qū))結(jié)構(gòu)域、CH2結(jié)構(gòu)域、CH3結(jié)構(gòu)域或其變體或片段。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的結(jié)合分子可包含免疫球蛋白重鏈(例如，鉸鏈部分、CH2結(jié)構(gòu)域和CH3結(jié)構(gòu)域)的Fe部分。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明的結(jié)合分子缺乏恒定結(jié)構(gòu)域的至少一部分(例如，CH2結(jié)構(gòu)域的全部或一部分)。在某些實(shí)施方案中，恒定結(jié)構(gòu)域的至少之一并且優(yōu)選全部來源于人免疫球蛋白重鏈。例如，在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，重鏈部分包含全人鉸鏈結(jié)構(gòu)域。
[0500]在另一些優(yōu)選實(shí)施方案中，重鏈部分包含全人Fe部分(例如人免疫球蛋白的鉸鏈、CH2和CH3結(jié)構(gòu)域序列)。在某些實(shí)施方案中，重鏈部分之組成部分的恒定結(jié)構(gòu)域來自不同免疫球蛋白分子。例如，多肽的重鏈部分可包含來自IgGl分子的CH2結(jié)構(gòu)域和來自IgG3或IgG4分子的鉸鏈區(qū)。在另一些實(shí)施方案中，恒定結(jié)構(gòu)域是包含不同免疫球蛋白分子部分的嵌合結(jié)構(gòu)域。例如，鉸鏈可包含IgGl分子的第一部分和IgG3或IgG4分子的第二部分。如在上文中所給出的，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將理解可以修飾重鏈部分的恒定結(jié)構(gòu)域從而使得他們的氨基酸序列與天然(野生型)免疫球蛋白分子不同。即，本文所公開的本發(fā)明多肽可包含一個(gè)或更多個(gè)重鏈恒定結(jié)構(gòu)域(CH1、鉸鏈、CH2或CH3)和/或輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域(CL)的改變或修飾。示例性修飾包括一個(gè)或更多個(gè)結(jié)構(gòu)域中一個(gè)或更多個(gè)氨基酸的添加、缺失或替換。
[0501]“嵌合“嵌合”蛋白質(zhì)包含與第二氨基酸序列連接的第一氨基酸序列，第一氨基酸序列與第二氨基酸序列在自然中并非天然地連接。所述氨基酸序列通?？纱嬖谟诤喜⒊扇诤隙嚯牡姆珠_的蛋白質(zhì)中，或者他們通?？纱嬖谟谕坏鞍踪|(zhì)中但在融合多肽中以新的排布布置。嵌合蛋白質(zhì)可例如通過化學(xué)合成或者通過產(chǎn)生和翻譯其中肽區(qū)以所需關(guān)系編碼的多核苷酸來產(chǎn)生。示例性嵌合c-Met抗體包括融合蛋白，所述融合蛋白包含與人抗體(例如人IgGl、IgG2、IgG3或IgG4)的恒定結(jié)構(gòu)域融合的駱駝科動(dòng)物來源的VH和VL結(jié)構(gòu)域或其人源化變體。
[0502]“可變區(qū)”或“可變結(jié)構(gòu)域術(shù)語“可變”指這樣的事實(shí):可變結(jié)構(gòu)域VH和VL的某些部分的序列在抗體之間差異很大，并用于每個(gè)特定抗體針對其靶抗原的結(jié)合和特異性。然而，可變性在抗體的可變結(jié)構(gòu)域中并非均勻分布。它集中在每個(gè)VL結(jié)構(gòu)域和VH結(jié)構(gòu)域中被稱為“高變環(huán)”的三個(gè)區(qū)段中，并形成抗原結(jié)合位點(diǎn)的一部分。νλ輕鏈結(jié)構(gòu)域中的第一、第二和第三高變環(huán)在本文中被稱為LI `( λ )、L2 ( λ )和L3 ( λ )，并且可限定為包含VL結(jié)構(gòu)域中的24-33位(LI ( λ )，由9、10或11個(gè)氨基酸殘基組成)、49-53位(L2 ( λ )，由3個(gè)殘基組成)和 90-96 位(L3 ( λ )，由 5 個(gè)殘基組成)殘基(Morea 等，Methods 20: 267-279 (2000))。V K輕鏈結(jié)構(gòu)域中的第一、第二和第三高變環(huán)在本文中被稱為L1(k )、L2(k )和L3(k )，并且可限定為包含VL結(jié)構(gòu)域中的25-33位(LI ( K )，由6、7、8、11、12或13個(gè)殘基組成)、49-53位(L2 ( O，由3個(gè)殘基組成)和90-97位(L3 ( O，由6個(gè)殘基組成)殘基(Morea等，Methods20:267-279(2000)) ο VH結(jié)構(gòu)域中的第一、第二和第三高變環(huán)在本文中被稱為Hl、H2和H3，并且可限定為包含VH結(jié)構(gòu)域中的25-33位(Hl，由7、8或9個(gè)殘基組成)、52至56位(H2，由3或4個(gè)殘基組成)和91至105位(H3，其長度非常不等)殘基(Morea等，Methods20:267-279 (2000))。
[0503]除非另有說明，否則術(shù)語L1、L2和L3分別指VL結(jié)構(gòu)域的第一、第二和第三高變環(huán)，并且涵蓋得自Vk和νλ同種型二者的高變環(huán)。術(shù)語Η1、Η2和Η3分別指VH結(jié)構(gòu)域的第一、第二和第三高變環(huán)，并且涵蓋得自任意已知重鏈同種型(包括Y、ε、δ、α或μ)的高變環(huán)。
[0504]高變環(huán)L1、L2、L3、HU H2和H3均可包含如下文中所限定的“互補(bǔ)決定區(qū)”或“CDR”的一部分。術(shù)語“高變環(huán)”和“互補(bǔ)決定區(qū)”不是嚴(yán)格意義的同義詞，因?yàn)楦咦儹h(huán)(HV)是基于結(jié)構(gòu)限定的，而互補(bǔ)決定區(qū)(⑶R)是基于序列可變性限定的(Kabat等，Sequencesof Proteins of Immunological Interest,第 5 版.Public Health Service, NationalInstitutes of Health, Bethesda, MD.，1983)，并且 HV 和 CDR 的范圍在一些 VH 和 VL 結(jié)構(gòu)域中可以不同。
[0505]VL和VH結(jié)構(gòu)域的⑶R通常可限定為包含下列氨基酸:輕鏈可變結(jié)構(gòu)域中的24_34位(CDRLl)、50-56位(CDRL2)和89-97位(CDRL3)殘基，以及重鏈可變結(jié)構(gòu)域中的31-35位或 31-35b 位(CDRHl)、50-65 位(CDRH2)和 95-102 位(CDRH3)殘基；(Kabat 等，Sequencesof Proteins of Immunological Interest,第 5 版.Public Health Service, NationalInstitutes of Health, Bethesda, MD.(1991))。因此，HV 可包含在相應(yīng)的 CDR 中，并且本文中關(guān)于VH和VL結(jié)構(gòu)域的“高變環(huán)”也應(yīng)解釋為涵蓋相應(yīng)的⑶R，反之亦然，除非另有說明。
[0506]可變結(jié)構(gòu)域保守性較高的部分稱為框架區(qū)(FR)，如下文中所限定。天然重鏈和輕鏈的可變結(jié)構(gòu)域均包含四個(gè)FR(分別為FR1、FR2、FR3和FR4)，主要是采用β-片層構(gòu)型，通過三個(gè)高變環(huán)相連接。每條鏈中的高變環(huán)通過FR而緊密聯(lián)系在一起，并與其它鏈中的高變環(huán)一起促成抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)的形成。對抗體的結(jié)構(gòu)分析披露了序列與通過互補(bǔ)決定區(qū)形成的結(jié)合位點(diǎn)形狀之間的關(guān)系(Chothia等，J.Mol.Biol.227:799-817(1992)；Tramontano等，J.Mol.Biol，215:175-182 (1990))。盡管它們具有高度序列可變性，但六個(gè)環(huán)有五個(gè)只采取了主鏈構(gòu)象的一小部分，稱為“典型結(jié)構(gòu)(canomical structure)”。這些構(gòu)象首先取決于環(huán)的長度，其次取決于環(huán)和框架區(qū)中某些位點(diǎn)關(guān)鍵殘基的存在(其通過包裝、氫鍵鍵合或決定不尋常主鏈構(gòu)象的能力來確定構(gòu)象)。
[0507]“⑶R”_如本文所使用的，術(shù)語“⑶R”或“互補(bǔ)決定區(qū)”表示見于重鏈多肽和輕鏈多肽二者的可變區(qū)中的非連續(xù)抗原組合位點(diǎn)。Kabat等，J.Biol.Chem.252,6609-6616(1977)和 Kabat 等，Sequences of protein ofimmunological interest.(1991),及 Chothia 等，J.Mol.Biol.196:901-917 (1987)以及 MacCallum 等，J.Mol.Biol.262:732-745 (1996)描述了這些特定區(qū)，其中定義包括當(dāng)與彼此比較時(shí)，氨基酸殘基的重疊和子集。給出涵蓋如以上所引用的各參考文獻(xiàn)所限定的CDR的氨基酸殘基用于比對。優(yōu)選地，術(shù)語“CDR”是根據(jù)序列比對由Kabat所限定的⑶R。
[0508]表1:CDR 定義
【權(quán)利要求】
