專利名稱：一種喹乙醇?xì)埩魳?biāo)示物高偶聯(lián)比的全抗原合成方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于免疫化學(xué)分析技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及ー種喹こ醇?xì)埩魳?biāo)示物高偶聯(lián)比的全抗原合成方法。
背景技術(shù)：
喹こ醇又稱喹酰胺醇，商品名為倍育諾、快育靈，有 中度至明顯的蓄積毒性，對(duì)大多數(shù)動(dòng)物有明顯的致畸作用，對(duì)人也有潛在的三致性，即致畸形，致突變，致癌，由于其在飼料及飼料添加劑中濫用所引起的食品安全問(wèn)題備受關(guān)注，對(duì)喹こ醇及其殘留標(biāo)示物3-甲基喹喔啉-2-羧酸(MQCA)殘留快速檢測(cè)試劑盒和膠體金試紙條的研究成為近年來(lái)國(guó)內(nèi)熱點(diǎn)。3-甲基喹喔啉-2-羧酸為小分子物質(zhì)，不能刺激動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答獲得抗體，需與大分子物質(zhì)如牛血清白蛋白、卵清白蛋白、鑰孔戚血藍(lán)蛋白等聯(lián)接作為免疫全抗原。研究發(fā)現(xiàn)半抗原能否刺激機(jī)體產(chǎn)生高特異性的抗血清不僅決定于它與蛋白質(zhì)的結(jié)合位點(diǎn)，而且取決于蛋白質(zhì)上連接的半抗原數(shù)目。已有的3-甲基喹喔啉-2-羧酸全抗原合成方法都選用N，N’-ニ環(huán)已基碳ニ亞胺(DCC)作為催劑，但該催化劑的缺點(diǎn)是合成過(guò)程中容易產(chǎn)生的副產(chǎn)物N，N’ - ニ環(huán)已基脲且不易除凈，該副產(chǎn)物對(duì)皮膚、眼睛有刺激性，引起發(fā)炎，所得全抗原的偶聯(lián)比一般只有10 :1左右。目前國(guó)內(nèi)尚未建立合理、可靠的喹こ醇?xì)埩魳?biāo)示物全抗原偶聯(lián)比檢測(cè)方法，其偶聯(lián)比的測(cè)定方法主要為紫外分光光度法，該方法的專屬性不強(qiáng)，準(zhǔn)確度不高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供ー種安全性好、效率高、高偶聯(lián)比的3-甲基喹喔啉-2-羧酸全抗原的合成方法。本發(fā)明獲得3-甲基喹喔啉-2-羧酸全抗原的合成方法如下
在N，N’ - ニ異丙基碳ニ亞胺存在下，3-甲基喹喔啉-2-羧酸與N-羥基琥珀酰亞胺發(fā)生酷化反應(yīng)，反應(yīng)產(chǎn)物再與載體蛋白偶聯(lián)，得到全抗原。所述載體蛋白為牛血清白蛋白、卵清白蛋白或鑰孔戚血藍(lán)蛋白。合成路線為
權(quán)利要求
1.喹乙醇?xì)埩魳?biāo)示物高偶聯(lián)比的全抗原合成方法，其特征在于在N，N’-二異丙基碳二亞胺存在下，3-甲基喹喔啉-2-羧酸與N-羥基琥珀酰亞胺發(fā)生酯化反應(yīng)，反應(yīng)產(chǎn)物再與載體蛋白偶聯(lián)，得到全抗原。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述喹乙醇?xì)埩魳?biāo)示物高偶聯(lián)比的全抗原合成方法，其特征在于所述3-甲基喹喔啉-2-羧酸與N-羥基琥珀酰亞胺的摩爾用量比為I : (I. 5 2)。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述喹乙醇?xì)埩魳?biāo)示物高偶聯(lián)比的全抗原合成方法，其特征在于所述載體蛋白為牛血清白蛋白、卵清白蛋白或鑰孔戚血藍(lán)蛋白。
4.根據(jù)利要求I所述喹乙醇?xì)埩魳?biāo)示物高偶聯(lián)比的全抗原合成方法，其特征在于，所得全抗原偶聯(lián)比的檢測(cè)將含全抗原的反應(yīng)液置于超濾管中，離心、洗滌，收集濾液，采用高效液相色譜法檢測(cè)濾液中游離3-甲基喹喔啉-2-羧酸的濃度，色譜條件填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠，流動(dòng)相為體積比為60:40的甲醇水混合液，檢測(cè)波長(zhǎng)為320nm，
5.依權(quán)利要求I至3任一所述喹乙醇?xì)埩魳?biāo)示物高偶聯(lián)比的全抗原合成方法制得的全抗原的應(yīng)用，其特征在于用于制備喹乙醇?xì)埩魳?biāo)示物ELISA檢測(cè)試劑盒。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)一種高偶聯(lián)比的喹乙醇?xì)埩魳?biāo)示物全抗原合成方法。該方法采用N,N'-二異丙基碳二亞胺為催化劑，3-甲基喹喔啉-2-羧酸與過(guò)量的N-羥基琥珀酰亞胺發(fā)生酯化反應(yīng)，酯化物再與載體蛋白偶聯(lián)反應(yīng)即得到高偶聯(lián)比的喹乙醇?xì)埩魳?biāo)示物全抗原。本發(fā)明使用的催化劑安全性更高，不易造成操作人員的過(guò)敏，且副產(chǎn)物少，所得全抗原偶聯(lián)比可達(dá)到32～62；所得抗原免疫小鼠后，可得到抗體效價(jià)在128000以上的MQCA多克隆抗體，與喹乙醇、喹唏酮、痢菌凈的交叉反應(yīng)性均小于20%，與氯霉素、鹽酸克倫特羅、抗生素類等無(wú)交叉反應(yīng)性。
文檔編號(hào)C07K14/77GK102675455SQ201210151680
公開(kāi)日2012年9月19日 申請(qǐng)日期2012年5月16日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月16日
發(fā)明者孟嘉仁, 張凱, 張宏, 張景艷, 李建喜, 楊志強(qiáng), 王學(xué)智, 王磊, 秦哲 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所