高度可溶性瘦蛋白的制作方法【專利摘要】本公開(kāi)內(nèi)容提供了嵌合多肽和編碼嵌合多肽的核酸分子。還提供了針對(duì)疾病和病癥，包括脂肪營(yíng)養(yǎng)不良、血脂障礙、高脂血、超重、肥胖癥、下丘腦性閉經(jīng)、阿耳茨海默氏病、瘦蛋白缺陷、脂肪肝病或糖尿病(包括I型和II型)的藥物組合物和治療方法?？梢酝ㄟ^(guò)本文中所描述的化合物和方法治療的其它疾病和病癥包括非酒精性脂肪肝炎(NASH)和非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、代謝綜合征X和亨廷頓氏病?！緦＠f(shuō)明】高度可溶性瘦蛋白[0001]對(duì)相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用[0002]本申請(qǐng)要求2010年9月28日提交的美國(guó)申請(qǐng)N0.61/387，402和2010年12月10日提交的美國(guó)申請(qǐng)N0.61/422，091的優(yōu)先權(quán)，其公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)提述并入本文。[0003]發(fā)明背景[0004]本發(fā)明提供了已經(jīng)表明生物學(xué)活性的新的化合物。所述化合物還在物理特性如溶解度和穩(wěn)定性中表明令人驚訝的且重大的改進(jìn)。[0005]本發(fā)明的化合物基于美國(guó)申請(qǐng)N0.61/387，402和美國(guó)申請(qǐng)N0.61/422，091中披露的瘦蛋白序列。令人驚訝地，所述化合物是高度可溶的，并且與天然存在的瘦蛋白不同，沒(méi)有表明聚集的傾向。所述化合物的物理特性促進(jìn)制備可溶性、藥學(xué)可接受的配制劑和組合物，其也由本發(fā)明提供。適合于這類(lèi)治療的疾病包括脂肪營(yíng)養(yǎng)不良(lipodystrophy)、血脂障礙(dyslipidemia)、高脂血(hyperlipidemia)、超重(overweight)、肥胖癥(obesity)>下丘腦性閉經(jīng)(hypothalamicamenorrhea)、阿耳茨海默(Alzheimer)氏病、瘦蛋白缺陷(leptindeficiency)、脂肪肝病(fattyliverdisease)、糖尿病(diabetes)(包括I型和II型)、非酒精性脂肪肝炎(nonalcoholicsteatohepatitis,NASH)、非酒精性脂肪肝病(nonalcoholicfattyliverdisease,NAFLD)、代謝綜合征X(metabolicsyndromeX)、和亨廷頓(Huntington)氏病、或其組合。[0006]仍然需要開(kāi)發(fā)可用于上文所描述的代謝疾病、狀況和病癥的多肽。因而，本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供可用于治療上述狀況的新多肽及其生成和使用方法。[0007]本文中引用的每篇專利、專利申請(qǐng)和出版物通過(guò)提述據(jù)此完整并入本文并用于所有目的。[0008]發(fā)明概述[0009]提供了在增強(qiáng)的物理特性外，具有瘦蛋白生物學(xué)活性的嵌合多肽化合物。所述化合物是基于野生型海豹瘦蛋白多肽的嵌合多肽，其中野生型海豹瘦蛋白序列的至少一個(gè)1-30個(gè)氨基酸的連續(xù)區(qū)已經(jīng)用成熟人瘦蛋白序列的1-30個(gè)氨基酸的連續(xù)區(qū)替換。[0010]在第一個(gè)方面，提供了如本文中描述的嵌合多肽。[0011]在另一個(gè)方面，提供了用于在需要治療的受試者中治療疾病或病癥的方法。所述方法包括對(duì)受試者施用如本文中描述的嵌合多肽。[0012]在又一個(gè)方面，提供了包含與藥學(xué)可接受賦形劑組合的本文中描述的嵌合多肽的藥物組合物。[0013]在又一個(gè)方面，是編碼所述嵌合多肽及其中間體的多核苷酸、攜帶這類(lèi)多核苷酸的表達(dá)載體、表達(dá)這類(lèi)多核苷酸的宿主細(xì)胞、以及用于其表達(dá)、合成、翻譯后修飾和分離的手段。[0014]附圖簡(jiǎn)述[0015]圖1A-1C繪出了本文中所描述的指定嵌合多肽的每日施用在對(duì)C57/B6雌性小鼠施用后對(duì)食物攝取和體重變化(％經(jīng)媒介物校正的)的影響，如實(shí)施例4中描述的。圖1A:食物攝取。圖1B:體重變化(％經(jīng)媒介物校正的)。圖1C:劑量響應(yīng)曲線。[0016]圖2A-2C繪出了本文中所描述的指定嵌合多肽的每日施用在對(duì)C57/B6雌性小鼠施用后對(duì)食物攝取和體重變化(％經(jīng)媒介物校正的)的影響，如實(shí)施例5中描述的。圖2A:食物攝取。圖2B:體重變化(％經(jīng)媒介物校正的)。圖2C:劑量響應(yīng)曲線。[0017]發(fā)明詳述[0018]1.定義[0019]“肥胖癥”和“超重”指具有比正常預(yù)期更大的重量的哺乳動(dòng)物，并且可以通過(guò)例如身體外觀、如本領(lǐng)域中已知的體重指數(shù)(BMI)、腰臀圍比、皮褶厚度、腰圍等來(lái)確定。疾病控制和預(yù)防中心(OTC)將超重定義為成人具有25至29.9的BMI;并將肥胖定義為成人具有30或更高的BMI。存在用于測(cè)定肥胖癥的其它量度。例如，CDC宣稱具有大于1.0的腰臀比的人是超重的。[0020]“瘦體重”指無(wú)脂肪的體重，即總體重減去身體脂肪重量為瘦體重?？梢酝ㄟ^(guò)如本領(lǐng)域中已知的方法如流體靜力學(xué)稱量(hydrostaticweighing)、計(jì)算機(jī)化室(computerizedchamber)、雙能χ-射線吸收測(cè)量學(xué)、皮膚卡尺(skincaliper)、磁共振成象(MRI)和生物電阻抗分析(BIA)來(lái)測(cè)量瘦體重。[0021]“哺乳動(dòng)物”指一般具有軟毛或毛發(fā)，活產(chǎn)其后代，并且用乳喂養(yǎng)其后代的溫血?jiǎng)游?。哺乳?dòng)物包括人；同伴動(dòng)物(例如犬、貓)；家畜動(dòng)物(例如牛、馬、綿羊、豬、山羊)；野生動(dòng)物等等。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述哺乳動(dòng)物是雌性。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述哺乳動(dòng)物是女性。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述哺乳動(dòng)物是貓或犬。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述哺乳動(dòng)物是患糖尿病的哺乳動(dòng)物，例如具有2型糖尿病的人。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述哺乳動(dòng)物是肥胖的患糖尿病的哺乳動(dòng)物，例如具有2型糖尿病的肥胖哺乳動(dòng)物。術(shù)語(yǔ)“受試者”在本文中描述的方法的背景中指哺乳動(dòng)物。[0022]在多肽背景中的“片段”在本文中在習(xí)慣的化學(xué)意義上指多肽的一部分。例如，片段可以源自親本多肽的一個(gè)或多個(gè)殘基的N端缺失或C端缺失，和/或片段可以源自親本多肽的一個(gè)或多個(gè)殘基的內(nèi)部缺失?！捌巍痹诳贵w的背景中指抗體中可以與生物學(xué)活性分子連接以調(diào)控溶解度、受試者內(nèi)的分布等的部分。例如，本文中描述的瘦蛋白A200是Fe抗體片段與瘦蛋白的綴合物，如本領(lǐng)域中已知的。參見(jiàn)例如W098/28427和US2007/002084。術(shù)語(yǔ)“親本”在多肽背景中在習(xí)慣的意義上指充當(dāng)修飾，例如插入、缺失和/或取代前的參照結(jié)構(gòu)的多肽。[0023]如用于本文的，“類(lèi)似物”在多肽的背景中指相對(duì)于親本化合物具有氨基酸的插入、缺失和/或取代的化合物。類(lèi)似物可以具有卓越的穩(wěn)定性、溶解度、效力、半衰期，等等。在一些實(shí)施方案中，類(lèi)似物是相對(duì)于親本化合物具有至少50%，例如50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或甚至更高的序列同一性的化合物。[0024]“同一性”、“序列同一性”等在比較兩種或更多種核酸或多肽序列的背景中，指根據(jù)使用本領(lǐng)域中已知的序列比較算法例如BLAST或BLAST2.0測(cè)量，相同的或具有規(guī)定百分比的相同氨基酸殘基或核苷酸(即在比較窗或指定區(qū)里為了最大對(duì)應(yīng)性而比較和比對(duì)時(shí)，在規(guī)定區(qū)域里約50%同一1注，優(yōu)選地50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高的同一性)的兩種或更多種序列或亞序列。此定義包括具有缺失和/或添加的序列、以及那些具有取代的序列、以及天然存在的(例如多態(tài)性或等位)變體、和人工制備的變體。在優(yōu)選的算法中，如本領(lǐng)域中已知的，解決缺口等。對(duì)于序列比較，通常一種序列作用為與測(cè)試序列比較的參照序列。當(dāng)使用序列比較算法時(shí)，使測(cè)試和參照序列進(jìn)入計(jì)算機(jī)中，在必要時(shí)指定隨后的坐標(biāo)，并指定序列算法程序參數(shù)。優(yōu)選地，可以使用缺省程序參數(shù)或可以指定備選參數(shù)。然后，序列比較算法基于程序參數(shù)計(jì)算測(cè)試序列相對(duì)于參照序列的百分比序列同一性?？梢赃M(jìn)行比較序列的最佳比對(duì)，例如通過(guò)Smith&ffaterman,1981,Adv.App1.Math.2:482的局部同源性算法，通過(guò)Needleman&ffunsch,1970,J.Mol.Biol.48:443的同源性比對(duì)算法，通過(guò)Pearson&Lipman,1988,Proc.Nat，1.Acad.Sc1.USA85:2444的搜索相似性方法，通過(guò)這些算法的計(jì)算機(jī)化實(shí)現(xiàn)(WisconsinGenetics軟件包中的GAP,BESTFIT,FASTA和TFASTA,GeneticsComputerGroup,575ScienceDr.,Madison,ffis.),或通過(guò)手動(dòng)比對(duì)和視覺(jué)檢查來(lái)進(jìn)行。參見(jiàn)例如CurrentProtocolsinMolecularBiology(Ausubel等編1995增刊))。適合于測(cè)定百分比序列同一性和序列相似性的算法的優(yōu)選例子包括BLAST和BLAST2.0算法，其記載于Altschul等，1977，Nuc1.AcidsRes.25:3389-3402和Altschul等，1990，J.Mol.Biol.215:403-410。如本領(lǐng)域中已知的，使用BLAST和BLAST2.0來(lái)測(cè)定本發(fā)明的核酸和蛋白質(zhì)的百分比序列同一性。用于實(shí)施BLAST分析的軟件經(jīng)由國(guó)家生物技術(shù)信息中心(NationalCenterforBiotechnologyInformation)的網(wǎng)站公開(kāi)可獲得。此算法牽涉首先通過(guò)鑒定詢問(wèn)序列中長(zhǎng)度W的短詞來(lái)鑒定高得分序列對(duì)(HSP)，所述短詞在與數(shù)據(jù)庫(kù)序列中相同長(zhǎng)度的詞比對(duì)時(shí)匹配或滿足某一正值的閾值得分T。T稱為相鄰詞得分閾值(Altschul等，同前)。這些初始的相鄰詞命中(hits)作用為啟動(dòng)搜索以尋找含有它們的較長(zhǎng)HSP的種子。將詞命中沿著每條序列以兩個(gè)方向延伸，只要可以增加累積比對(duì)得分。例如對(duì)于核苷酸序列，使用參數(shù)M(—對(duì)匹配殘基的獎(jiǎng)勵(lì)得分；總是>0)和N(錯(cuò)配殘基的懲罰得分；總是〈O)來(lái)計(jì)算累積得分。對(duì)于氨基酸序列，使用評(píng)分矩陣來(lái)計(jì)算累積得分。在如下情況時(shí)停止每個(gè)方向的詞命中延伸:累積比對(duì)得分從其最大實(shí)現(xiàn)值下降數(shù)量X;由于一個(gè)或多個(gè)負(fù)評(píng)分殘基比對(duì)的積累，累積得分變?yōu)镺以下；或達(dá)到任一序列的末端。BLAST算法參數(shù)W、T和X決定比對(duì)的靈敏度和速度。BLASTN程序(對(duì)于核苷酸序列)使用字長(zhǎng)(W)為11，期望值(E)為10，M=5，N=-4和兩條鏈的比較作為缺省。對(duì)于氨基酸序列，BLASTP程序使用字長(zhǎng)為3，期望值(E)為10，和BL0SUM62評(píng)分矩陣(參見(jiàn)Henikoff&Henikoff,1989,Proc.Natl.Acad.Sc1.USA89:10915)比對(duì)(B)為50，期望值(E)為10，M=5，N=_4和兩條鏈的比較作為缺省。[0025]除非另外明確指出，術(shù)語(yǔ)“約”在數(shù)字值的背景中指數(shù)字值的+/_10%。[0026]術(shù)語(yǔ)“肽”和“多肽”在本文中所描述的化合物的背景中是同義的。[0027]瘦蛋白?！岸喾N瘦蛋白”和“一種瘦蛋白”分別意指:多種瘦蛋白、多種瘦蛋白活性片段、多種瘦蛋白類(lèi)似物、和多種瘦蛋白衍生物；和一種瘦蛋白、一種瘦蛋白活性片段、一種瘦蛋白類(lèi)似物、和一種瘦蛋白衍生物。因而，除非另外記載，提及“多種瘦蛋白”意為涵蓋多種瘦蛋白、多種瘦蛋白活性片段、多種瘦蛋白類(lèi)似物、和多種瘦蛋白衍生物，如本文中公開(kāi)的。類(lèi)似地，除非另外記載，提及“一種瘦蛋白”意為涵蓋一種瘦蛋白、一種瘦蛋白活性片段、一種瘦蛋白類(lèi)似物、和一種瘦蛋白衍生物，如本文中公開(kāi)的?？梢栽诒疚闹泄_(kāi)的嵌合多肽的設(shè)計(jì)、制備和使用中采用的例示性瘦蛋白包括如下那些瘦蛋白，其引發(fā)本領(lǐng)域中已知在對(duì)受試者施用瘦蛋白時(shí)引發(fā)的一種或多種生物學(xué)應(yīng)答(參見(jiàn)例如公布的美國(guó)專利申請(qǐng)N0.US2007/0020284和US2008/0207512,美國(guó)專利N0.6，309，853和US7,183，254，以及PCT公布的申請(qǐng)N0.W096/005309,W098/28427和W02009/064298)，如:食物攝取減少、體重減輕、體重增加減少、誘發(fā)過(guò)飽、熱量利用度降低、熱量效率降低、代謝平臺(tái)(plateau)降低、胰島素敏感性升高、高脂血癥減輕、改正血脂障礙、高甘油三酯血癥(hypertriglyceridemia)減輕、改善肥胖癥、改善超重、改善糖尿病(包括I型糖尿病、II型糖尿病和妊娠糖尿病)、改善胰島素抗性、改善其關(guān)聯(lián)的脂肪營(yíng)養(yǎng)不良狀況、以及本領(lǐng)域中已知在施用瘦蛋白后引發(fā)的其它生物學(xué)應(yīng)答(參見(jiàn)例如公布的美國(guó)專利申請(qǐng)N0.US2007/0020284和US2008/0207512,美國(guó)專利N0.6，309，853，和US7,183，254，以及PCT公布的申請(qǐng)N0.W096/005309,W098/28427,和W02009/064298)。[0028]瘦蛋白包括但不限于在下列專利中描述的化合物:美國(guó)專利N0.US5，594，101，US5,851，995，US5,691，309，US5,580，954，US5,554，727，US5,552，523，US5,559，208，US5，756，461，US6,309，853，公布的美國(guó)專利申請(qǐng)N0.US2007/0020284、和PCT公布的申請(qǐng)Nο.W096/23517,W096/005309,W098/28427,W02004/039832,W098/55139,W098/12224,和W097/02004，每篇完整并入本文并用于所有目的。在體外和體內(nèi)測(cè)定瘦蛋白活性和生物學(xué)應(yīng)答，包括過(guò)飽、食物攝取抑制活性和重量減輕活性的方法是本領(lǐng)域中已知的，并且記載于本文中及還在本文中引用的上述參考文獻(xiàn)和其它參考文獻(xiàn)中。[0029]代表性的瘦蛋白、瘦蛋白類(lèi)似物、瘦蛋白活性片段、和瘦蛋白衍生物包括下列各項(xiàng):[0030]成熟的鼠瘦蛋白:[0031]VPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHT-Xaa-SVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPQASGLETLESLGGVLEASGYSTEVVALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGC，其中第28位Xaa是Q或缺乏的(SEQIDNO:1)。[0032]成熟的鼠瘦蛋白形式1:[0033]VPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSAKQRVTGLDFIPGLHPILSLSKMDQTLAVYQQVLTSLPSQNVLQIANDLENLRDLLHLLAFSKSCSLPQTSGLQKPESLDGVLEASLYSTEVVALSRLQGSLQDILQQLDVSPEC(SEQIDNO:2)?[0034]成熟的鼠瘦蛋白形式2:[0035]VPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTSVSAKQRVTGLDFIPGLHPILSLSKMDQTLAVYQQVLTSLPSQNVLQIANDLENLRDLLHLLAFSKSCSLPQTSGLQKPESLDGVLEASLYSTEVVALSRLQGSLQDILQQLDVSPEC(SEQIDNO:3)?[0036]具有N端甲硫氨酸的成熟鼠瘦蛋白:[0037]MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHT-Xaa-SVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPQASGLETLESLGGVLEASGYSTEVVALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGC，其中第29位Xaa是Q或缺乏的(SEQIDNO:4)?[0038]具有N端甲硫氨酸的成熟鼠瘦蛋白形式1:[0039]MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSAKQRVTGLDFIPGLHPILSLSKMDQTLAVYQQVLTSLPSQNVLQIANDLENLRDLLHLLAFSKSCSLPQTSGLQKPESLDGVLEASLYSTEVVALSRLQGSLQDILQQLDVSPEC(SEQIDNO:5)?[0040]具有N端甲硫氨酸的成熟鼠瘦蛋白形式2:[0041]MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTSVSAKQRVTGLDFIPGLHPILSLSKMDQTLAVYQQVLTSLPSQNVLQIANDLENLRDLLHLLAFSKSCSLPQTSGLQKPESLDGVLEASLYSTEVVALSRLQGSLQDILQQLDVSPEC(SEQIDNO:6)?[0042]成熟的豬瘦蛋白:[0043]VPIWRVQDDTKTLIKTIVTRISDISHMQSVSSKQRVTGLDFIPGLHPVLSLSKMDQTLAIYQQILTSLPSRNVIQISNDLENLRDLLHLLASSKSCPLPQARALETLESLGGVLEASLYSTEVVALSRLQGALQDMLRQLDLSPGC(SEQIDNO:7)?[0044]具有N端甲硫氣酸的成熟豬瘦蛋白:[0045]MVPIWRVQDDTKTLIKTIVTRISDISHMQSVSSKQRVTGLDFIPGLHPVLSLSKMDQTLAIYQQILTSLPSRNVIQISNDLENLRDLLHLLASSKSCPLPQARALETLESLGGVLEASLYSTEVVALSRLQGALQDMLRQLDLSPGC(SEQIDNO:8)。[0046]成熟的牛瘦蛋白:[0047]VPICKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHT-Xaa-SVSSKQRVTGLDFIPGLHPLLSLSKMDQTLAIYQQILTSLPSRNVVQISNDLENLRDLLHLLAASKSCPLPQVRALESLESLGVVLEASLYSTEVVALSRLQGSLQDMLRQLDLSPGC，其中第28位Xaa是Q或缺乏的(SEQIDNO:9)?[0048]具有N端甲硫氨酸的成熟牛瘦蛋白:[0049]MVPICKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHT-Xaa-SVSSKQRVTGLDFIPGLHPLLSLSKMDQTLAIYQQILTSLPSRNVVQISNDLENLRDLLHLLAASKSCPLPQVRALESLESLGVVLEASLYSTEVVALSRLQGSLQDMLRQLDLSPGC，其中第29位Xaa是Q或缺乏的(SEQIDNO:10)。[0050]未加工的全長(zhǎng)人瘦蛋白(即包含21個(gè)殘基的N端信號(hào)序列):[0051]MHWGTLCGFLWLWPYLFYVQAVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASGYSTEVVALSRLQGSLQDMLffQLDLSPGC(SEQIDNO:11)[0052]成熟的人瘦蛋白(除去N端21個(gè)氨基酸的信號(hào)序列):[0053]VPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISH-Xaa-Xaa-SVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASGYSTEVVALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC，其中第27位Xaa是T或A;且第28位Xaa是Q或缺乏的(SEQIDNO:12)。[0054]具有N端甲硫氨酸的成熟人瘦蛋白:[0055]MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISH-Xaa-Xaa-SVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASGYSTEVVALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC，其中第28位Xaa是T或A;且第29位Xaa是Q或缺乏的(SEQIDNO:13)。[0056]成熟的獼猴瘦蛋白:[0057]VPIQKVQSDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQRVTGLDFIPGLHPVLTLSQMDQTLAIYQQILINLPSRNVIQISNDLENLRDLLHLLAFSKSCHLPLASGLETLESL⑶VLEASLYSTEVVALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC(SEQIDNO:14)。[0058]具有N端甲硫氨酸的成熟的獼猴瘦蛋白:[0059]MVPIQKVQSDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQRVTGLDFIPGLHPVLTLSQMDQTLAIYQQILINLPSRNVIQISNDLENLRDLLHLLAFSKSCHLPLASGLETLESLGDVLEASLYSTEVVALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC(SEQIDN0:15)。[0060]成熟的大鼠瘦蛋白:[0061]VPIHKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSARQRVTGLDFIPGLHPILSLSKMDQTLAVYQQILTSLPSQNVLQIAHDLENLRDLLHLLAFSKSCSLPQTRGLQKPESLDGVLEASLYSTEVVALSRLQGSLQDILQQLDLSPEC(SEQIDNO:16)。[0062]具有N端甲硫氨酸的成熟的大鼠瘦蛋白:[0063]MVPIHKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSARQRVTGLDFIPGLHPILSLSKMDQTLAVYQQILTSLPSQNVLQIAHDLENLRDLLHLLAFSKSCSLPQTRGLQKPESLDGVLEASLYSTEVVALSRLQGSLQDILQQLDLSPEC(SEQIDNO:17)?[0064]成熟的鴨嘴獸瘦蛋白:成熟的鴨嘴獸瘦蛋白序列如下:[0065]ISIEKIQADTKTLTKTIITRIIQLSTQNGVSTDQRVSGLDFIPGNQQFQNLADMDQTLAVYQQILSSLPMPDRTQISNDLENLRSLFALLATLKNCPFTRSDGLDTMEIWGGIVEESLYSTEVVTLDRLRKSLKNIEKQLDHIQG(SEQIDNO:18)。[0066]未加工的全長(zhǎng)鴨嘴獸瘦蛋白(即包含21個(gè)殘基的N端信號(hào)序列):包含21個(gè)殘基的N端信號(hào)序列的鴨嘴獸瘦蛋白的全長(zhǎng)序列如下:[0067]MRCILLYGFLCVffQHLYYSHPISIEKIQADTKTLTKTIITRIIQLSTQNGVSTDQRVSGLDFIPGNQQFQNLADMDQTLAVYQQILSSLPMPDRTQISNDLENLRSLFALLATLKNCPFTRSDGLDTMEIWGGIVEESLYSTEVVTLDRLRKSLKNIEKQLDHIQG(SEQIDNO:19)。[0068]成熟的人瘦蛋白形式1:[0069]VPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASGYSTEVVALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC(SEQIDNO:20)。