1.分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其特異性地與人C-Met蛋白結(jié)合，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段表現(xiàn)出下述特性中的至少兩個(gè)或全部三個(gè): (a)是HGF介導(dǎo)人C-Met蛋白活化的嚴(yán)格拮抗劑， (b)抑制非HGF依賴性的人c-Met蛋白活化，以及 (C)不誘導(dǎo)細(xì)胞表面人c-Met蛋白的顯著下調(diào)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其與人c-Met蛋白的IPT區(qū)中的表位、特別是人c-Met蛋白的IPT結(jié)構(gòu)域1-2、2-3或3_4中的表位結(jié)合，或者與人c-Met蛋白的PS1-1PTl區(qū)中的表位結(jié)合。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其與所述人c-Met蛋白的PS1-1PTl區(qū)中氨基酸序列 523-rseeclsgtwtqqiclpaiykvfpnsapleggtrlticgwdfgfrrnnkfdlkktrvllgneSCTLTLSESTMNTLKCTVGPAMNKHFNMSIIISNGHGTTQYSTFSYVDP-633 (SEQ ID NO:136)中的表位結(jié)口 ο
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其阻斷HGF與人c-Met蛋白的高親和力HGF結(jié)合位點(diǎn)的結(jié)合。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其 (a)不誘導(dǎo)細(xì)胞表面人c-Met蛋白的下調(diào)，并且 (b)與人c-Met蛋白的SEMA結(jié)構(gòu)域中的表位結(jié)合。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其阻斷HGF與人c-Met蛋白的低親和力HGF結(jié)合位點(diǎn)的結(jié)合。
7.根據(jù)權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其包含具有全人序列的鉸鏈區(qū)。
8.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其具有高人同源性。
9.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)，其中所述VH和VL結(jié)構(gòu)域或者其一個(gè)或更多個(gè)CDR是駱駝科動(dòng)物來源的。
10.分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其特異性地與人C-Met蛋白結(jié)合，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)，其中所述VH和VL結(jié)構(gòu)域或者其一個(gè)或更多個(gè)CDR是駱駝科動(dòng)物來源的。
11.根據(jù)權(quán)利要求9或10所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述VH結(jié)構(gòu)域和/或VL結(jié)構(gòu)域來自大羊駝或者是大羊駝VH或VL結(jié)構(gòu)域的人種系化變體。
12.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述VH結(jié)構(gòu)域或所述VL結(jié)構(gòu)域中的至少一個(gè)高變環(huán)表現(xiàn)出預(yù)測的或?qū)嶋H的典型折疊結(jié)構(gòu)，所述結(jié)構(gòu)與人抗體中存在的典型折疊結(jié)構(gòu)基本相同。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述高變環(huán)H1、H2、L1和L2及任選的L3均表現(xiàn)出預(yù)測的或?qū)嶋H的典型折疊結(jié)構(gòu)，所述結(jié)構(gòu)與人抗體中存在的典型折疊結(jié)構(gòu)基本相同。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述高變環(huán)Hl和H2形成存在于人抗體中的典型折疊結(jié)構(gòu)的組合，并且所述高變環(huán)LI和L2形成存在于人抗體中的典型折疊結(jié)構(gòu)的組合。
15.分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合人c-Met蛋白，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含含有可變重鏈CDR3的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，其中所述可變重鏈CDR3包含選自以下的氨基酸序列: SEQ ID NO:21[DVRVIATGWATANALDA]，或其序列變體； SEQ ID NO:15[VDDYYLGYDY]，或其序列變體； SEQ ID NO:3[RRDNYYGTSGEYDY]，或其序列變體； SEQ ID NO:6[DTVVSGNGY]，或其序列變體； SEQ ID NO:9[DLIGSHDY]，或其序列變體; SEQ ID NO:12[GPGWYSGSRNDY]，或其序列變體； SEQ ID NO: 18 [LEDYELAYDY]，或其序列變體；以及 SEQ ID NO:73[SGYGSSLGDFGS]，或其序列變體， 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的抗體或抗原結(jié)合片段，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域還包含含有選自以下之序列的可變重鏈⑶R2: (a)SEQ ID NO:XXI [X1X2X3X4X5X6X7X8HBESM]或其序列變體， 其中 Xl是任意氨基酸，優(yōu)選為T或A ; X2是任意氨基酸，優(yōu)選為I ; X3是任意氨基酸，優(yōu)選為S或N ; X4是任意氨基酸，優(yōu)選為W ; X5是任意氨基酸，優(yōu)選為N; X6是任意氨基酸，優(yōu)選為D或G ; X7是任意氨基酸，優(yōu)選為1、G或S;以及 X8是任意氨基酸，優(yōu)選為N或S， (b)SEQID NO:XX2rVIAYDGSTX.YSPSLKSl 或其序列變體，其中 Xl是任意氨基酸，優(yōu)選為Y或D ;和 (c)SEQID NO:ΧΧ3 IRIDPEX.GGTKYAQKFQGl,或其序列奪體，其中 Xl是任意氨基酸，優(yōu)選為D、N或E，并且 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換。
17.根據(jù)權(quán)利要求15所述的抗體或抗原結(jié)合片段，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域還包含含有選自以下之序列的可變重鏈⑶Rl: (a)SEQ ID NO =XXdDC1DIX2MX3]，或其序列變體，其中 X1是任意氨基酸，優(yōu)選為D或S ; X2是任意氨基酸，優(yōu)選為A或V ;以及 X3是任意氨基酸，優(yōu)選為T、N或S， (b)SEQ ID NO:XX5 [X1NYYX2WS]，或其序列變體，其中 Xl是任意氨基酸，優(yōu)選為G或T ;以及 X2是任意氨基酸，優(yōu)選為A或Y， (c)SEQ ID NO:XX6 [X1X2X3ID]，或其序列變體，其中Xl是任意氨基酸，優(yōu)選為M或N ; X2是任意氨基酸，優(yōu)選為N或Y ;以及 X3是任意氨基酸，優(yōu)選為S或V，并且 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換。
18.根據(jù)權(quán)利要求15至17中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其包含含有可變輕鏈CDR3的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，其中所述可變輕鏈CDR3包含選自以下的氨基酸序列: (a)SEQID NO:YY1「QQGX丄SFPX2X31，或其序列變體，其中 X1是任意氨基酸，優(yōu)選為Y或W ; X2是任意氨基酸，優(yōu)選為Y或L ; X3是任意氨基酸，優(yōu)選為T或S，
(b)SEQ ID NO:YY2 [ASYRX1X2X3X4X5X6V]，或其序列變體，其中
Xl是任意氨基酸，優(yōu)選為S、1、R或T ; Χ2是任意氨基酸，優(yōu)選為Α、S、T或R ; Χ3是任意氨基酸，優(yōu)選為N或T ; Χ4是任意氨基酸，優(yōu)選為N、D、R或K ; Χ5是任意氨基酸，優(yōu)選為Α、V、Y、N或H ; Χ6是任意氨基酸，優(yōu)選為V、A、S或G，` 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其還包含含有選自以下之序列的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域CDR2: (a)SEQ ID NO:YY3 iffASX.RESl，或其序列變體，其中 Xl是任意氨基酸，優(yōu)選為I或T ; (b)SEQID NO:YYADciYX2X3SX4S],或其序列變體，其中 Xl是任意氨基酸，優(yōu)選為D、A或E ; X2是任意氨基酸，優(yōu)選為N或S ; X3是任意氨基酸，優(yōu)選為R、Y或K ; X4是任意氨基酸，優(yōu)選為A或P， 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其還包含含有選自以下之序列的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域CDRl: (a)SEQ ID NO:YY5「KSSQSVIXXXNX,KXJLAl，或其序列變體，其中 Xl是任意氨基酸，優(yōu)選為W、L或F ; X2是任意氨基酸，優(yōu)選為R或S ; X3是任意氨基酸，優(yōu)選為S或P ; X4是任意氨基酸，優(yōu)選為Q或H ; X5是任意氨基酸，優(yōu)選為N或S， (b)SEQID NO:YY6 [X1P2X3X4X5X6P7X8X9IXiaS],或其序列變體，其中 Xl是任意氨基酸，優(yōu)選為A或T ; Χ2是任意氨基酸，優(yōu)選為T或S ;X3是任意氨基酸，優(yōu)選為S或N ; X4是任意氨基酸，優(yōu)選為S或T ; X5是任意氨基酸，優(yōu)選為D或N ; X6是任意氨基酸，優(yōu)選為V或I ; X7是任意氨基酸，優(yōu)選為Y、G、D或N ; X8是任意氨基酸，優(yōu)選為G或Y ; X9是任意氨基酸，優(yōu)選為N或Y ; XlO是任意氨基酸，優(yōu)選為V或L， 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換。
