專利名稱：一種大托菊苷a的提取純化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥制藥領(lǐng)域，涉及一種大托菊苷A的提取純化方法。
背景技術(shù)：
大托菊苷A (Macrocliniside A),分子式為C21H28O9,分子量424. 45,是從菊科(Compositae)臭萵苣Zaciwca virosa L.須根中分離得到的倍半職化合物。藥理研究表明，大托菊苷A具有細(xì)胞毒作用，對(duì)L-5178Y細(xì)胞株的ID5tl為21. Aug/ml。
目前，國內(nèi)尚未見大托菊苷A的提取制備方法的相關(guān)報(bào)道，因此提供一種大托菊苷A的提取純化方法，為臭萵苣資源開發(fā)利用及藥理研究提供了豐富的物質(zhì)基礎(chǔ)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在克服上述技術(shù)缺陷，提供一種分離效果好、收率高、產(chǎn)品純度好，適合工業(yè)化生產(chǎn)的大托菊苷A的提取純化方法。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案
一種大托菊苷A的提取純化方法，其特征在于將臭萵苣須根采用超臨界CO2萃取，丙酮為夾帶劑，收集萃取物，分散于水，進(jìn)行高壓硅膠柱層析，用石油醚-丙酮梯度洗脫，收集各洗脫部分，然后進(jìn)行薄層層析，收集含大托菊苷A的組分，濃縮成浸膏后用甲醇分散，經(jīng)制備液相色譜進(jìn)行純化，甲醇水溶液進(jìn)行洗脫，濃縮目標(biāo)組分，干燥即得大托菊苷A。所述超臨界CO2萃取條件為萃取釜壓力為18_35MPa，萃取釜溫度為33_55°C，萃取時(shí)間為2-5h。所述高壓硅膠柱的柱壓為2.2-3. IMPa，柱內(nèi)徑為150_250mm，層析柱徑高比為1:12-20，硅膠目數(shù)為100-400目。所述甲醇水溶液濃度為25-29%。本發(fā)明的有益效果是
I、本發(fā)明方法通過超臨界萃取、柱層析及制備液相分離等步驟制備大托菊苷A，耗時(shí)短，得率高，操作簡單，易于工業(yè)化生產(chǎn)。2、使用高壓柱層析，上樣量大，周期短，分離度好，產(chǎn)品純度高。3、本發(fā)明為大托菊苷A的進(jìn)一步開發(fā)利用提供藥理原料、理論和實(shí)踐支持。本發(fā)明內(nèi)容通過以下的實(shí)施例作進(jìn)一步的闡述，但并不限制本發(fā)明的范圍。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I :
取臭萵苣須根5kg粉碎處理，加入超臨界CO2萃取釜中，萃取溫度為38°C，萃取壓力為25MPa，CO2流量為4ml/g生藥/min，保持釜壓、溫度不變，通入500ml丙酮作為夾帶劑， 萃取時(shí)間為4h，分離釜溫度為25°C，壓力為6MPa，收集解析萃取物，分散于水，上樣至填料200-300目硅膠高壓柱，其中高壓柱的柱壓為2. 9MPa，柱內(nèi)徑為150mm，層析柱徑高比為1:18，以石油醚-丙酮的混合溶劑，依次按體積比1:1、1:6、1:12洗脫，分段收集各流分，將含大托菊苷A流分合并，減壓回收溶劑，加甲醇溶解，經(jīng)高效制備液相分離，制備液相色譜條件是流動(dòng)相25%甲醇水溶液，流速15ml/min，檢測(cè)波長231nm，濃縮目標(biāo)組分，干燥即得純度為98. 9%的大托菊苷A7. 5g。
實(shí)施例2
取臭萵苣須根5kg粉碎處理，加入超臨界CO2萃取釜中，萃取溫度為35°C，萃取壓力為18MPa，CO2流量為5ml/g生藥/min，保持釜壓、溫度不變，通入600ml丙酮作為夾帶劑，萃取時(shí)間為4h，分離釜溫度為25°C，壓力為7MPa，收集解析萃取物，分散于水，上樣至填料100-200目硅膠高壓柱，其中高壓柱的柱壓為3. IMPa，柱內(nèi)徑為250mm，層析柱徑高比為1:20,以石油醚-丙酮的混合溶劑，依次按體積比I: I、1: 4、1: 11洗脫，分段收集各流分，將含大托菊苷A流分合并，減壓回收溶劑，加甲醇溶解，經(jīng)高效制備液相分離，制備液相色譜條件是流動(dòng)相29%甲醇水溶液，流速20ml/min，檢測(cè)波長231nm，濃縮目標(biāo)組分，干燥即 得純度為98. 7%的大托菊苷A6. 8g。