[0070]成熟的人瘦蛋白形式2:[0071]VPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHAQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASGYSTEVVALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC(SEQIDN0:21)。[0072]成熟的人瘦蛋白形式3:[0073]VPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASGYSTEVVALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC(SEQIDNO:22)。[0074]成熟的人瘦蛋白形式4:[0075]VPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHASVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASGYSTEVVALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC(SEQIDNO:23)。[0076]具有N端甲硫氨酸的成熟的人瘦蛋白形式I(也稱為美曲普汀[0077](Metreletpin),或A100):[0078]MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASGYSTEVVALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC(SEQIDNO:24)。[0079]具有N端甲硫氨酸的成熟的人瘦蛋白形式2:[0080]MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHAQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASGYSTEVVALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC(SEQIDNO:25)。[0081]具有N端甲硫氨酸的成熟的人瘦蛋白形式3:[0082]MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASGYSTEVVALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC(SEQIDNO:26)。[0083]具有N端甲硫氨酸的成熟的人瘦蛋白形式4:[0084]MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHASVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASGYSTEVVALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC(SEQIDNO:27)。[0085]海豹瘦蛋白:[0086]PIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISPPQGVCSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQQILTSLQSRSVVQIANDLANLRALLRLLASAKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASVHSTEVVALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC(SEQIDNO:28)。[0087]氨基酸71-92用美曲普汀的氨基酸73-94(螺旋3)替換的海豹瘦蛋白:[0088]PIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISPPQGVCSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQQILTSLQSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASVHSTEVVALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC(SEQIDNO:29)。[0089]氨基酸30和71-92分別用美曲普汀的氨基酸32和73_94(螺旋3)替換的海豹瘦蛋白:[0090]PIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISPPQGVSSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQQILTSLQSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASVHSTEVVALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC(SEQIDNO:30)。[0091]具有N端甲硫氨酸的海豹瘦蛋白:[0092]MPIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISPPQGVCSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQQILTSLQSRSVVQIANDLANLRALLRLLASAKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASVHSTEVVALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC(SEQIDN0:31)。[0093]具有N端甲硫氨酸，且氨基酸71-92用美曲普汀的氨基酸73_94(螺旋3)替換的海豹瘦蛋白:[0094]MPIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISPPQGVCSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQQILTSLQSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASVHSTEVVALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC(SEQIDNO:32)。[0095]具有N端甲硫氨酸，且氨基酸30和71-92分別用美曲普汀的氨基酸32和73-94(螺旋3)替換的海豹瘦蛋白:[0096]MPIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISPPQGVSSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQQILTSLQSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASVHSTEVVALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC(SEQIDNO:33)。[0097]瘦蛋白A200:瘦蛋白A200是Fe抗體片段與瘦蛋白的縮合產(chǎn)物，如本領(lǐng)域中已知的。參見(jiàn)例如Lo等，2005，ProteinEng.Design&Selection,18:1-10。A200的氨基酸序列如下:[0098]MDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASGYSTEVVALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC(SEQIDNO:34)[0099]瘦蛋白A300:瘦蛋白A300是具有取代WlOlQ和W139Q(N端1Met以殘基I計(jì)數(shù))的美曲普汀:[0100]MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPQASGLETLDSLGGVLEASGYSTEVVALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGC(SEQIDNO:35)。[0101]瘦蛋白A400:瘦蛋白A400是第78位絲氨酸殘基用半胱氨酸殘基替換的美曲普汀，如下文列出的:[0102]MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQICNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASGYSTEVVALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC(SEQIDNO:36);其已經(jīng)經(jīng)由第78位半胱氨酸殘基附接有20千道爾頓(kDa)PEG模塊。[0103]瘦蛋白A500:包括發(fā)明人在內(nèi)的許多調(diào)查人員的研究聚焦于瘦蛋白中的殘基取代對(duì)聚集的影響。參見(jiàn)例如Ricci等，2006.“Mutationalapproachto[0104]improvephysicalstabilityofproteintherapeuticssusceptibletoaggregation:Roleofalteredconformationinirreversibleprecipitation,”書(shū)早.于.:MisbehavingPeoteins:Peotein(Mis)Folding,Aggregation,ANDStability,MurphyRM,TsaiAMHe,NewYork.Springer.第331頁(yè)-第350頁(yè),其通過(guò)提述并入本文并用于所有目的。因而,在本文中描述的某些化合物和方法中使用了具有以下序列的瘦蛋白A500:[0105]MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPQASGLETLESLGGVLEASGYSTEVVALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGC(SEQIDNO:37)。[0106]瘦蛋白AlOO變體:具有下列氨基酸取代的瘦蛋白A100變體如下:[0107]D41E,H98S,W101Q,D109E,G113E,M137I,W139Q和G146E:[0108]MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLEFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCSLPQASGLETLESLGEVLEASGYSTEVVALSRLQGSLQDILQQLDLSPEC(SEQIDNO:38)。[0109]H98S,W101Q,A102T,G113E,M137I,W139Q，和G146E:[0110]MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCSLPQASGLETLDSLGGVLEASGYSTEVVALSRLQGSLQDILQQLDLSPEC(SEQIDNO:39)。[0111]H98S,W101Q,G113E,M137I,W139Q,G146E:[0112]MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCSLPQASGLETLDSLGEVLEASGYSTEVVALSRLQGSLQDILQQLDLSPEC(SEQIDNO:40)。[0113]W101Q,G113E,M137I,W139Q,G146E:[0114]MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPQASGLETLDSLGEVLEASGYSTEVVALSRLQGSLQDILQQLDLSPEC(SEQIDNO:41)。[0115]H98S,W101Q,M137I,W139Q,G146E:[0116]MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCSLPQASGLETLDSLGGVLEASGYSTEVVALSRLQGSLQDILQQLDLSPEC(SEQIDNO:42)。[0117]W101Q,G113E,M137I,W139Q,L143V，和G146E:[0118]MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPQASGLETLDSLGEVLEASGYSTEVVALSRLQGSLQDILQQLDVSPEC(SEQIDNO:43)。[0119]H98S,W101Q,A102T,M137I,W139Q,G146E:[0120]MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCSLPQTSGLETLDSLGGVLEASGYSTEVVALSRLQGSLQDILQQLDLSPEC(SEQIDNO:44)。[0121]H98S,W101Q,D109E,G113E，和G146E:[0122]MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCSLPQASGLETLESLGEVLEASGYSTEVVALSRLQGSLQDMLWQLDLSPEC(SEQIDNO:45)。[0123]W101Q，M137I,W139Q，和G146E:[0124]MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPQASGLETLDSLGGVLEASGYSTEVVALSRLQGSLQDILQQLDLSPEC(SEQIDNO:46)。[0125]W101Q,M137I,W139Q,L143V，和G146E:[0126]MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPQASGLETLDSLGGVLEASGYSTEVVALSRLQGSLQDILQQLDVSPEC(SEQIDNO:47)。[0127]H98S,W101Q,A102T,M137I,W139Q,L143V，和G146E:[0128]MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCSLPQTSGLETLDSLGGVLEASGYSTEVVALSRLQGSLQDILQQLDVSPEC(SEQIDNO:48)。[0129]H98S,W101Q,A102T,G113E，和G146E:[0130]MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCSLPQTSGLETLDSLGEVLEASGYSTEVVALSRLQGSLQDMLWQLDLSPEC(SEQIDNO:49)。[0131]W101Q，G113E，和W139Q:[0132]MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPQASGLETLDSLGEVLEASGYSTEVVALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGC(SEQIDNO:50)。[0133]W101Q,G113E,W139Q，和G146E:[0134]MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPQASGLETLDSLGEVLEASGYSTEVVALSRLQGSLQDMLQQLDLSPEC(SEQIDN0:51)。[0135]I1.嵌合多肽[0136]在本公開(kāi)內(nèi)容的一個(gè)方面，描述了一系列嵌合多肽。這些嵌合多肽基于野生型海豹瘦蛋白多肽，其中野生型海豹瘦蛋白序列的至少一個(gè)1-30個(gè)氨基酸的連續(xù)區(qū)用成熟人瘦蛋白序列的1-30個(gè)氨基酸的連續(xù)區(qū)替換。野生型海豹瘦蛋白序列包括野生型海豹瘦蛋白的序列(SEQIDNO:28)和具有N端甲硫氨酸的野生型海豹瘦蛋白的序列(SEQIDN0:31)。可用于嵌合化如本文中提供的野生型海豹瘦蛋白的成熟人瘦蛋白序列包含上文所描述的以下序列:成熟的人瘦蛋白(SEQIDNO:12)、具有N端甲硫氨酸的成熟人瘦蛋白(SEQIDNO:13)、成熟的人瘦蛋白形式I(SEQIDNO:20)、成熟的人瘦蛋白形式2(SEQIDN0:21)、成熟的人瘦蛋白形式3(SEQIDNO:22)、成熟的人瘦蛋白形式4(SEQIDN0:23)、具有N端甲硫氨酸的成熟的人瘦蛋白形式1(美曲普汀，或A100，SEQIDN0:24)、具有N端甲硫氨酸的成熟的人瘦蛋白形式2(SEQIDN0:25)、具有N端甲硫氨酸的成熟的人瘦蛋白形式3(SEQIDN0:26)、具有N端甲硫氨酸的成熟的人瘦蛋白形式4(SEQIDNO:27),A200(SEQIDN0:34),A300(SEQIDNO:35)，A400(SEQIDNO:36)，A500(SEQIDNO:37)，和AlOO變體(SEQIDNO:38-51)?在一些實(shí)施方案中，描述了一系列嵌合多肽，其中野生型海豹瘦蛋白序列(SEQIDN0.28或SEQIDN0:31)的至少一個(gè)1_30個(gè)氨基酸的連續(xù)區(qū)已經(jīng)用AlOO(SEQIDN0.24)的1-30個(gè)氨基酸的連續(xù)區(qū)替換。[0137]在任何公開(kāi)的嵌合多肽中，1-30個(gè)氨基酸的連續(xù)區(qū)可以包含任何天然或非天然存在的氨基酸?？梢詿o(wú)限制地采用任意氨基酸組合。也就是說(shuō)，連續(xù)區(qū)中的兩個(gè)或更多個(gè)氨基酸可以用天然存在的氨基酸、非天然存在的氨基酸、保守取代、非保守取代或其任意組合替換。[0138]在增強(qiáng)的物理特性外，本文中所描述的嵌合多肽已經(jīng)表明生物學(xué)活性。例如，海豹-人嵌合多肽在體外和體內(nèi)顯示瘦蛋白活性。如實(shí)施例所顯示的，嵌合多肽與用于衍生該序列的成熟人瘦蛋白多肽相比顯示增強(qiáng)的穩(wěn)定性和溶解度。[0139]術(shù)語(yǔ)“瘦蛋白活性”包括瘦蛋白結(jié)合活性和瘦蛋白功能活性。使用適合于測(cè)量瘦蛋白結(jié)合或瘦蛋白功能活性的測(cè)定法，熟練技術(shù)人員會(huì)識(shí)別出具有瘦蛋白活性的瘦蛋白類(lèi)似物化合物。瘦蛋白類(lèi)似物化合物在瘦蛋白結(jié)合測(cè)定法，諸如本文中描述的瘦蛋白結(jié)合測(cè)定法中可以具有約200nM或更小、約IOOnM或更小、或約50nM或更小、或約5nM或更小、或約InM或更小的IC5(I。術(shù)語(yǔ)“IC5(I”在習(xí)慣意義中指抑制生物學(xué)或生化功能的化合物的半最大抑制濃度。因而，在受體結(jié)合研究的背景中，IC5tl指與規(guī)定受體競(jìng)爭(zhēng)已知配體的一半的測(cè)試化合物濃度。瘦蛋白類(lèi)似物化合物在瘦蛋白功能測(cè)定法，諸如本文中描述的瘦蛋白功能測(cè)定法中可以具有約20nM或更小、約IOnM或更小、約5nM或更小、約InM或更小、或約0.1nM或更小的EC5(i。術(shù)語(yǔ)“EC5(i”在習(xí)慣意義中指誘導(dǎo)介于基線響應(yīng)和最大響應(yīng)之間的中間響應(yīng)的化合物有效濃度，如本領(lǐng)域中已知的。[0140]A.摻入人螺旋I的嵌合多肽[0141]成熟的人瘦蛋白多肽的螺旋I區(qū)跨越20個(gè)氨基酸的連續(xù)區(qū)。螺旋I和螺旋3是形成瘦蛋白中針對(duì)其受體的結(jié)合位點(diǎn)II的一部分的反向平行螺旋。此位點(diǎn)與瘦蛋白受體的細(xì)胞因子受體同源域(CRH)相互作用，并且認(rèn)為是一種主要的受體結(jié)合位點(diǎn)，但不牽涉受體激活。參見(jiàn)例如Peelman等，2004，J.Biol.Chem.279:41038.[0142]在一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容涉及嵌合多肽，其基于野生型海豹瘦蛋白及摻入的來(lái)自成熟人瘦蛋白的螺旋I序列。在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含野生型海豹瘦蛋白多肽的氨基酸序列(SEQIDNO:28)，其中跨越SEQIDNO:28位置第3位-第22位氨基酸的連續(xù)區(qū)已經(jīng)用跨越AlOO(SEQIDNO:24)的第5位-第24位氨基酸的連續(xù)區(qū)替換。在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含SEQIDNO:52中描述的序列:[0143]氨基酸3-22分別用美曲普汀的氨基酸5-24(螺旋I)替換的海豹瘦蛋白=PIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISPPQGVCSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQQILTSLQSRSVVQIANDLANLRALLRLLASAKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASVHSTEVVALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC(SEQIDNO:52)。[0144]在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含具有N端甲硫氨酸的野生型海豹瘦蛋白多肽的氨基酸序列(SEQIDNO:31)，其中跨越SEQIDNO:31的第3位-第22位氨基酸的連續(xù)區(qū)已經(jīng)用跨越AlOO(SEQIDNO:24)的第5位-第24位氨基酸的連續(xù)區(qū)替換。在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含SEQIDNO:53中描述的序列:[0145]具有N端甲硫氨酸，且氨基酸3-22分別用美曲普汀的氨基酸5-24(螺旋I)替換的海豹瘦蛋白:[0146]MPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISPPQGVCSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQQILTSLQSRSVVQIANDLANLRALLRLLASAKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASVHSTEVVALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC(SEQIDNO:53)。[0147]B.摻入人螺旋2的嵌合多肽[0148]成熟的人瘦蛋白多肽的螺旋2區(qū)跨越16個(gè)連續(xù)氨基酸的區(qū)。此螺旋埋藏于4-螺旋束中，如記載于Zhang等(Naturel997387:206)的最初晶體結(jié)構(gòu)論文中的。[0149]在一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容涉及嵌合多肽，其基于野生型海豹瘦蛋白及摻入的來(lái)自成熟人瘦蛋白的螺旋2序列。在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含野生型海豹瘦蛋白多肽的氨基酸序列(SEQIDNO:28)，其中跨越SEQIDNO:28的第50位-第65位氨基酸的連續(xù)區(qū)已經(jīng)用跨越AlOO(SEQIDNO:24)的第52位-第67位的氨基酸的連續(xù)區(qū)替換。在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含SEQIDNO:54中描述的序列:[0150]氨基酸50-65分別用美曲普汀的氨基酸52-67(螺旋2)替換的海豹瘦蛋白:PIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISPPQGVCSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSKMDQTLAVYQQILTSLQSRSVVQIANDLANLRALLRLLASAKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASVHSTEVVALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC(SEQIDNO:54)。[0151]在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含具有N端甲硫氨酸的野生型海豹瘦蛋白多肽的氨基酸序列(SEQIDNO:31)，其中跨越SEQIDNO:31的第50位-第65位氨基酸的連續(xù)區(qū)已經(jīng)用跨越AlOO(SEQIDNO:24)的第52位-第67位氨基酸的連續(xù)區(qū)替換。在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含SEQIDNO:55中描述的序列:[0152]具有N端甲硫氨酸，且氨基酸50-65分別用美曲普汀的氨基酸52_67(螺旋2)替換的海豹瘦蛋白:[0153]MPIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISPPQGVCSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSKMDQTLAVYQQILTSLQSRSVVQIANDLANLRALLRLLASAKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASVHSTEVVALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC(SEQIDNO:55)。[0154]C.摻入人螺旋3的嵌合多肽[0155]成熟的人瘦蛋白多肽的螺旋3區(qū)跨越22個(gè)氨基酸的連續(xù)區(qū)。螺旋3和螺旋I是形成瘦蛋白中針對(duì)其受體的結(jié)合位點(diǎn)II的一部分的反向平行螺旋。此位點(diǎn)與瘦蛋白受體的細(xì)胞因子受體同源域(CRH)相互作用，并且認(rèn)為是一種主要的受體結(jié)合位點(diǎn)，但不牽涉受體激活。參見(jiàn)例如Peelman等，2004，J.Biol.Chem.279:41038。[0156]在一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容涉及嵌合多肽，其基于野生型海豹瘦蛋白及摻入的來(lái)自成熟的人瘦蛋白的螺旋3序列。在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含野生型海豹瘦蛋白多肽的氨基酸序列(SEQIDNO:28)，其中跨越SEQIDNO:28的第71位-第92位氨基酸的連續(xù)區(qū)已經(jīng)用跨越AlOO(SEQIDNO:24)的第73位-第94位氨基酸替換。