21.根據(jù)權(quán)利要求1或5至17中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述可變重鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:21或其序列變體，其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換。
22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中 所述可變重鏈CDR3序列是SEQ ID NO:21或SEQ ID NO:12或其序列變體； 所述可變重鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:XX2或其序列變體；以及 所述可變重鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:XX5或其序列變體，并且 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換。
23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中 所述可變重鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:21或其序列變體； 所述可變重鏈CDR2序列是SEQ ID NO:20或其序列變體或者SEQ ID NO:83或其序列變體；以及 所述可變重鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:19或其序列變體，并且， 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換。
24.根據(jù)權(quán)利要求22所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中 所述可變重鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:12或其序列變體； 所述可變重鏈⑶R2序列是SEQ ID NO: 11或其序列變體；以及 所述可變重鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:10或其序列變體，并且， 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換。
25.根據(jù)權(quán)利要求21至24中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中 所述可變輕鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:YY2或其序列變體； 所述可變輕鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:ΥΥ4或其序列變體；以及 所述可變輕鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:ΥΥ6或其序列變體，并且， 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換。
26.根據(jù)權(quán)利要求25所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中 所述可變輕鏈CDR3序列選自SEQ ID NO:33或其序列變體、SEQ ID NO:145或其序列變體、SEQ ID NO:146或其序列變體、SEQ ID NO:147或其序列變體和SEQ ID NO:148或其序列變體； 所述可變輕鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:32或其序列變體；以及 所述可變輕鏈CDRl序列是SEQ ID NO:31或其序列變體或者SEQ ID NO:144或其序列變體，并且， 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換。
27.根據(jù)權(quán)利要求25所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中 所述可變輕鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:30或其序列變體； 所述可變輕鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:29或其序列變體；以及 所述可變輕鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:28或其序列變體，并且 ， 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換。
28.根據(jù)權(quán)利要求21或22所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合人c-Met蛋白，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，其中: 所述可變重鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:21或其序列變體； 所述可變重鏈CDR2序列選自SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:84或其序列變體；以及 所述可變重鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:19或其序列變體；所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含選自以下的⑶R的組合: (i)所述可變輕鏈⑶R3序列是SEQID NO:33或其序列變體； 所述可變輕鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:32或其序列變體； 所述可變輕鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:31或其序列變體， 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換；或者 (ii)所述可變輕鏈⑶R3序列是SEQID NO:145或其序列變體； 所述可變輕鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:32或其序列變體； 所述可變輕鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:144或其序列變體， 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換；或者 (iii)所述可變輕鏈⑶R3序列是SEQID NO:146或其序列變體； 所述可變輕鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:32或其序列變體； 所述可變輕鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:31或其序列變體， 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換；或者 (iv)所述可變輕鏈⑶R3序列是SEQID NO:147或其序列變體； 所述可變輕鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:32或其序列變體； 所述可變輕鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:144或其序列變體， 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換；或者 (V)所述可變輕鏈CDR3序列是SEQ ID NO:148或其序列變體； 所述可變輕鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:32或其序列變體； 所述可變輕鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:144或其序列變體， 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換。
29.根據(jù)權(quán)利要求21或22所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合人cMet蛋白，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，其中: 所述可變重鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:12或其序列變體；所述可變重鏈⑶R2序列是SEQ ID NO: 11或其序列變體；以及 所述可變重鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO: 10或其序列變體， 所述可變輕鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:30或其序列變體； 所述可變輕鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:29或其序列變體；以及 所述可變輕鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:28或其序列變體，并且 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換。
