專利名稱：彌散型淺表性光線性汗孔角化癥(dsap)相關(guān)基因的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及分子遺傳學(xué)領(lǐng)域以及疾病診斷和治療領(lǐng)域。特別地，本發(fā)明鑒定了與彌散型淺表性光線性汗孔角化癥(DSAP)相關(guān)的致病基因-MVK基因。在此基礎(chǔ)上，本發(fā)明提供了一種突變的MVK基因、其編碼蛋白質(zhì)及其用途，包含突變的MVK基因的載體、宿主細(xì)胞以及試劑盒。此外，本發(fā)明還提供了用于診斷或治療DSAP的方法，用于所述方法的診斷劑或治療劑，以及包含所述診斷劑或治療劑的試劑盒。
背景技術(shù)：
汗孔角化癥(Porokeratosis，PK)是一種罕見的皮膚角化病，早在1893年，Mibelli就對該疾病作了詳細(xì)的臨床報道，到目前為止，臨床上有5種典型的汗孔角化癥亞型:經(jīng)典Mibelli型汗孔角化癥(PM);彌散型淺表性汗孔角化癥(DSP);彌散型淺表性光線性汗孔角化癥(Disseminated superficial actinic porokeratosis,DSAP);彌散型足底、手掌汗孔角化癥(PPPD)以及線性角化癥(LP)。彌散型 淺表性光線性汗孔角化癥(DSAP)是角化癥中最常見的類型，它是一種罕見的慢性皮膚角化病，呈常染色體顯性遺傳，以眾多的、環(huán)形的皮疹為特征，一般十幾歲發(fā)病，皮疹多發(fā)生于皮膚的陽光暴露區(qū)，表現(xiàn)為周邊角質(zhì)嵴稍隆起，中央呈輕度萎縮。皮膚角化癥的發(fā)生，尤其是大面積的皮膚病變?nèi)菀讓?dǎo)致其發(fā)生惡性轉(zhuǎn)變。同時，皮膚角質(zhì)化嚴(yán)重影響患者的外觀，給患者生活和工作帶來諸多不便，造成了巨大心理負(fù)擔(dān)。以往利用連鎖分析方法，將與DSAP發(fā)病相關(guān)的區(qū)域主要定位在以下5個區(qū)域:2q23.2-24.1，12q24.1_q24.2，15q25.1-26.1，1ρ31.3_p31.l，16q24.1_24.3 (表 I)，然而基因缺陷與 DSAP 的病理關(guān)系依然不明確。表1.汗孔角化病連鎖分析得到的遺傳易感區(qū)域
權(quán)利要求
1.突變的MVK基因，其與MVK基因相比具有至少I個雜合突變，并且所述突變的MVK基因?qū)е聫浬⑿蜏\表性光線性汗孔角化癥的發(fā)生； 優(yōu)選地，所述雜合突變選自錯義突變、起始密碼子突變、缺失突變、插入突變和剪接位點突變中的一種或多種； 優(yōu)選地，所述雜合突變位于這樣的區(qū)域，所述區(qū)域選自MVK基因的外顯子2-11中的一個或多個； 優(yōu)選地，所述雜合突變位于MVK基因的第2個、第3個、第5個、第6個、第7個、第8個、第9個、第10個和/或11個外顯子； 優(yōu)選地，所述雜合突變位于選自下列位置中的一個或多個位置:c.3，c.34，c.122,c.481—482，c.417—418，c.604，c.635—637，c.764，c.836，c.871，c.1039+2，c.935，c.1094，c.1126 ； 優(yōu)選地，所述雜合突變是選自下列突變中的一個或多個突變:C.3G > C，c.34G > C，c.122T > C，c.481_482delTG，c.417_418insC，c.604G > A, c.635_637delGAG，c.764T >C, c.836T > C, c.871T > G, c.1039+2T > C, c.935A > G, c.1094T > C, c.1126G > A。
2.由權(quán)利要求1的突變的MVK基因編碼的蛋白質(zhì)。
3.包含權(quán)利要求1的突變的MVK基因的載體。
4.包含權(quán)利要求1的突變的MVK基因和/或權(quán)利要求3的載體的宿主細(xì)胞。
5.權(quán)利要求1的突變的MVK基因或者權(quán)利要求2的蛋白質(zhì)的用途，其用于產(chǎn)生DSAP動物模型，或用作藥物靶點，或用于制備試劑盒，所述試劑盒用于產(chǎn)生DSAP動物模型，或用作藥物靶點。
6.權(quán)利要求3的載體或權(quán)利要求4的宿主細(xì)胞的用途，其用于產(chǎn)生DSAP動物模型，或用于制備試劑盒，所述試劑盒用于產(chǎn)生DSAP動物模型。
7.試劑盒，其包含權(quán)利要求1的突變的MVK基因和/或權(quán)利要求3的載體和/或權(quán)利要求4的宿主細(xì)胞。