在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含SEQIDNO:29中描述的序列:[0157]氨基酸71-92分別用美曲普汀的氨基酸73-94(螺旋3)替換的海豹瘦蛋白:PIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISPPQGVCSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQQILTSLQSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASVHSTEVVALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC(SEQIDNO:29)。[0158]在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含具有N端甲硫氨酸的野生型海豹瘦蛋白多肽的氨基酸序列(SEQIDNO:31)，其中跨越SEQIDNO:31的第71位-第92位氨基酸的連續(xù)區(qū)已經(jīng)用跨越AlOO(SEQIDNO:24)的第73位-第94位氨基酸的連續(xù)區(qū)替換。在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含在SEQIDNO:32中描述的序列:[0159]具有N端甲硫氨酸，且氨基酸71-92分別用美曲普汀的氨基酸73_94(螺旋3)替換的海豹瘦蛋白:[0160]MPIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISPPQGVCSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQQILTSLQSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASVHSTEVVALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC(SEQIDNO:32)。[0161]D.摻入人螺旋4的嵌合多肽[0162]成熟的人瘦蛋白多肽的螺旋4區(qū)跨越22個(gè)氨基酸的連續(xù)區(qū)。認(rèn)為螺旋4形成瘦蛋白的結(jié)合位點(diǎn)I和結(jié)合位點(diǎn)III的部分，這兩種結(jié)合位點(diǎn)對(duì)受體激活都是重要的。參見(jiàn)例如Peelman等，2004，J.Biol.Chem.279:41038。[0163]在一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容涉及嵌合多肽，其基于野生型海豹瘦蛋白及摻入的來(lái)自成熟人瘦蛋白的螺旋4序列。在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含野生型海豹瘦蛋白多肽的氨基酸序列(SEQIDNO:28)，其中跨越SEQIDNO:28的第120位-第141位氨基酸的連續(xù)區(qū)已經(jīng)用跨越AlOO(SEQIDNO:24)的第122位-第143位氨基酸的連續(xù)區(qū)替換。在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含在SEQIDNO:56中描述的序列:[0164]氨基酸120-141分別用美曲普汀的氨基酸122-143(螺旋4)替換的海豹瘦蛋白:[0165]PIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISPPQGVCSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQQILTSLQSRSVVQIANDLANLRALLRLLASAKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASVHSTEVVALSRLQGSLQDMLWQLDLNPGC(SEQIDNO:56)。[0166]在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含具有N端甲硫氨酸的野生型海豹瘦蛋白多肽的氨基酸序列(SEQIDNO:31)，其中跨越SEQIDNO:31的第120位-第141位氨基酸的連續(xù)區(qū)已經(jīng)用跨越AlOO(SEQIDNO:24)的第122位-第143位氨基酸的連續(xù)區(qū)替換。在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含在SEQIDNO:57中描述的序列:[0167]具有N端甲硫氨酸，且氨基酸120-141分別用美曲普汀的氨基酸122-143(螺旋4)替換的海豹瘦蛋白:[0168]MPIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISPPQGVCSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQQILTSLQSRSVVQIANDLANLRALLRLLASAKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASVHSTEVVALSRLQGSLQDMLWQLDLNPGC(SEQIDNO:57)。[0169]E.摻入人AB環(huán)的嵌合多肽[0170]成熟的人瘦蛋白多肽的AB環(huán)區(qū)跨越27個(gè)氨基酸的連續(xù)區(qū)。認(rèn)為AB環(huán)形成瘦蛋白中結(jié)合位點(diǎn)III的部分以及瘦蛋白結(jié)合位點(diǎn)I的小部分。參見(jiàn)例如Peelman等，2004,J.Biol.Chem.279:41038。該區(qū)還含有絕對(duì)保守的基序GLDFIP。[0171]在一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容涉及嵌合多肽，其基于野生型海豹瘦蛋白及摻入的來(lái)自成熟人瘦蛋白的AB環(huán)序列。在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含野生型海豹瘦蛋白多肽的氨基酸序列(SEQIDNO:28)，其中跨越SEQIDNO:28的第23位-第49位氨基酸的連續(xù)區(qū)已經(jīng)用跨越AlOO(SEQIDNO:24)的第25位-第51位氨基酸的連續(xù)區(qū)替換。在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含在SEQIDNO:58中描述的序列:[0172]氨基酸23-49分別用美曲普汀的氨基酸25-51(AB環(huán))替換的海豹瘦蛋白:PIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSGMDQILATYQQILTSLQSRSVVQIANDLANLRALLRLLASAKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASVHSTEVVALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC(SEQIDNO:58)。[0173]在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含具有N端甲硫氨酸的野生型海豹瘦蛋白多肽的氨基酸序列(SEQIDNO:31)，其中跨越SEQIDNO:31的第23位-第49位氨基酸的連續(xù)區(qū)已經(jīng)用跨越AlOO(SEQIDNO:24)的第25位-第51位氨基酸的連續(xù)區(qū)替換。在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含在SEQIDNO:59中描述的序列:[0174]具有N端甲硫氨酸，且氨基酸23-49分別用美曲普汀的氨基酸25_51(AB環(huán))替換的海豹瘦蛋白:[0175]MPIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSGMDQILATYQQILTSLQSRSVVQIANDLANLRALLRLLASAKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASVHSTEVVALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC(SEQIDNO:59)。[0176]F.摻入人環(huán)3-4的嵌合多肽[0177]成熟的人瘦蛋白多肽的環(huán)3-4區(qū)跨越27個(gè)氨基酸的連續(xù)區(qū)。認(rèn)為環(huán)3_4含有瘦蛋白中針對(duì)其受體的結(jié)合位點(diǎn)III的一部分。參見(jiàn)例如Peelman等，2004，J.Biol.Chem.279:41038。[0178]在一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容涉及嵌合多肽，其基于野生型海豹瘦蛋白及摻入的來(lái)自成熟人瘦蛋白的環(huán)3-4序列。在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含野生型海豹瘦蛋白多肽的氨基酸序列(SEQIDNO:28)，其中跨越SEQIDNO:28的第93位-第119位氨基酸的連續(xù)區(qū)已經(jīng)用跨越AlOO(SEQIDNO:24)的第95位-第121位氨基酸的連續(xù)區(qū)替換。在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含在SEQIDNO:60中描述的序列:[0179]氨基酸93-119分別用美曲普汀的氨基酸95-121(環(huán)3-4)替換的海豹瘦蛋白:[0180]PIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISPPQGVCSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQQILTSLQSRSVVQIANDLANLRALLRLLASAKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASGYSTEVVALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC(SEQIDNO:60)。[0181]在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含具有N端甲硫氨酸的野生型海豹瘦蛋白多肽的氨基酸序列(SEQIDNO:31)，其中跨越SEQIDNO:31的第93位-第119位氨基酸的連續(xù)區(qū)已經(jīng)用跨越AlOO(SEQIDNO:24)的第95位-第121位氨基酸的連續(xù)區(qū)替換。在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含在SEQIDN0:61中描述的序列:[0182]具有N端甲硫氨酸，且氨基酸93-119分別用美曲普汀的氨基酸95-121(環(huán)3_4)替換的海豹瘦蛋白:[0183]MPIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISPPQGVCSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQQILTSLQSRSVVQIANDLANLRALLRLLASAKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASGYSTEVVALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC(SEQIDN0:61)。[0184]G.嵌合組合多肽[0185]在本公開(kāi)內(nèi)容的另一個(gè)方面，描述了一系列嵌合組合多肽。這些嵌合組合多肽基于野生型海豹瘦蛋白多肽，其中野生型海豹瘦蛋白序列(例如SEQIDN0:28或SEQIDN0:31)的兩個(gè)或更多個(gè)1-30個(gè)氨基酸的連續(xù)區(qū)已經(jīng)在每個(gè)區(qū)用成熟人瘦蛋白序列的1-30個(gè)氨基酸的連續(xù)區(qū)替換?？梢怨こ袒脑烨逗辖M合多肽，以在保留人瘦蛋白生物學(xué)活性的情況中與用于衍生該序列的成熟人瘦蛋白多肽相比表明增強(qiáng)的物理特性。[0186]在一些實(shí)施方案中，本公開(kāi)內(nèi)容涉及嵌合多肽，其基于野生型海豹瘦蛋白及來(lái)自成熟人瘦蛋白的摻入螺旋I序列和摻入螺旋3序列。在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含野生型海豹瘦蛋白多肽(SEQIDNO:28)的氨基酸序列，其中跨越SEQIDN0:28的第3位-第22位氨基酸的連續(xù)區(qū)已經(jīng)用跨越AlOO(SEQIDNO:24)的第5位-第24位氨基酸的連續(xù)區(qū)替換，且跨越SEQIDNO:28的第71位-第92位氨基酸的連續(xù)區(qū)已經(jīng)用跨越AlOO(SEQIDNO:24)的第73位-第94位氨基酸的連續(xù)區(qū)替換。在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含在SEQIDNO:62中描述的序列:[0187]氨基酸3-22分別用美曲普汀的氨基酸5-24(螺旋I)替換，且氨基酸71_92分別用美曲普汀的氨基酸73-94(螺旋3)替換的海豹瘦蛋白:[0188]PIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISPPQGVCSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQQILTSLQSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASVHSTEVVALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC(SEQIDNO:62)[0189]在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含具有N端甲硫氨酸的野生型海豹瘦蛋白多肽的氨基酸序列(SEQIDNO:31)，其中跨越SEQIDNO:31的第3位-第22位氨基酸的連續(xù)區(qū)已經(jīng)用跨越A100(SEQIDNO:24)的第5位-第24位氨基酸的連續(xù)區(qū)替換，且跨越SEQIDN0:31的第71位-第92位氨基酸的連續(xù)區(qū)已經(jīng)用跨越A100(SEQIDNO:24)的第73位-第94位氨基酸的連續(xù)區(qū)替換。在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含在SEQIDN0:63中描述的序列:[0190]具有N端甲硫氨酸，且氨基酸3-22分別用美曲普汀的氨基酸5-24(螺旋I)替換，以及氨基酸72-93分別用美曲普汀的氨基酸73-94(螺旋3)替換的海豹瘦蛋白:[0191]MPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISPPQGVCSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQQILTSLQSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASVHSTEVVALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC(SEQIDNO:63)[0192]在一些實(shí)施方案中，本公開(kāi)內(nèi)容涉及嵌合多肽，其基于野生型海豹瘦蛋白及來(lái)自成熟人瘦蛋白的摻入螺旋3序列和摻入AB環(huán)序列。在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含野生型海豹瘦蛋白多肽的氨基酸序列(SEQIDNO:28)，其中跨越SEQIDN0:28的第71位-第92位氨基酸的連續(xù)區(qū)已經(jīng)用跨越AlOO(SEQIDNO:24)的第73位-第94位氨基酸的連續(xù)區(qū)替換，且跨越SEQIDNO:28的第23位-第49位氨基酸的連續(xù)區(qū)已經(jīng)用跨越AlOO(SEQIDNO:24)的第25位-第51位氨基酸的連續(xù)區(qū)替換。在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含在SEQIDNO:64中描述的序列:[0193]氨基酸71-92分別用美曲普汀的氨基酸73-94(螺旋3)替換，且氨基酸23_49分別用美曲普汀的氨基酸25-51(AB環(huán))替換的海豹瘦蛋白:[0194]PIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSGMDQILATYQQILTSLQSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASVHSTEVVALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC(SEQIDNO:64)[0195]在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含具有N端甲硫氨酸的野生型海豹瘦蛋白多肽的氨基酸序列(SEQIDNO:31)，其中跨越SEQIDNO:31的第71位-第92位氨基酸的連續(xù)區(qū)已經(jīng)用跨越AlOO(SEQIDNO:24)的第73位-第94位氨基酸的連續(xù)區(qū)替換，且跨越SEQIDNO:31的第23位-第49位氨基酸的連續(xù)區(qū)已經(jīng)用跨越AlOO(SEQIDN0:24)的第25位-第51位氨基酸的連續(xù)區(qū)替換。在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含在SEQIDN0:65中描述的序列:[0196]具有N端甲硫氨酸，且氨基酸71-92分別用美曲普汀的氨基酸73_94(螺旋3)替換，以及氨基酸23-49分別用美曲普汀的氨基酸25-51(AB環(huán))替換的海豹瘦蛋白:[0197]MPIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSGMDQILATYQQILTSLQSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASVHSTEVVALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC(SEQIDNO:65)[0198]在一些實(shí)施方案中，本公開(kāi)內(nèi)容涉及嵌合多肽，其基于野生型海豹瘦蛋白及來(lái)自成熟人瘦蛋白的摻入螺旋3序列和摻入環(huán)3-4序列。在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含野生型海豹瘦蛋白多肽的氨基酸序列(SEQIDNO:28)，其中跨越SEQIDN0:28的第71位-第92位氨基酸的連續(xù)區(qū)已經(jīng)用跨越AlOO(SEQIDNO:24)的第73位-第94位氨基酸的連續(xù)區(qū)替換，且跨越SEQIDN0:28的第93位-第119位氨基酸的連續(xù)區(qū)已經(jīng)用跨越A100(SEQIDNO:24)的第95位-第121位氨基酸的連續(xù)區(qū)替換。在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含在SEQIDNO:66中描述的序列:[0199]氨基酸71-92分別用美曲普汀的氨基酸73-94(螺旋3)替換，且氨基酸93-119分別用美曲普汀的氨基酸95-121(環(huán)3-4)替換的海豹瘦蛋白:[0200]PIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISPPQGVCSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQQILTSLQSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASGYSTEVVALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC(SEQIDNO:66)[0201]在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含具有N端甲硫氨酸的野生型海豹瘦蛋白多肽的氨基酸序列(SEQIDNO:31)，其中跨越SEQIDNO:31的第71位-第92位氨基酸的連續(xù)區(qū)已經(jīng)用跨越AlOO(SEQIDNO:24)的第73位-第94位氨基酸的連續(xù)區(qū)替換，且跨越SEQIDN0:31的第93位-第119位氨基酸的連續(xù)區(qū)已經(jīng)用跨越A100(SEQIDNO:24)的第95位-第121位氨基酸的連續(xù)區(qū)替換。在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含在SEQIDN0:67中描述的序列:[0202]具有N端甲硫氨酸，且氨基酸71-92分別用美曲普汀的氨基酸73_94(螺旋3)替換，以及氨基酸93-119分別用美曲普汀的氨基酸95-121(環(huán)3-4)替換的海豹瘦蛋白:[0203]MPIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISPPQGVCSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQQILTSLQSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASGYSTEVVALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC(SEQIDNO:67)[0204]在一些實(shí)施方案中，本公開(kāi)內(nèi)容涉及嵌合多肽，其基于野生型海豹瘦蛋白及來(lái)自成熟人瘦蛋白的摻入AB環(huán)序列和摻入螺旋4序列。在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含野生型海豹瘦蛋白多肽的氨基酸序列(SEQIDNO:28)，其中跨越SEQIDN0:28的第23位-第49位氨基酸的連續(xù)區(qū)已經(jīng)用跨越AlOO(SEQIDNO:24)的第25位-第51位氨基酸的連續(xù)區(qū)替換，且跨越SEQIDN0:28的第120位-第141位氨基酸的連續(xù)區(qū)已經(jīng)用跨越AlOO(SEQIDNO:24)的第122位-第143位氨基酸的連續(xù)區(qū)替換。在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含在SEQIDNO:68中描述的序列:[0205]氨基酸23-49分別用美曲普汀的氨基酸25-51(AB環(huán))替換，且氨基酸120-141分別用美曲普汀的氨基酸122-143(螺旋4)替換的海豹瘦蛋白:[0206]PIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSGMDQILATYQQILTSLQSRSVVQIANDLANLRALLRLLASAKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASVHSTEVVALSRLQGSLQDMLWQLDLNPGC(SEQIDNO:68)[0207]在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含具有N端甲硫氨酸的野生型海豹瘦蛋白多肽的氨基酸序列(SEQIDNO:31)，其中跨越SEQIDNO:31的第23位-第49位氨基酸的連續(xù)區(qū)已經(jīng)用跨越AlOO(SEQIDNO:24)的第25位-第51位氨基酸的連續(xù)區(qū)替換，且跨越SEQIDN0:31的第120位-第141位氨基酸的連續(xù)區(qū)已經(jīng)用跨越A100(SEQIDNO:24)的第122位-第143位氨基酸的連續(xù)區(qū)替換。在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含在SEQIDN0:69中描述的序列:[0208]具有N端甲硫氨酸，且氨基酸23-49分別用美曲普汀的氨基酸25-51(AB環(huán))替換，以及氨基酸120-141分別用美曲普汀的氨基酸122-143(螺旋4)替換的海豹瘦蛋白:[0209]MPIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSGMDQILATYQQILTSLQSRSVVQIANDLANLRALLRLLASAKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASVHSTEVVALSRLQGSLQDMLWQLDLNPGC(SEQIDNO:69)[0210]在一些實(shí)施方案中，本公開(kāi)內(nèi)容涉及嵌合多肽，其基于野生型海豹瘦蛋白及來(lái)自成熟人瘦蛋白的摻入AB環(huán)序列和摻入環(huán)3-4序列。在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含野生型海豹瘦蛋白多肽的氨基酸序列(SEQIDNO:28)，其中跨越SEQIDN0:28的第23位-第49位氨基酸的連續(xù)區(qū)已經(jīng)用跨越AlOO(SEQIDNO:24)的第25位-第51位氨基酸的連續(xù)區(qū)替換，且跨越SEQIDN0:28的第93位-第119位氨基酸的連續(xù)區(qū)已經(jīng)用跨越A100(SEQIDNO:24)的第95位-第121位氨基酸的連續(xù)區(qū)替換。