30.根據(jù)權(quán)利要求1、5至14或21至29中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合人c-Met蛋白，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含與選自SEQ ID NO:51、88、92、94、96和98的序列具有至少85 %的序列同一性、或至少90 %的序列同一性、或至少95 %的序列同一性或至少97%、98%或99%序列同一性的VH序列。
31.根據(jù)權(quán)利要求1或5至14中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合人c-Met蛋白，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含選自SEQ ID NO:51、88、92、94、96和98的VH氨基酸序列。
32.根據(jù)權(quán)利要求1、5至14或21至31中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合人c-Met蛋白，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含與選自SEQ ID NO:55、93、95、97、99、158、159、160、161、162、163和164的氨基酸序列具有至少80%序列同一性、或至少85%序列同一性、或至少90 %序列同一性、或至少95 %序列同一性、或至少97 %、98 %或99 %序列同一1性的V入序列。`
33.根據(jù)權(quán)利要求1、5至14或21至31中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合人c-Met蛋白，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含選自SEQ ID NO:55、93、95、97、99、158、159、160、161、162、163 和 164 的 VA 氨基酸序列。
34.根據(jù)權(quán)利要求1或5至14中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其特異性地與人c-Met蛋白結(jié)合，并且是HGF介導(dǎo)c-Met受體活化的嚴(yán)格拮抗劑，所述抗體包含:包含如SEQID NO:51或SEQ ID NO:88所示的氨基酸序列或其人源化變體或親和變體的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，和包含如SEQ ID NO:55所示的氨基酸序列或其人源化變體或親和變體的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)。
35.根據(jù)權(quán)利要求1或5至14中任一項(xiàng)所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或抗原結(jié)合片段是權(quán)利要求34所述的抗體的人種系化變體，所述種系化變體抗體或抗原結(jié)合片段包含: (a)包含如SEQID NO:92所示的氨基酸序列的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，和包含如SEQ IDNO:93所示的氨基酸序列的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL);或者 (b)包含如SEQID NO:94所示的氨基酸序列的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，和包含如SEQ IDNO:95所示的氨基酸序列的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL);或者 (c)包含如SEQID NO:96所示的氨基酸序列的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，和包含如SEQ IDNO:97所示的氨基酸序列的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL);或者(d)包含如SEQ ID NO:98所示的氨基酸序列的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，和包含如SEQ IDNO:99所示的氨基酸序列的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)。
36.根據(jù)權(quán)利要求1或5至14中任一項(xiàng)所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或抗原結(jié)合片段是權(quán)利要求34所述的親和變體，所述親和變體包含:包含如SEQ ID NO:88所示的氨基酸序列的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，和包含選自ID NO:156,SEQ ID NO: 157,SEQID NO:158,SEQ ID NO: 159、SEQ ID NO: 160,SEQ ID NO:161、SEQ ID NO: 162,SEQ ID NO:163和SEQ ID NO:164的氨基酸序列的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)。
37.根據(jù)權(quán)利要求1或5至14中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其特異性地與人c-Met蛋白結(jié)合，并且是HGF介導(dǎo)c-Met受體活化的嚴(yán)格拮抗劑，所述抗體包含:包含如SEQID NO:48所示的氨基酸序列或其人源化變體或親和變體的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，和包含如SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列或其人源化變體或親和變體的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL) 。
38.根據(jù)權(quán)利要求1至4或7至17中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中 所述可變重鏈CDR3序列是SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:18或其序列變體，其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換。
39.根據(jù)權(quán)利要求38所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中 所述可變重鏈CDR3序列是SEQ ID NO: 15或SEQ ID NO:18或其序列變體； 所述可變重鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:XX3或其序列變體；以及 所述可變重鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:XX6或其序列變體，并且 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換。
40.根據(jù)權(quán)利要求39所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中 所述可變重鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:15或其序列變體； 所述可變重鏈⑶R2序列是SEQ ID NO: 14或其序列變體或者SEQ ID NO:85或其序列變體；以及 所述可變重鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:13或其序列變體，并且 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換。
41.根據(jù)權(quán)利要求39所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中 所述可變重鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:18或其序列變體； 所述可變重鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:17或其序列變體；以及 可變重鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:16或其序列變體，并且 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換。
42.根據(jù)權(quán)利要求39至41中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中 所述可變輕鏈⑶R3序列是SEQ ID NO =YYl或其序列變體； 所述可變輕鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:YY3或其序列變體；以及 所述可變輕鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:ΥΥ5或其序列變體，并且 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換。
43.根據(jù)權(quán)利要求42所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中 所述可變輕鏈CDR3序列選自SEQ ID NO:87或其序列變體、SEQ ID NO:139或其序列變體和SEQ ID NO:141或其序列變體； 所述可變輕鏈CDR2序列是SEQ ID NO:23或其序列變體或者SEQ ID NO:26或其序列變體；以及 所述可變輕鏈CDRl序列選自SEQ ID NO:86或其序列變體、SEQ ID NO:137或其序列變體、SEQ ID NO:138或其序列變體、SEQ ID NO:140或其序列變體、SEQ ID NO:142或其序列變體以及SEQ ID NO:143或其序列變體，并且 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換。