實(shí)施例3
取臭萵苣須根IOkg粉碎處理，加入超臨界CO2萃取釜中，萃取溫度為55°C，萃取壓力為35MPa，CO2流量為4ml/g生藥/min，保持釜壓、溫度不變，通入1200ml丙酮作為夾帶劑，萃取時(shí)間為4h，分離釜溫度為40°C，壓力為6. 5MPa，收集解析萃取物，分散于水，上樣至填料300-400目硅膠高壓柱，其中高壓柱的柱壓為2. 2MPa，柱內(nèi)徑為200mm，層析柱徑高比為1:15，以石油醚-丙酮的混合溶劑，依次按體積比1:2、1:6、1:12洗脫，分段收集各流分，將含大托菊苷A流分合并，減壓回收溶劑，加甲醇溶解，經(jīng)高效制備液相分離，制備液相色譜條件是流動(dòng)相26%甲醇水溶液，流速35ml/min，檢測(cè)波長231nm，濃縮目標(biāo)組分，干燥即得純度為98. 8%的大托菊苷A14. 6g。
實(shí)施例4
取臭萵苣須根IOkg粉碎處理，加入超臨界CO2萃取釜中，萃取溫度為40°C，萃取壓力為25MPa，CO2流量為3. 5ml/g生藥/min，保持釜壓、溫度不變，通入900ml丙酮作為夾帶齊IJ，萃取時(shí)間為4h，分離釜溫度為30°C，壓力為7MPa，收集解析萃取物，分散于水，上樣至填料200-300目硅膠高壓柱，其中高壓柱的柱壓為2.6MPa，柱內(nèi)徑為220mm，層析柱徑高比為1:15，以石油醚-丙酮的混合溶劑，依次按體積比1:1、1:5、1:11洗脫，分段收集各流分，將含大托菊苷A流分合并，減壓回收溶劑，加甲醇溶解，經(jīng)高效制備液相分離，制備液相色譜條件是流動(dòng)相27%甲醇水溶液，流速50ml/min，檢測(cè)波長231nm，濃縮目標(biāo)組分，干燥即得純度為98. 6%的大托菊苷A10. 2g。
權(quán)利要求
1.ー種大托菊苷A的提取純化方法，其特征是將臭萵苣須根采用超臨界CO2萃取，丙酮為夾帶劑，收集萃取物，分散于水，進(jìn)行高壓硅膠柱層析，用石油醚-丙酮梯度洗脫，收集各洗脫部分，然后進(jìn)行薄層層祈，收集含大托菊苷A的組分，濃縮成浸膏后用甲醇分散，經(jīng)制備液相色譜進(jìn)行純化，甲醇水溶液進(jìn)行洗脫，濃縮目標(biāo)組分，干燥即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的ー種大托菊苷A的提取純化方法，其特征在于所述超臨界CO2萃取條件為萃取釜壓カ為18-35MPa，萃取釜溫度為33_55°C，萃取時(shí)間為2_5h。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的ー種大托菊苷A的提取純化方法，其特征在于所述高壓硅膠柱的柱壓為2. 2-3. IMPa，柱內(nèi)徑為150_250mm，層析柱徑高比為1:12-20，硅膠目數(shù)為100-400 目。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的ー種大托菊苷A的提取純化方法，其特征在于所述甲醇水溶液濃度為25-29%。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種大托菊苷A的提取純化方法，其特征是臭萵苣須根采用超臨界CO2萃取，丙酮為夾帶劑，收集萃取物，分散于水，進(jìn)行高壓硅膠柱層析，用石油醚-丙酮梯度洗脫，收集各洗脫部分，然后進(jìn)行薄層層析，收集含大托菊苷A的組分，濃縮成浸膏后用甲醇分散，經(jīng)制備液相色譜進(jìn)行純化，甲醇水溶液進(jìn)行洗脫，濃縮目標(biāo)組分，干燥即得。本發(fā)明方法條件溫和，避免了傳統(tǒng)方法局部高溫對(duì)產(chǎn)品活性的不利影響，工藝合理，可實(shí)現(xiàn)快速提取、分離純化，易于工業(yè)化。
文檔編號(hào)C07H1/08GK102659868SQ20121012281
公開日2012年9月12日 申請(qǐng)日期2012年4月25日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月25日
發(fā)明者萬冬梅, 劉東鋒 申請(qǐng)人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司