在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含在SEQIDNO:70中描述的序列:[0211]氨基酸23-49分別用美曲普汀的氨基酸25-51(AB環(huán))替換，且氨基酸93-119分別用美曲普汀的氨基酸95-121(環(huán)3-4)替換的海豹瘦蛋白:[0212]PIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSGMDQILATYQQILTSLQSRSVVQIANDLANLRALLRLLASAKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASGYSTEVVALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC(SEQIDNO:70)[0213]在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含具有N端甲硫氨酸的野生型海豹瘦蛋白多肽的氨基酸序列(SEQIDNO:31)，其中跨越SEQIDNO:31的第23位-第49位氨基酸的連續(xù)區(qū)已經(jīng)用跨越AlOO(SEQIDNO:24)的第25位-第51位氨基酸的連續(xù)區(qū)替換，且跨越SEQIDN0:31的第93位-第119位氨基酸的連續(xù)區(qū)已經(jīng)用跨越A100(SEQIDNO:24)的第95位-第121位氨基酸的連續(xù)區(qū)替換。在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含在SEQIDN0:71中描述的序列:[0214]具有N端甲硫氨酸，且氨基酸23-49分別用美曲普汀的氨基酸25-51(AB環(huán))替換，以及氨基酸93-119分別用美曲普汀的氨基酸95-121(環(huán)3-4)替換的海豹瘦蛋白:[0215]MPIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSGMDQILATYQQILTSLQSRSVVQIANDLANLRALLRLLASAKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASGYSTEVVALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC(SEQIDN0:71)。[0216]在一些實(shí)施方案中，本公開(kāi)內(nèi)容涉及嵌合多肽，其基于野生型海豹瘦蛋白及來(lái)自成熟人瘦蛋白的摻入AB環(huán)序列、摻入環(huán)3-4序列和摻入螺旋3序列。在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含野生型海豹瘦蛋白多肽的氨基酸序列(SEQIDNO:28)，其中跨越SEQIDNO:28的第23位-第49位氨基酸的連續(xù)區(qū)已經(jīng)用跨越A100(SEQIDNO:24)的第25位-第51位氨基酸的連續(xù)區(qū)替換，且跨越SEQIDN0:28的第93位-第119位氨基酸的連續(xù)區(qū)已經(jīng)用跨越A100(SEQIDNO:24)的第95位-第121位氨基酸的連續(xù)區(qū)替換，且跨越SEQIDNO:28的第71位-第92位氨基酸的連續(xù)區(qū)已經(jīng)用跨越AlOO(SEQIDNO:24)的位置73-94處的氨基酸的連續(xù)區(qū)替換。在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含在SEQIDN0:72中描述的序列:[0217]氨基酸23-49分別用美曲普汀的氨基酸25-51(AB環(huán))替換，且氨基酸93-119分別用美曲普汀的氨基酸95-121(環(huán)3-4)替換，且氨基酸71-92分別用美曲普汀的氨基酸73-94(螺旋3)替換的海豹瘦蛋白:[0218]PIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSGMDQILATYQQILTSLQSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASGYSTEVVALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC(SEQIDNO:72)[0219]在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含具有N端甲硫氨酸的野生型海豹瘦蛋白多肽的氨基酸序列(SEQIDNO:31)，其中跨越SEQIDNO:31的第23位-第49位氨基酸的連續(xù)區(qū)已經(jīng)用跨越AlOO(SEQIDNO:24)的第25位-第51位氨基酸的連續(xù)區(qū)替換，且跨越SEQIDN0:31的第93位-第119位氨基酸的連續(xù)區(qū)已經(jīng)用跨越A100(SEQIDNO:24)的第95位-第121位氨基酸的連續(xù)區(qū)替換，且跨越SEQIDNO:31的第71位-第92位氨基酸的連續(xù)區(qū)已經(jīng)用跨越AlOO(SEQIDNO:24)的第73位-第94位氨基酸的連續(xù)區(qū)替換。在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽包含在SEQIDNO:73中描述的序列:[0220]具有N端甲硫氨酸，且氨基酸23-49分別用美曲普汀的氨基酸25-51(AB環(huán))替換，氨基酸93-119分別用美曲普汀的氨基酸95-121(環(huán)3_4)替換，且氨基酸71-92分別用美曲普汀的氨基酸73-94(螺旋3)替換的海豹瘦蛋白:MPIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSGMDQILATYQQILTSLQSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASGYSTEVVALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC(SEQIDNO:73)。[0221]在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供的嵌合多肽在野生型海豹多肽序列的第30位含有Cys到Ser的氨基酸取代。依照一些實(shí)施方案，提供了下列嵌合多肽:[0222]氨基酸30和3-22分別用美曲普汀的氨基酸32和5_24(螺旋I)替換的海豹瘦蛋白:[0223]PIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISPPQGVSSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQQILTSLQSRSVVQIANDLANLRALLRLLASAKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASVHSTEVVALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC(SEQIDNO:74)。[0224]具有N端甲硫氨酸,且氨基酸30和3-22分別用美曲普汀的氨基酸32和[0225]5-24(螺旋I)替換的海豹瘦蛋白:[0226]MPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISPPQGVSSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQQILTSLQSRSVVQIANDLANLRALLRLLASAKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASVHSTEVVALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC(SEQIDNO:75)。[0227]氨基酸30和50-65分別用美曲普汀的氨基酸32和52_67(螺旋2)替換的海豹瘦蛋白:[0228]PIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISPPQGVSSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSKMDQTLAVYQQILTSLQSRSVVQIANDLANLRALLRLLASAKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASVHSTEVVALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC(SEQIDNO:76)。[0229]具有N端甲硫氨酸，且氨基酸30和50-65分別用美曲普汀的氨基酸32和52-67(螺旋2)替換的海豹瘦蛋白:[0230]MPIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISPPQGVSSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSKMDQTLAVYQQILTSLQSRSVVQIANDLANLRALLRLLASAKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASVHSTEVVALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC(SEQIDNO:77)。[0231]氨基酸30和71-92分別用美曲普汀的氨基酸32和73_94(螺旋3)替換的海豹瘦蛋白:[0232]PIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISPPQGVSSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQQILTSLQSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASVHSTEVVALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC(SEQIDNO:30)。[0233]具有N端甲硫氨酸，且氨基酸30和71-92分別用美曲普汀的氨基酸32和73-94(螺旋3)替換的海豹瘦蛋白:[0234]MPIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISPPQGVSSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQQILTSLQSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASVHSTEVVALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC(SEQIDNO:33)。[0235]氨基酸30和120-141分別用美曲普汀的氨基酸32和122-143(螺旋4)替換的海豹瘦蛋白:[0236]PIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISPPQGVSSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQQILTSLQSRSVVQIANDLANLRALLRLLASAKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASVHSTEVVALSRLQGSLQDMLffQLDLNPGC(SEQIDNO:78)。[0237]具有N端甲硫氨酸，且氨基酸30和120-141分別用美曲普汀的氨基酸32和122-143(螺旋4)替換的海豹瘦蛋白:[0238]MPIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISPPQGVSSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQQILTSLQSRSVVQIANDLANLRALLRLLASAKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASVHSTEVVALSRLQGSLQDMLWQLDLNPGC(SEQIDNO:79)。[0239]氨基酸30和93-119分別用美曲普汀的氨基酸32和95-121(環(huán)3-4)替換的海豹瘦蛋白:[0240]PIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISPPQGVSSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQQILTSLQSRSVVQIANDLANLRALLRLLASAKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASGYSTEVVALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC(SEQIDNO:80)。[0241]具有N端甲硫氨酸，且氨基酸30和93-119分別用美曲普汀的氨基酸32和95-121(環(huán)3-4)替換的海豹瘦蛋白:[0242]MPIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISPPQGVSSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQQILTSLQSRSVVQIANDLANLRALLRLLASAKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASGYSTEVVALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC(SEQIDN0:81)。[0243]氨基酸30、氨基酸3-22、和氨基酸71_92分別用美曲普汀的氨基酸32、氨基酸5-24(螺旋I)和氨基酸73-94(螺旋3)替換的海豹瘦蛋白:[0244]PIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISPPQGVSSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQQILTSLQSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASVHSTEVVALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC(SEQIDNO:82)[0245]具有N端甲硫氨酸，且氨基酸30、氨基酸3-22、和氨基酸71_92分別用美曲普汀的氨基酸32、氨基酸5-24(螺旋I)和氨基酸73-94(螺旋3)替換的海豹瘦蛋白:[0246]MPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISPPQGVSSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQQILTSLQSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASVHSTEVVALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC(SEQIDNO:83)[0247]氨基酸30、氨基酸71-92、和氨基酸93-119分別用美曲普汀的氨基酸32、氨基酸73-94(螺旋3)和氨基酸95-121(環(huán)3_4)替換的海豹瘦蛋白:[0248]PIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISPPQGVSSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQQILTSLQSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASGYSTEVVALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC(SEQIDNO:84)[0249]具有N端甲硫氨酸，且氨基酸30、氨基酸71-92、和氨基酸93-119分別用美曲普汀的氨基酸32、氨基酸73-94(螺旋3)和氨基酸95-121(環(huán)3_4)替換的海豹瘦蛋白:[0250]MPIQRVQDDTKTLIKTIITRINDISPPQGVSSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQQILTSLQSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASGYSTEVVALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC(SEQIDNO:85)。[0251]其它實(shí)施方案。理解的是，還涵蓋本文中公開(kāi)的每種多肽包括(任選地)與其天然存在的第一個(gè)氨基酸以符合讀碼框方式融合的N端甲硫氨酸。例如，美曲普汀(瘦蛋白A100)由已經(jīng)添加有N端甲硫氨酸的成熟人瘦蛋白組成，如SEQIDN0:24中公開(kāi)的。類(lèi)似地，可以在貫穿本文中所公開(kāi)的任意氨基酸序列和分子式的N端納入甲硫氨酸殘基。[0252]在一些實(shí)施方案中，提供了嵌合多肽類(lèi)似物。相對(duì)于親本嵌合多肽，嵌合多肽類(lèi)似物可以具有至少80%，例如80%，85%,90%,95%,98%或甚至更高的序列同一性。在一些實(shí)施方案中，親本嵌合多肽是SEQIDNO:29，SEQIDNO:30，SEQIDNO:32，SEQIDNO:33，SEQIDNO:52，SEQIDNO:53，SEQIDNO:54，SEQIDNO:55，SEQIDNO:56，SEQIDNO:57，SEQIDNO:58,SEQIDNO:59,SEQIDNO:60,SEQIDNO:61,SEQIDNO:62,SEQIDNO:63,SEQIDNO:64，SEQIDNO:65，SEQIDNO:66，SEQIDNO:67，SEQIDNO:68，SEQIDNO:69，SEQIDNO:70,SEQIDNO:71,SEQIDNO:72,SEQIDNO:73,SEQIDNO:74,SEQIDNO:75,SEQIDNO:76,SEQIDNO:77,SEQIDNO:78,SEQIDNO:79,SEQIDNO:80，IDNO:81,SEQIDNO:82，SEQIDNO:83，SEQIDNO:84，或SEQIDNO:85中所列的多肽。因而，在一些實(shí)施方案中，相對(duì)于選自由SEQIDNO:29，SEQIDNO:30，SEQIDNO:32,和SEQIDNO:33組成的組的任何嵌合多肽，嵌合多肽類(lèi)似物可以具有至少80%，例如80%，85%,90%,95%,98%或甚至更高的序列同一'I"生。在一些實(shí)施方案中，相對(duì)于SEQIDN0:33中列出的嵌合多肽,嵌合多肽類(lèi)似物可以具有至少80%，例如80%，85%,90%,95%,98%或甚至更高的序列同一性。在一些實(shí)施方案中，相對(duì)于SEQIDNO:29，SEQIDNO:30，SEQIDNO:32，或SEQIDNO:33中列出的嵌合多肽，嵌合多肽類(lèi)似物可以具有至少90%序列同一性。在一些實(shí)施方案中，相對(duì)于SEQIDN0:33中列出的嵌合多肽，嵌合多肽類(lèi)似物可以具有至少90%序列同一性。[0253]另外，可以依照本發(fā)明設(shè)計(jì)、制備并使用嵌合多肽類(lèi)似物，其中選自下組的嵌合多肽的I,2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20或甚至21個(gè)氨基酸用另一種氨基酸，如保守氨基酸或非保守氨基酸取代或以其它方式改變:SEQIDNO:29,SEQIDNO:30，SEQIDNO:32，SEQIDNO:33，SEQIDNO:52，SEQIDNO:53，SEQIDNO:54，SEQIDNO:55，SEQIDNO:56，SEQIDNO:57，SEQIDNO:58，SEQIDNO:59，SEQIDNO:60，SEQIDNO:61,SEQIDNO:62,SEQIDNO:63,SEQIDNO:64,SEQIDNO:65,SEQIDNO:66,SEQIDNO:67,SEQIDNO:68,SEQIDNO:69,SEQIDNO:70,SEQIDNO:71,SEQIDNO:72,SEQIDNO:73，SEQIDNO:74，SEQIDNO:75，SEQIDNO:76，SEQIDNO:77，SEQIDNO:78，SEQIDNO:79,SEQIDNO:80，IDNO:81,SEQIDNO:82,SEQIDNO:83,SEQIDNO:84,和SEQIDN0:85。如本領(lǐng)域中慣用的，術(shù)語(yǔ)“保守的”在氨基酸取代的背景中指保留電荷類(lèi)型(例如陰離子、陽(yáng)離子、中性、極性，等等)、疏水性或親水性、體積(bulk)(例如范德華(vanderWaals)接觸等等)和/或功能性(例如羥基、胺、巰氫基等等)特性的取代。術(shù)語(yǔ)“非保守的”指非保守的氨基酸取代。[0254]在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了包含來(lái)自成熟人瘦蛋白類(lèi)似物序列的至少一個(gè)1-30個(gè)氨基酸的連續(xù)區(qū)的嵌合多肽類(lèi)似物，所述成熟人瘦蛋白類(lèi)似物序列在如下位置處含有至少一處氨基酸取代，在來(lái)自另一物種的瘦蛋白中與前述位置對(duì)應(yīng)的位置中觀察到趨異。[0255]如本領(lǐng)域中理解的，例如鼠瘦蛋白、大鼠瘦蛋白、牛瘦蛋白、豬瘦蛋白、和獼猴瘦蛋白，如本文中公開(kāi)的那些瘦蛋白各自與人瘦蛋白是基本上同源的；特別地，這些瘦蛋白的成熟形式與成熟的瘦蛋白是基本上同源的，且進(jìn)一步地，尤其是在蛋白質(zhì)的N端部分附近?？梢灾苽溥@類(lèi)瘦蛋白的類(lèi)似物，如成熟的人瘦蛋白形式I(SEQIDNO:20)和美曲普汀(SEQIDN0:24)，如通過(guò)取代或以其它方式改變這類(lèi)序列中的一個(gè)或多個(gè)如下位置處的氨基酸殘基來(lái)進(jìn)行，所述位置處的趨異在相應(yīng)的成熟小鼠、大鼠、牛、豬或獼猴瘦蛋白中觀察到。例如，成熟的人瘦蛋白(例如SEQIDN0:20)在例如小鼠、大鼠和猴中引發(fā)生物學(xué)應(yīng)答。參見(jiàn)例如W098/28427,W02009/064298,US2007/0020284,US2008/0207512,和Murakami等，1995,Biochem.Biophys.Res.Comm.209:944-952。由于人成熟瘦蛋白在例如這類(lèi)物種中具有生物學(xué)活性，可以設(shè)計(jì)并制備瘦蛋白類(lèi)似物，其中在來(lái)自一種或多種這類(lèi)物種的瘦蛋白中的相應(yīng)位置處趨異的位置處的一個(gè)或多個(gè)氨基酸用在這類(lèi)相應(yīng)的趨異位置處的氨基酸取代。[0256]例如，使用依照SEQIDNO:20的人成熟瘦蛋白蛋白質(zhì)(其中第一個(gè)氨基酸是纈氨酸，且第146位氨基酸是半胱氨酸)，可以用存在于SEQIDNO:2中的相應(yīng)位置處的相應(yīng)氨基酸用另一種氨基酸取代位置32，35，50，64，68，71，74，77，89，97，100，101，105，106，107，I08，111，112，118，136，138，142，和145處的一個(gè)或多個(gè)氨基酸，從而設(shè)計(jì)并制備依照本發(fā)明的嵌合多肽包含的瘦蛋白類(lèi)似物。另外，也可以將另一種氨基酸如保守氨基酸或非保守氨基酸取代入例如SEQIDNO:20的位置32，35，50，64，68，71，74，77，89，97，100，101，105，106，107，108，111，112，118，136，138，142，和145之一個(gè)或多個(gè)中，從而設(shè)計(jì)并制備依照本發(fā)明的嵌合多肽包含的瘦蛋白類(lèi)似物。[0257]可以基于成熟的大鼠瘦蛋白蛋白質(zhì)序列(SEQIDNO:16)來(lái)進(jìn)一步制備其它瘦蛋白類(lèi)似物。參見(jiàn)例如W098/28427，US2007/0020284和Murakami等，1995，同上，通過(guò)提述完整并入本文中并用于所有目的。成熟的大鼠瘦蛋白與成熟的人瘦蛋白形式I(SEQIDNO:20)在下列位置處有所不同:4，32，33，35，50，68，71，74，77，78，89，97，100，101，102，105，106，107，108，111，112，118，136，138和145。因而，在SEQIDNO:20中的一個(gè)或多個(gè)這類(lèi)位置處，可以用存在于成熟大鼠瘦蛋白(SEQIDNO:16)中的相應(yīng)位置處找到的氨基酸取代，從而設(shè)計(jì)并制備依照本發(fā)明的嵌合多肽包含的瘦蛋白類(lèi)似物。另外，也可以將另一種氨基酸如保守氨基酸或非保守氨基酸取代入例如SEQIDNO:20的位置4，32，33，35，50，68，71，74，77，78，89，97，100，101，102，105，106，107，108，111，112，118，136，138和145之一個(gè)或多個(gè)中，從而設(shè)計(jì)并制備依照本發(fā)明的嵌合多肽包含的瘦蛋白類(lèi)似物。[0258]與成熟人瘦蛋白形式1(SEQIDNO:20)趨異的來(lái)自成熟大鼠瘦蛋白(SEQIDNO:16)和成熟鼠瘦蛋白形式I(SEQIDNO:2)兩者的位置是:4，32，33，35，50，64，68，71，74，77，78，89，97，100，102，105，106，107，108，111，112，118，136，138，142和145。因而，在SEQIDN0:20中的一個(gè)或多個(gè)這類(lèi)位置處，可以用存在于成熟大鼠瘦蛋白序列(SEQIDNO:16)或成熟鼠形式I序列(SEQIDNO:2)中的相應(yīng)位置處找到的氨基酸取代，從而設(shè)計(jì)并制備依照本發(fā)明的嵌合多肽包含的瘦蛋白類(lèi)似物。另外，也可以將另一種氨基酸如保守氨基酸或非保守氨基酸取代入位置4，32，33，35，50，64，68，71，74，77，78，89，97，100，102，105，106，107，108，111，112，118，136，138，142，和145之一個(gè)或多個(gè)中，從而設(shè)計(jì)并制備依照本發(fā)明的嵌合多肽包含的瘦蛋白類(lèi)似物。[0259]另外，與成熟人瘦蛋白形式I(SEQIDNO:20)趨異的存在于獼猴成熟瘦蛋白(SEQIDNO:14)中的氨基酸是(以一字母氨基酸縮寫(xiě)在括號(hào)中記錄氨基酸殘基):8(S)，35(R)，48(V),53(Q),60(1)，66(1)，67(N),68((L),89(L),IOO(L),108(E),112(D)和118(L)。由于人成熟瘦蛋白在猴中引發(fā)生物學(xué)應(yīng)答，在設(shè)計(jì)并制備依照本發(fā)明的嵌合多肽包含的瘦蛋白類(lèi)似物中可以采用瘦蛋白，如用另一種氨基酸如括號(hào)中的氨基酸替換一個(gè)或多個(gè)獼猴趨異氨基酸的成熟人瘦蛋白形式I(SEQIDNO:20)。應(yīng)當(dāng)注意的是，某些獼猴趨異氨基酸也是那些存在于例如上述成熟的鼠瘦蛋白形式I(位置35，68，89，100和112)中的氨基酸。