44.根據(jù)權(quán)利要求42所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中 所述可變輕鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:24或其序列變體； 所述可變輕鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:23或其序列變體；以及 所述可變輕鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:22或其序列變體，并且 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換。
45.根據(jù)權(quán)利要求42所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中 所述可變輕鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:27或其序列變體； 所述可變輕鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:26或其序列變體；以及 所述可變輕鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:25或其序列變體，并且 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換。
46.根據(jù)權(quán)利要求1至4、7至14或40中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，其中: 所述可變重鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:15或其序列變體； 所述可變重鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:14或其序列變體；以及 所述可變重鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:13或其序列變體，` 所述可變輕鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:87或其序列變體； 所述可變輕鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:23或其序列變體；以及 所述可變輕鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:86或其序列變體，并且 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換。
47.根據(jù)權(quán)利要求1至4、7至14或40中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，其中: 所述可變重鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:15或其序列變體； 所述可變重鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:14或其序列變體；以及 所述可變重鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:13或其序列變體；并且 所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含選自以下的CDR的組合: (i)所述可變輕鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:24或其序列變體； 所述可變輕鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:23或其序列變體；以及 所述可變輕鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:22或其序列變體，并且 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換；或者 (?)所述可變輕鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:87或其序列變體； 所述可變輕鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:26或其序列變體；以及 所述可變輕鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:137或其序列變體，并且 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換；或者 (iii)所述可變輕鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:139或其序列變體；所述可變輕鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:26或其序列變體；以及 所述可變輕鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:138或其序列變體，并且 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換，或者 (iv)所述可變輕鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:141或其序列變體； 所述可變輕鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:26或其序列變體；以及 所述可變輕鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:140或其序列變體，并且 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換，或者 (V)所述可變輕鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:141或其序列變體； 所述可變輕鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:26或其序列變體；以及 所述可變輕鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:142或其序列變體，并且 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換，或者 (vi)所述可變輕鏈⑶R3序列是SEQID NO:87或其序列變體； 所述可變輕鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:26或其序列變體；以及 所述可變輕鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:86或其序列變體，并且 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換，或者 (vii)所述可變輕鏈⑶R3序列是SEQID NO:87或其序列變體； 所述可變輕鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:26或其序列變體；以及 所述可變輕鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:143或其序列變體，并且 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換。
48.根據(jù)權(quán)利要求38或39所述的抗體或抗原結(jié)合片段，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域: 所述可變重鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:18或其序列變體； 所述可變重鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:17或其序列變體；以及 所述可變重鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:16或其序列變體， 所述可變輕鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:27或其序列變體； 所述可變輕鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:26或其序列變體；以及 所述可變輕鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:25或其序列變體，并且 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換。
49.根據(jù)權(quán)利要求1至4、7至14或38至48中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含與選自SEQ ID NO:49、108、110、112、114、116、118和120的氨基酸序列具有至少85%序列同一性、或至少90 %序列同一性、或至少95 %序列同一性、或至少97 %、98 %或99 %序列同一性的VH序列。
50.根據(jù)權(quán)利要求1至4或7至14中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含選自SEQID NO:49、108、110、112、114、116、118 和 120 的 VH 氨基酸序列。
