專利名稱：一種美沙酮人工抗原的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物化工技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種美沙酮人工抗原的制備方法。
背景技術(shù)：
美沙酮(MTD)又稱美散痛，非那痛，阿米酮，屬于麻醉鎮(zhèn)痛藥，為μ阿片受體激動齊U，藥效與嗎啡類似，具有鎮(zhèn)痛作用，并可產(chǎn)生呼吸抑制、縮瞳、鎮(zhèn)靜等作用。與嗎啡比較，具有作用時間較長、藥物依賴性低的特點，是二戰(zhàn)期間德國合成的替代嗎啡的麻醉性鎮(zhèn)痛藥。其結(jié)構(gòu)式為
權(quán)利要求
1.一種美沙酮人工抗原的制備方法，其特征在于，包括以下步驟 (I)制備人工半抗原 (a)將二苯乙腈與2-氯-N，N-二甲基丙胺鹽酸鹽以摩爾比為1:1.6加入圓底燒瓶中，100°C下攪拌反應(yīng)6小時；反應(yīng)結(jié)束后反應(yīng)液用乙醚提取，轉(zhuǎn)干，經(jīng)重結(jié)晶得到白色固體產(chǎn)物I ;TLC :層析液為乙酸乙酯，產(chǎn)物Rf =0. 5^0. 7 ； (b)將70%的硫酸與產(chǎn)物I以摩爾比為3.6:1加入圓底燒瓶中，130°C下攪拌反應(yīng)2小時；反應(yīng)結(jié)束后，將溶劑轉(zhuǎn)干，用乙醚提取得產(chǎn)物II ；TLC :層析液為乙酸乙酯 ，產(chǎn)物Rf=03 O. 5 ； (C)將產(chǎn)物II與98%的硫酸以摩爾比為1:8溶于無水甲醇中，68°C回流反應(yīng)18小時，反應(yīng)結(jié)束后加入碳酸氫鈉固體中和，過濾，將濾液轉(zhuǎn)干，加入四氫呋喃提取，得到黃色油狀物III ；TLC :層析液為95%乙醇，產(chǎn)物Rf =0. 9 ； (d)將黃色油狀物III與氫化鋁鋰以摩爾比為1:1. 5溶于無水四氫呋喃中，氮氣保護，68°C回流反應(yīng)18小時；反應(yīng)結(jié)束后，用氫氧化鈉溶液調(diào)至堿性，過濾轉(zhuǎn)干得到白色油狀物IV ；TLC :層析液為95%乙醇，產(chǎn)物Rf =0. 7 ； Ce)將白色油狀物IV與丁二酸酐以摩爾比為1:2溶于無水吡啶中，100°C反應(yīng)20小時；反應(yīng)結(jié)束后減壓蒸餾，薄層層析法純化得到美沙酮半抗原V ；TLC :層析液為95%乙醇，產(chǎn)物Rf=O. 4 O. 5 ；(2)制備美沙酮人工抗原 (f)將美沙酮半抗原V與N-羥基琥珀酰亞胺、環(huán)己基碳酰二亞胺以摩爾比為I: I. 5:1. 5溶于N，N- 二甲基甲酰胺中，室溫攪拌反應(yīng)18小時，反應(yīng)結(jié)束后離心取上清液記為A液； (g)將氯化鈉與十二水磷酸氫二鈉、二水磷酸二氫鈉以摩爾比為78.3:4. 2:1溶于雙蒸水中，制備鈉離子濃度為O. lmol/L的PBS緩沖液，pH為7. 2 . 4 ； (h)將牛血清蛋白溶于PBS緩沖液中，得到濃度為5mg/ml的B液； (i)將A液緩慢滴加到B液，A液與B液的體積比為1:5，得到的混合液在4°C條件下靜置保存過夜，得到人工抗原混合液； U)將人工抗原混合液于PBS緩沖液中透析，透析結(jié)束后離心取上清液即得到人工抗原美沙酮-牛血清蛋白。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種美沙酮人工抗原的制備方法，第一步為半抗原的制備及檢測以2-氯-N,N-二甲基丙胺與二苯乙腈為原料通過縮合，氧化，酯化，還原在1位上引入羥基，和丁二酸酐反應(yīng)得到含羧基的半抗原；第二步為人工抗原的制備與檢測通過碳二亞胺法使之與牛血清蛋白(BSA)結(jié)合制備美沙酮的人工抗原即美沙酮-牛血清蛋白。所制備的美沙酮人工抗原可進行動物免疫，取得相應(yīng)的美沙酮抗體，可用于各種美沙酮類免疫分析法的研究，為美沙酮的檢測提供更加方便快速準(zhǔn)確的途徑。
文檔編號C07C213/06GK102617730SQ20121010560
公開日2012年8月1日 申請日期2012年4月11日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月11日
發(fā)明者王百龍, 邵越水 申請人:杭州培樂生物技術(shù)有限公司