8.用于診斷DSAP的診斷劑，其包含能夠特異性擴增MVK基因的引物，或能夠特異性檢測MVK基因突變的探針； 優(yōu)選地，所述引物能夠特異性擴增MVK基因的外顯子，優(yōu)選第2個、第3個、第5個、第6個、第7個、第8個、第9個、第10個和/或11個外顯子； 優(yōu)選地，所述引物的序列選自SEQ ID NO:1 18 ; 優(yōu)選地，所述引物是如SEQ ID NO:1和2所示的引物，或如SEQID NO:3和4所示的引物，或如SEQ ID NO:5和6所示的引物，或如SEQ ID NO:7和8所示的引物，或如SEQ IDNO:9和10所示的引物，或如SEQ ID NO:11和12所示的引物，或如SEQ ID NO:13和14所示的引物，或如SEQ ID NO:15和16所示的引物，或如SEQID NO: 17 18所示的引物; 優(yōu)選地，所述突變位于MVK基因的外顯子，優(yōu)選第2個、第3個、第5個、第6個、第7個、第8個、第9個、第10個和/或11個外顯子，更優(yōu)選地位于選自下列的一個或多個位置:c.3，c.34，c.122，c.481_482，c.417_418，c.604，c.635_637，c.764，c.836，c.871，c.1039+2，c.935，c.1094，c.1126 ； 優(yōu)選地，所述雜合突變是選自下列突變中的一個或多個突變:C.3G > C，c.34G > C，c.122T > C，c.481_482delTG，c.4174_18insC，c.604G > A, c.635_637delGAG，c.764T >C，c.836T > C，c.871T > G, c.1039+2T > C，c.935A > G, c.1094T > C，c.1126G > A。
9.用于治療DSAP的治療劑，其包含反義RNA，所述反義RNA特異于權(quán)利要求1的突變的MVK基因，且不作用于正常的MVK基因。
10.用于治療DSAP的治療劑，其包含抗體，所述抗體特異于權(quán)利要求1的突變的MVK基因所編碼的蛋白，且不作用于正常的MVK基因所編碼的蛋白。
11.試劑盒，其包含權(quán)利要求8的診斷劑，或權(quán)利要求9的治療劑，或權(quán)利要求10的治療劑。
12.診斷受試者是否患有DSAP的方法，其包括，檢測受試者的MVK基因是否存在雜合突變； 優(yōu)選地，所述雜合突變選自錯義突變、起始密碼子突變、缺失突變、插入突變和剪接位點突變中的一種或多種； 優(yōu)選地，所述雜合突變位于這樣的區(qū)域，所述區(qū)域選自MVK基因的外顯子2-11中的一個或多個； 優(yōu)選地，所述雜合突變位于MVK基因的第2個、第3個、第5個、第6個、第7個、第8個、第9個、第10個和/或11個外顯子； 優(yōu)選地，所述雜合突變位于選自下列位置中的一個或多個位置:c.3，c.34，c.122,c.481—482，c.417—418，c.604，c.635—637，c.764，c.836，c.871，c.1039+2，c.935，c.1094，c.1126 ； 優(yōu)選地，所述雜合突變是選自下列突變中的一個或多個突變:C.3G > C，c.34G > C，c.122T > C，c.481_482delTG，c.417_41 8insC，c.604G > A, c.635_637delGAG，c.764T >C, c.836T > C, c.871T > G, c.1039+2T > C, c.935A > G, c.1094T > C, c.1126G > A ； 如果存在所述雜合突變，則判斷受試者患有DSAP綜合征。
13.檢測MVK基因的突變的方法，其包括使用權(quán)利要求8的診斷劑。
14.治療DSAP的方法，其包括使用權(quán)利要求9或10的治療劑。
15.權(quán)利要求8的診斷劑在制備用于檢測MVK基因的突變和/或用于診斷DSAP的試劑盒中的用途。
16.權(quán)利要求9或10的治療劑在制備用于治療DSAP綜合征的試劑盒中的用途。
17.權(quán)利要求8的診斷劑用于DSAP綜合征疾病篩查的用途， 優(yōu)選地，所述的疾病篩查為產(chǎn)前DSAP綜合征疾病篩查。
18.—種DSAP綜合征疾病篩查或產(chǎn)前DSAP綜合征疾病篩查的方法，其包括使用權(quán)利要求8的診斷劑或權(quán)利要求12的診斷方法。
全文摘要
本發(fā)明鑒定了與DSAP相關(guān)的致病基因MVK基因。并且，本發(fā)明提供了突變的TRPV 3基因、其編碼的蛋白質(zhì)及其用途，包含突變的TRPV3基因的載體、宿主細(xì)胞以及試劑盒。此外，本發(fā)明還提供了用于診斷或治療DSAP的方法，用于所述方法的診斷劑或治療劑，以及包含所述診斷劑或治療劑的試劑盒。
文檔編號C07K14/47GK103205432SQ201210006290
公開日2013年7月17日 申請日期2012年1月11日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月11日
發(fā)明者張學(xué)軍, 蔣濤, 楊森, 孫良丹, 左先波, 王俊, 汪建, 楊煥明 申請人:安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院, 深圳華大基因科技有限公司