51.分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合人c-Met蛋白，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含與選自 SEQ IDNO:52、89、109、111、113、115、117、119、121、149、150、.151、152、153、154、155、156和157的氨基酸序列具有至少75%序列同一性、或至少80%序列同一性、或至少85%序列同一性、或至少90%序列同一性、或至少95%序列同一性、或至少97%、98%或99%序列同一性的Vk序列。
52.根據(jù)權(quán)利要求1至4、7至14或38至50中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含選自 SEQ ID NO:52、89、109、111、113、115、117、119、121、149、150、151、152、153、154、155、.156和157的Vk氨基酸序列。
53.根據(jù)權(quán)利要求1至4或7至14中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，所述抗體包含:包含如SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列或其人源化變體或親和變體的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，和包含如SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列或如SEQ ID NO:89所示的氨基酸序列或其人源化變體或親和變體的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)。
54.根據(jù)權(quán)利要求1至4、7至14、47或50中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，所述抗體包含:包含如SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列或其人源化變體或親和變體的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，和包含如SEQ ID NO:89所示的氨基酸序列或其人源化變體或親和變體的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)。
55.根據(jù)權(quán)利要求1至4或7至14中任一項(xiàng)所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體是權(quán)利要求54所述抗體的人種系化變體，所述種系化變體抗體包含: (a)包含如SEQID NO:108所示的氨基酸序列的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，和包含如SEQID NO:109所示的氨基酸序列的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL);或者 (b)包含如SEQID NO:110所示的氨基酸序列的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，和包含如SEQID NO:111所示的氨基酸序列的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL);或者 (c)包含如SEQID NO:112所示的氨基酸序列的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，和包含如SEQID NO:113所示的氨基酸序列的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL);或者 (d)包含如SEQID NO:114所示的氨基酸序列的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，和包含如SEQID NO:115所示的氨基酸序列的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL);或者 (e)包含如SEQID NO:116所示的氨基酸序列的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，和包含如SEQID NO:117所示的氨基酸序列的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL);或者 (f)包含如SEQID NO:118所示的氨基酸序列的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，和包含如SEQID NO:119所示的氨基酸序列的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL);或者 (g)包含如SEQID NO:120所示的氨基酸序列的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，和包含如SEQID NO:121所示的氨基酸序列的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)。
56.根據(jù)權(quán)利要求1至4或7至14中任一項(xiàng)所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體是權(quán)利要求54所述抗體的親和變體，所述親和變體抗體包含:包含如SEQ ID N0:49所示的氨基酸序列的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，和包含選自SEQ ID NO:149, SEQ ID NO:150,SEQ ID NO:15USEQ ID NO: 152、SEQ ID NO: 153,SEQ ID NO: 154、SEQ ID NO: 155,SEQ IDNO:156和SEQ ID NO:157的氨基酸序列的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)。
57.根據(jù)權(quán)利要求1或7至14中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，所述抗體包含:包含如SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列或其人源化變體或親和變體的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，和包含如SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列或其人源化變體或親和變體的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)。
58.根據(jù)權(quán)利要求1、7至14或15至17中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述可變重鏈CDR3序列選自SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:9或其序列變體，其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換。
59.根據(jù)權(quán)利要求58所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中 所述可變重鏈CDR3序列選自SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:9或其序列變體； 所述可變重鏈⑶R2序列是SEQ ID NO =XXl或其序列變體；以及 所述可變重鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:XX4或其序列變體，并且 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換。
60.根據(jù)權(quán)利要求59所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中 所述可變重鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:3或其序列變體； 所述可變重鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:2或其序列變體；以及 所述可變重鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:1或其序列變體，并且 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換。
61.根據(jù)權(quán)利要求59所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中 所述可變重鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:6或其序列變體； 所述可變重鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:5或其序列變體；以及 所述可變重鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:4或其序列變體，并且 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換。
62.根據(jù)權(quán)利要求59所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中 所述可變重鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:9或其序列變體； 所述可變重鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:8或其序列變體；以及 所述可變重鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:7或其序列變體，并且 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換。