如此，可以制備如下的瘦蛋白類(lèi)似物，其中例如成熟的人瘦蛋白形式I(SEQIDNO:20)的位置4，8，32，33，35，48，50，53，60，64，66，67，68，71，74，77，78，89，97，100，102，105，106，107，108，111，112，118，136，138，142，和145處的一個(gè)或多個(gè)氨基酸用小鼠或獼猴瘦蛋白(例如SEQIDNO:2和/或SEQIDNO:14)中這類(lèi)位置處的相應(yīng)氨基酸替換。[0260]依照本發(fā)明，可以將嵌合多肽類(lèi)似物設(shè)計(jì)并制備為包含來(lái)自人瘦蛋白類(lèi)似物的氨基酸連續(xù)區(qū)。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了基于野生型海豹瘦蛋白多肽的嵌合多肽，其中野生型海豹瘦蛋白序列的至少一個(gè)1-30個(gè)氨基酸的連續(xù)區(qū)已經(jīng)用成熟的人瘦蛋白類(lèi)似物序列的1-30個(gè)氨基酸的連續(xù)區(qū)替換，[0261]且其中成熟的人瘦蛋白類(lèi)似物序列在如下位置處含有至少一處氨基酸取代，在來(lái)自另一物種的瘦蛋白中與前述位置對(duì)應(yīng)的位置中觀察到趨異。還提供了嵌合多肽類(lèi)似物，其包含成熟人瘦蛋白類(lèi)似物序列的兩個(gè)或更多個(gè)1-30個(gè)氨基酸的連續(xù)區(qū)。[0262]附接有化學(xué)模塊的嵌合多肽是多肽衍生物。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)通過(guò)附接一種或多種化學(xué)模塊對(duì)嵌合多肽的衍生化在某些情況下提供某種優(yōu)點(diǎn)，如提高治療性蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性和循環(huán)時(shí)間以及降低免疫原性和例如生成中和性抗體的傾向和/或注射部位反應(yīng)的發(fā)生率。參見(jiàn)例如W098/28427,US2007/0020284,美國(guó)專利N0.4，179，337，Davis等，1979年12月18日公告。關(guān)于綜述，參見(jiàn)Abuchowski等，于ENZYMESASDRUGS.(J.S.Holcerberg和J.Roberts編第367頁(yè)-第383頁(yè)(1981));Francis等，同上。[0263]多肽衍生物可以構(gòu)成多肽，已經(jīng)對(duì)該多肽對(duì)其氨基酸側(cè)基、α-碳原子、末端氨基基團(tuán)或末端羧酸基團(tuán)之一種或多種做出化學(xué)修飾?；瘜W(xué)修飾包括但不限于附接一種或多種化學(xué)模塊、創(chuàng)建新鍵、和除去一種或多種化學(xué)模塊。在氨基酸側(cè)基處的修飾包括但不限于烷基化、?；Ⅴバ纬?、馬來(lái)酰亞胺偶聯(lián)、賴氨酸ε-氨基基團(tuán)的酰化、精氨酸、組氨酸或賴氨酸的N-烷基化、谷氨酸或天冬氨羧酸基團(tuán)的烷基化，以及谷氨酰胺或天冬酰胺的脫酰胺作用。對(duì)末端氨基的修飾包括但不限于脫氨基、N-低級(jí)烴基、N-二-低級(jí)烴基和N-?；揎棥?duì)末端氨基的修飾包括但不限于脫氨基、N-低級(jí)烴基、N-二-低級(jí)烴基和N-?；揎?，如烷基?；⒎种榛；?、烷基芳基-?；?。對(duì)末端羧基基團(tuán)的修飾包括但不限于酰胺、低級(jí)烴基酰胺、二烴基酰胺、芳基酰胺、烴基芳基酰胺和低級(jí)烴基酯修飾。低級(jí)烴基是C1-C4烴基。此外，可以通過(guò)普通技能的合成化學(xué)人員已知的保護(hù)基來(lái)保護(hù)一種或多種側(cè)基或末端基團(tuán)。氨基酸的α_碳可以是單或二甲基化的。[0264]這類(lèi)衍生物包括與一種或多種水溶性聚合物分子，如聚乙二醇(“PEG”)或各種長(zhǎng)度的脂肪酸鏈(例如硬脂?；?、棕櫚?；?、辛?；?綴合的多肽，其通過(guò)添加多聚氨基酸，如多聚-his、多聚-arg、多聚-lys、和多聚_ala,或通過(guò)添加小分子取代基,包括短烴基和約束的烴基(例如分支、環(huán)狀、融合的、金剛烷基)，以及芳香基基團(tuán)來(lái)得到。在一些實(shí)施方案中，水溶性聚合物分子會(huì)具有范圍為約500道爾頓到約60，000道爾頓的分子量。[0265]這類(lèi)聚合物綴合可以在如本文中公開(kāi)的嵌合多肽的N或C端或序列內(nèi)的氨基酸殘基的側(cè)鏈單一發(fā)生?；蛘?，沿著這類(lèi)嵌合多肽的氨基酸序列可以有多個(gè)衍生化位點(diǎn)。用賴氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、或半胱氨酸取代一個(gè)或多個(gè)氨基酸可以為衍生化提供額外的位點(diǎn)。參見(jiàn)例如美國(guó)專利N0.5，824，784和5，824，778。在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽可以與I個(gè)、2個(gè)、或3個(gè)聚合物分子綴合。[0266]在一些實(shí)施方案中，將水溶性聚合物分子與氨基、羧基或硫醇基團(tuán)連接，并且可以通過(guò)N或C端，或者在賴氨酸、天冬氨酸、谷氨酸或半胱氨酸的側(cè)鏈連接。或者，水溶性聚合物分子可以與二胺和二羧基基團(tuán)連接。在一些實(shí)施方案中，嵌合多肽經(jīng)由賴氨酸氨基酸上的ε氨基基團(tuán)與I個(gè)、2個(gè)或3個(gè)PEG分子綴合。[0267]多肽衍生物還包括具有對(duì)一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的化學(xué)變化的多肽。這類(lèi)化學(xué)變化包括酰胺化、糖基化、?；?、硫酸化、磷酸化、乙?；铜h(huán)化?；瘜W(xué)變化可以在瘦蛋白的N或C端或者在序列內(nèi)的氨基酸殘基的側(cè)鏈單一發(fā)生。在一個(gè)實(shí)施方案中，這些肽的C端可以具有游離的-OH或-NH2基團(tuán)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，可以用以下基團(tuán)對(duì)N端末端加帽:異丁基氧基擬基基團(tuán)、異丙基氧基擬基、η-丁基氧基擬基基團(tuán)、乙氧基擬基基團(tuán)、異己酸基基團(tuán)(“isocap”)、辛?；鶊F(tuán)、辛基甘氨酸基團(tuán)(稱為“G(0ct)”或“octylGly”)、8-氨基辛酸基團(tuán)、丹酰基和/或Fmoc基團(tuán)。在一些實(shí)施方案中，環(huán)化可以經(jīng)由形成二硫化物橋。或者，沿著多肽氨基酸序列可以有化學(xué)變化的多個(gè)位點(diǎn)。[0268]在某些實(shí)施方案中，將嵌合多肽化學(xué)改變?yōu)榘U爾通-亨特(Bolton-Hunter)基團(tuán)。鮑爾通-亨特試劑是本領(lǐng)域中已知的(“Radioimmunoassayandrelatedmethods,A.E.Bolton和W.M.Hunter,HandbqqkqfExpeeimentalImmunology的弟26早，弟I卷，Immunochemistey?D-M.Weir編,BlackwellScientificPublications,1986),并且可以用于經(jīng)由氨基端α-氨基基團(tuán)或賴氨酸的ε_(tái)氨基基團(tuán)用中性連接引入酪氨酸樣模塊。在一些實(shí)施方案中，多肽的N端末端修飾為具有鮑爾通-亨特基團(tuán)。在一些實(shí)施方案中，內(nèi)部賴氨酸殘基修飾為具有鮑爾通-亨特基團(tuán)。在一些實(shí)施方案中，沿著多肽氨基酸序列可以有多個(gè)鮑爾通-亨特修飾位點(diǎn)。用于多肽修飾的鮑爾通-亨特試劑是商業(yè)化的，并且可以包括但不限于水溶性鮑爾通-亨特試劑磺基琥珀酰亞氨基-3-[4_羥苯基]丙酸鹽(PierceBiotechnology,Inc.,Rockford,IL)和鮑爾通-亨特試劑2，N-琥拍酰亞氨基3-(4-輕基-3-碘苯基)丙酸鹽(WakoPureChemicalIndustries,Ltd.,Japan,產(chǎn)品目錄編號(hào)#199-09341)。下文例示了經(jīng)由酰胺連接與多肽綴合的例示性鮑爾通-亨特基團(tuán)，其中虛線通過(guò)酰胺鍵:[0269]O[0270]可以在鮑爾通-亨特修飾之前或之后將多肽碘化(如用125I放射性標(biāo)記)。[0271]多肽衍生物可以包含“非必需”氨基酸殘基的一處或多處修飾。在本發(fā)明的背景中，“非必需”氨基酸殘基是可以在沒(méi)有消除或?qū)嵸|(zhì)性降低嵌合多肽的活性(例如激動(dòng)劑活性)的情況中改變例如衍生化的殘基。本發(fā)明的嵌合多肽可以包含1，2，3，4，5，6，7，8，9，10或更多個(gè)氨基酸殘基的衍生化；這些之中，一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基可以是非必需氨基酸殘基。另外，可以將本發(fā)明的多肽衍生化，使得它們?cè)跊](méi)有消除或?qū)嵸|(zhì)性降低多肽活性的情況中包含至少1，2，3，4，5，6，7，8，9，10或更多個(gè)氨基酸的添加。另外，可以將這類(lèi)非必需氨基酸殘基用適合于衍生化的氨基酸殘基取代，如全文描述的。[0272]如全文使用的，“氨基酸”、“氨基酸殘基”等指天然氨基酸、非天然氨基酸和經(jīng)修飾的氨基酸。除非相反說(shuō)明，一般或通過(guò)名稱明確對(duì)氨基酸的任何提述包括提述D和L立體異構(gòu)體兩者，若其結(jié)構(gòu)允許這類(lèi)立體異構(gòu)體形式的話。天然氨基酸包括丙氨酸(Ala)、精氨酸(Arg)、天冬酰胺(Asn)、天冬氨酸(Asp)、半胱氨酸(Cys)、谷氨酰胺(Gin)、谷氨酸(Glu)、甘氨酸(Gly)、組氨酸(His)、異亮氨酸(He)、亮氨酸(Leu)、賴氨酸(Lys)、甲硫氨酸(Met)、苯丙氨酸(Phe)、脯氨酸(Pro)、絲氨酸(Ser)、蘇氨酸(Thr)、色氨酸(Trp)、酪氨酸(Tyr)和纈氨酸(Val)。非天然氨基酸包括但不限于高賴氨酸、高精氨酸、高絲氨酸、鈴蘭氨酸(azetidinecarboxylicacid)、2_氨基己二酸、3_氨基己二酸、β_丙氨酸、氨基丙酸、2-氨基丁酸、4-氨基丁酸、6-氨基己酸、2-氨基庚酸、2-氨基異丁酸、3-氨基異丁酸、2-氨基庚二酸、叔丁基甘氨酸、2，4-二氨基異丁酸、鎖鏈素、2，2’-二氨基庚二酸、2，3-二氨基丙酸、N-乙基甘氨酸、N-乙基天冬酰胺、高脯氨酸、羥基賴氨酸、別-羥基賴氨酸、3-羥脯氨酸、4-羥脯氨酸、異鎖鏈素、別-異亮氨酸、N-甲基丙氨酸、N-甲基甘氨酸、N-甲基異亮氨酸、N-甲基戊基甘氨酸、N-甲基纈氨酸、萘丙氨酸、正纈氨酸、正亮氨酸、鳥(niǎo)氨酸、戊基甘氨酸、哌可酸(pipecolicacid)和硫代脯氨酸。其它非天然氨基酸包括可逆或不可逆地化學(xué)封閉的或者在其N(xiāo)端氨基基團(tuán)或其側(cè)鏈基團(tuán)上化學(xué)修飾的經(jīng)修飾氨基酸殘基，如例如，N-甲基化的D和L氨基酸或如下的殘基，其中側(cè)鏈官能團(tuán)化學(xué)修飾為另一種官能團(tuán)。例如，經(jīng)修飾的氨基酸包括甲硫氨酸亞砜；甲硫氨酸砜；天冬氨酸_(β_甲酯)(天冬氨酸的一種經(jīng)修飾的氨基酸)；Ν-乙基甘氨酸(甘氨酸的一種經(jīng)修飾的氨基酸)；或丙氨酸羧酰胺(丙氨酸的一種經(jīng)修飾的氨基酸)?？梢該饺氲钠渌鼩埢涊d于Sandberg等，J.Med.Chem.41:2481-91，1998。[0273]如上文提述的，適合于嵌合多肽的這類(lèi)衍生化的化學(xué)模塊包括例如各種水溶性聚合物。優(yōu)選地，為了終產(chǎn)物制備物的治療性用途，聚合物會(huì)是藥學(xué)可接受的。本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)能夠基于如下的考慮來(lái)選擇期望的聚合物，所述考慮諸如聚合物/蛋白質(zhì)綴合物是否會(huì)治療性使用，并且如果這樣的話，期望的劑量、循環(huán)時(shí)間、對(duì)蛋白酶解的抗性，以及其它考慮。對(duì)于嵌合多肽，可以如下確定衍生化的效率，即以期望的形式(即通過(guò)滲透泵，或更優(yōu)選地通過(guò)注射或輸注，或進(jìn)一步配制用于例如口服、肺或鼻投遞)施用衍生化的多肽，并觀察如本文中描述的生物學(xué)效應(yīng)和生物學(xué)應(yīng)答。[0274]這類(lèi)水溶性聚合物可以選自下組:例如聚乙二醇、乙二醇/丙二醇的共聚物、羧甲基纖維素、右旋糖苷、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯燒酮、聚-1，3-二氧戍環(huán)(dioxolane)、聚-1,3，6-三口惡燒(trioxane)、乙烯/馬來(lái)酸酐共聚物、聚氨基酸(均聚物或隨機(jī)共聚物)、和右旋糖苷或聚(η-乙烯基吡咯烷酮)聚乙二醇、丙二醇均聚物、聚氧化丙烯/氧化乙烯共聚物、聚氧乙烯(polyoxyethylated)多元醇和聚乙烯醇。聚乙二醇丙醒由于其在水中的穩(wěn)定性而可以具有制造優(yōu)點(diǎn)。還有，也可以使用琥珀酸酯、苯乙烯、和羥乙基淀粉。[0275]可以通過(guò)附接聚氨基酸或分支點(diǎn)氨基酸來(lái)制備依照本發(fā)明的嵌合多肽衍生物。例如，聚氨基酸可以是別的載體蛋白如Fe模塊，其可以用來(lái)還延長(zhǎng)嵌合多肽的循環(huán)半衰期。另外，這類(lèi)聚氨基酸可以選自下組:血清清蛋白(如人血清清蛋白)、別的抗體或其部分(例如Fe區(qū))、或其它聚氨基酸例如聚賴氨酸。如下文指示的，聚氨基酸的附接位置可以位于多肽的N端或C端或中間的其它位置，并且也可以通過(guò)化學(xué)“接頭”模塊與多肽連接，如肽接頭或非肽接頭。[0276]聚合物可以具有任意分子量，并且可以是分支的或不分支的。對(duì)于聚乙二醇，為了易于操作和制造，優(yōu)選的分子量在約2千道爾頓(kDa)和約IOOkDa(術(shù)語(yǔ)“約”指示在聚乙二醇制備物中，一些分子的重量會(huì)超過(guò)敘述的分子量，一些會(huì)小于敘述的分子量)之間。在某些實(shí)施方案中，聚乙二醇在約2kDa和約60kDa之間。在某些實(shí)施方案中，聚乙二醇在約2kDa和約40kDa之間。在某些實(shí)施方案中，聚乙二醇在約5kDa和約40kDa之間。在某些實(shí)施方案中，聚乙二醇在約IOkDa和約40kDa之間。在某些實(shí)施方案中，聚乙二醇在約5kDa和約30kDa之間。在某些實(shí)施方案中，聚乙二醇在約5kDa和約20kDa之間。在某些實(shí)施方案中，聚乙二醇在約IOkDa和約20kDa之間。根據(jù)期望的治療概況(例如期望的持續(xù)釋放持續(xù)時(shí)間、溶解度特征、對(duì)生物學(xué)活性的影響(若有的話)、操作的方便、抗原性的程度或缺乏和與本發(fā)明的瘦蛋白和/或嵌合多肽附接的聚乙二醇的其它已知效應(yīng))，可以使用其它大小?？梢杂绊戇x擇可與嵌合多肽附接以生成依照本發(fā)明的嵌合衍生物的特定分子量的PEG的其它考慮包括這類(lèi)分子量PEG可以實(shí)現(xiàn)如下功能的程度:當(dāng)存在于藥物可接受組合物或配制劑中時(shí)，或者當(dāng)對(duì)受試者施用(如通過(guò)注射進(jìn)行)后暴露于生理學(xué)流體或組織時(shí)，降低嵌合多肽的聚集和/或提高溶解度；在通過(guò)注射對(duì)受試者施用后降低由于施用嵌合多肽引起的注射部位反應(yīng)的發(fā)生；減少中和性抗體的生成,所述中和性抗體由于對(duì)受試者施用這類(lèi)嵌合多肽而可以針對(duì)嵌合多肽生成；等等。[0277]如此附接的聚合物分子的數(shù)目可以變化，并且本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)能夠確定對(duì)功能所致的影響?？梢杂孟嗤虿煌幕瘜W(xué)模塊(例如聚合物，如不同重量的聚乙二醇)單衍生化，或者可以提供二、三、四衍生化或衍生化的某種組合。聚合物分子與要衍生化的嵌合多肽分子的比例會(huì)變化，它們?cè)诜磻?yīng)混合物中的濃度也會(huì)變化。一般而言，就沒(méi)有過(guò)量未反應(yīng)的嵌合多肽或聚合物的反應(yīng)效率而言，最佳比率會(huì)由諸如期望的衍生化程度(例如單、二、三等)、所選聚合物的分子量、聚合物是分支的還是或不分支的、和反應(yīng)條件等因素確定。[0278]化學(xué)模塊應(yīng)當(dāng)在考慮對(duì)嵌合多肽的功能或抗原域影響的情況中與嵌合多肽附接。存在有本領(lǐng)域技術(shù)人員可用的許多附接方法。例如通過(guò)提述并入本文中的EP0401384(將PEG與G-CSF偶聯(lián))，還可見(jiàn)Malik等，1992,Exp.Hematol.20:1028-1035(報(bào)告了使用Tresyl氯使GM-CSF聚乙二醇化(pegylation))。例如,聚乙二醇可以經(jīng)由反應(yīng)性基團(tuán)如游離的氨基或羧基基團(tuán)共價(jià)結(jié)合到氨基酸殘基。反應(yīng)性基團(tuán)是那些可以與活化的聚乙二醇分子結(jié)合的。具有游離氨基基團(tuán)的氨基酸殘基可以包括賴氨酸殘基和N端氨基酸殘基。那些具有游離羧基基團(tuán)的氨基酸殘基可以包括天冬氨酸殘基、谷氨酸殘基、和C端氨基酸殘基。硫氫基基團(tuán)也可以用作附接聚乙二醇分子的反應(yīng)性基團(tuán)。對(duì)于治療目的優(yōu)選的是在氨基基團(tuán)附接，如在N端或賴氨酸基團(tuán)附接。如果期望受體結(jié)合，那么應(yīng)當(dāng)避免在對(duì)受體結(jié)合重要的殘基處的附接。[0279]可以明確地期望設(shè)計(jì)并制備N(xiāo)端經(jīng)化學(xué)修飾的本發(fā)明的嵌合多肽。使用聚乙二醇作為本組合物的例示，可以自多種聚乙二醇分子(根據(jù)分子量、分支，等等)、反應(yīng)混合物中聚乙二醇分子與嵌合多肽分子的比例、待實(shí)施的PEG化反應(yīng)的類(lèi)型、和獲得選擇的N端PEG化的蛋白質(zhì)的方法選擇。獲得N端PEG化的制備物(即在必要時(shí)將此模塊與其它單PEG化的模塊分開(kāi))的方法可以通過(guò)從PEG化的蛋白質(zhì)分子群體純化N端PEG化的材料進(jìn)行。選擇性N端化學(xué)修飾可以通過(guò)還原烷基化完成，所述還原烷基化利用特定蛋白質(zhì)中可用于衍生化的不同類(lèi)型的伯氨基團(tuán)(賴氨酸對(duì)N端)的差異反應(yīng)性。在合適的反應(yīng)條件下，用含有羰基基團(tuán)的聚合物實(shí)現(xiàn)N端的蛋白質(zhì)實(shí)質(zhì)性選擇性衍生化。例如，可以通過(guò)在如下的pH實(shí)施反應(yīng)來(lái)使蛋白質(zhì)選擇性地在N端PEG化，該pH允許利用賴氨酸殘基的ε-氨基基團(tuán)和蛋白質(zhì)N端殘基的α-氨基基團(tuán)之間的PKa差異。通過(guò)這類(lèi)選擇性衍生化，水溶性聚合物與蛋白質(zhì)的附接受到控制:與聚合物的綴合主要在蛋白質(zhì)的N端發(fā)生，并且對(duì)其它反應(yīng)性基團(tuán)如賴氨酸側(cè)鏈氨基基團(tuán)沒(méi)有發(fā)生重大修飾。使用還原烷基化，水溶性聚合物可以是上文所描述的類(lèi)型的，并且應(yīng)當(dāng)具有用于與蛋白質(zhì)綴合的單一反應(yīng)性醛?？梢允褂煤袉我环磻?yīng)性醛的聚乙二醇丙醛。[0280]II1.設(shè)計(jì)和生成的方法[0281]構(gòu)建體的設(shè)計(jì)?？梢栽诎被崴缴显O(shè)計(jì)本文中描述的嵌合多肽。然后，可以使用本領(lǐng)域中已知的多種軟件產(chǎn)品回譯(backtranslate)這些序列，從而例如針對(duì)基于期望的表達(dá)宿主的蛋白質(zhì)表達(dá)、密碼子優(yōu)化、限制性位點(diǎn)含量?jī)?yōu)化核苷酸序列。例如，可以針對(duì)基于大腸桿菌的蛋白質(zhì)表達(dá)和限制性位點(diǎn)含量?jī)?yōu)化核苷酸序列?；诟信d趣的核苷酸序列，可以為多步PCR提供重疊的寡核苷酸，如本領(lǐng)域中已知的?？梢栽诒绢I(lǐng)域中公知的條件下在多重PCR反應(yīng)中使用這些寡核苷酸以建立編碼感興趣蛋白質(zhì)的cDNA。一個(gè)例子是IXAmplitaq緩沖液、L3mMMgCl2>200uMdNTP、4UAmplitaqGolcU0.2uM每種引物(AmpliTaqGold,ABI)，循環(huán)參數(shù)為:(94C:30秒、58C:1分鐘、72C:1分鐘)，35個(gè)循環(huán)。[0282]如本領(lǐng)域中已知的，可以將限制性位點(diǎn)添加至PCR產(chǎn)物的末端以在載體連接中使用。特定的位點(diǎn)可以包括Ndel和Xhol，使得cDNA然后可以在pET45b表達(dá)載體(Novagen)中的合適的閱讀框中。通過(guò)使用這些位點(diǎn)，可以除去此載體中的任何N端His標(biāo)簽，因?yàn)槟菢拥脑挿g起始位點(diǎn)會(huì)在該標(biāo)簽的下游。一旦完成表達(dá)構(gòu)建物，如本領(lǐng)域中已知的，可以使用例如T7啟動(dòng)子引物、T7終止子引物和標(biāo)準(zhǔn)ABIBigDyeTermv3.1方案通過(guò)測(cè)序進(jìn)行驗(yàn)證?？梢詮睦鏏BI3730DNA分析儀獲得序列信息，并且可以使用VectorNTIv.10軟件(Invitrogen)對(duì)其分析?？梢砸阅K方式設(shè)計(jì)表達(dá)構(gòu)建體，從而可以容易地切出并改變接頭序列，如本領(lǐng)域中已知的。[0283]可以將本領(lǐng)域中已知的或本文中描述的蛋白酶識(shí)別位點(diǎn)摻入構(gòu)建體中，該構(gòu)建體可用于本文中描述的重組嵌合多肽的設(shè)計(jì)、構(gòu)建、操作和生成。[0284]通用生成方法?？梢允褂帽绢I(lǐng)域中已知的生物學(xué)、化學(xué)和/或重組DNA技術(shù)來(lái)制備本文中描述的嵌合多肽。例示性的方法記載于本文和美國(guó)專利N0.6，872，700;W02007/139941;W02007/140284;W02008/082274;W02009/011544;和美國(guó)公開(kāi)文本N0.2007/0238669,其公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)提述完整并入本文并用于所有目的。在本文中列出了用于制備該化合物的其它方法。[0285]可以使用標(biāo)準(zhǔn)的固相肽合成技術(shù)，如自動(dòng)化或半自動(dòng)化的肽合成儀來(lái)制備本文中描述的嵌合多肽?？梢允褂冒被岷?或反應(yīng)性側(cè)鏈?zhǔn)鼙Ｗo(hù)的氨基酸衍生物通過(guò)非生物學(xué)肽合成生成嵌合多肽，所述非生物學(xué)肽合成包括逐步偶聯(lián)所述氨基酸和/或氨基酸衍生物以形成反應(yīng)性側(cè)鏈?zhǔn)鼙Ｗo(hù)的依照第一方面的多肽，從多肽的反應(yīng)性側(cè)鏈除去保護(hù)性基團(tuán)，并在水性溶液中折疊該多肽。如此，使用正常的氨基酸(例如甘氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、異亮氨酸、亮氨酸和纈氨酸)和經(jīng)預(yù)保護(hù)的氨基酸衍生物在溶液中或在有機(jī)溶劑中的固體支持物上序貫建立多肽序列。當(dāng)建立完整的多肽序列時(shí)，除去保護(hù)基，并允許多肽在水性溶液中折疊。[0286]通常，使用這類(lèi)技術(shù)，將經(jīng)α-N-氨基甲?；Ｗo(hù)的氨基酸和對(duì)樹(shù)脂上的生長(zhǎng)肽鏈附著的氨基酸于RT在惰性溶劑(例如二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮、二氯甲烷等)中在存在偶聯(lián)劑(例如二環(huán)己基碳二亞胺、1-羥基苯并三唑等)的情況下在存在堿(例如二異丙基乙胺等)的情況下偶聯(lián)。使用試劑(例如三氟乙酸、哌啶等)從所得的肽-樹(shù)脂除去α-N-氨基甲酰基保護(hù)基，并且用下一期望的、要對(duì)肽鏈添加的、經(jīng)N保護(hù)的氨基酸重復(fù)偶聯(lián)反應(yīng)。合適的N保護(hù)基是本領(lǐng)域中公知的,如叔丁基氧化羰基(t-butyloxycarbonyl)(tBoc)、荷基甲氧基擬基(fluorenylmethoxycarbonyl)(Fmoc)等?？梢詮腁ppliedBiosystemslnc.(FosterCity,Calif.)購(gòu)買(mǎi)溶劑、氨基酸衍生物和肽合成儀中使用的4-甲基二苯甲基胺樹(shù)脂。[0287]對(duì)于化學(xué)合成，可以對(duì)嵌合多肽使用固相肽合成，因?yàn)橐话愕?，固相合成是一種具有向商業(yè)規(guī)模的卓越可擴(kuò)縮性的直接方法?？梢允褂肗MP/HOBt(選項(xiàng)I)系統(tǒng)和具有加帽的tBoc或Fmoc化學(xué)(參見(jiàn)AppliedBiosystemsABI430A妝合成儀用戶手冊(cè),版本1.3B1988年7月I日，第6部分,第49頁(yè)-第70頁(yè)，AppliedBiosystems,Inc.,FosterCity,Calif.)用自動(dòng)妝合成儀(430A型，AppliedBiosystemsInc.,FosterCity,Calif.)來(lái)實(shí)施固相肽合成。可以用HF切割Boc-肽-樹(shù)脂(-5°C至0°C，I小時(shí))?？梢杂媒惶娴乃鸵宜釓臉?shù)脂提取肽，并將濾液凍干?？梢砸勒諛?biāo)準(zhǔn)方法(例如IntroductiontoCleavageTechniques,AppliedBiosystems,Inc.,1990,第6頁(yè)-第12頁(yè))來(lái)切割Fmoc-月太樹(shù)脂。也可以使用AdvancedChemTech合成儀(MPS350型,Louisville,Ky.)來(lái)裝配妝。[0288]也可以使用本領(lǐng)域中已知的方法，如Sambrook等，1989，MoleculaeCloning:ALaboeatoeyManual,第2版，ColdSpringHarbor使用重組DNA技術(shù)來(lái)制備本文中描述的化合物?？梢酝ㄟ^(guò)本領(lǐng)域已知的方法來(lái)制備非肽化合物。