專利名稱：灰黃青霉、由其產(chǎn)生的抗菌活性化合物及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于微生物和制藥領(lǐng)域，具體地說，涉及一株灰黃青霉、由其產(chǎn)生的抗菌活性化合物及應(yīng)用。
背景技術(shù)：
天然抗菌藥物和合成抗菌藥物等的出現(xiàn)使有效治療各種細菌感染成為可能，為保障人類健康做出了卓越貢獻。但隨著抗生素的廣泛應(yīng)用，也出現(xiàn)了細菌耐藥性逐年增加，致使一些抗生素療效降低、甚至無效的情況。過去已獲控制的一些傳染性疾病(如結(jié)核病等)出現(xiàn)了再次流行的趨勢；一些非致病菌成為條件致病菌，如變形桿菌、綠膿桿菌等；尤其是超級細菌的出現(xiàn)，更是讓醫(yī)學(xué)界擔(dān)心“后抗菌藥物時代”的到來。因此，迫切要求不斷地研發(fā)新型抗菌藥物。在蛋白質(zhì)的生物合成過程中，氨酰-tRNA合成酶起了至關(guān)重要的作用，它催化氨基酸與相應(yīng)的tRNA合成氨酰-tRNA，是遺傳信息通過蛋白質(zhì)形式得以表達所必需的一個組分，是各類生物體生存所必不可少的一類酶。對于病原菌而言，一旦它的某種氨酰-tRNA合成酶受到抑制失去功能，就會導(dǎo)致其蛋白質(zhì)的生物合成中斷以及許多重要的生理過程受影響，病原菌的生長繁殖也就隨之終止。因此，氨酰-tRNA合成酶適于作為新型抗菌藥物的作用靶點。苯丙氨酰-t RNA合成酶(PheRS)作為藥物篩選的靶點具有其獨特的優(yōu)點。PheRS與其它氨酰-tRNA合成酶在結(jié)構(gòu)以及催化特性方面的差異將有利于避免交叉耐藥的問題。另外，PheRS在不同細菌中的序列比較保守，而且與真核生物的同種功能的蛋白之間不具有相關(guān)性，有利于篩選到對多種病原菌都有效的廣譜抗生素，而且所篩選到的化合物對人體的毒性也會很小。微生物及其代謝產(chǎn)物的多樣性，為新抗菌藥物的篩選提供了豐富來源。目前，已從青霉菌中發(fā)現(xiàn)了大量具有新穎化學(xué)結(jié)構(gòu)和特異生理功能的化合物，其中許多具有良好的抗菌、抗病毒、抗腫瘤等活性，青霉菌通過人工條件發(fā)酵培養(yǎng)，可以提供穩(wěn)定的天然產(chǎn)物來源。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一株灰黃青霉CPCC 400528。本發(fā)明的另一目的是提供由灰黃青霉CPCC 400528產(chǎn)生的具有廣譜抗菌作用的化合物及其應(yīng)用。為了實現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明的灰黃青霉(Penicillium griseofulvum) CPCC400528，其分離自新疆喀納斯湖畔的土壤樣品中，現(xiàn)已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址:北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號中國科學(xué)院微生物研究所，保藏日期2012年2月13日，保藏號CGMCC N0.5752?；尹S青霉CPCC 400528的菌落在察氏培養(yǎng)基(CA)上25°C培養(yǎng)7天，產(chǎn)生大量的放射狀皺紋，中心有臍狀突起；質(zhì)地通常絨狀，帶輕微絮狀；菌絲體，邊緣通常呈現(xiàn)白色，而中部面上往往呈現(xiàn)淡灰黃色；分生孢子結(jié)構(gòu)大量產(chǎn)生，分生孢子梗發(fā)生在孢梗束和束絲之中，帚狀分枝比較復(fù)雜，多是四輪生，少三輪生，叉開，分枝點通常2-3或更多，分生孢子呈現(xiàn)寬橢圓形，分生孢子鏈呈現(xiàn)較緊密而叉開的近圓柱狀。本發(fā)明還提供由灰黃青霉CPCC 400528發(fā)酵產(chǎn)生的抗菌活性化合物一異棒曲霉素，其分子式為C7H6O4,結(jié)構(gòu)如式(I’ )所示:
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權(quán)利要求
1.灰黃青霉(Penicilliumgriseofulvum)CPCC 400528，其保藏號為 CGMCC N0.5752。
2.由權(quán)利要求1所述的灰黃青霉CPCC400528發(fā)酵產(chǎn)生的抗菌活性化合物，其分子式為C7H6O4，結(jié)構(gòu)如式⑴所示:
3.權(quán)利要求2所述抗菌活性化合物的制備方法，其特征在于，包括步驟: 1)將活化后的灰黃青霉CPCC400528接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中進行發(fā)酵培養(yǎng)； 2)用乙酸乙酯-甲醇體積比為17: 3作為萃取劑萃取步驟I)所得的發(fā)酵液，過濾，濾液經(jīng)真空濃縮，得到褐色浸膏； 3)以水溶解步驟2)中得到的褐色浸膏，然后用乙酸乙酯浸提，并用RP-18反相硅膠柱分離浸提液，以甲醇的水溶液進行洗脫，收集洗脫液，濃縮后用正相硅膠柱分離，以氯仿和甲醇的混合液進行梯度洗脫，當(dāng)氯仿:甲醇體積比為20: I時，即得目標(biāo)化合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，步驟I)中發(fā)酵培養(yǎng)的溫度為25 28°C，培養(yǎng)時間為3 7d ;步驟2)中萃取時間為12 24h，真空濃縮的溫度為40 45°C。
5.權(quán)利要求2所述的抗菌活性化合物在制備廣譜抗菌藥物中的應(yīng)用。
6.含有權(quán)利要求2所述抗菌活性化合物的廣譜抗菌藥物。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的廣譜抗菌藥物，其為抗金黃色葡菌球菌、表皮葡萄球菌、糞腸球菌、屎腸球菌、結(jié)核分枝桿菌的藥物。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的廣譜抗菌藥物，其為抗耐藥的金黃色葡菌球菌、表皮葡萄球菌、糞腸球菌、屎腸球菌的藥物。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的廣譜抗菌藥物，其為抗大腸埃希氏菌、肺炎克雷伯桿菌、銅綠假單胞菌、鮑曼不動桿菌、陰溝腸桿菌、產(chǎn)氣腸桿菌、粘質(zhì)沙雷氏菌、摩根摩根氏菌、雷極普魯菲登桿菌、普通變形桿菌、奇異變形桿菌、傷寒沙門菌、弗勞地枸櫞酸菌的藥物。
10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的廣譜抗菌藥物，其為抗耐藥的大腸埃希氏菌、肺炎克雷伯桿菌、銅綠假單胞菌、鮑曼不動桿菌的藥物。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種灰黃青霉(Penicillium griseofulvum)CPCC400528，其保藏號為CGMCC NO.5752，由其發(fā)酵制備產(chǎn)生的抗菌活性化合物，其分子式為C7H6O4，結(jié)構(gòu)如式(I)所示式(I)，該化合物對多種革蘭氏陽性病原菌，革蘭氏陰性病原菌具有較好的生長抑制作用，隨著濃度增加，其抑制作用逐漸增強；同時對多種耐藥菌株也具有良好的抑制作用。本發(fā)明的菌株易于發(fā)酵培養(yǎng)，產(chǎn)量高，活性化合物的制備工藝簡單易控，制備的化合物抗菌活性明顯，為抗菌新藥的研發(fā)奠定了基礎(chǔ)，具有十分廣闊的市場前景。
文檔編號C07D493/04GK103255061SQ20121003428
公開日2013年8月21日 申請日期2012年2月15日 優(yōu)先權(quán)日2012年2月15日
發(fā)明者余利巖, 王莉?qū)? 張志明, 張濤, 游雪甫, 胡辛欣, 劉紅宇, 魏玉珍 申請人:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所