63.根據(jù)權(quán)利要求59至62中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中 所述可變輕鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:YY2或其序列變體； 所述可變輕鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:ΥΥ4或其序列變體；以及 所述可變輕鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:ΥΥ6或其序列變體，并且 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換。
64.根據(jù)權(quán)利要求63所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中 所述可變輕鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:36或其序列變體； 所述可變輕鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:35或其序列變體；以及 所述可變輕鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:34或其序列變體，并且 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換。
65.根據(jù)權(quán)利要求63所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中 所述可變輕鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:39或其序列變體； 所述可變輕鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:38或其序列變體；以及 所述可變輕鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:37或其序列變體，并且其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換。
66.根據(jù)權(quán)利要求63所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中 所述可變輕鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:42或其序列變體； 所述可變輕鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:41或其序列變體；以及 所述可變輕鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:40或其序列變體，并且 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換。
67.根據(jù)權(quán)利要求1或7至14中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，其中: 所述可變重鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:9或其序列變體； 所述可變重鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:8或其序列變體；以及 所述可變重鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:7或其序列變體， 所述可變輕鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:42或其序列變體； 所述可變輕鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:41或其序列變體；以及 所述可變輕鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:40或其序列變體，并且 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換。
68.根據(jù)權(quán)利要求1或7至14中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，其中: 所述可變重鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:6或其序列變體； 所述可變重鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:5或其序列變體；以及 所述可變重鏈⑶Rl序列是SEQ I`D NO:4或其序列變體， 所述可變輕鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:39或其序列變體； 所述可變輕鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:38或其序列變體；以及 所述可變輕鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:37或其序列變體，并且 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換。
69.根據(jù)權(quán)利要求1或7至14中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，其中 所述可變重鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:3或其序列變體； 所述可變重鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:2或其序列變體；以及 所述可變重鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:1或其序列變體， 所述可變輕鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:36或其序列變體； 所述可變輕鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:35或其序列變體；以及 所述可變輕鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:34或其序列變體，并且 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換。
70.根據(jù)權(quán)利要求1或7至14中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含與選自SEQ IDNO:45,46和47的氨基酸序列具有至少85%序列同一性、或至少90%序列同一性、或至少95%序列同一性、或至少97%、98%或99%序列同一性的VH序列。
71.根據(jù)權(quán)利要求1或7至14中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含選自SEQ IDNO:45、46和47的VH氣基酸序列。
72.根據(jù)權(quán)利要求1或7至14中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含與選自SEQ IDNO:56,57和58的氨基酸序列具有至少80%序列同一性、或至少85%序列同一性、或至少90%序列同一性、或至少95%序列同一性、或至少97%、98%或99%序列同一性的νλ序列。
73.根據(jù)權(quán)利要求1或7至14中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含選自SEQ IDNO:56、57和58的V λ氨基酸序列。
74.根據(jù)權(quán)利要求1或7至14中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，所述抗體包含:包含如SEQ ID NO:45所示的氨基酸序列或其人源化變體或親和變體的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，和包含如SEQ ID NO:56所示的氨基酸序列或其人源化變體或親和變體的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)。
75.根據(jù)權(quán)利要求1或7至14中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，所述抗體包含:包含如SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列或其人源化變體或親和變體的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，和包含如SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列或其人源化變體或親和變體的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)。
76.根據(jù)權(quán)利要求1或7至14中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其特異性地與人c-Met蛋白結(jié)合，并且是HGF介導(dǎo)c-Met受體活化的嚴(yán)格拮抗劑，所述抗體包含:包含如SEQID NO:47所示的氨基酸序列或其人源化變體或親和變體的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，和包含如SEQ ID NO:58所示的氨基酸序列或其人源化變體或親和變體的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)。