例如，可以使用本領(lǐng)域中已知的方法，如記載于Bartlett等，1986，Biorg.Chem.14:356-377的方法來(lái)制備含有磷酸的氨基酸和含有這類(lèi)氨基酸的肽。[0289]或者，可以通過(guò)本領(lǐng)域中公知的重組技術(shù)來(lái)生成嵌合多肽。參見(jiàn)例如Sambrook等，1989(同上)?？梢詮亩嗪塑账岜磉_(dá)通過(guò)重組技術(shù)生成的這些嵌合多肽?？紤]到密碼子選擇的簡(jiǎn)并性，本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)領(lǐng)會(huì)編碼這類(lèi)嵌合多肽的多核苷酸(包括DNA和RNA)可以從野生型cDNA(例如人瘦蛋白)獲得，并且在期望時(shí)可以進(jìn)一步工程化改造以摻入指定的取代。這些多核苷酸序列可以摻入促進(jìn)mRNA在微生物宿主中的轉(zhuǎn)錄和翻譯的密碼子?？梢砸勒毡绢I(lǐng)域中公知的方法容易地構(gòu)建這類(lèi)制造序列。參見(jiàn)例如W083/04053，其通過(guò)提述完整并入本文中并用于所有目的。任選地，上述多核苷酸還可以編碼N端甲硫氨?；鶜埢？捎糜诒景l(fā)明的非肽化合物可以通過(guò)本領(lǐng)域中已知的方法來(lái)制備。例如，可以使用本領(lǐng)域中已知的方法來(lái)制備含有磷酸的氨基酸和含有這類(lèi)氨基酸的肽。參見(jiàn)例如Bartlett和Landen,1986,Bioorg.Chem.14:356-77。[0290]可以利用多種表達(dá)載體/宿主系統(tǒng)以含有并表達(dá)嵌合多肽編碼序列。這些包括但不限于微生物如用重組噬菌體、質(zhì)?；蛘沉NA表達(dá)載體轉(zhuǎn)化的細(xì)菌；用酵母表達(dá)載體轉(zhuǎn)化的酵母；用病毒表達(dá)載體(例如桿狀病毒)感染的昆蟲(chóng)細(xì)胞系統(tǒng)；用病毒表達(dá)載體(例如花椰菜花葉病毒，CaMV;煙草花葉病毒，TMV)轉(zhuǎn)染或用細(xì)菌表達(dá)載體(例如Ti或pBR322質(zhì)粒)轉(zhuǎn)化的植物細(xì)胞系統(tǒng)；或動(dòng)物細(xì)胞系統(tǒng)。可用于重組蛋白質(zhì)生成的哺乳動(dòng)物細(xì)胞包括但不限于，VERO細(xì)胞、HeLa細(xì)胞、中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CHO)細(xì)胞系、COS細(xì)胞(如C0S_7)、WI38、BHK、H印G2、3T3、RIN、MDCK,A549、PC12、K562和293細(xì)胞。用于蛋白質(zhì)重組表達(dá)的例示性方案是在本文中描述的和/或本領(lǐng)域中已知的。[0291]因而，多核苷酸序列可用于生成新的且有用的病毒和質(zhì)粒DNA載體、新的且有用的經(jīng)轉(zhuǎn)化的和經(jīng)轉(zhuǎn)染的原核和真核宿主細(xì)胞(包括培養(yǎng)物中培養(yǎng)的細(xì)菌、酵母和哺乳動(dòng)物細(xì)胞)、和新的且有用的方法，該方法用于能夠表達(dá)本嵌合多肽的這類(lèi)宿主細(xì)胞的培養(yǎng)生長(zhǎng)。編碼本文中嵌合多肽的多核苷酸序列在嵌合多肽的生成不足會(huì)得到減輕或其水平升高的需要會(huì)得到滿足的情況中可用于基因療法。[0292]本發(fā)明還提供了用于本嵌合多肽的重組DNA生成的方法。提供了用于從含有編碼嵌合多肽的核酸的宿主細(xì)胞生成嵌合多肽的方法，包括:(a)在促進(jìn)DNA分子表達(dá)的條件下培養(yǎng)含有編碼嵌合多肽的多核苷酸的宿主細(xì)胞；并(b)獲得嵌合多肽。[0293]宿主細(xì)胞可以是原核或真核的，并且包括細(xì)菌、哺乳動(dòng)物細(xì)胞(如中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CHO)細(xì)胞、猴細(xì)胞、幼倉(cāng)鼠腎細(xì)胞、癌細(xì)胞或其它細(xì)胞)、酵母細(xì)胞和昆蟲(chóng)細(xì)胞。[0294]用于表達(dá)重組蛋白質(zhì)的哺乳動(dòng)物宿主系統(tǒng)也是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。可以對(duì)宿主細(xì)胞菌株選擇加工表達(dá)的蛋白質(zhì)或產(chǎn)生在提供蛋白質(zhì)活性中會(huì)有用的某些翻譯后修飾的特定能力。對(duì)多肽的這類(lèi)修飾包括但不限于乙酰化、羧基化、糖基化、磷酸化、脂質(zhì)化和?；Ｇ懈畹鞍踪|(zhì)的“前原(prepro)”形式的翻譯后加工對(duì)于正確的插入、折疊和/或功能也可能是重要的。不同宿主細(xì)胞(如CHO、HeLa,MDCK、293、WI38，等等)對(duì)于這類(lèi)翻譯后活動(dòng)具有特異性細(xì)胞機(jī)器和特征性機(jī)制，并且可以對(duì)其選擇以確保對(duì)引入的外來(lái)蛋白質(zhì)的正確修飾和加工。[0295]或者，可以采用酵母系統(tǒng)來(lái)生成本發(fā)明的嵌合多肽。通過(guò)PCR擴(kuò)增嵌合多肽DNA的編碼區(qū)。使用含有α交配因子基因的核苷酸1-20的一種引物和與此基因的核苷酸255-235互補(bǔ)的另一種引物在PCR反應(yīng)中從酵母基因組DNA擴(kuò)增編碼酵母前原α前導(dǎo)序列的DNA(Kurjan和Herskowitz,1982，Cell,30:933-43)。將該前原α前導(dǎo)編碼序列和嵌合多妝編碼序列片段連接到含有酵母醇脫氫酶(ADH2)啟動(dòng)子的質(zhì)粒中，從而使該啟動(dòng)子指導(dǎo)由融合的前原α因子和成熟的嵌合多肽組成的融合蛋白的表達(dá)。如由Rose和Broach,Meth.Enz.185:234-79,Goeddel編，AcademicPress,Inc.,SanDiego,California(1990)教導(dǎo)的，載體進(jìn)一步包含在克隆位點(diǎn)下游的ADH2轉(zhuǎn)錄終止子、酵母“2微米”復(fù)制起點(diǎn)、酵母leu-2d基因、酵母(E.coli)REPl和REP2基因、大腸桿菌β-內(nèi)酰胺酶基因、和大腸桿菌復(fù)制起點(diǎn)。內(nèi)酰胺酶和leu-2d基因分別提供細(xì)菌和酵母中的選擇。leu-2d基因還促進(jìn)酵母中質(zhì)粒的拷貝數(shù)增加以誘導(dǎo)更高水平的表達(dá)。REPl和REP2基因編碼牽涉質(zhì)?？截悢?shù)調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)。[0296]使用已知的方法例如醋酸鋰處理(Steams等，1990，.Meth.Enz.185:280-297)，將前段中描述的DNA構(gòu)建體轉(zhuǎn)化到酵母細(xì)胞中。當(dāng)耗盡生長(zhǎng)培養(yǎng)基中的葡萄糖后誘導(dǎo)ADH2啟動(dòng)子(Price等，1987，Gene55:287)。前原α序列實(shí)現(xiàn)從細(xì)胞分泌融合蛋白。伴隨地，酵母ΚΕΧ2蛋白從成熟的嵌合多肽切割前原序列(Bitter等，1984，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA81:5330-5334)。[0297]也可以使用商品化的表達(dá)系統(tǒng)，例如畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)(Invitrogen,SanDiego,California)遵循制造商的用法說(shuō)明書(shū)在酵母例如畢赤酵母(Pichia)中重組表達(dá)本發(fā)明的嵌合多肽。此系統(tǒng)也依賴于前原α序列來(lái)指導(dǎo)分泌，但是插入物的轉(zhuǎn)錄在甲醇誘導(dǎo)后由醇氧化酶(AOXl)啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)。從酵母生長(zhǎng)培養(yǎng)基純化分泌性嵌合多肽，其通過(guò)例如用于從細(xì)菌和哺乳動(dòng)物細(xì)胞上清液純化所述嵌合多肽的方法進(jìn)行。[0298]或者，可以將編碼嵌合多肽的DNA克隆到桿狀病毒表達(dá)載體例如pVL1393(PharMingen,SanDiego,California)中。然后，依照制造商的指導(dǎo)(PharMingen)或已知的技術(shù)使用此嵌合多肽編碼載體來(lái)感染例如在sF9無(wú)蛋白質(zhì)培養(yǎng)基中培養(yǎng)的草地夜蛾(Spodopterafrugiperda)細(xì)胞,及生成重組蛋白。使用本領(lǐng)域中已知的方法，例如肝素-Sepharose柱(Pharmacia,Piscataway,NewJersey)和序貫分子分篩柱(sequentialmolecularsizingcolumn)(Amicon,Beverly,Massachusetts)從培養(yǎng)基純化并濃縮蛋白質(zhì)，并將其在合適的溶液，例如PBS中重懸?？梢允褂肧DS-PAGE分析來(lái)表征蛋白質(zhì)，例如通過(guò)顯示確認(rèn)期望的嵌合多肽大小的單一條帶來(lái)進(jìn)行，全氨基酸氨基酸序列分析(例如Proton2090肽測(cè)序儀上的Edman測(cè)序)，或其N(xiāo)端序列的確認(rèn)也可以。[0299]例如，可以將編碼預(yù)測(cè)的成熟嵌合多肽的DNA序列克隆到含有期望的啟動(dòng)子和任選地前導(dǎo)序列的質(zhì)粒中(參見(jiàn)例如Better等，1988,Science240:1041-1043)。可以通過(guò)自動(dòng)化測(cè)序確認(rèn)此構(gòu)建體的序列。然后使用標(biāo)準(zhǔn)方法將該質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌菌株MC1061中，該方法采用CaC12溫育和熱休克處理細(xì)菌(Sambrook等，同上)。在補(bǔ)充有羧芐西林(carbenicillin)的LB培養(yǎng)基中培養(yǎng)經(jīng)轉(zhuǎn)化的細(xì)菌,并通過(guò)在合適的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)誘導(dǎo)表達(dá)蛋白質(zhì)的生成。若存在的話，前導(dǎo)序列會(huì)影響成熟嵌合多肽的分泌，并且在分泌期間被切害I]。通過(guò)本文中描述的方法從細(xì)菌培養(yǎng)基純化分泌性重組嵌合多肽。[0300]或者，可以在昆蟲(chóng)系統(tǒng)中表達(dá)嵌合多肽。用于蛋白質(zhì)表達(dá)的昆蟲(chóng)系統(tǒng)是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。在一種這類(lèi)系統(tǒng)中，將苜猜銀紋夜蛾(Autographacalifornica)核型多角體病毒(AcNPV)用作載體在草地夜蛾細(xì)胞中或在粉紋夜蛾(Trichoplusia)幼蟲(chóng)中表達(dá)外來(lái)基因。將嵌合多肽編碼序列克隆到病毒的非必需區(qū)(如多角體蛋白基因)中，并置于多角體蛋白啟動(dòng)子的控制下。嵌合多肽的成功插入會(huì)使得多角體蛋白無(wú)活性，并生成缺乏外殼蛋白外殼的重組病毒。然后，使用重組病毒來(lái)感染草地夜蛾細(xì)胞或粉紋夜蛾幼蟲(chóng)，其中表達(dá)本發(fā)明的嵌合多妝(Smith等,1983,J.Virol.46:584;Engelhard等,1994,Proc.Natl.Acad.Sc1.USA91:3224-3227)。[0301]在另一個(gè)例子中，可以通過(guò)PCR擴(kuò)增編碼嵌合多肽的DNA序列，并且將其克隆到合適的載體例如pGEX_3X(Pharmacia,Piscataway,NewJersey)中。pGEX載體設(shè)計(jì)為生成融合蛋白，其包含由載體編碼的谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GST)和由插入載體克隆位點(diǎn)中的DNA片段編碼的蛋白質(zhì)?？梢陨砂绾线m的切割位點(diǎn)的PCR引物。然后，可以從融合蛋白的GST部分切割重組融合蛋白。將PGEX-3X/嵌合多肽構(gòu)建體轉(zhuǎn)化到大腸桿菌XL-1Blue細(xì)胞(Stratagene,LaJolla,California)中，并分離個(gè)別轉(zhuǎn)化體,在LB培養(yǎng)基(補(bǔ)充有羧芐西林)中于37°C培養(yǎng)至波長(zhǎng)600nm處光密度為0.4，接著在存在0.5mM異丙基β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(SigmaChemicalC0.,St.Louis,Missouri)的情況下再溫育4小時(shí)。將來(lái)自個(gè)別轉(zhuǎn)化體的質(zhì)粒DNA純化，并使用自動(dòng)化測(cè)序儀來(lái)部分測(cè)序以確認(rèn)正確取向的期望的嵌合多肽編碼基因插入物的存在。[0302]當(dāng)預(yù)期在細(xì)菌中以不溶性包含體生成時(shí)，可以如上文描述的或如下純化融合蛋白。通過(guò)離心收獲細(xì)胞；在0.15MNaCl,IOmMTris,pH8,ImMEDTA中清洗；并用0.lmg/mL溶菌酶(SigmaChemicalC0.)于RT處理15分鐘。通過(guò)超聲處理使裂解液澄清,并通過(guò)以12，OOOxg離心10分鐘使細(xì)胞碎片沉淀。將含有融合蛋白的團(tuán)粒在50mMTris,pH8,和IOmMEDTA中重懸，在50%甘油上成層，并以6000xg離心30分鐘。將團(tuán)粒在無(wú)Mg++和Ca++的標(biāo)準(zhǔn)磷酸鹽緩沖鹽水溶液(PBS)中重懸。通過(guò)將重懸的團(tuán)粒在變性SDS聚丙烯酰胺凝膠中分級(jí)來(lái)對(duì)融合蛋白進(jìn)一步純化(Sambrook等,見(jiàn)上文)。將凝膠在0.4MKCl中浸泡以顯現(xiàn)蛋白質(zhì)，將該蛋白質(zhì)切出，并在缺少SDS的凝膠運(yùn)行緩沖液中電洗脫。如果GST/嵌合多肽融合蛋白在細(xì)菌中以可溶性蛋白質(zhì)生成，那么可以使用GST純化模塊(PharmaciaBiotech)將其純化。[0303]融合蛋白可以進(jìn)行消化以從成熟的嵌合多肽切割GST。將消化反應(yīng)(0.5mLPBS中20-40μg融合蛋白，20-30個(gè)單位人凝血酶(4000U/mg(Sigma))于RT溫育16-48小時(shí)，并在變性SDS-PAGE凝膠上加載以分級(jí)反應(yīng)產(chǎn)物。將凝膠在0.4MKCl中浸泡以顯現(xiàn)蛋白質(zhì)條帶?？梢允褂米詣?dòng)化測(cè)序儀(AppliedBiosystems473A型，F(xiàn)osterCity,California)通過(guò)部分氨基酸序列分析確認(rèn)與嵌合多肽的預(yù)期分子量對(duì)應(yīng)的的蛋白質(zhì)條帶的身份。[0304]在本發(fā)明嵌合多肽的重組表達(dá)的特別例示性方法中，可以通過(guò)磷酸鈣方法用在PCMV載體(5’CMV啟動(dòng)子，3’HGH多聚A序列)和pSV2neo(含有neo抗性基因)中含有嵌合多肽cDNA的質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293細(xì)胞。在一個(gè)實(shí)施方案中，應(yīng)當(dāng)在轉(zhuǎn)染前用ScaI將載體線性化。類(lèi)似地，可以使用一種備選的構(gòu)建體，其使用摻有neo基因的類(lèi)似pCMV載體。從單一細(xì)胞克隆選擇穩(wěn)定的細(xì)胞系，其通過(guò)在含有0.5mg/mLG418(新霉素樣抗生素)的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中有限稀釋10-14天來(lái)進(jìn)行。通過(guò)ELISA或Western印跡針對(duì)嵌合多肽的表達(dá)篩選細(xì)胞系，并且擴(kuò)大高表達(dá)細(xì)胞系以用于大規(guī)模生長(zhǎng)。[0305]優(yōu)選的是使用經(jīng)轉(zhuǎn)化的細(xì)胞進(jìn)行長(zhǎng)期、高產(chǎn)量的蛋白質(zhì)生成，因此穩(wěn)定表達(dá)是期望的。一旦用含有與期望的表達(dá)盒一起的選擇標(biāo)志物的載體轉(zhuǎn)化這類(lèi)細(xì)胞，可以允許細(xì)胞在將它們轉(zhuǎn)換到選擇培養(yǎng)基前在富集培養(yǎng)基中生長(zhǎng)1-2天。選擇標(biāo)志物設(shè)計(jì)為賦予對(duì)選擇的抗性，并且其存在允許成功表達(dá)導(dǎo)入序列的細(xì)胞的生長(zhǎng)和回收?？梢允褂眠m合于細(xì)胞的組織培養(yǎng)技術(shù)增殖經(jīng)穩(wěn)定轉(zhuǎn)化的細(xì)胞的抗性塊。[0306]可以使用許多選擇系統(tǒng)來(lái)回收已經(jīng)經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)化以用于重組蛋白質(zhì)生成的細(xì)胞。這類(lèi)選擇系統(tǒng)包括但不限于分別在tk、hgprt或aprt細(xì)胞中的HSV胸苷激酶、次黃嘌呤-鳥(niǎo)嘌呤磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶和腺嘌呤磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶基因。還有，可以將抗代謝物抗性用作對(duì)以下基因選擇的基礎(chǔ):dhfr,其賦予對(duì)甲氨蝶呤的抗性；gpt,其賦予對(duì)霉酹酸的抗性；neo,其賦予對(duì)氨基糖苷G418的抗性；also,其賦予對(duì)綠磺隆(chlorsulfuron)的抗性；和hygro,其賦予對(duì)潮霉素的抗性。可用的其它可選擇基因包括trpB(其允許細(xì)胞利用吲哚代替色氨酸)，或hisD(其允許細(xì)胞利用組氨醇(histinol)代替組氨酸)。為轉(zhuǎn)化體的鑒定給出視覺(jué)指示的標(biāo)志物包括花色素苷、β-葡糖醛酸糖苷酶及其底物、GUS、和螢光素酶及其底物螢光素。[0307]可以使用自動(dòng)化肽合成和重組技術(shù)兩者的組合來(lái)生成本發(fā)明的嵌合多肽。例如，本發(fā)明的嵌合多肽可以含有修飾的組合，所述修飾包括缺失、取代、插入和通過(guò)PEG化(或其它模塊，例如聚合物、脂肪?；湣端酰胺化)的衍生化?？梢栽诟麟A段中生成這類(lèi)嵌合多肽。在第一階段，可以通過(guò)如描述的重組技術(shù)來(lái)生成中間嵌合多肽，其含有缺失、取代、插入和其任意組合的修飾。然后，在如本文中描述的任選純化步驟后，經(jīng)由用合適的PEG化試劑(例如來(lái)自NeKtarTransformingTherapeutics,SanCarlos,California)的化學(xué)修飾將中間嵌合多肽PEG化(或進(jìn)行其它化學(xué)衍生化，例如酰化、C端酰胺化)以產(chǎn)生期望的嵌合多肽衍生物。本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)領(lǐng)會(huì)，可以將上文所描述的規(guī)程一般化以適用于含有修飾的組合的嵌合多肽，所述修飾選自缺失、取代、插入、衍生化和本領(lǐng)域中公知的且由本發(fā)明涵蓋的其它修飾手段。[0308]可以通過(guò)本領(lǐng)域中已知的許多方法，包括如本文中描述的方法來(lái)純化肽。在一種方法中，使用WatersDeltaPr印3000系統(tǒng)通過(guò)RP-HPLC(制備型和分析型)純化肽?？梢允褂肅4、C8或C18制備柱(10μ,2.2X25cm;Vydac,Hesperia,Calif.)來(lái)分離肽，并且可以使用C4、C8或C18分析柱(5μ，0.46X25cm;Vydac)來(lái)測(cè)定純度?？梢詫⑷軇?A=0.1%TFA/水且B=0.1%TFA/CH3CN)以1.0ml/分鐘的流速投遞至分析柱，以15ml/分鐘投遞制備柱?？梢栽赪atersPicoTag系統(tǒng)上實(shí)施氨基酸分析，并使用Maxima程序處理。可以通過(guò)蒸汽相酸水解(115°C，20-24h)將肽水解。可以將水解產(chǎn)物衍生化，并通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法分析(Cohen等，ThePicoTagMethod:AManualofAdvancedTechniquesfoe-^mino^cidAnalysis，第11頁(yè)-第52頁(yè)，Mi11iporeCorporation,Milford,Mass.(1989))?？梢酝ㄟ^(guò)Μ-Scan,Incorporated(WestChester,Pa.)實(shí)施快速原子轟擊分析?？梢允褂玫饣C或碘化銫/甘油來(lái)實(shí)施質(zhì)量校正。使用飛行時(shí)間檢測(cè)的等離子體解吸電離分析可以在AppliedBiosystemsBio-1on20質(zhì)譜儀上實(shí)施。[0309]嵌合多肽表達(dá)測(cè)定法。用于測(cè)定宿主細(xì)胞的蛋白質(zhì)表達(dá)水平的方法是可用的。在以下典型的方案中例示了可用于測(cè)定宿主細(xì)胞的蛋白質(zhì)表達(dá)水平的規(guī)程。用2ul質(zhì)粒DNA(嵌合多核苷酸的表達(dá)載體)轉(zhuǎn)化約25μIBL21大腸桿菌細(xì)胞?？梢詫⒓?xì)胞鋪板，并在37°C溫育過(guò)夜或于室溫(RT)在48小時(shí)期間里溫育?？梢赃x出單個(gè)菌落，并用于在4ml具有合適抗生素的LB培養(yǎng)基中培養(yǎng)起始培養(yǎng)物達(dá)約6小時(shí)。通過(guò)向900ul儲(chǔ)液添加100ul80%無(wú)菌甘油來(lái)制備甘油儲(chǔ)液，然后可以將其溫和混合并在-80C貯存。對(duì)于TCP未誘導(dǎo)的樣品可以取出250μI樣品?？梢杂?μI起始培養(yǎng)物接種等分試樣，例如2ml含有合適抗生素的Magic培養(yǎng)基，然后可以將其于37C以300rpm溫育過(guò)夜(長(zhǎng)達(dá)24小時(shí))。如本領(lǐng)域中已知的，Magic培養(yǎng)基是自身誘導(dǎo)的?；蛘?，可以在250ml或125mlThompson燒瓶中用60μI起始培養(yǎng)物接種60ml含有合適抗生素的Magic培養(yǎng)基，然后將其于30C以300rpm溫育過(guò)夜(長(zhǎng)達(dá)24小時(shí))。溫育后，可以從每管取出250μI培養(yǎng)物，并將細(xì)胞沉淀。可以將細(xì)胞在lml50mMTrispH8,150mMNaCl中重懸，可以對(duì)其添加0.1體積(IOOul)POP培養(yǎng)試劑和Iylr-溶菌酶(在r-溶菌酶緩沖液中以1:750稀釋)。可以將混合物充分混合，并于RT溫育至少10分鐘。然后，將制備物以HOOOxG離心10分鐘?？梢詫⑸锨逡?可溶性級(jí)分)取出并保留，并且可以制備樣品以進(jìn)行凝膠分析(15μ1+5μ1?^)。可以將剩余的包含體團(tuán)粒通過(guò)超聲處理在lmll%SDS中重懸。可以制備樣品以進(jìn)行凝膠分析(15ul+5yILDS)。對(duì)于未誘導(dǎo)的樣品，可以添加1.0體積POP培養(yǎng)試劑和Iylr-溶菌酶(在r-溶菌酶緩沖液中以1:750稀釋)。可以將溶液充分混合，并于RT溫育至少10分鐘。這些樣品可以不需要離心。然后，可以制備樣品以進(jìn)行凝膠分析(15ιι1+5μ1LDS)。可以運(yùn)行IXMES緩沖液中的非還原性NU-PAGE凝膠(4-12%)，并用SimplyBlue微波方案染色?？梢赃M(jìn)行脫色過(guò)夜，如本領(lǐng)域中已知的?？梢员Ａ裟z圖像，并進(jìn)行分析以測(cè)定蛋白質(zhì)表達(dá)水平。[0310]包含體制備。對(duì)于在包含體級(jí)分中找到的嵌合多肽，以下規(guī)程可以是有益的。對(duì)于每50ml培養(yǎng)物，可以將細(xì)胞團(tuán)粒在最少100ml裂解緩沖液中重懸。在添加30ml時(shí)，可以使用IOml移液管來(lái)重懸，然后再用70ml沖洗管?？梢詫⒅貞业募?xì)胞溶液以100PSI(min)多次運(yùn)行(例如4次通過(guò))流過(guò)微射流儀(microfIuidizer),注意貫穿整個(gè)過(guò)程將室在冰水中保持?？梢砸?4000xg將流化的漿體離心20分鐘(例如JLA10.5，10，OOOrpm,使用250mlNa!ge_tie?_瓶)。在用移液管尖端破壞后，可以將包含體團(tuán)粒在冰上在冰冷的裂解緩沖液中用攪拌棒和攪拌盤(pán)于4C重懸I小時(shí)。在用移液管尖端破壞后，可以將團(tuán)粒在蒸餾H20中用攪拌棒和攪拌盤(pán)于4C第二次重懸I小時(shí)，接著以14000xg離心15分鐘。可以將上清液取出并棄去?？梢杂?80C貯存所得物。[0311]蛋白質(zhì)純化。如本文中描述的，眾多用于分離表達(dá)的多肽的方法是已知的。以下是一個(gè)例子?？梢詫w團(tuán)粒在合適體積的溶解緩沖液(SM尿素或SM胍，50mMTris,IOmMDTT,pH7.75)中在RT溶解I小時(shí)。溶解的團(tuán)?？梢砸?7000g離心20分鐘。可以將經(jīng)過(guò)濾(例如0.4um)的上清液于RT逐滴轉(zhuǎn)移到適當(dāng)體積的重折疊緩沖液(50mMTris-HC1，1M尿素，0.8M精氨酸，4mM半胱氨酸，ImM胱胺；pH8)中。然后，可以將所得物在溫和混合的情況下置于4°C過(guò)夜或更長(zhǎng)?？梢詫悠窛饪s，并在4C環(huán)境中使用GEHealthsciencesAKTAFPLC?以l_2ml/分鐘在凝膠過(guò)濾柱(Superdex?7526/60)上運(yùn)行。可以將含有合適蛋白質(zhì)的級(jí)分經(jīng)由SDS-PAGE鑒定，合并，并運(yùn)行通過(guò)第二凝膠過(guò)濾柱。然后，可以將合并的蛋白質(zhì)在Amicon濾器中濃縮至合適的濃度，并使用例如Endosafe?PTS閱讀器(CharlesRiver)測(cè)定內(nèi)毒素水平，如本領(lǐng)域中已知的。