77.根據(jù)權(quán)利要求1、7至14或15中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中 所述可變重鏈CDR3序列是SEQ ID NO:73或其序列變體，其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換。
78.根據(jù)權(quán)利要求77所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中 所述可變重鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:73或其序列變體； 所述可變重鏈⑶R2序列是SEQ ID NO ,12或其序列變體；以及 所述可變重鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:71或其序列變體；并且 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換。
79.根據(jù)權(quán)利要求78中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中 所述可變輕鏈⑶R3序列是SEQ ID NO:76或其序列變體； 所述可變輕鏈⑶R2序列是SEQ ID NO:75或其序列變體；以及 所述可變輕鏈⑶Rl序列是SEQ ID NO:74或其序列變體，并且 其中所述序列變體在所示序列中包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)氨基酸替換。
80.根據(jù)權(quán)利要求1、7至14、77或78中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含與如SEQ ID NO:77所示的氨基酸序列具有至少85%序列同一性、或至少90%序列同一性、或至少95%序列同一性、或至少97%、98%或99%序列同一性的VH序列。
81.根據(jù)權(quán)利要求1或7至14中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含如SEQ ID NO:77所示的VH氨基酸序列。
82.根據(jù)權(quán)利要求1、7至14或77至81中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含與如SEQ ID NO:78所示的氨基酸序列具有至少80%序列同一性、或至少85%序列同一性、或至少90%序列同一性、或至少95%序列同一性、或至少97%、98%或99%序列同一性的νλ序列。
83.根據(jù)權(quán)利要求1、7至14或77至81中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含如SEQID NO:78所不的V λ氣基酸序列。
84.根據(jù)權(quán)利要求1或7至14中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，所述抗體包含:包含如SEQ ID NO:77所示的氨基酸序列或其人源化變體或親和變體的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，和包含如SEQ ID NO:78所示的氨基酸序列或其人源化變體或親和變體的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)。
85.分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其與根據(jù)權(quán)利要求15至84中任一項(xiàng)所述的抗體交叉競爭與所述人c-Met蛋白結(jié)合，或者其與根據(jù)權(quán)利要求15至84中任一項(xiàng)所述的抗體結(jié)合相同的表位。
86.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段: (a)是HGF介導(dǎo)人c-Met蛋白活化的嚴(yán)格拮抗劑，并且 (b)抑制非HGF依賴性人c-Met蛋白活化，并且任選地不誘導(dǎo)細(xì)胞表面人c-Met蛋白的顯著下調(diào)。
87.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其表現(xiàn)出對非HGF依賴性c-Met受體活化的至少40%、或至少50%、或至少60%、或至少70%、或至少80%的抑制，或者與參照抗體C224G11相比，其表現(xiàn)出對非HGF依賴性c-Met受體活化的更有效的抑制。
88.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其表現(xiàn)出對人c-Met受體的不大于20 %、或不大于15 %或不大于10 %的激動(dòng),或者與參照抗體c224Gl I相比,其對人c-Met受體表現(xiàn)出較低的激動(dòng)劑活性。
89.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其表現(xiàn)出不大于20%、或不大于15%、或不大于10%的細(xì)胞表面c-Met蛋白表達(dá)下調(diào)。
90.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其顯示出選自以下的一個(gè)或更多個(gè)效應(yīng)子功能:針對在細(xì)胞表面表達(dá)人c-Met蛋白之細(xì)胞的抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)、補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(CDC)和抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的吞噬作用(ADCP)。
91.根據(jù)權(quán)利要求90所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其表現(xiàn)出針對表達(dá)c-Met或過表達(dá)c-Met之癌細(xì)胞的ADCC。
92.根據(jù)權(quán)利要求80或81所述的抗體或抗原結(jié)合片段，與包含天然人Fe結(jié)構(gòu)域的相應(yīng)抗體相比，就選自以下的至少一個(gè)效應(yīng)子功能而言，其表現(xiàn)出增強(qiáng)的效應(yīng)子功能:針對在細(xì)胞表面表達(dá)人c-Met蛋白之細(xì)胞的抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)、補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(CDC)和抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的吞噬作用(ADCP)。
93.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其包含人IgG的鉸鏈區(qū)、CH2結(jié)構(gòu)域和CH3結(jié)構(gòu)域。
94.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體，其為非巖藻糖基化IgG。
95.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體，其為人IgGl。
96.分離的多核苷酸，其編碼前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段。
97.表達(dá)載體,其包含根據(jù)權(quán)利要求96所述的多核苷酸,所述多核苷酸與允許抗原結(jié)合多肽在宿主細(xì)胞或無細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)的調(diào)節(jié)序列有效連接。
98.包含根據(jù)權(quán)利要求97所述的表達(dá)載體的宿主細(xì)胞或無細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)。
99.產(chǎn)生重組抗體或其抗原結(jié)合片段的方法，其包括在允許所述抗體或抗原結(jié)合片段表達(dá)的條件下培養(yǎng)根據(jù)權(quán)利要求98所述的宿主細(xì)胞或無細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)，以及回收所表達(dá)的抗體或抗原結(jié)合片段。
100.藥物組合物，其包含根據(jù)權(quán)利要求1至95中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段以及可藥用載體或賦形劑。
101.免疫綴合物，其包含根據(jù)權(quán)利要求1至95中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段以及細(xì)胞毒劑、細(xì)胞抑制劑、毒素或放射性核素。
102.在人患者中治療癌癥的方法，其包括向有此需要的患者施用治療有效量的根據(jù)權(quán)利要求I至95中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段。`
103.根據(jù)權(quán)利要求1至95中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段在治療癌癥中的用途。
【文檔編號】C07K16/28GK103562223SQ201180052993
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2011年11月3日 優(yōu)先權(quán)日:2010年11月3日
【發(fā)明者】安娜·胡爾特貝里, 邁克爾·桑德斯, 喬納斯·德哈德, 艾麗斯·費(fèi)斯特延斯, 納塔利·德?lián)P, 保羅·米基耶利, 克里斯蒂娜·巴西利科, 托爾斯滕·德賴爾 申請人:阿爾金-X公司