一旦蛋白質(zhì)樣品已經(jīng)通過(guò)內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)，那么就可以將其無(wú)菌過(guò)濾，分配成等分試樣，并運(yùn)行經(jīng)過(guò)質(zhì)量控制測(cè)定法。質(zhì)量控制測(cè)定法可以包括分析型HPLC-SEC、非還原性SDSPAGE和RPHPLC-MS以獲得大致質(zhì)量。可以在lxPBS(137mM氯化鈉、2.7mM氯化鉀、4.3mM磷酸二鈉、1.4mM磷酸單鉀，pH7.2)中獲得蛋白質(zhì)，分配成等分試樣，并速凍以于-70C至-80°C貯存。[0312]IV.使用和治療疾病的方法[0313]適應(yīng)癥。涵蓋通過(guò)本文中描述的多肽化合物和方法有益治療的多種疾病和病癥。[0314]肥胖癥和超重。肥胖癥及其關(guān)聯(lián)病癥(包括超重)是美國(guó)和全世界的常見(jiàn)且嚴(yán)重的公共健康問(wèn)題。上身肥胖癥是2型糖尿病已知的最強(qiáng)的風(fēng)險(xiǎn)因子，并且是心血管疾病的強(qiáng)風(fēng)險(xiǎn)因子。肥胖癥是高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化、充血性心力衰竭、中風(fēng)、膽囊疾病、骨關(guān)節(jié)炎、睡眠呼吸暫停、生殖性病癥如多囊卵巢綜合征、乳腺癌、前列腺癌和結(jié)腸癌、以及全身麻醉并發(fā)癥發(fā)生率增加的公認(rèn)的風(fēng)險(xiǎn)因子。參見(jiàn)例如Kopelman,2000,Nature404:635-43。[0315]肥胖癥縮短壽命，并且攜帶上文所列出的合并癥，以及病癥如感染、靜脈曲張、黑棘皮病、濕疫、運(yùn)動(dòng)不耐(exerciseintolerance)、胰島素抗性、高血壓血膽固醇過(guò)多、膽石癥、矯形損傷(orthopedicinjury)和血栓栓塞性疾病的嚴(yán)重風(fēng)險(xiǎn)。參見(jiàn)例如Rissanen等，1990，Br.Med.J.，301:835-7。肥胖癥也是稱作胰島素抗性綜合征或“綜合征X”和代謝綜合征的一組狀況的風(fēng)險(xiǎn)因子。肥胖癥和關(guān)聯(lián)病癥的全世界醫(yī)學(xué)成本是巨大的。[0316]認(rèn)為肥胖癥的發(fā)病機(jī)制是多因素的。一個(gè)問(wèn)題是，在肥胖的受試者中，營(yíng)養(yǎng)利用度和能量消耗不進(jìn)入平衡，直到存在有過(guò)量的脂肪組織。中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)控制能量平衡，并協(xié)調(diào)適合于動(dòng)物代謝狀態(tài)的多種行為的、自主的和內(nèi)分泌的活動(dòng)?？刂七@些活動(dòng)的機(jī)制或系統(tǒng)在前腦(例如下丘腦)、后腦(例如腦干)和脊髓間廣泛分布。最終，來(lái)自這些系統(tǒng)的代謝(即燃料利用度)和認(rèn)知(即習(xí)得偏愛(ài))信息得到整合，并且開(kāi)啟(進(jìn)餐獲取和啟動(dòng))或關(guān)閉(進(jìn)餐終止)參與食欲(食物尋找)和完成(攝食)行為的決定。認(rèn)為下丘腦主要負(fù)責(zé)整合這些信號(hào)，然后向腦干發(fā)出命令。腦干核控制完成運(yùn)動(dòng)控制系統(tǒng)的元件(例如負(fù)責(zé)咀嚼和吞咽的肌肉)。因而，這些CNS核照字面意義稱為構(gòu)成攝取行為的“最終共同途徑”。[0317]神經(jīng)解剖學(xué)和藥理學(xué)證據(jù)支持能量和營(yíng)養(yǎng)穩(wěn)態(tài)的信號(hào)在前腦核中整合，而且完成運(yùn)動(dòng)控制系統(tǒng)駐留于腦干核中，可能在圍繞三叉神經(jīng)運(yùn)動(dòng)核的區(qū)域中。在下丘腦和腦干之間有廣泛的交互連接。多種CNS定向性抗肥胖癥治療劑(例如小分子和肽)主要聚焦于駐留于下丘腦中的前腦基質(zhì)和/或駐留于腦干中的后腦基質(zhì)。[0318]肥胖癥仍然是一種不太好治療的、慢性的、基本上難治的代謝性病癥。因而，需要可用于受試者中的重量減輕和/或重量維持的新療法。這類(lèi)療法會(huì)對(duì)受試者的健康產(chǎn)生深刻的有益效果。采用本文中公開(kāi)的嵌合多肽(單獨(dú)地或與其它抗肥胖癥藥劑聯(lián)合(參見(jiàn)例如TO2009064298和US20080207512))的方法和療法可以提供這類(lèi)有益效果。[0319]瘦蛋白缺陷。已經(jīng)顯示了瘦蛋白缺陷導(dǎo)致肥胖癥。一種瘦蛋白缺陷形式是先天性瘦蛋白缺陷，即一種罕見(jiàn)的遺傳病癥。參見(jiàn)Montaque等，1997，Nature387:903-908。重度瘦蛋白缺陷可以是不受控制的胰島素缺陷性糖尿病的結(jié)果，所述不受控制的胰島素缺陷性糖尿病源自對(duì)胰島素分泌性β細(xì)胞的破壞。理論化的是，胰島素缺乏導(dǎo)致脂肪組織中甘油三酯的合成和貯存，這阻止重量增加，并且繼而顯著降低血漿瘦蛋白水平，因?yàn)槭莸鞍资窃谥窘M織中合成的?？梢杂檬莸鞍滋鎿Q療法，諸如經(jīng)由每日瘦蛋白或瘦蛋白激動(dòng)劑注射來(lái)治療這些和其它瘦蛋白缺陷、以及源自這類(lèi)缺陷的疾病及病癥。本文中描述的嵌合多肽能提供對(duì)這類(lèi)疾病和病癥的更方便的且有利的治療性處理。[0320]糖尿病和心血管疾病。認(rèn)為糖尿病是一種復(fù)雜的慢性疾病，其中糖尿病患者中占所有病例死亡的60%至70%是心血管并發(fā)癥的結(jié)果。糖尿病不僅被視為冠心病風(fēng)險(xiǎn)等同體，而且還鑒定為不利事件的獨(dú)立預(yù)測(cè)物，所述不利事件包括復(fù)發(fā)性心肌梗死、充血性心力衰竭、和心血管事件后的死亡。預(yù)期采用更緊密的葡萄糖控制和心血管風(fēng)險(xiǎn)因子的攻擊性治療會(huì)降低冠心病并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)，并且改善糖尿病患者間的總體存活。然而,糖尿病患者比非糖尿病患者以2至3倍更可能經(jīng)歷急性心肌梗死，并且糖尿病患者比非糖尿病患者少活8至13年。[0321]了解糖尿病/急性心肌梗死患者的高風(fēng)險(xiǎn)性質(zhì),美國(guó)心臟病學(xué)會(huì)/美國(guó)心臟學(xué)會(huì)(AmericanCollegeofCardiology/AmericanHeartAssociation,“ACC/AHA，，)不穩(wěn)定心絞痛(unstableangina)或非ST-升高心肌梗死(統(tǒng)稱為“ACS”)住院患者管理臨床實(shí)踐指南最近認(rèn)為住院糖尿病患者是一個(gè)需要高血糖癥攻擊性管理的特殊群體。具體地，該指南宣稱住院糖尿病/ACS患者的降葡萄糖療法應(yīng)當(dāng)靶向?yàn)檫_(dá)到小于10mg/dL的餐前葡萄糖、小于180mg/dL的最大每日目標(biāo)(maximumdailytarget)、和小于7%的出院后血紅蛋白Alc0[0322]在全國(guó)性老年ACS患者樣本中，表明糖尿病患者中30天死亡率的增加與醫(yī)院收治后具有較高葡萄糖值的患者一致。參見(jiàn)“DiabeticCoronaryArteryDisease&Intervention,”CoronaryTherapeutics2002,OakBrook,ILj2002年9月20日。有越來(lái)越多的證據(jù)的是，醫(yī)院收治后持續(xù)的高血糖而非短暫升高的葡萄糖與嚴(yán)重的不利事件相關(guān)。盡管不容易知道患者中高血糖和血管風(fēng)險(xiǎn)的理想度量，但是表現(xiàn)為住院期間的均值葡萄糖值對(duì)死亡率最具預(yù)測(cè)性。在來(lái)自美國(guó)的超過(guò)40家醫(yī)院的ACS患者的不同研究中，發(fā)現(xiàn)與醫(yī)院收治后的隨機(jī)葡萄糖值形成對(duì)比，持續(xù)性高血糖對(duì)住院死亡率更具預(yù)測(cè)性。參見(jiàn)AcuteCoronarySyndromeSummit:AStateoftheArtApproach,KansasCity,MO,2002年9月21日。與收治后的葡萄糖值相比，在整個(gè)住院里葡萄糖控制的邏輯回歸模型對(duì)死亡率最具預(yù)測(cè)性。在120mg/dL上葡萄糖每升高10mg/dL，住院期間的死亡風(fēng)險(xiǎn)幾乎增加2倍。在連續(xù)性糖尿病/ACS患者的一個(gè)較小分組中，隨著醫(yī)院收治后葡萄糖水平升高，存在有I年時(shí)死亡率的分級(jí)增加。在醫(yī)院背景中，ACC/AHA指南建議啟動(dòng)攻擊性胰島素療法以實(shí)現(xiàn)住院期間的較低血液葡萄糖。[0323]已經(jīng)報(bào)道了瘦蛋白對(duì)于治療糖尿病可以具有直接的益處，特別是在I型糖尿病和II型糖尿病(存在或不存在肥胖癥)中，且更特別是在低血清瘦蛋白的狀況中。已經(jīng)報(bào)道了瘦蛋白補(bǔ)充在伴有或沒(méi)有肥胖癥的I和2型糖尿病的多種動(dòng)物模型中降低或阻止高胰島素血癥、胰島素抗性和高血糖癥。例如，通過(guò)藥理學(xué)施用瘦蛋白或用腺病毒基因療法產(chǎn)生的高瘦蛋白血漿水平在STZ誘導(dǎo)的糖尿病中降低高血糖和關(guān)聯(lián)的血漿胰高血糖素水平升高，盡管胰島素水平持續(xù)較低。[0324]脂質(zhì)調(diào)節(jié)疾病。如本領(lǐng)域中已知的，脂肪營(yíng)養(yǎng)不良的特征在于身體脂肪組織的異?；蜃冃孕誀顩r。血脂障礙是血液中正常脂質(zhì)組分受破壞。認(rèn)為延長(zhǎng)的胰島素水平的升高可以導(dǎo)致血脂障礙。高脂血是血液中存在升高或異常水平的脂質(zhì)和/或脂蛋白。下丘腦性閉經(jīng)是一種由于牽涉下丘腦的問(wèn)題所致的月經(jīng)停止數(shù)月的狀況。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了具有下丘腦性閉經(jīng)的女性中瘦蛋白替換療法改善生殖、甲狀腺和生長(zhǎng)激素軸和骨形成標(biāo)志物，而不引起不利效應(yīng)。參見(jiàn)例如Oral等，NEnglJMed.2004，351:959-962，987-997。脂肪肝病，例如非酒精性脂肪肝病(NAFLD)指一大批肝病，其范圍為簡(jiǎn)單的脂肪肝(脂肪變性(steatosis))，至非酒精性脂肪肝炎(NASH)，至肝硬化(cirrhosis)(不可逆的、進(jìn)行性肝瘢痕化)。NAFLD的所有階段共同具有肝臟細(xì)胞(肝細(xì)胞)中的脂肪積累(脂肪浸潤(rùn))。認(rèn)為瘦蛋白是包括NASH在內(nèi)的各種慢性肝病中炎癥和纖維化進(jìn)展的關(guān)鍵調(diào)節(jié)物之一。見(jiàn)例如Ikejima等,HepatologyRes.33:151-154。[0325]另外，不希望受任何理論束縛，認(rèn)為2型糖尿病中的相對(duì)胰島素缺陷、葡萄糖毒性、和通過(guò)經(jīng)由門(mén)靜脈從腹內(nèi)脂肪組織投遞的升高而增加的肝游離脂肪酸負(fù)荷暗示為脂肪肝病癥的可能原因。實(shí)際上，已經(jīng)假設(shè)進(jìn)食行為是驅(qū)動(dòng)肥胖癥的代謝綜合征及其許多必然結(jié)果(包括NASH)的關(guān)鍵因素。因而，如已經(jīng)在2型糖尿病中證明的，針對(duì)減少食物攝取并增加小餐次數(shù)的治療可以有效治療并預(yù)防NASH。促進(jìn)胰島素分泌和體重減少，并延遲胃排空的藥物也有效改善葡萄糖耐受性，并且如此可以改善脂肪肝及其伴隨的高胰島素血癥。如此，嵌合瘦蛋白多肽的使用可以完全適合作為針對(duì)此狀況的治療形式。因而，本文中描述的嵌合多肽在治療脂肪肝病癥中可以是有用的。[0326]阿耳茨海默氏病。如本領(lǐng)域中已知的，阿耳茨海默氏病(AD)與腦中的斑塊和纏結(jié)(其包括Α-β蛋白的失調(diào))有關(guān)。認(rèn)為腦脂質(zhì)復(fù)雜地牽涉Α-β相關(guān)的致病途徑，且脂質(zhì)穩(wěn)態(tài)的一種重要調(diào)控物為瘦蛋白。因而，瘦蛋白可以調(diào)控雙向Α-β動(dòng)態(tài)，在胞外降低其水平。實(shí)際上，已經(jīng)表明了對(duì)AD轉(zhuǎn)基因動(dòng)物長(zhǎng)期施用瘦蛋白降低腦Α-β負(fù)載，從而成為其治療潛力的基礎(chǔ)。參見(jiàn)Fewlass等，2004，F(xiàn)ASEBJ.，18:1870-1878。另外，2型糖尿病和AD共享的流行病學(xué)和生化特征在于兩者都以具有纖維狀構(gòu)象的不溶性蛋白聚集物(在2型DM胰島中為胰淀素(amylin)，而在AD腦中為Αβ)為特征。不希望受任何理論束縛，認(rèn)為類(lèi)似的毒性機(jī)制可以表征2型DM和AD。參見(jiàn)Lim等，F(xiàn)EBSLett.，582:2188-2194。[0327]代謝綜合征X。代謝綜合征X的特征為胰島素抗性、血脂障礙、高血壓、和脂肪組織的內(nèi)臟分布，并且在2型糖尿病的病理生理學(xué)中起著樞要作用。還已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了它與NASH、纖維化、和肝損傷高度關(guān)聯(lián)。因而，本文中描述的嵌合多肽可用于治療代謝綜合征X。[0328]亨廷頓氏病。亨廷頓氏病是一種常染色體顯性的神經(jīng)變性性疾病。該疾病的特征包括運(yùn)動(dòng)障礙、癡呆、精神病問(wèn)題和無(wú)意識(shí)的重量減輕。本文中描述的嵌合多肽可用于治療亨廷頓氏病。[0329]因而，在一個(gè)方面，提供了用于治療受試者中疾病或病癥的方法。受試者需要治療該疾病或病癥。所述疾病或病癥可以是脂肪營(yíng)養(yǎng)不良、血脂障礙、高脂血、超重、肥胖癥、下丘腦性閉經(jīng)、阿耳茨海默氏病、瘦蛋白缺陷、脂肪肝病或糖尿病(包括I型和II型)?？梢酝ㄟ^(guò)本文中描述的化合物和方法治療的其它疾病和病癥包括非酒精性脂肪肝炎(NASH)、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、代謝綜合征X和亨廷頓氏病。治療方法包括以有效治療該疾病或病癥的量對(duì)受試者施用如本文中描述的嵌合多肽。[0330]V.測(cè)定法[0331]一般地，用于生成和測(cè)定本文中描述的嵌合多肽的方法是熟練技術(shù)人員可用的。此外，具體的方法記載于本文以及本文引用的專利公開(kāi)文本和其它參考文獻(xiàn)中，其通過(guò)提述并入以用于此額外目的。[0332]食物攝取。不希望受任何理論束縛，認(rèn)為食物攝取可用于評(píng)估如本文中描述的化合物的效用。例如，已知許多代謝病理學(xué)涉及食物攝取(例如糖尿病、肥胖癥)。因而，可以進(jìn)行初始篩選以確定通過(guò)施用本文中描述的化合物調(diào)控食物攝取的程度，并且陽(yáng)性初始篩選在化合物的后續(xù)開(kāi)發(fā)中可以是有用的。[0333]體外測(cè)定法。不希望受任何理論或作用機(jī)制束縛，認(rèn)為體外(例如受體)測(cè)定法的結(jié)果和藥劑用于治療代謝性疾病和病癥的效用之間存在相關(guān)性。因而，體外測(cè)定法(例如基于細(xì)胞的測(cè)定法)可用作潛在代謝劑的篩選策略，如本文中描述的。多種體外測(cè)定法是本領(lǐng)域中已知的，包括那些如下描述的。[0334]瘦蛋白結(jié)合測(cè)定法?？梢酝ㄟ^(guò)測(cè)試化合物在從由32DOBECA細(xì)胞系呈現(xiàn)的表面膜表達(dá)的嵌合瘦蛋白(Hu)-EPO(Mu)受體置換1251-重組瘦蛋白(鼠)中的效力來(lái)測(cè)量瘦蛋白結(jié)合(TBiolCheml998:273(29):18365-18373)0可以從收獲的32DOBECA細(xì)胞匯合細(xì)胞培養(yǎng)物通過(guò)勻漿化制備純化的細(xì)胞膜?？梢栽?6孔聚苯乙烯板中將膜與1251-reC_鼠瘦蛋白和遞增濃度的測(cè)試化合物于環(huán)境溫度一起溫育3小時(shí)。然后，通過(guò)快速過(guò)濾到在0.5%PEI(聚乙烯亞胺)中預(yù)封閉至少60’的96孔GF/B板上分開(kāi)結(jié)合的和未結(jié)合的配體級(jí)分。然后，可以干燥玻璃纖維板，添加閃爍體，并通過(guò)在能夠讀出放射性標(biāo)記的碘的多孔閃爍計(jì)數(shù)器上閱讀來(lái)測(cè)定CPM。[0335]瘦蛋白功能測(cè)定法?？梢栽谟脺y(cè)試化合物處理異位表達(dá)嵌合Hu-瘦蛋白/Mu-EPO受體的32D-Keptin細(xì)胞后測(cè)量升高的磷酸化STAT5(信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)物和轉(zhuǎn)錄激活物5)水平?？梢允?2D-Keptin細(xì)胞(與32D-0BECA細(xì)胞相同，但是在具有瘦蛋白的培養(yǎng)物中維持)脫離瘦蛋白過(guò)夜，然后在96孔板中用測(cè)試化合物于37°C處理30分鐘，接著進(jìn)行細(xì)胞提取?？梢允褂肞erkinElmerAScreeii"SwreFire'"PSTAT5測(cè)定試劑盒以384孔形式(Proxiplate?384Plus)測(cè)定細(xì)胞裂解物中的pSTAT5水平?？梢韵鄬?duì)于來(lái)自用人瘦蛋白處理的細(xì)胞的細(xì)胞裂解物中的最大信號(hào)測(cè)定測(cè)試化合物的效力。[0336]V1.藥物組合物[0337]在一個(gè)方面，提供了包含與藥學(xué)可接受賦形劑(例如載體)組合的本文中描述的化合物的藥物組合物。如本文中使用的，術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)可接受載體”指藥用賦形劑，例如適合于腸或胃腸外應(yīng)用的藥學(xué)、生理學(xué)可接受的有機(jī)或無(wú)機(jī)載體物質(zhì)，其不與活性劑有害地起反應(yīng)。合適的藥學(xué)可接受載體包括水、鹽溶液(例如林格(Ringer)氏溶液等)、醇、油、明膠、和碳水化合物如乳糖、直鏈淀粉或淀粉、脂肪酸酯、羥甲基纖維素、和聚乙烯吡咯烷?？梢詫⑦@類(lèi)制劑滅菌，并且在期望時(shí)與不與本發(fā)明的化合物有害地起反應(yīng)的輔助劑如潤(rùn)滑劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、濕潤(rùn)劑、乳化劑、用于影響滲透壓的鹽、緩沖劑、染料、和/或芳香物質(zhì)等混口ο[0338]Α.方法[0339]可以對(duì)受試者單獨(dú)地或者可以共施用本文中描述的嵌合多肽。共施用意為包括單獨(dú)或組合地(超過(guò)一種化合物)同時(shí)或序貫施用化合物。例如，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了可以用包括瘦蛋白(例如美曲普汀)和某些其它抗肥胖癥化合物的聯(lián)合療法有益地治療肥胖癥。參見(jiàn)例如美國(guó)公開(kāi)的申請(qǐng)N0.2008/0207512。因而，本文中描述的嵌合多肽對(duì)于肥胖癥的治療可以是有用的。[0340]在一些實(shí)施方案中，本文中描述的配制劑和方法進(jìn)一步提供了與一種或多種抗糖尿病劑如抗高血糖劑，例如胰島素、胰淀素(amylins)、普蘭林肽(pramlintide)、二甲雙胍(metformin)共施用嵌合多肽。[0341]在一些實(shí)施方案中，本文中描述的配制劑和方法進(jìn)一步提供了與一種或多種膽固醇和/或甘油三酯降低劑共施用嵌合多肽。例示性藥劑包括HMGCoA還原酶抑制劑(例如阿托伐他汀(atorvastatin)、氟伐他汀(fIuvastatin)、洛伐他汀(1vastatin)、普伐他汀(pravastatin)、羅蘇伐他汀(rosuvastatin)、辛伐他汀(simvastatin));膽汁螯合劑(例如考來(lái)維侖(colesevelam)、考來(lái)烯胺(cholestyramine)、考來(lái)替泊(colestipol))；貝特類(lèi)(fibrates)(例如非諾貝特(fenofibrate)、氯貝丁酯(clofibrate)、吉非貝齊(gemfibrozil));依澤替米貝(ezetimibe)、煙堿酸、普羅布考(probucol)、洛伐他汀/煙酸(niacin)組合；阿托伐他汀/氨氯地平(amlodipine)組合；和辛伐他汀/依澤替米貝組合。[0342]或者，可以與其它抗肥胖癥藥劑如艾塞那肽(exenatide)或利拉魯肽(Iiraglutide)共施用個(gè)別嵌合多肽。[0343]由于瘦蛋白化合物是治療活性化合物，本公開(kāi)內(nèi)容提供了用作藥物(即在療法中使用)的組合物。本文中還明確涵蓋并例示包含嵌合多肽(液體或干形式)和任選地至少一種藥學(xué)可接受載體和/或賦形劑的組合物。[0344]可以通過(guò)與第二藥劑分開(kāi)施用嵌合多肽，或者通過(guò)施用包含嵌合多肽和第二藥劑的單一藥用配制劑來(lái)實(shí)現(xiàn)共施用。適合于第二藥劑的劑量方案一般是本領(lǐng)域中已知的。[0345]在期望時(shí)，也可以與如本領(lǐng)域中已知的其它活性物質(zhì)(例如以降低代謝性降解)或其它治療活性劑共施用所述制劑。[0346]胰淀素。胰淀素是由胰腺β細(xì)胞合成的肽激素，其響應(yīng)營(yíng)養(yǎng)物攝取而與胰島素共分泌。胰淀素的序列在哺乳動(dòng)物物種間高度保守，其與降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)、降鈣素、垂體中間葉激素、和腎上腺髓質(zhì)素具有結(jié)構(gòu)相似性，如本領(lǐng)域中已知的。胰淀素的葡萄糖調(diào)節(jié)作用補(bǔ)充胰島素的葡萄糖調(diào)節(jié)作用，其通過(guò)經(jīng)由抑制營(yíng)養(yǎng)物刺激的胰高血糖素分泌調(diào)節(jié)循環(huán)中葡萄糖出現(xiàn)的速率，并減緩胃排空來(lái)實(shí)現(xiàn)。在經(jīng)胰島素治療的糖尿病患者中，普蘭林肽(人胰淀素的一種合成的且等效的類(lèi)似物)通過(guò)抑制不適當(dāng)?shù)厣叩牟秃笠雀哐撬胤置诓⒀泳徫概趴諄?lái)降低餐后葡萄糖偏移(excursion)。大鼠胰淀素、人胰淀素和普蘭林肽的序列如下:[0347]大鼠胰淀素:KCNTATCATQRLANFLVRSSNNLGPVLPPTNVGSNTY(SEQIDNO:86)；[0348]人胰淀素:KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGAILSSTNVGSNTY(SEQIDNO:87)；[0349]普蘭林肽:KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQIDNO:88)。[0350]達(dá)瓦林肽(Davalintide)。達(dá)瓦林肽，也稱為“AC-2307”，是一種可用于治療多種疾病適應(yīng)癥的有力的胰淀素激動(dòng)劑。參見(jiàn)W02006/083254和W02007/114838，每篇通過(guò)提述完整并入本文中并用于所有目的。達(dá)瓦林肽是一種嵌合肽，其具有胰淀素或降鈣素及其類(lèi)似物的N端環(huán)區(qū)、降鈣素或其類(lèi)似物的α-螺旋區(qū)的至少一部分的α-螺旋區(qū)或具有胰淀素α-螺旋區(qū)和降鈣素α-螺旋區(qū)或其類(lèi)似物的一部分的α-螺旋區(qū)、和胰淀素或降鈣素的C端尾部區(qū)。人降鈣素、鮭魚(yú)降鈣素和達(dá)瓦林肽的序列如下:[0351]人降鈣素:CGNLSTCMLGTYTQDFNKFHTFPQTAIGVGAP(SEQIDNO:89)；[0352]鮭魚(yú)降鈣素:CSNLSTCVLGKLSQELHKLQTYPRTNTGSGTP(SEQIDNO:90)；[0353]達(dá)瓦林肽:KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQIDNO:91)。[0354]不希望受任何理論束縛，認(rèn)為胰淀素和達(dá)瓦林肽及其片段和類(lèi)似物可要求C端酰胺化來(lái)引發(fā)完全的生物學(xué)應(yīng)答。理解的是，可以在C端酰胺化胰淀素化合物，如本文中描述的那些胰淀素化合物，其包括胰淀素和/或達(dá)瓦林肽及其片段和類(lèi)似物。[0355]“胰淀素激動(dòng)劑化合物”包括天然的胰淀素肽、胰淀素類(lèi)似物肽、和其它具有胰淀素激動(dòng)劑活性的化合物(例如小分子)?！耙鹊硭丶?dòng)劑化合物”可以自天然來(lái)源衍生，可以是合成的，或可以自重組DNA技術(shù)衍生。胰淀素激動(dòng)劑化合物具有胰淀素激動(dòng)劑受體結(jié)合活性，并且可以包含氨基酸(例如天然的、非天然的或其組合)，肽模擬物，化學(xué)模塊等。使用胰淀素受體結(jié)合測(cè)定法或通過(guò)在比目魚(yú)肌測(cè)定法中測(cè)量胰淀素激動(dòng)劑活性，熟練技術(shù)人員會(huì)識(shí)別胰淀素激動(dòng)劑化合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，胰淀素激動(dòng)劑化合物在胰淀素受體結(jié)合測(cè)定法中會(huì)具有約200nM或更低、約IOOnM或更低、或約50nM或更低的IC5tl，所述胰淀素受體結(jié)合測(cè)定法諸如在本文、美國(guó)專利N0.5，686，411、和美國(guó)公開(kāi)文本N0.2008/0176804(其公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)提述完整并入本文并用于所有目的)中描述的胰淀素受體結(jié)合測(cè)定法。在一個(gè)實(shí)施方案中，胰淀素激動(dòng)劑化合物在比目魚(yú)肌測(cè)定法(如在本文中和美國(guó)專利N0.5，686，411中記載的)中會(huì)具有約20nM或更低、約15nM或更低、約IOnM或更低、或約5nM或更低的EC5tlt5在一個(gè)實(shí)施方案中，胰淀素激動(dòng)劑化合物與25’28’29Pro-人胰淀素具有至少90%或100%序列同一性。在一個(gè)實(shí)施方案中，胰淀素激動(dòng)劑化合物是胰淀素(例如人胰淀素、大鼠胰淀素等)和降鈣素(例如人降鈣素、鮭魚(yú)降鈣素等)的肽嵌合物。合適的且例示性的胰淀素激動(dòng)劑化合物還記載于美國(guó)公開(kāi)文本N0.2008/0274952中，其公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)提述完整并入本文并用于所有目的。[0356]如本文中使用的，“胰淀素類(lèi)似物”意指與胰淀素的天然存在形式(大鼠的或人的或來(lái)自任何其它物種的)具有至少50%序列同一性，優(yōu)選地至少70%序列同一性，且通過(guò)對(duì)參照氨基酸序列的修飾(包括插入、取代、延伸和/或缺失)自其衍生而來(lái)的胰淀素激動(dòng)劑。[0357]胰淀素類(lèi)似物序列與參照胰淀素可以具有至少50%,55%,60%,65%,70%,75%,80%,90%或95%的氨基酸序列同一性。在一個(gè)方面,相對(duì)于參照化合物，類(lèi)似物具有O,I,2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15或甚至16處氨基酸取代、插入、延伸、和/或缺失。在一個(gè)實(shí)施方案中，胰淀素類(lèi)似物可以包含保守或非保守的氨基酸取代(包括非天然的氨基酸和L和D形式)。優(yōu)選地，這些類(lèi)似物為肽、肽衍生物或肽模擬物。典型的胰淀素類(lèi)似物會(huì)是肽，特別是32-37個(gè)氨基酸，例如27-45，特別是28-38，且甚至31-36個(gè)氨基酸的肽。[0358]與大鼠和人胰淀素具有同一性的胰淀素類(lèi)似物包括25’28’29Pi*0-h-胰淀素(普蘭林肽)；脫」Lys-h-胰淀素；25Pro,26Val,28’29Pro-h-胰淀素；18Arg,25’28Pro-h-胰淀素;脫」Lys,18Arg,25’28Pro-h-胰淀素；18Arg,25’28’29Pro-h-胰淀素；脫」Lys,18Arg,25’28’29Pro-h-胰淀素；脫-^Lys2W9Pro-11-胰淀素；25Pro,26Val,28’29Pro-h_胰淀素；28Pro_h-胰淀素，2，7_環(huán)-[2Asp,7Lys]_h_胰淀素；2_37h_胰淀素；1Ala-11-胰淀素；2Ala-h-胰淀素；2，7Ala_h-胰淀素；1Ser-11-胰淀素；29Pro-h-胰淀素；25’28Pro-h-胰淀素；脫-1Lys,25’28Pro_h-胰淀素；23Leu,25Pro,26Val,28’29Pro_h-胰淀素；23Leu25Pro26Val28Pro-h-胰淀素；脫-1Lys,23Leu,25Pro,26Val,28Pro-h-胰淀素；18Arg,23Leu,25Pro,26Val,28Pro-h-胰淀素；18Arg,23Leu,25’28’29Pro_h-胰淀素；18Arg23Leu,25’28Pro_h-胰淀素；17Ile,23Leu,25’28’29Pro_h-胰淀素；17Ile,25’28’29Pro_h-胰淀素；脫-1Lys,17Ile,23Leu,25’28’29pro-h-胰淀素；17Ile,18Arg,23Leu_h_胰淀素；17Ile,18Arg,23Leu,26Val,29Pro_h-胰淀素；17Ile,18Arg,23Leu,25Pro,26Val,28’29Pro_h-膜淀素；13Thr,21His,23Leu,26Ala,28Leu,29Pro,31Asp_h_膜淀素；13Thr,21His,23Leu,26Ala,29Pro,31Asp_h_膜淀素Jj^-1Lys,13Thr,21His,23Leu,26Ala,28Pro,31Asp-h-膜淀素；13Thr,18Arg,21His,23Leu,26Ala,29Pro,31Asp_h_膜淀素；13Thr,18Arg,21His，23Leu,28’29Pro，31Asp-h_胰淀素；和13Thr,18Arg,21His,23Leu,25Pro,26Ala,28’29Pro，31Asp-h_胰淀素。[0359]胰淀素類(lèi)似物包括下述式⑴的殘基1-37的氨基酸序列，其中式⑴中列出的氨基酸的多達(dá)25%可以缺失或用不同氨基酸取代:[0360]X，-Xaal-Cys2-Asn3-Thr4-Ala5-Thr6-Cys7-Ala8-Thr9-Glnio-Argll-Leu12-Ala13-Asn14-Phei5-Leul6-Vali7-His18-Ser19-Ser20-Xaa21-Asn22-Phe23-Xaa24-Xaa25-Xaa26-Xaa27-Xaa28-Xaa29-Thr30-Xaa31-Val32-Gly33-Ser34-Asn35-Thr36-Tyr37-X(SEQIDNO:92)(I)。[0361]在式⑴中，V是氫、N端加帽基團(tuán)、或與持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)模塊的接頭。Xaa1是Lys或鍵，Xaa21是Lys>Cys或Asn,Xaa24是Lys>Cys或Gly,Xaa25是Lys>Cys或Pro,Xaa26是Lys>Cys或He,Xaa27是Lys>Cys或Leu,Xaa28是Lys>Cys或Pro,Xaa29是Lys>Cys或Pro,且Xaa31是Lys、Cys或Asn。進(jìn)一步關(guān)于式(I)，變量X代表C端官能度(例如C端帽)。X是取代或未取代的氨基、取代或未取代的烴基氨基(alkyIamino)、取代或未取代的二烴基氨基、取代或未取代的環(huán)烴基氨基、取代或未取代的芳基氨基、取代或未取代的芳烷基氨基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的芳氧基、取代或未取代的芳烷基氧基、或羥基。如果具有式(I)殘基1-37的序列的多肽組分的C端用官能度X加帽，那么優(yōu)選地，X是胺，由此形成C端酰胺。在一些實(shí)施方案中，在依照式(I)的多肽組分中缺失或取代式(I)殘基1-37的氨基酸的多達(dá)5%,10%,15%,20%,25%,30%,35%,40%,45%或甚至50%。在一些實(shí)施方案中，相對(duì)于式(I)中列出的氨基酸序列，胰淀素類(lèi)似物組分具有0，I,2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15或甚至16處氨基酸取代。在一些實(shí)施方案中，胰淀素類(lèi)似物具有相對(duì)于依照式(I)的氨基酸序列的殘基1-37具有限定序列同一'丨生的序列。在一些實(shí)施方案中，本文中描述的胰淀素類(lèi)似物和式(I)的殘基1-37之間的序列同一性為50%，55%,60%,65%,70%,75%,80%,85%,90%,95%或甚至更高。在一些實(shí)施方案中，可以缺失或用不同氨基酸取代式(I)的殘基1-37中列出的氨基酸的多達(dá)50%,45%,40%,35%,30%,25%,20%,15%,10%,5%或甚至更少。在一些實(shí)施方案中，序列同一性在75%-100%的范圍內(nèi)。在一些實(shí)施方案中，序列同一性在75%-90%的范圍內(nèi)。在一些實(shí)施方案中，序列同一性在80%-90%的范圍內(nèi)。在一些實(shí)施方案中，序列同一'I"生為至少75%。在一些實(shí)施方案中,胰淀素類(lèi)似物具有式(I)的殘基1-37的序列。[0362]在一些實(shí)施方案中，胰淀素類(lèi)似物(包括式⑴的那些胰淀素類(lèi)似物)形成多肽組分的基礎(chǔ)，所述多肽組分與一種或多種持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)模塊連接(任選地經(jīng)由接頭進(jìn)行)，以形成胰淀素多肽綴合物。如此，多肽組分充當(dāng)模板(“多肽模板”)，其優(yōu)選地通過(guò)共價(jià)附接來(lái)與一種或多種持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)模塊附接。持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)模塊與多肽組分的連接可以經(jīng)由如本文中描述的接頭進(jìn)行。或者，持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)模塊與多肽組分的連接可以經(jīng)由直接的共價(jià)鍵進(jìn)行。持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)模塊可以是如本文中描述的水溶性聚合物。在一些實(shí)施方案中，多種持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)模塊附接于多肽組分，在此情況下與每種持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)模塊的每種接頭獨(dú)立選自本文中描述的接頭。[0363]可用作本文中描述的多肽組分的胰淀素類(lèi)似物包括但不限于，在下表1中提供的式(I)的殘基1-37中列出的化合物。除非相反指明，以游離的羧化物和酰胺化形式兩者涵蓋本文中描述的所有肽，包括具有明確提供的序列的肽。[0364]表1.可用于本文中描述的化合物的組分多肽。[0365]【權(quán)利要求】1.一種包含野生型海豹瘦蛋白多肽的嵌合多肽，其中野生型海豹瘦蛋白序列的至少一個(gè)1-30個(gè)氨基酸的連續(xù)區(qū)已經(jīng)用成熟人瘦蛋白序列的1-30個(gè)氨基酸的連續(xù)區(qū)替換。2.權(quán)利要求1的嵌合多肽，其中野生型海豹瘦蛋白序列的兩個(gè)或更多個(gè)1-30個(gè)氨基酸的連續(xù)區(qū)已經(jīng)在每個(gè)區(qū)用成熟人瘦蛋白序列的1-30個(gè)氨基酸的連續(xù)區(qū)替換。3.權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的嵌合多肽，其中野生型海豹瘦蛋白序列包含SEQIDNO:28或SEQIDNO:31的氨基酸序列。4.權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的嵌合多肽，其中成熟人瘦蛋白序列包含選自下組的氨基酸序列:SEQIDNO:12,SEQIDNO:13,SEQIDNO:20,SEQIDNO:21,SEQIDNO:22,SEQIDNO:23，SEQIDNO:24，SEQIDNO:25，SEQIDNO:26，SEQIDNO:27，SEQIDNO:34，SEQIDNO:35，SEQIDNO:36，SEQIDNO:37，SEQIDNO:38，SEQIDNO:39，SEQIDNO:40，SEQIDNO:41,SEQIDNO:42,SEQIDNO:43,SEQIDNO:44,SEQIDNO:45,SEQIDNO:46,SEQIDNO:47，SEQIDNO:48，SEQIDNO:49，SEQIDNO:50，和SEQIDNO:51。5.權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的嵌合多肽,其中成熟人瘦蛋白序列包含選自下組的氨基酸序列:SEQIDNO:12,SEQIDNO:13,SEQIDNO:20,SEQIDNO:21,SEQIDNO:22,SEQIDNO:23，SEQIDNO:24，SEQIDNO:25，SEQIDNO:26，SEQIDNO:27，SEQIDNO:34，SEQIDNO:35，SEQIDNO:36，SEQIDNO:37，SEQIDNO:38，SEQIDNO:39，SEQIDNO:40，SEQIDNO:41,SEQIDNO:42,SEQIDNO:43,SEQIDNO:44,SEQIDNO:45,SEQIDNO:46,SEQIDNO:47，SEQIDNO:48，SEQIDNO:49，SEQIDNO:50，和SEQIDNO:51，其中所述成熟人瘦蛋白序列在如下位置處具有至少I(mǎi)處氨基酸取代，在來(lái)自另一物種的瘦蛋白中與前述位置對(duì)應(yīng)的位置中觀察到趨異。6.權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的嵌合多肽,其中成熟人瘦蛋白序列包含選自下組的氨基酸序列:SEQIDNO:12,SEQIDNO:13,SEQIDNO:20,SEQIDNO:21,SEQIDNO:22,SEQIDNO:23，SEQIDNO:24，SEQIDNO:25，SEQIDNO:26，SEQIDNO:27，SEQIDNO:34，SEQIDNO:35，SEQIDNO:36，SEQIDNO:37，SEQIDNO:38，SEQIDNO:39，SEQIDNO:40，SEQIDNO:41,SEQIDNO:42,SEQIDNO:43,SEQIDNO:44,SEQIDNO:45,SEQIDNO:46,SEQIDNO:47，SEQIDNO:48，SEQIDNO:49，SEQIDNO:50，和SEQIDNO:51，其中所述成熟人瘦蛋白序列在如下的位置處具有至少2處氨基酸取代，在來(lái)自另一物種的瘦蛋白中與前述位置對(duì)應(yīng)的位置中觀察到趨異。7.權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的嵌合多肽,其中成熟人瘦蛋白序列包含選自下組的氨基酸序列:SEQIDNO:12,SEQIDNO:13,SEQIDNO:20,SEQIDNO:21,SEQIDNO:22,SEQIDNO:23，SEQIDNO:24，SEQIDNO:25，SEQIDNO:26，SEQIDNO:27，SEQIDNO:34，SEQIDNO:35，SEQIDNO:36，SEQIDNO:37，SEQIDNO:38，SEQIDNO:39，SEQIDNO:40，SEQIDNO:41,SEQIDNO:42,SEQIDNO:43,SEQIDNO:44,SEQIDNO:45,SEQIDNO:46,SEQIDNO:47，SEQIDNO:48，SEQIDNO:49，SEQIDNO:50，和SEQIDNO:51，其中所述成熟人瘦蛋白序列在如下的位置處具有至少3處氨基酸取代，在來(lái)自另一物種的瘦蛋白中與前述位置對(duì)應(yīng)的位置中觀察到趨異。8.權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)的嵌合多肽，其中成熟人瘦蛋白序列包含選自下組的氨基酸序列:SEQIDNO:12,SEQIDNO:13,SEQIDNO:20,SEQIDNO:21,SEQIDNO:22,SEQIDNO:23，SEQIDNO:24，SEQIDNO:25，SEQIDNO:26，SEQIDNO:27，SEQIDNO:34，SEQIDNO:35，SEQIDNO:36，SEQIDNO:37,SEQIDNO:38,SEQIDNO:39,SEQIDNO:40,SEQIDNO:41,SEQIDNO:42,SEQIDNO:43,SEQIDNO:44,SEQIDNO:45,SEQIDNO:46,SEQIDNO:47,SEQIDNO:48,SEQIDNO:49,SEQIDNO:50,和SEQIDNO:51，其中所述成熟人瘦蛋白序列在如下的位置處具有至少4處氨基酸取代，在來(lái)自另一物種的瘦蛋白中與前述位置對(duì)應(yīng)的位置中觀察到趨異。9.權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)的嵌合多肽，其中成熟人瘦蛋白序列包含選自下組的氨基酸序列:SEQIDNO:12,SEQIDNO:13,SEQIDNO:20,SEQIDNO:21,SEQIDNO:22,SEQIDNO:23，SEQIDNO:24，SEQIDNO:25，SEQIDNO:26，SEQIDNO:27，SEQIDNO:34，SEQIDNO:35，SEQIDNO:36，SEQIDNO:37，SEQIDNO:38，SEQIDNO:39，SEQIDNO:40，SEQIDNO:41,SEQIDNO:42,SEQIDNO:43,SEQIDNO:44,SEQIDNO:45,SEQIDNO:46,SEQIDNO:47,SEQIDNO:48,SEQIDNO:49,SEQIDNO:50,和SEQIDNO:51，其中所述成熟人瘦蛋白序列在如下的位置處具有至少5處氨基酸取代，在來(lái)自另一物種的瘦蛋白中與前述位置對(duì)應(yīng)的位置中觀察到趨異。10.權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的嵌合多肽，其中成熟人瘦蛋白序列包含選自下組的氨基酸序列:SEQIDNO:12，SEQIDNO:13，SEQIDNO:20，SEQIDNO:21，SEQIDNO:22，SEQIDNO:23，SEQIDNO:24，SEQIDNO:25，SEQIDNO:26，SEQIDNO:27，SEQIDNO:34，SEQIDNO:35，SEQIDNO:36，SEQIDNO:37，SEQIDNO:38，SEQIDNO:39，SEQIDNO:40，SEQIDNO:41,SEQIDNO:42,SEQIDNO:43,SEQIDNO:44,SEQIDNO:45,SEQIDNO:46,SEQIDNO:47，SEQIDNO:48，SEQIDNO:49，SEQIDNO:50，和SEQIDNO:51，其中所述成熟人瘦蛋白序列在如下的位置處具有至少6處氨基酸取代，在來(lái)自另一物種的瘦蛋白中與前述位置對(duì)應(yīng)的位置中觀察到趨異。11.權(quán)利要求ι-?ο中任一項(xiàng)的嵌合多肽，其中成熟人瘦蛋白序列包含選自下組的氨基酸序列:SEQIDNO:12，SEQIDNO:13，SEQIDNO:20，SEQIDNO:21，SEQIDNO:22，SEQIDNO:23，SEQIDNO:24，SEQIDNO:25，SEQIDNO:26，SEQIDNO:27，SEQIDNO:34，SEQIDNO:35，SEQIDNO:36，SEQIDNO:37，SEQIDNO:38，SEQIDNO:39，SEQIDNO:40，SEQIDNO:41,SEQIDNO:42,SEQIDNO:43,SEQIDNO:44,SEQIDNO:45,SEQIDNO:46,SEQIDNO:47，SEQIDNO:48，SEQIDNO:49，SEQIDNO:50，和SEQIDNO:51，其中所述成熟人瘦蛋白序列在如下的位置處具有至少7處氨基酸取代，在來(lái)自另一物種的瘦蛋白中與前述位置對(duì)應(yīng)的位置中觀察到趨異。12.權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)的嵌合多肽，其中成熟人瘦蛋白序列包含選自下組的氨基酸序列:SEQIDNO:12，SEQIDNO:13，SEQIDNO:20，SEQIDNO:21，SEQIDNO:22，SEQIDNO:23，SEQIDNO:24，SEQIDNO:25，SEQIDNO:26，SEQIDNO:27，SEQIDNO:34，SEQIDNO:35，SEQIDNO:36，SEQIDNO:37，SEQIDNO:38，SEQIDNO:39，SEQIDNO:40，SEQIDNO:41,SEQIDNO:42,SEQIDNO:43,SEQIDNO:44,SEQIDNO:45,SEQIDNO:46,SEQIDNO:47，SEQIDNO:48，SEQIDNO:49，SEQIDNO:50，和SEQIDNO:51，其中所述成熟人瘦蛋白序列在如下的位置處具有至少8處氨基酸取代，在來(lái)自另一物種的瘦蛋白中與前述位置對(duì)應(yīng)的位置中觀察到趨異。13.權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)的嵌合多肽，其中成熟人瘦蛋白序列包含選自下組的氨基酸序列:SEQIDNO:12，SEQIDNO:13，SEQIDNO:20，SEQIDNO:21，SEQIDNO:22，SEQIDNO:23，SEQIDNO:24，SEQIDNO:25,SEQIDNO:26,SEQIDNO:27,SEQIDNO:34,SEQIDNO:35,SEQIDNO:36,SEQIDNO:37,SEQIDNO:38,SEQIDNO:39,SEQIDNO:40,SEQIDNO:41,SEQIDNO:42,SEQIDNO:43,SEQIDNO:44,SEQIDNO:45,SEQIDNO:46,SEQIDNO:47,SEQIDNO:48,SEQIDNO:49,SEQIDNO:50,和SEQIDNO:51，其中所述成熟人瘦蛋白序列在如下的位置處具有至少9處氨基酸取代，在來(lái)自另一物種的瘦蛋白中與前述位置對(duì)應(yīng)的位置中觀察到趨異。14.權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)的嵌合多肽，其中成熟人瘦蛋白序列包含選自下組的氨基酸序列:SEQIDNO:12，SEQIDNO:13，SEQIDNO:20，SEQIDNO:21，SEQIDNO:22，SEQIDNO:23，SEQIDNO:24，SEQIDNO:25，SEQIDNO:26，SEQIDNO:27，SEQIDNO:34，SEQIDNO:35，SEQIDNO:36，SEQIDNO:37，SEQIDNO:38，SEQIDNO:39，SEQIDNO:40，SEQIDNO:41,SEQIDNO:42,SEQIDNO:43,SEQIDNO:44,SEQIDNO:45,SEQIDNO:46,SEQIDNO:47，SEQIDNO:48，SEQIDNO:49，SEQIDNO:50，和SEQIDNO:51，其中所述成熟人瘦蛋白序列在如下的位置處具有至少10處氨基酸取代，在來(lái)自另一物種的瘦蛋白中與前述位置對(duì)應(yīng)的位置中觀察到趨異。15.權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)的嵌合多肽，其中所述成熟人瘦蛋白序列包含SEQIDNO:24的氨基酸序列。16.權(quán)利要求1-15中任一項(xiàng)的嵌合多肽,其中所述嵌合多肽包含與選自下組的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列:SEQIDNO:29,SEQIDNO:30,SEQIDNO:32,SEQIDNO:33，SEQIDNO:52，SEQIDNO:53，SEQIDNO:54，SEQIDNO:55，SEQIDNO:56，SEQIDNO:57,SEQIDNO:58,SEQIDNO:59,SEQIDNO:60,SEQIDNO:61,SEQIDNO:62,SEQIDNO:63，SEQIDNO:64，SEQIDNO:65，SEQIDNO:66，SEQIDNO:67，SEQIDNO:68，SEQIDNO:69,SEQIDNO:70,SEQIDNO:71,SEQIDNO:72,SEQIDNO:73,SEQIDNO:74,SEQIDNO:75，SEQIDNO:76，SEQIDNO:77，SEQIDNO:78，SEQIDNO:79，SEQIDNO:80，IDNO:81,SEQIDNO:82,SEQIDNO:83,SEQIDNO:84,和SEQIDNO:85。17.權(quán)利要求1-16中任一項(xiàng)的嵌合多肽,其中所述嵌合多肽包含與選自下組的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列:SEQIDNO:29,SEQIDNO:30,SEQIDNO:32,SEQIDNO:33。18.權(quán)利要求1-17中任一項(xiàng)的嵌合多肽，其中所述嵌合多肽包含與SEQIDNO:33的氨基酸序列具有至少80%同一性的氨基酸序列。19.權(quán)利要求1-18中任一項(xiàng)的嵌合多肽，其中所述嵌合多肽包含與SEQIDNO:33的氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列。20.權(quán)利要求1-19中任一項(xiàng)的嵌合多肽,其中所述嵌合多肽包含選自下組的氨基酸序列:SEQIDNO:29，SEQIDNO:30，SEQIDNO:32，SEQIDNO:33，SEQIDNO:52，SEQIDNO:53，SEQIDNO:54，SEQIDNO:55，SEQIDNO:56，SEQIDNO:57，SEQIDNO:58，SEQIDNO:59,SEQIDNO:60,SEQIDNO:61,SEQIDNO:62,SEQIDNO:63,SEQIDNO:64,SEQIDNO:65，SEQIDNO:66，SEQIDNO:67，SEQIDNO:68，SEQIDNO:69，SEQIDNO:70，SEQIDNO:71,SEQIDNO:72,SEQIDNO:73,SEQIDNO:74,SEQIDNO:75,SEQIDNO:76,SEQIDNO:77,SEQIDNO:78,SEQIDNO:79,SEQIDNO:80，IDNO:81,SEQIDNO:82,SEQIDNO:83，SEQIDNO:84，和SEQIDNO:85。21.權(quán)利要求1-20中任一項(xiàng)的嵌合多肽,其中所述嵌合多肽包含選自下組的氨基酸序列:SEQIDNO:29，SEQIDNO:30，SEQIDNO:32，SEQIDNO:33。22.權(quán)利要求1-21中任一項(xiàng)的嵌合多肽，其中所述嵌合多肽包含SEQIDNO:29的氨基酸序列。23.權(quán)利要求1-21中任一項(xiàng)的嵌合多肽，其中所述嵌合多肽包含SEQIDN0:30的氨基酸序列。24.權(quán)利要求1-21中任一項(xiàng)的嵌合多肽，其中所述嵌合多肽包含SEQIDNO:32的氨基酸序列。25.權(quán)利要求1-21中任一項(xiàng)的嵌合多肽，其中所述嵌合多肽包含SEQIDNO:33的氨基酸序列。26.—種用于治療受試者中的疾病或病癥的方法,包括以有效治療所述疾病或病癥的量對(duì)有此需要的受試者施用權(quán)利要求1至25中任一項(xiàng)的嵌合多肽。27.依照權(quán)利要求26的方法，其中所述疾病或病癥是選自下組的疾病或病癥:脂肪營(yíng)養(yǎng)不良、血脂障礙、高脂血、超重、肥胖癥、下丘腦性閉經(jīng)、阿耳茨海默氏病、瘦蛋白缺陷、脂肪肝病、糖尿病(包括I型和II型)、非酒精性脂肪肝炎(NASH)、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、代謝綜合征X和亨廷頓氏病。28.依照權(quán)利要求26或權(quán)利要求27的方法，其中所述疾病或病癥是脂肪營(yíng)養(yǎng)不良、血脂障礙、高脂血、超重、肥胖癥、下丘腦性閉經(jīng)、阿耳茨海默氏病、瘦蛋白缺陷、脂肪肝病或糖尿病。29.依照權(quán)利要求26-28中任一項(xiàng)的方法，其中所述疾病或病癥是I型糖尿病或II型糖尿病。30.依照權(quán)利要求26-28中任一項(xiàng)的方法，其中所述疾病或病癥是肥胖癥。31.依照權(quán)利要求26-28中任一項(xiàng)的方法，其中所述疾病或病癥是脂肪營(yíng)養(yǎng)不良或瘦蛋白缺陷。32.—種藥物組合物，其包含依照權(quán)利要求1-25中任一項(xiàng)的嵌合多肽和藥學(xué)可接受賦形劑。【文檔編號(hào)】C07K14/575GK103547590SQ201180056939【公開(kāi)日】2014年1月29日申請(qǐng)日期:2011年9月28日優(yōu)先權(quán)日:2010年9月28日【發(fā)明者】M.埃里克森申請(qǐng)人:艾米琳制藥有限責(zé)任公司,阿斯利康制藥公司